检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：王易欣肖杭南京医科大学现代毒理学教育部重点实验室神经毒理研究室

【目的】甲基苯丙胺(Methamphetamine,Meth)是否可通过丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase,MAPK)途径,调节Kv2.1蛋白,进而影响海马神经元凋亡。【材料和方法】用300μM的Meth对原代培养的海马神经元处理24小时,利用we... 详细信息

【目的】甲基苯丙胺(Methamphetamine,Meth)是否可通过丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase,MAPK)途径,调节Kv2.1蛋白,进而影响海马神经元凋亡。【材料和方法】用300μM的Meth对原代培养的海马神经元处理24小时,利用western blot方法,观察Meth对于MAPK信号通路中ERK、JNK、p38通路及其磷酸化水平的影响。对海马神经元预敷ERK1/2、JNK和p38 MAPK通路抑制剂PD98059(10μM)、SP600125(10μM)和SB203580(10μM)1 h,随后加入300μM/L Meth作用24 h,利用western blot方法检测Kv2.1蛋白表达水平,并检测cleaved-caspase 3、bcl-2,bax等凋亡相关蛋白的表达水平。【结果】Meth(300μM/L)对MAPK通路的三个主要亚族有不同时程与程度的激活。其中,ERK通路与JNK通路在短时程内(15min)即发生激活,磷酸化p38蛋白表达的高峰则出现在1 h,并随着时间延长磷酸化水平逐渐恢复。另外,磷酸化p38蛋白随着Meth浓度的增大有上调趋势,提示Meth对p38通路有特异性的调节作用。Meth诱导的Kv2.1蛋白表达的上调可被p38抑制剂SB203580所阻断,差异具有统计学意义(P<0.05);SP600125亦可显著调低Kv2.1蛋白水平(p<0.01);PD98059对Meth作用下Kv2.1蛋白的升高未有影响,提示该通路不参与Kv2.1的调控。p38抑制剂SB203580能够显著下调Meth诱导的cleaved-caspase 3的激活水平,bcl-2,bax蛋白指标在不同抑制剂作用下均无显著改变。【结论】Meth可能通过磷酸化激活p38 MAPK通路对Kv2.1钾通道进行调控从而介导海马神经元的损伤。

关键词：甲基苯丙胺 MAPK Kv2.1 细胞凋亡

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利用体外模型评价多壁碳纳米管的雄性生殖毒效应及机制研究

利用体外模型评价多壁碳纳米管的雄性生殖毒效应及机制研究

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中国毒理学会第五次中青年科技论坛

作者：徐诚刘倩顾爱华 “现代毒理学”教育部重点实验室、南京医科大学毒理研究所南京医科大学南京 210000

目的：随着纳米学科飞速发展,人类生活环境涌现越来越多的纳米材料。其中,多壁碳纳米管(Multi-wall carbon nanotube,MWCNT)在工程领域和生物医药领域均有广泛应用,但生物安全性评价远未完善。以往研究报道其在生物体内可能具有基因毒...

目的：随着纳米学科飞速发展,人类生活环境涌现越来越多的纳米材料。其中,多壁碳纳米管(Multi-wall carbon nanotube,MWCNT)在工程领域和生物医药领域均有广泛应用,但生物安全性评价远未完善。以往研究报道其在生物体内可能具有基因毒性和致癌性质,但其在雄性生殖方面的报道较少。本研究评价低剂量MWCNT对于雄性小鼠生殖健康的影响,并探讨其潜在的分子机制。方法：购买商业化的MWCNT(Sigma-Aldrich,773840),以小鼠支持细胞TM-4(ATCC＃CRL-1715)和初级精母细胞GC-2 spd(ts)(ATCC＃CRL-2196)作为雄性生殖功能的体外评价模型。处理MWCNT固体得到水溶液和培养基溶液,经透射电子显微镜和纳米粒径及电位分析仪检测纳米分布、流体学粒径和zeta电位。

关键词：

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环境污染物的神经发育毒性研究——以斑马鱼为例

环境污染物的神经发育毒性研究——以斑马鱼为例

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中国毒理学会第九次全国毒理学大会

作者：刘倩顾杰顾爱华 "现代毒理学"教育部重点实验室南京医科大学公共卫生学院毒理学系

目的双酚A在工业上被广泛用来合成聚碳酸酯和环氧树脂等材料,作为双酚A类似物被大量生产并应用于各种领域。随着对双酚A的生产和使用的严格限定,双酚类似物的生物毒性效应逐渐引起了研究者的重视。近些年,随着研究的不断深入,双酚A类似... 详细信息

目的双酚A在工业上被广泛用来合成聚碳酸酯和环氧树脂等材料,作为双酚A类似物被大量生产并应用于各种领域。随着对双酚A的生产和使用的严格限定,双酚类似物的生物毒性效应逐渐引起了研究者的重视。近些年,随着研究的不断深入,双酚A类似物被证实对生物具有多种毒性效应,主要表现为急性毒性、内分泌干扰效应、神经毒性、生殖与发育毒性和细胞与基因毒性等。双酚S（BPS）作为最常见的双酚A替代品,一些研究表明,双酚S有破坏生殖功能和影响葡萄糖稳态等作用。然而,双酚S对神经系统的影响仍不清楚。本文以斑马鱼为模式动物,研究BPS对斑马鱼的神经发育毒性作用。材料和方法将斑马鱼胚胎随机分为5组,以BPS(0、0.03、0.3和3.0 mg·L)和阳性参照毒死蜱(0.3 mg·L)进行暴露,暴露时间为受精后4小时至受精后第6天。通过对胚胎和仔鱼的运动行为学测试、抗氧化酶活力（SOD、CAT和MDA检测试剂盒）、细胞凋亡（吖啶橙染色）、组织形态（HE染色）和神经发育相关基因（RT-PCR,原位杂交）及蛋白（免疫荧光）检测来阐述BPS的神经发育毒性作用及其可能的作用机制。结果 BPS暴露能够显著抑制斑马鱼仔鱼的运动距离和平均速度,对其运动行为能力产生影响,说明BPS对斑马鱼仔鱼具有早期神经毒性作用。BPS可能通过显著降低SOD、CAT活性,显著升高MDA活性,诱导氧化应激从而产生神经毒性;同时抗氧化基因的表达受到显著抑制;吖啶橙（AO）染色结果显示斑马鱼脑部细胞凋亡增加。BPS能够使6种神经发育基因（α1-tubulin,elav13,gap43,mbp,syn2a和gfap）的表达水平显著下调,其中下调髓磷脂碱性蛋白基因（mbp）可能抑制少突胶质细胞,进一步影响髓鞘的形成;下调突触蛋白基因（syn2a）可能会影响神经分化和突触形成等,并最终影响导致神经行为障碍。此外,BPS暴露导致斑马鱼仔鱼视网膜受损,随着剂量的增加,毒性作用也显著增加。结论 BPS可能通过增加氧化应激和抑制神经发育基因的表达水平来影响运动行为并部分改变斑马鱼幼虫的视网膜结构。BPS对斑马鱼仔鱼具有早期神经毒性作用。

关键词：双酚S 运动行为神经毒性

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微小RNA在血液系统发育分化中的调控作用研究

微小RNA在血液系统发育分化中的调控作用研究

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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛

作者：顾爱华周勇 “现代毒理学”教育部重点实验室南京医科大学公共卫生学院毒理学系

【目的】血液系统的发育分化调控网络高度复杂,异常的信号调控将导致血液病,因此血液系统的调控机制研究备受关注。微小RNA具有多靶点作用特点,其信号调控研究可为揭示造血系统发育、造血细胞分化和功能的精密信号协同机制提供重要依据... 详细信息

【目的】血液系统的发育分化调控网络高度复杂,异常的信号调控将导致血液病,因此血液系统的调控机制研究备受关注。微小RNA具有多靶点作用特点,其信号调控研究可为揭示造血系统发育、造血细胞分化和功能的精密信号协同机制提供重要依据。但目前对于miRNA特异性调控血液系统发育分化的研究有待深入。【方法】我们通过全基因组研究发现miR142是造血系统关键的微小RNA,但其信号调控机制尚不明确。使用锌指基因突变技术及斑马鱼模型,我们获得了miR142的突变体。通过功能缺失及获得实验,我们对miR对造血干细胞、粒细胞前体等的分化功能进行了研究。通过使用计算生物学靶点预测技术及高通量转录组筛选,发现下游调控网络。并进一步利用胚胎干细胞诱导造血干细胞进行体外研究。【结果】我们最近研究发现突变删除miR-142-3p导致中性粒细胞及单核细胞数量下降,粒细胞的炎症反应迁移受到影响。产生的中性粒细胞过度成熟并向巨噬细胞状态转化,可引起慢性髓系增生衰竭。这些表型由IFNγ-Jak-Stat信号激活上调的Irf1和Stat1介导。作为具有多靶点调控功能的微小RNA,它还调控了其他通路。进一步研究发现miR142还可能抑制性调控PI3K信号。Pten突变缺失引起的PI3K-mTOR-Cebpα通路的激活导致了中性粒细胞及单核细胞数量上升,但炎症诱导趋化性和成熟度不足。该通路抑制剂LY294002和Rapamycin能够改善这一表型。我们同时发现,与PI3K直接相关的P1cγ1突变缺失导致了中性粒细胞/单核细胞分化和成熟抑制。对于其他的信号通路的ES细胞诱导造血干细胞的研究,发现其高表达于CD41+CD117+造血前体细胞,功能机制正在深入研究。【结论】本研究发现了参与造血系统调控的重要微小RNA(miR142),并探讨其下游的调控通路,揭示miR-142在中性粒及单核细胞发育分化稳态中的调控机制,该miR-142在其他谱系中的功能尚有待进一步探讨。上述研究有助于阐明血液系统谱系分化中的表观遗传学调控机制,可为血液恶性疾病的病因学研究提供新的理论依据。

关键词：微小RNA 血液发生调控作用信号通路

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不同辅助因子对CYP1A2和POR体外表达的影响

不同辅助因子对CYP1A2和POR体外表达的影响

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中国毒理学会第五次全国学术大会

作者：陆慧媛马骏刘年王守林南京医科大学公共卫生学院毒理学系现代毒理学教育部重点实验室

目的研究在Baculovirus/Sf9系统中体外表达CYP1A2和POR蛋白时,不同辅助因子Hemin、5-ALA和Fe3 +对表达效率及活性的影响,并尝试CYP1A2和POR的共表达,探寻稳定、高效表达高活性CYP1A2酶和POR的条件。方法使用分子克隆技术构建含有CYP1A2... 详细信息

目的研究在Baculovirus/Sf9系统中体外表达CYP1A2和POR蛋白时,不同辅助因子Hemin、5-ALA和Fe3 +对表达效率及活性的影响,并尝试CYP1A2和POR的共表达,探寻稳定、高效表达高活性CYP1A2酶和POR的条件。方法使用分子克隆技术构建含有CYP1A2和POR cDNA的重组质粒,并进行PCR和酶切验证;用该质粒转染昆虫细胞Sf9以获得含上述基因的杆状病毒。然后再进一步感染Sf9细胞,表达CYP1A2和POR蛋白。通过加入不同浓度5-ALA、Fe、Hemin或其组合,观察这些条件对蛋白表达水平和活力的影响。此外,将含CYP1A2或POR基因的杆状病毒按不同比例混合,联合感染Sf9细胞进行共表达。在此基础上,进一步分析5-ALA或（和）Fe对CYP1A2和POR共表达的影响,寻找最合适的体外表达条件。使用免疫印迹法检测蛋白质的表达情况;使用CO差示光谱法和细胞色素C还原法分别检测CYP1A2和POR的活性。结果同时加入0.1mM 5-ALA和0.1mM Fe时,CYP1A2蛋白的表达显著提高,相对于单独加入5-ALA、Fe或Hemin,分别增加了40%、65%和32%;对于POR蛋白,加入了5-ALA和/或Fe后表达量显著提高,分别相当于不加任何辅助因子时的2.13、1.71和1.86倍,以仅加入5-ALA时表达水平最高;同样的结果也反映在POR的活力上,加入5-ALA和/或Fe分别提高7.1倍、4.5倍和5.4倍。在Baculovirus/Sf9系统中进行CYP1A2和POR共表达时,当病毒比例为2.5:1或3:1时,无论CYP1A2还是POR,其表达量都显著增加,分别比2:1和4:1时提高约50%,且两者的表达比例较为适当;在CYP1A2:POR病毒比例为2.5:1的表达体系中,加入0.1和0.35mM 5-ALA时,CYP1A2和POR的表达量都显著高于0. 6mM;此外,加入0.1mM Fe时,蛋白表达也有较高水平;但有趣的是,当联合加入5-ALA和Fe时,蛋白的表达量反而下降,相关机制有待进一步研究。结论不同辅助因子对CYP450和POR的表达及活性有明显影响。联合加入5- ALA和Fe可显著增加CYP450的表达和活性;低浓度5- ALA或Fe、以及CYP1A2和POR病毒比例为2.5:1或3:1时,有利于两者的共表达。

关键词： CYP1A2 POR Baculovirus/Sf9表达系统辅助因子体外表达

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孕晚期暴露全氟辛酸诱导小鼠子代肥胖

孕晚期暴露全氟辛酸诱导小鼠子代肥胖

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中国毒理学会第八次全国毒理学大会

作者：刘倩徐诚顾爱华 "现代毒理学"教育部重点实验室南京医科大学公共卫生学院毒理学系南京

[目的]全氟辛酸(Perfluorooctanoic acid,PFOA)是一种人工合成氟化有机物,在工业生产和生活消费领域有着广泛的应用.PFOA在环境,野生动物和人类中广泛存在,属于持久性有机污染物.PFOA已被证明会引起肝毒性和其他毒理作用.本文是研究母... 详细信息

[目的]全氟辛酸(Perfluorooctanoic acid,PFOA)是一种人工合成氟化有机物,在工业生产和生活消费领域有着广泛的应用.PFOA在环境,野生动物和人类中广泛存在,属于持久性有机污染物.PFOA已被证明会引起肝毒性和其他毒理作用.本文是研究母代孕晚期暴露PFOA对子代小鼠肥胖的影响.

关键词：全氟辛酸糖脂代谢紊乱线粒体功能肝毒性肠道菌群

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雌激素受体β介导的全氟辛烷磺酸诱导小鼠肝毒性

雌激素受体β介导的全氟辛烷磺酸诱导小鼠肝毒性

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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛

作者：刘倩徐诚顾爱华 “现代毒理学”教育部重点实验室、南京医科大学公共卫生学院毒理学系

【目的】全氟辛烷磺酸(Perfluorooctane sulfonate,PFOS)是一种人工合成氟化有机物,在工业生产和生活消费领域有着广泛的应用。雌激素受体β属于激素核受体家族,能参与调节细胞增生,分化和维持正常的人体生理功能。本文是研究雌激素受体... 详细信息

【目的】全氟辛烷磺酸(Perfluorooctane sulfonate,PFOS)是一种人工合成氟化有机物,在工业生产和生活消费领域有着广泛的应用。雌激素受体β属于激素核受体家族,能参与调节细胞增生,分化和维持正常的人体生理功能。本文是研究雌激素受体β(estrogen receptorβ)在全氟辛烷磺酸诱导雌激素受体β敲除小鼠胆汁酸和胆固醇代谢紊乱中的作用。【材料和方法】本研究选取20只12-14周龄野生型和雌激素受体β敲除雄性小鼠,随机分组四组(A,C组为野生雄鼠;B,D组为雌激素受体β敲除雄鼠)。每天经口灌胃全氟辛烷磺酸28天,剂量为:0 mg/kg(A和B组)and 8 mg/kg(C和D组)。第29天处死并取肝脏,小肠和粪便样本,随后进行蛋白质印迹法检测雌激素受体α和雌激素受体β蛋白表达水平;肝脏病理苏木精-伊红染色;检测肝组织中胆汁酸和总胆固醇水平;对肝脏和小肠进行RNA提取,RT-PCR检测胆汁酸和胆固醇代谢相关基因的表达;对收集的粪便进行DNA提取,PCR扩增,16S rRNA Illumina基因检测肠道菌群。【结果】在暴露8 mg/kg的全氟辛烷磺酸两个组中,野生型小鼠肝细胞呈现水样变性和空泡化,而雌激素受体β敲除组中,没有显著病理变化,即使是在相同的剂量的全氟辛烷磺酸暴露下。并且在暴露于全氟辛烷磺酸雄性野生型小鼠的肝脏胆固醇和胆汁酸水平显著低于对照组,而在雌激素受体β敲除小鼠,暴露于相同剂量全氟辛烷磺酸没有改变。在肝和小肠中胆汁酸和胆固醇代谢相关基因的表达,其中Hmgcr,Ldl receptor,Srbi,NPC1L1和Abcal在各组之间没有显著差别,而在全氟辛烷磺酸暴露组中Abcg5和Fgfl5的表达相对于其他组是显著增加的,Cyp7a1的表达相对于其他组是显著降低的。全氟辛烷磺酸暴露组肠道菌群丰度和种类均降低,并且雌激素受体β敲除组可减弱由全氟辛烷磺酸诱导肠道菌群组成的改变,此外肠道菌群的主成分分析也能很好的将全氟辛烷酸暴露野生型小鼠组别与其他三个组分开。【结论】本研究表明雌激素受体β的缺失可以减轻由于暴露全氟辛烷磺酸造成的胆汁酸和胆固醇代谢紊乱。暴露全氟辛烷磺酸后小鼠肠道菌群的丰度和种类也发生了变化,提示肠道菌群可能是全氟辛烷磺酸诱导的肝毒性的主要靶点之一,增加我们的对人类接触全氟辛烷磺酸的潜在有害影响的认识。

关键词：全氟辛烷磺酸雌激素受体β 肠道菌群肝毒性

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双酚S的环境污染现状及对脂质代谢紊乱的影响

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生物医学转化 2020年第1期1卷 56-60页

作者：翁振坤顾爱华南京医科大学公共卫生学院现代毒理学教育部重点实验室江苏南京211166

双酚S(Bisphenol S,BPS)是双酚A(Bisphenol A,BPA)的替代品,被广泛用于制造各种聚合物。由于其广泛的使用,造成的环境污染已经严重威胁生态环境和人体健康。近年来,BPS所引起的脂质代谢紊乱逐渐引起大家的关注。本文对BPS导致环境污染... 详细信息

双酚S(Bisphenol S,BPS)是双酚A(Bisphenol A,BPA)的替代品,被广泛用于制造各种聚合物。由于其广泛的使用,造成的环境污染已经严重威胁生态环境和人体健康。近年来,BPS所引起的脂质代谢紊乱逐渐引起大家的关注。本文对BPS导致环境污染的现状及人群暴露风险进行总结,并从其对脂质合成、转运和降解基因的表达,代谢组学以及对过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的作用等方面来探讨BPS所致脂质代谢异常的潜在机制。

关键词：双酚S 环境分布脂质代谢紊乱

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阿米替林对大鼠皮层神经元钠离子通道电流及其mRNA的影响

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中国疼痛医学杂志 2011年第2期17卷 111-115页

作者：燕兰云王强徐武叶青肖杭万琪南京医科大学第一附属医院神经内科南京210029 南京医科大学现代毒理学教育部重点实验室南京210029

目的:观察阿米替林(AMI)对大鼠皮层神经元钠通道电流及其mRNA表达的影响。方法:运用全细胞膜片钳模式记录AMI加药前后的钠通道电流(INa);采用实时逆转录聚合酶链反应(real time reverse-transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR... 详细信息

目的:观察阿米替林(AMI)对大鼠皮层神经元钠通道电流及其mRNA表达的影响。方法:运用全细胞膜片钳模式记录AMI加药前后的钠通道电流(INa);采用实时逆转录聚合酶链反应(real time reverse-transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)观察实验组和对照组皮层神经元钠通道各亚型的mRNA表达量。结果:AMI抑制大鼠皮层神经元INa及其mRNA表达(P<0.05)。10μMAMI显著改变钠通道的激活特性和失活特性。10μMAMI在5 min、10 min及24 h对Nav1.1均有抑制作用,而对于Nav1.2的作用只是在5 min时有抑制作用,对Nav1.6的抑制作用存在波动性的变化。结论:AMI对大鼠皮层神经元INa及其各亚型mRNA的表达均有浓度依赖性抑制作用。AMI对INa的抑制主要通过影响钠通道的激活和失活动力学来实现的,对其各亚型mRNA表达的抑制作用具有不同的特点。

关键词：偏头痛皮层扩散抑制阿米替林膜片钳实时逆转录聚合酶链反应

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miR-191调控EMT和CSCs特性获得在砷所致HBE细胞恶性转化中作用

miR-191调控EMT和CSCs特性获得在砷所致HBE细胞恶性转化中作用

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中国毒理学会第四届中青年学者科技论坛

作者：徐文超刘起展南京医科大学公共卫生学院卫生毒理学系现代毒理学教育部重点实验室

目的探讨miR-191通过BASP1/WT1调控EMT(上皮-间质转化)和肿瘤干细胞(CSCs)特性获得在亚砷酸钠(NaAsO2)所致肺支气管上皮(HBE)细胞恶性转化中作用及其分子过程。方法应用基因芯片分析技术,检测NaAsO2恶性转化HBE细胞与同代对照细胞中不... 详细信息

目的探讨miR-191通过BASP1/WT1调控EMT(上皮-间质转化)和肿瘤干细胞(CSCs)特性获得在亚砷酸钠(NaAsO2)所致肺支气管上皮(HBE)细胞恶性转化中作用及其分子过程。方法应用基因芯片分析技术,检测NaAsO2恶性转化HBE细胞与同代对照细胞中不同miRNA表达情况;NaAsO2急性处理不同时间和慢性处理HBE细胞30代后,qRT-PCR检测miR-191水平;应用靶基因预测软件***预测miR-191下游靶基因并通过Westen blot实验验证;应用免疫荧光、流式细胞及CSCs成球实验检测不同miR-191水平对NaAsO2慢性处理所致恶性转化HBE细胞的EMT和CSCs特性获得及恶性程度及侵袭转移能力的影响。结果基因芯片结果分析miR-191水平在NaAsO2慢性处理所致恶性转化HBE细胞中显著高于同代对照细胞;qRT-PCR检测也发现1.0μM NaAsO2急性处理HBE细胞24 h和慢性处理HBE细胞30代,miR-191表达水平与对照相比显著上升;通过软件预测及实验证明BASP1为miR-191的靶基因,miR-191通过下调其靶基因BASP1而引起WT1水平升高;而且通过导入miR-191-inhibitor而下调miR-191可以逆转NaAsO2慢性处理所致恶性转化HBE细胞的EMT过程,即Ecadherin水平显著回升,而vimentin水平显著回降;而且肺癌干细胞标志CD44和CD133水平也显著回降,SP侧群细胞百分率显著回降,干细胞成球数目也明显减少,即恶性转化HBE细胞的于细胞特性减弱;软琼脂培养基上细胞集落数目显著减少,划痕损伤修复能力也显著下降,即细胞的恶性程度降低。结论 miR-191通过抑制其靶基因BASP1的表达而上调WT1水平和调控EMT和CSCs特性获得在亚砷酸钠所致细胞恶性转化过程中具有重要作用。

关键词：砷中毒 miR-191 上皮间质转化(EMT) 肿瘤干细胞(CSCs) 恶性转化

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