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第一届劳动卫生职业病与环境医学学术研讨会

作者：叶健李爱萍秋雯周进红周建伟 210029 南京医科大学公共卫生学院江苏省人类功能基因组学和应用毒理学重点实验室分子毒理研究室

目的:探讨JWA蛋白PKC磷酸化位点对TPA诱导的MCF-7细胞分化的影响。方法:利用连续PCR引入点突变技术构建JWA编码区PKC磷酸化位点1、2以及两位点同时突变的三种pEGFP.N1载体，脂质体稳定转染获得相应的三种MCF-7细胞株，油红O染色观... 详细信息

目的:探讨JWA蛋白PKC磷酸化位点对TPA诱导的MCF-7细胞分化的影响。方法:利用连续PCR引入点突变技术构建JWA编码区PKC磷酸化位点1、2以及两位点同时突变的三种pEGFP.N1载体，脂质体稳定转染获得相应的三种MCF-7细胞株，油红O染色观察细胞分化状态。结果:20 nmol/LTPA处理MCF-7-N1(稳定转染pEGFP-N1载体的MCF07细胞)、MCF-7-JWA(稳定转染pEGFP-N1-JWA载体的MCF-7细胞)、MCF-7-JWA-1、MCF-7-JWA-2、MCF-7-JWA-1+2细胞2d后，油红O染色阳性细胞百分比分别为48％、67％、69％、67％、70％。与MCF-7-N1相比，TPA诱导MCF-7-JWA、MCF-7-JWA-1、MCF-7-JWA-2、MCF-7-JWA-1+2细胞分化率(油红O染色阳性细胞百分比)显著升高(P＜0.05)，但MCF-7-JWA、MCF-7-JWA-1、MCF-7-JWA-2、MCF-7-JWA-1+2细胞分化率无显著差异(P＜0.05)。结论:稳定转染JWA能增强TPA诱导的MCF-7细胞分化;JWA编码区PKC磷酸化位点突变并不影响TPA诱导MCF-7细胞分化。可能存在其他的分子机制。

关键词：细胞分化 TPA诱导 JWA蛋白 PKC磷酸化

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地昔帕明对大鼠背根神经节神经元钠电流的影响

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中国药科大学学报 2006年第3期37卷 259-262页

作者：程宏赵丽萍王昌松程洁高蓉肖杭南京医科大学应用毒理学研究所神经毒理研究室南京210029

目的:研究地昔帕明(desipramine,DMI)对大鼠背根神经节神经元电压依赖性钠电流的影响。方法:分离单个大鼠背根神经节,应用全细胞膜片钳技术观察地昔帕明对内向钠电流(INa)的影响。结果:地昔帕明浓度依赖性地抑制INa,即分别加入10,50,100... 详细信息

目的:研究地昔帕明(desipramine,DMI)对大鼠背根神经节神经元电压依赖性钠电流的影响。方法:分离单个大鼠背根神经节,应用全细胞膜片钳技术观察地昔帕明对内向钠电流(INa)的影响。结果:地昔帕明浓度依赖性地抑制INa,即分别加入10,50,100μmol/L的DMI可使钠电流的抑制率达(5.56±0.62)%,(54.67±13.39)%和(86.63±16.08)%,并且,50μmol/L的DMI可使INa稳态失活曲线左移,V1/2分别由对照组的-(43.71±0.79)mV降低至-(47.91±1.14)mV,k值无明显变化。结论:DMI浓度依赖性地抑制背根神经节神经元Na+通道,并改变通道的失活,这可能是其影响痛觉传导通路,产生镇痛作用的机制之一。

关键词：地昔帕明背根神经节神经元全细胞膜片钳技术钠电流

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亚砷酸钠所致人胚肺成纤维细胞增殖兴奋效应与氧化应激的关系

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中华劳动卫生职业病杂志 2006年第2期24卷 103-105页

作者：杨萍刘起展李爱萍李婷洪霞周建伟南京医科大学公共卫生学院江苏省人类功能基因组学和应用毒理学重点实验室分子毒理研究室 210029

目的探讨亚砷酸钠（Na2AsO2）所致人胚肺成纤维细胞（HELF）增殖兴奋效应与氧化应激的关系。方法0．0、0．1、0．5、1．0、5．0和10．0μmol／LNa2ASO2处理HELF细胞4h或24h后，检测Na2AsO2对HELF细胞增殖率、细胞中活性氧（ROS）水平、... 详细信息

目的探讨亚砷酸钠（Na2AsO2）所致人胚肺成纤维细胞（HELF）增殖兴奋效应与氧化应激的关系。方法0．0、0．1、0．5、1．0、5．0和10．0μmol／LNa2ASO2处理HELF细胞4h或24h后，检测Na2AsO2对HELF细胞增殖率、细胞中活性氧（ROS）水平、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）和还原性谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力的影响。结果0．1和0．5μmol／L Na2ASO2引起HELF细胞增殖率均明显升高，差异有统计学意义（P〈0．01），细胞增殖高峰表现在0．5μmol／L，而5．0和10．0μmol／L Na2ASO2引起HELF细胞增殖率均明显低于对照组，差异有统计学意义（P〈0．01），其剂量-反应关系曲线呈倒U形；0．5—10．0μmol／L Na2ASO2引起ROS水平均明显升高，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01），ROS水平与Na2ASO2处理剂量有明显的正相关关系（r=0．934，P〈0．01）；5．0和10．0μmol／L Na2ASO2引起MDA含量均明显升高和GSH-Px活力明显降低。与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．01）；0．5μmol／L Na2ASO2引起SOD活力明显升高。而5．0和10．0μmol／L Na2ASO2引起SOD活力均明显降低，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．01），其剂量-反应关系呈倒U形曲线。结论Na2ASO2可引起HELF细胞增殖明显兴奋效应，其剂量-反应关系呈倒U形曲线，其机制可能与不同浓度Na2ASO2引起HELF细胞小同程度的氧化应激有关。

关键词：砷剂亚砷酸钠类氧化性应激活性氧组分

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JWA在N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍诱导的人支气管上皮细胞凋亡中的作用

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中华劳动卫生职业病杂志 2006年第4期24卷 205-208页

作者：徐艳琼李爱萍陈瑞周建伟南京医科大学公共卫生学院江苏省人类功能基因组学和应用毒理学重点实验室分子毒理研究室 210029

目的探讨JWA在化学致突变物烷化剂N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱导人支气管上皮(HBE)细胞凋亡中的作用及其可能机制。方法用噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长抑制率,用Hoechst染色法检测细胞凋亡,用Western blot法检测JWA蛋白表达,用Sou... 详细信息

目的探讨JWA在化学致突变物烷化剂N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱导人支气管上皮(HBE)细胞凋亡中的作用及其可能机制。方法用噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长抑制率,用Hoechst染色法检测细胞凋亡,用Western blot法检测JWA蛋白表达,用Southwestern印迹分析法检测JWA基因近端启动子的结合蛋白。结果MNNG处理HBE细胞24 h均可诱导细胞发生凋亡,并呈现明显的剂量-效应关系；MNNG诱导HBE细胞凋亡过程中伴随着JWA蛋白表达升高。进一步用2．0μg/ml MNNG处理HBE细胞24h后,用Southwestern方法从HBE细胞核蛋白中检测出一与JWA近端启动子能特异性结合的转录因子。结论MNNG激活HBE细胞中核转录因子与JWA近端启动子结合后可能激活了细胞内凋亡的信号通路。

关键词：基因,JWA 细胞凋亡烷化剂转录因子

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JWA参与调节N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍诱导的HBE细胞凋亡

JWA参与调节N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍诱导的HBE细胞凋亡

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第五节全国环境与职业医学研究生学术研讨会

作者：徐艳琼李爱萍陈瑞周建伟 210029 南京江苏省人类功能基因组学和应用毒理学重点实验室分子毒理研究室南京医科大学公共卫生学院

[目的]探讨JWA在化学致突变物N-甲基-N‘-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱导HBE细胞凋亡中的作用及可能机制. [方法]用MTT法检测细胞生长抑制率,用Hoechst染色法检测细胞凋亡,用Westernblot法检测JWA蛋白表达,用Southwestern印迹分析法检... 详细信息

[目的]探讨JWA在化学致突变物N-甲基-N‘-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱导HBE细胞凋亡中的作用及可能机制. [方法]用MTT法检测细胞生长抑制率,用Hoechst染色法检测细胞凋亡,用Westernblot法检测JWA蛋白表达,用Southwestern印迹分析法检测JWA基因近端启动子的结合蛋白. [结果]MNG处理HBE细胞24h均可诱导细胞发生凋亡,并呈现明显的剂量-效应关系;MNNG诱导HBE细胞凋亡过程中伴随着JWA蛋白表达升高.进一步用2μg/mlMNNG处理HBE细胞24h后,用Southwestern方法从HBE细胞核蛋白中检测出一与JWA近端启动子能特异性结合的转录因子. [结论]MNNG激活HBE细胞中核转录因子与JWA近端启动子结合后可能激活了细胞内凋亡信号通路.

关键词： HBE细胞凋亡 JWA基因核转录因子信号通路 MNNG激活

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青黛复方对K562细胞bcr/abl及JWA基因表达的影响

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中国实验血液学杂志 2005年第5期13卷 809-811页

作者：戴海萍沈群周建伟汤唯艳朱光荣夏雯南京中医药大学附属江苏省中医院血液科南京210029 南京医科大学应用毒理研究所分子毒理研究室南京210029

为了研究不同浓度青黛复方对K562细胞株增殖、凋亡及bcr/abl、JWA基因表达水平的影响,为临床治疗提供理论依据,以不同浓度药物(2.5、5、7.5、10和20mg/ml)处理K562细胞24小时后,光学显微镜下观察形态学改变;采用半定量RT-PCR技术检测各... 详细信息

为了研究不同浓度青黛复方对K562细胞株增殖、凋亡及bcr/abl、JWA基因表达水平的影响,为临床治疗提供理论依据,以不同浓度药物(2.5、5、7.5、10和20mg/ml)处理K562细胞24小时后,光学显微镜下观察形态学改变;采用半定量RT-PCR技术检测各组bcr/abl及JWA基因在mRNA水平表达的变化。结果发现,随药物作用浓度升高,K562细胞逐渐呈典型凋亡形态学改变;bcr/abl及JWA基因表达呈浓度依赖性下降。结论:青黛复方能部分抑制K562bcr/abl及JWA基因的表达,其对CML的疗效可能是通过促进细胞凋亡而实现的。

关键词：青黛复方 K562细胞 bcr/abl JWA

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苯并(a)芘作用下人胚肺细胞JWA基因的表达及其与DNA损伤修复的关系

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中华预防医学杂志 2005年第3期39卷 187-190页

作者：顾灯安李爱萍朱婷叶健周建伟南京医科大学公共卫生学院分子毒理研究室江苏省人类功能基因组学和应用毒理学重点实验室 210029

目的研究苯并(a)芘诱导人胚肺(ccc HPF1)细胞DNA损伤修复中基因JWA和热休克蛋白(hsp70)的表达规律,探讨JWA基因参与细胞DNA损伤修复的作用和可能机制。方法建立ccc HPF1细胞DNA损伤模型,在S9活化状态下分别以10～100μmol/L苯并(a)芘处... 详细信息

目的研究苯并(a)芘诱导人胚肺(ccc HPF1)细胞DNA损伤修复中基因JWA和热休克蛋白(hsp70)的表达规律,探讨JWA基因参与细胞DNA损伤修复的作用和可能机制。方法建立ccc HPF1细胞DNA损伤模型,在S9活化状态下分别以10～100μmol/L苯并(a)芘处理细胞3h收获细胞或再恢复24h,用碱性单细胞凝胶电泳鉴定DNA损伤和修复情况,免疫印迹方法检测JWA和hsp70的表达水平。结果在DNA损伤模型中,苯并(a)芘活跃地调节JWA的表达,50μmol/L和100μmol/L处理组JWA和hsp70明显上调,在恢复期内10～100μmol/L处理组两者都处于较高的表达水平并且JWA和hsp70的表达规律几乎完全一致。结论JWA是一个有效的环境应答基因,活跃地参与细胞应答与DNA切除修复有关的信号通路。

关键词：苯并(a)芘人胚肺细胞 JWA基因基因表达 DNA损伤 DNA修复

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新的环境应答蛋白JWA在MCF-7细胞应答氧化应激中的表达

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中华劳动卫生职业病杂志 2005年第2期23卷 122-124,i002页

作者：朱婷陈瑞李爱萍顾灯安刘起展周建伟南京医科大学公共卫生学院江苏省人类功能基因组学和应用毒理学重点实验室分子毒理研究室 210029

目的　研究氧化应激诱导MCF 7 细胞氧化损伤过程中,JWA表达的调节规律及其作用,尤其是与热休克蛋白(HSPs)间的关系。方法　以不同浓度的H2O2(0.01、0.10、1.00 mmol/L)分别处理MCF 7细胞10、30、60、180 min,建立MCF 7细胞氧化损伤模型... 详细信息

目的　研究氧化应激诱导MCF 7 细胞氧化损伤过程中,JWA表达的调节规律及其作用,尤其是与热休克蛋白(HSPs)间的关系。方法　以不同浓度的H2O2(0.01、0.10、1.00 mmol/L)分别处理MCF 7细胞10、30、60、180 min,建立MCF 7细胞氧化损伤模型并用DNA琼脂糖凝胶电泳鉴定;用四唑蓝(MTT)法分析H2O2 对MCF 7细胞的相对细胞增殖率和细胞毒性的影响;采用Western blot方法检测JWA、HSP70、HSP27和热休克转录因子(HSF1)蛋白表达水平的变化。结果　H2O2 对MCF 7细胞的增殖抑制和细胞毒性呈时间和剂量依赖关系,MCF 7细胞在最高剂量、最长处理时间(1.00 mmol/L、180 min)时,细胞增殖几乎完全受抑制。H2O2 活跃地调节JWA的表达,氧化损伤使JWA、HSP70 和HSF1表达上调并呈剂量依赖关系,而且JWA、HSP70和HSF1的表达规律相似,而HSP27 表达似乎与氧化应激的信号调节无关。结论　在H2O2 致MCF 7 细胞氧化应激时,JWA作为有效的环境应答蛋白,其与HSP70共同参与的信号通路可能受HSF1调控。

关键词： JwA基因氧化性应激热休克蛋白质类肿瘤发生机制

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过氧化氢处理K562细胞中JWA基因的表达及其与DNA损伤和凋亡的关系

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中华预防医学杂志 2005年第3期39卷 182-186页

作者：朱婷李爱萍刘起展王心如周建伟南京医科大学公共卫生学院分子毒理研究室江苏省人类功能基因组学和应用毒理学重点实验室 210029

目的研究过氧化氢(H2O2)诱导K562细胞氧化应激过程中,JWA蛋白、热休克蛋白(hsp70和hsp27)和p53蛋白的表达特点,探讨JWA参与细胞应答氧化应激的作用和可能机制。方法用0.01、0.1、1mmol/L的H2O2处理K562细胞10、30、60、180min建立氧化... 详细信息

目的研究过氧化氢(H2O2)诱导K562细胞氧化应激过程中,JWA蛋白、热休克蛋白(hsp70和hsp27)和p53蛋白的表达特点,探讨JWA参与细胞应答氧化应激的作用和可能机制。方法用0.01、0.1、1mmol/L的H2O2处理K562细胞10、30、60、180min建立氧化损伤模型;用0.1mmol/LH2O2处理不同时间(6～48h)和不同浓度(0.5～1000μmol/L)的H2O2处理48h分别诱导K562细胞凋亡,然后用DNA琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA损伤和凋亡,用免疫印迹方法检测热休克蛋白(hsp70和hsp27)、p53以及JWA的蛋白表达水平。结果在DNA损伤模型中,H2O2活跃地调节JWA的表达,JWA对氧化应激的应答比热休克蛋白更快速,JWA和hsp70的表达规律相似;在低剂量H2O2(0.01mmol/L)处理时,JWA和热休克蛋白的表达均显著增高;在细胞凋亡模型中,JWA、hsp70、hsp27和p53的表达均显著增高,其中,JWA、hsp70和p53三者的表达规律相似。结论JWA是一个有效的环境应答基因并活跃地参与细胞应答氧化应激所致的DNA损伤和细胞凋亡的信号通路,其介导的信号通路可能与hsp70和p53有关。

关键词：过氧化氢 K562细胞 JWA基因基因表达 DNA损伤细胞凋亡

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胚胎干细胞的研究进展

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医学研究生学报 2005年第1期18卷 77-80页

作者：胡娅莉徐运崔恒宓王心如南京医科大学鼓楼临床学院霍普金斯大学医学院表遗传研究室南京医科大学公共卫生学院应用毒理研究所江苏南京210024

胚胎干细胞包括来自囊胚内细胞群的ES细胞和来自胚胎原始生殖嵴的EG细胞 ,其中ES细胞维持不分化传代培养已达 80代。由于这些细胞具有高度复制能力及多向性分化潜能 ,近年来的研究使人们对胚胎干细胞的培养条件、表面分子标记和鉴定方... 详细信息

胚胎干细胞包括来自囊胚内细胞群的ES细胞和来自胚胎原始生殖嵴的EG细胞 ,其中ES细胞维持不分化传代培养已达 80代。由于这些细胞具有高度复制能力及多向性分化潜能 ,近年来的研究使人们对胚胎干细胞的培养条件、表面分子标记和鉴定方法、诱导分化及其应用前景 ,以及当前研究方面存在的主要问题有了进一步的认识。

关键词： ES细胞 EG细胞培养应用

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