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中华临床免疫和变态反应杂志 2012年第2期6卷 142-146页

作者：张慧云钱久荣沈道明何韶衡海南医学院病理生理学教研室海口571101 苏州市相城人民医院中心实验室江苏苏州215131 南京医科大学第一附属医院临床实验研究中心南京210029

CD203/核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶(ecto-nucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterases,ENPPs)是调节嘌呤代谢的胞外酶。近年人们应用流式细胞仪检测技术发现激活后的嗜碱性粒细胞能特异性表达CD203c,为嗜碱性粒细胞激发试验(basophil... 详细信息

CD203/核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶(ecto-nucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterases,ENPPs)是调节嘌呤代谢的胞外酶。近年人们应用流式细胞仪检测技术发现激活后的嗜碱性粒细胞能特异性表达CD203c,为嗜碱性粒细胞激发试验(basophil activation test,BAT)提供了重要的标记物。由于BAT一直被认为是变态反应性疾病辅助诊断的"金标准",所以嗜碱性粒细胞膜上CD203c表达水平的变化可能为变态反应性疾病辅助诊断带来突破性进展。

关键词：过敏性疾病发病机制诊断 CD203c

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P物质与肺部疾病

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江苏医药 2011年第13期37卷 1585-1587页

作者：李艳梅张慧云何韶衡南京医科大学第一临床医学院 210029 海南医学院病理生理学教研室

P物质是一种主要由非肾上腺素能非胆碱能神经释放的神经肽,广泛参与了机体多种疾病的发生发展,是神经-免疫系统相互作用的重要介导物质。本文主要是对其在呼吸系统常见疾病中的研究状况作一综述。

关键词：肺部疾病 P物质非肾上腺素能非胆碱能神经相互作用免疫系统常见疾病呼吸系统神经肽

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TNF刺激肥大细胞IL-6分泌的信号转导通路

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第8期27卷 829-831页

作者：张慧云杨靖龙星男何韶衡海南医学院病理生理学教研室海南海口571101 南京医科大学第一附属医院临床实验研究中心江苏南京210029

目的:检测TNF对肥大细胞IL-6、IL-10分泌和组胺释放的影响并探讨其可能的信号转导途径。方法:用不同浓度TNF激发肥大细胞系P815后收集细胞和上清,细胞用细胞激发信号ELISA(CASE)方法检测信号转导通路蛋白ERK、p38、和STAT3磷酸化水平,... 详细信息

目的:检测TNF对肥大细胞IL-6、IL-10分泌和组胺释放的影响并探讨其可能的信号转导途径。方法:用不同浓度TNF激发肥大细胞系P815后收集细胞和上清,细胞用细胞激发信号ELISA(CASE)方法检测信号转导通路蛋白ERK、p38、和STAT3磷酸化水平,上清用ELISA检测组胺、IL-6和IL-10的水平。结果:ELISA结果显示TNF促进P815肥大细胞IL-6分泌(P<0.05),但对IL-10分泌和组胺释放无明显影响。ERK信号转导通路抑制剂PD98059和U0126抑制TNF引起的P815肥大细胞IL-6分泌(P<0.05),而p38信号转导通路抑制剂SB203580和STAT3信号转导通路抑制剂AG490不能抑制TNF引起的P815肥大细胞IL-6分泌。CASE结果显示ERK信号转导通路抑制剂PD98059,U0126抑制TNF引起的P815肥大细胞内ERK蛋白磷酸化(P<0.05)而p38信号转导通路抑制剂SB203580和STAT3信号转导通路抑制剂AG490不能抑制TNF引起的P815肥大细胞内p38和STAT3蛋白磷酸化。结论:TNF刺激小鼠肥大细胞P815分泌IL-6可能与ERK信号转导通路的激活有关的。

关键词：肥大细胞 TNF IL-6 ELISA 信号转导

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RANTES对肥大细胞系P815细胞分泌IL-10的诱导作用及其机制

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免疫学杂志 2011年第2期27卷 105-109页

作者：张慧云马文静何韶衡海南医学院病理生理学教研室海口571101 南京医科大学第一附属医院临床实验研究中心 210029

目的检测RANTES对肥大细胞IL-10和IL-12分泌的影响和可能的信号转导通路。方法 P815肥大细胞培养、激发后收集不同时间点的细胞和上清液,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清中IL-10和IL-12的水平,用细胞激发信号ELISA(CASE)方法检测丝/... 详细信息

目的检测RANTES对肥大细胞IL-10和IL-12分泌的影响和可能的信号转导通路。方法 P815肥大细胞培养、激发后收集不同时间点的细胞和上清液,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清中IL-10和IL-12的水平,用细胞激发信号ELISA(CASE)方法检测丝/苏氨酸蛋白激酶(Akt),细胞外信号调节激酶(ERK),信号转导子和转录激活子(STAT)3和p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路蛋白磷酸化情况。结果 RANTES能够促进肥大细胞P815分泌IL-10而对IL-12的分泌无明显影响。LY294002能够阻断RANTES引起的肥大细胞IL-10分泌并抑制RANTES引起的Akt磷酸化。结论 RANTES刺激肥大细胞P815分泌IL-10可能是通过激活Akt信号转导通路实现的。

关键词：肥大细胞 RANTES 白细胞介素-10 白细胞介素-12 信号转导

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肿瘤坏死因子调节的肥大细胞蛋白酶激活受体表达分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2011年第8期31卷 673-677页

作者：张慧云张淑芳杨海伟马文静王顺兰何韶衡海南医学院病理生理学教研室海口571101 海口市人民医院中心实验室南京医科大学第一附属医院临床实验研究中心 210029

目的检测肿瘤坏死因子（TNF）引起的肥大细胞蛋白酶激活受体（PAR）．1，2，3，4表达。方法肥大细胞P815培养后以不同浓度的TNF激发肥大细胞，在不同时间点收集细胞，给予聚乙二醇辛基苯基醚（TritonX一100）非TritonX-100处理后用流式... 详细信息

目的检测肿瘤坏死因子（TNF）引起的肥大细胞蛋白酶激活受体（PAR）．1，2，3，4表达。方法肥大细胞P815培养后以不同浓度的TNF激发肥大细胞，在不同时间点收集细胞，给予聚乙二醇辛基苯基醚（TritonX一100）非TritonX-100处理后用流式细胞术和激光共聚焦方法检测肥大细胞蛋白酶激活受体的表达。结果TNF激发肥大细胞2h、6h和16h后，TritonX．100与非TritonX．100处理后，肥大细胞PAR-1，3表达均无明显变化；但TNF以浓度依赖方式上调P515肥大细胞PAR．2，4表达（P〈0．05）；上述各时间点检测PAR-1，2，3表达情况，TritonX．100处理组与非TritonX．100处理组检测结果无明显差异，但PAR-4表达结果显示TritonX-100处理组表达强于非TritonX．100处理组。结论TNF可以上调P815肥大细胞PAR-2，4表达，但对PAR-1，3表达的调节作用不明显，TritonX-100处理和非TritonX-100处理不影响TNF调节的肥大细胞PARs表达的检测结果。

关键词：肥大细胞肿瘤坏死因子(TNF) 蛋白酶激活受体(PAR) 流式细胞术免疫荧光显微技术

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RANTES调节P815细胞膜与细胞质中蛋白酶激活受体表达的分析

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南京医科大学学报（自然科学版） 2011年第11期31卷 1561-1565页

作者：曾晓宁杨海伟张慧云何韶衡南京医科大学第一附属医院临床实验研究中心江苏南京210029 海南医学院病理生理学教研室海南海口571101

目的:研究趋化因子RANTES对肥大细胞膜表面与细胞质内蛋白酶激活受体(protease-activated receptors,PARs)各亚型表达的影响。方法:肥大细胞瘤细胞P815以不同浓度RANTES(0.1、1.0、10.0、100.0 ng/ml)激发,于不同时间点(2、6及16h)收集... 详细信息

目的:研究趋化因子RANTES对肥大细胞膜表面与细胞质内蛋白酶激活受体(protease-activated receptors,PARs)各亚型表达的影响。方法:肥大细胞瘤细胞P815以不同浓度RANTES(0.1、1.0、10.0、100.0 ng/ml)激发,于不同时间点(2、6及16h)收集细胞,予透膜及非透膜处理,流式细胞术检测全细胞与细胞膜PARs的表达水平,分析细胞膜与胞质中PARs的表达变化。结果:RANTES作用6 h可显著下调细胞膜表面PAR1,2 h及16 h有下调趋势但差异无统计学意义,该下调效应可被抗RANTES单克隆抗体(anti-RANTES)取消;透膜处理后分析结果显示,RANTES对细胞质内PAR1表达无显著调节作用,细胞膜与细胞质中PAR1表达差异无统计学意义。RANTES对P815细胞PAR2、PAR3、PAR4表达均无显著调节作用。结论:RANTES可选择性调节肥大细胞膜表面PAR1表达水平,对细胞质内PAR1及其他PARs亚型(PAR2、PAR3、PAR4)胞膜与胞质水平均无显著影响。

关键词：肥大细胞 RANTES PARs PAR1 透膜

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蛋白酶激活受体激活对A549细胞IL-28和IL-29 mRNA表达的影响

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免疫学杂志 2010年第10期26卷 833-837,841页

作者：张慧云王海燕马文静何韶衡海南医学院病理生理学教研室海口571101 南京医科大学第一附属医院临床实验研究中心 210029

目的用蛋白酶和蛋白酶激活受体激动肽(PAR-AP)刺激A549细胞后检测细胞中白细胞介素IL-28和IL-29 mRNA表达情况以分析蛋白酶激活受体激活对人肺上皮细胞IL-28和IL-29基因表达的影响。方法用最佳工作浓度的凝血酶、胰蛋白酶、类胰蛋白酶... 详细信息

目的用蛋白酶和蛋白酶激活受体激动肽(PAR-AP)刺激A549细胞后检测细胞中白细胞介素IL-28和IL-29 mRNA表达情况以分析蛋白酶激活受体激活对人肺上皮细胞IL-28和IL-29基因表达的影响。方法用最佳工作浓度的凝血酶、胰蛋白酶、类胰蛋白酶及蛋白酶激活受体-1,2,3,4的激动肽刺激A549细胞后,分别在第2、8、16h收集细胞,用实时定量逆转录聚合酶链式反应(q-RT-PCR)方法分析A549细胞内IL-28和IL-29 mRNA表达。结果凝血酶作用A549后,细胞内IL-29 mRNA表达增强,高达对照组9.6倍;而细胞内IL-28 mRNA表达无明显变化。胰蛋白酶作用A549细胞后,细胞内IL-29和IL-28 mRNA表达增强,分别为对照组6.1倍和4.4倍。类胰蛋白酶作用A549细胞后,细胞内IL-29和IL-28 mRNA表达增强分别高达对照组的3.1倍和2.1倍。弹性蛋白酶作用A549细胞后,细胞内IL-29 mRNA表达增强高达对照组5.1倍而IL-28 mR-NA无明显变化。PAR-1AP(SFLLR)作用后,A549细胞内IL-29 mRNA表达增强为对照组1.7倍而IL-28 mRNA表达无明显变化。PAR-2AP(SLIGKV及tc-LIGRLO)作用后,A549细胞内IL-29和IL-28 mRNA表达增强分别为对照组4.9倍和2.4倍。PAR-3AP(TFRGAP)作用后,A549细胞内IL-29和IL-28 mRNA表达无明显变化。PAR-4AP(GYPGQV)作用后A549细胞内IL-29和IL-28 mRNA表达增强高达对照组4.1倍和5.5倍。结论 A549细胞蛋白酶激活受体的激活可以上调细胞内IL-29和IL-28 mRNA表达。

关键词：人肺上皮细胞癌A549 白细胞介素-29 白细胞介素-28 蛋白酶蛋白酶激活受体

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RANTES对类胰蛋白酶引起的肥大细胞蛋白酶激活受体-2表达和白细胞介素-4释放的影响

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中华临床免疫和变态反应杂志 2010年第4期4卷 262-266页

作者：张慧云马文静何韶衡海南医学院病理生理学教研室海口571101 南京医科大学第一附属医院临床实验研究中心南京210029

目的检测RANTES对类胰蛋白酶引起的肥大细胞白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)分泌和蛋白酶激活受体(protease activated receptor,PAR)-2表达的影响。方法 P815肥大细胞培养后,用不同浓度的RANTES、类胰蛋白酶单独或联合激发肥大细胞,... 详细信息

目的检测RANTES对类胰蛋白酶引起的肥大细胞白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)分泌和蛋白酶激活受体(protease activated receptor,PAR)-2表达的影响。方法 P815肥大细胞培养后,用不同浓度的RANTES、类胰蛋白酶单独或联合激发肥大细胞,不同时间点收集激发细胞和上清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清中IL-4水平,用流式细胞术检测P815肥大细胞表面PAR-2的表达。结果 RANTES单独作用对肥大细胞IL-4分泌无明显影响,而类胰蛋白酶单独作用则以浓度依赖方式促进肥大细胞IL-4释放(P<0.01);RANTES或类胰蛋白酶单独作用对肥大细胞PAR-2表达均无明显影响(P>0.25)。以RANTES预处理肥大细胞,则类胰蛋白酶促进肥大细胞IL-4释放的作用被显著抑制(P<0.01);而类胰蛋白调节的肥大细胞PAR-2表达显著增强(P<0.01)。结论 RANTES抑制类胰蛋白酶引起的肥大细胞IL-4分泌可能是通过RANTES增强类胰蛋白酶调节PAR-2表达而实现。

关键词：肥大细胞 RANTES 白细胞介素-4 蛋白酶激活受体-2

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TNF-α对肥大细胞IL-10、IL-12分泌和组胺释放的影响

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海南医学院学报 2010年第12期16卷 1533-1535,1542页

作者：张慧云马文静何韶衡海南医学院病理生理学教研室海南海口571101 南京医科大学第一附属医院临床实验研究中心江苏南京210029

目的:检测TNF-α对P815肥大细胞IL-10,IL-12分泌和组胺释放的影响。方法:P815肥大细胞培养后,用不同浓度的TNF-α单独或联合用TNF-α单克隆抗体激发肥大细胞,不同时间点收集上清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清中IL-10,IL-12和组胺... 详细信息

目的:检测TNF-α对P815肥大细胞IL-10,IL-12分泌和组胺释放的影响。方法:P815肥大细胞培养后,用不同浓度的TNF-α单独或联合用TNF-α单克隆抗体激发肥大细胞,不同时间点收集上清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清中IL-10,IL-12和组胺水平。结果:单独作用时,TNF-α促进P815肥大细胞IL-12分泌,而对IL-10分泌和组胺释放无明显影响,TNF-α单克隆抗体的应用可以阻断TNF-α引起的肥大细胞IL-12分泌。结论:TNF-α可以通过促进肥大细胞分泌IL-12参与肥大细胞相关的炎症过程。

关键词：肥大细胞 TNF-α 白细胞介素(IL)-10 IL-12 组胺

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IL-29促进肥大细胞Th2细胞因子释放的信号转导机制

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广西医科大学学报 2010年第6期27卷 821-825页

作者：张慧云马文静杨晓玉林青何韶衡海南医学院病理生理学教研室海口571101 南京医科大学第一附属医院临床实验研究中心汕头大学医学院过敏和炎症研究所

目的:检测白细胞介素(IL)-29对肥大细胞Th2细胞因子分泌的影响和可能的信号转导通路。方法:肥大细胞P815培养、激发后收集不同时间点的细胞和上清液,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清液中IL-4和IL-13的水平,用细胞激发信号ELISA(CASE... 详细信息

目的:检测白细胞介素(IL)-29对肥大细胞Th2细胞因子分泌的影响和可能的信号转导通路。方法:肥大细胞P815培养、激发后收集不同时间点的细胞和上清液,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清液中IL-4和IL-13的水平,用细胞激发信号ELISA(CASE)方法检测丝/苏氨酸蛋白激酶(Akt)、细胞外信号调节激酶(ERK)、信号转导子和转录激活子(STAT)3和p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路蛋白磷酸化情况。结果:IL-29能够促进肥大细胞P815分泌IL-4和IL-13。AG490和LY294002阻断IL-29引起的肥大细胞IL-4分泌并抑制IL-29引起的STAT3和Akt磷酸化。LY294002阻断IL-29引起的肥大细胞IL-13分泌并抑制IL-29引起的Akt磷酸化。结论:IL-29刺激肥大细胞P815分泌IL-4可能是通过激活Akt和STAT3信号转导通路实现的,而IL-29刺激肥大细胞P815分泌IL-13可能与Akt信号转导通路激活有关。

关键词：肥大细胞白细胞介素-29 白细胞介素-4 白细胞介素-13 信号转导

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