目的:探讨甲基苯丙胺(methamphetamine,METH)暴露后原代神经元蛋白组学及其对细胞功能的影响,整体阐述METH的神经毒性及其影响通路。方法:将原代培养的神经元经METH(0、900μmol/L)处理,蛋白酶解后,利用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)对其进行检测,利用Uniprot_RattusNorvegicus_36080_20180123数据库对其进行鉴定,利用基因本体论(gene ontology,GO)分析进行蛋白功能注释,采用京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)数据库分析将目标蛋白序列进行归类,获取目标蛋白参与的信号通路;基于上述通路,利用Western blot验证METH引起的神经元突触数量及表达改变;通过免疫荧光法观察突触间的表达及空间定位。结果:共鉴定出蛋白总数为6619个。与对照组比较,表达差异(上调/下调)倍数大于1.2倍,且P<0.05的蛋白质归为差异蛋白,通过筛选,METH处理组与对照组的差异蛋白有51种,其中上调的蛋白40种,下调的蛋白11种。蛋白表达方面,METH暴露显著降低突触后标志物PSD95及棘突标志蛋白Drebrin的表达,而突触前标志物Synapsin1明显上调;免疫荧光结果显示,Drebrin表达明显下调且与F-actin的共定位减少,而PSD95与Synapsin 1的空间定位亦显著下降。结论:METH暴露可引起原代神经元多种蛋白表达异常,细胞功能发生紊乱,突触结构破坏,引发神经元损伤。
目的探讨足月胎盘中去泛素化酶(USP2a)在巨大儿中的调控机制。方法随机选取我院2014年9月~2015年6月分娩的巨大儿29例,另选择同期住院足月分娩正常体重儿31例,采用ELISA技术检测两组产妇胎盘中USP2a蛋白表达;采用Real Time PCR技术检测...
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目的探讨足月胎盘中去泛素化酶(USP2a)在巨大儿中的调控机制。方法随机选取我院2014年9月~2015年6月分娩的巨大儿29例,另选择同期住院足月分娩正常体重儿31例,采用ELISA技术检测两组产妇胎盘中USP2a蛋白表达;采用Real Time PCR技术检测其下游底物MDM2、CCND1及FASN在两组胎盘中的mRNA表达水平;进一步检测两组孕妇胎盘中MDM2及P53的蛋白表达。结果与对照组相比,巨大儿胎盘中USP2a蛋白含量升高,其下游底物MDM2 mRNA表达水平和蛋白含量高于对照组,P53的蛋白含量低于对照组(P<0.05)。结论胎盘中USP2a的表达水平与巨大儿密切相关。USP2a可能特异性识别靶蛋白MDM2,通过去泛素化作用影响胎盘中MDM2、P53表达水平,进一步影响胎盘的生长发育,从而导致巨大儿的发生。
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