检索结果-内蒙古大学图书馆

中华男科学杂志 2011年第9期17卷 799-804页

作者：郑波蒋敏李苏影吴亦波祝辉周作民沙家豪南京医科大学生殖医学实验室江苏南京210029

目的:探讨动力蛋白激活蛋白1(Dctn1)在小鼠精子变形过程中的作用。方法:通过Western印迹及间接免疫荧光技术分析Dctn1在小鼠睾丸及精子中的表达和定位。分别运用体外GC2-spd细胞系以及在体两种策略筛选出具有最高干扰效率的Dctn1的小干... 详细信息

目的:探讨动力蛋白激活蛋白1(Dctn1)在小鼠精子变形过程中的作用。方法:通过Western印迹及间接免疫荧光技术分析Dctn1在小鼠睾丸及精子中的表达和定位。分别运用体外GC2-spd细胞系以及在体两种策略筛选出具有最高干扰效率的Dctn1的小干扰RNA(siRNA),进而应用睾丸网微注射技术,将混有示踪剂(0.4%台盼蓝)的Dctn1 siRNA注射至3周ICR小鼠的生精小管内,对照侧的睾丸注射阴性对照siRNA,正常组为不加任何处理的3周ICR小鼠。在注射后第3周取附睾尾部精子进行形态学分析。结果:Dctn1主要定位于精子的尾部。干涉后Dctn1 siRNA组的精子尾部畸形率为(23.57±0.55)%,明显高于对照组[(12.35±2.29)%,P<0.01,n=3],而正常组精子尾部畸形率为(3.37±0.69)%。结论:Dctn1在精子变形中可能发挥重要作用,它主要影响精子尾部的形成。

关键词：动力蛋白激活蛋白1 精子变形小干扰RNA 睾丸网微注射

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妊娠早期自然流产组织染色体异常情况及其相关因素分析

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中华妇产科杂志 2019年第12期54卷 797-802页

作者：沈鉴东孙方西瞿殿云谢佳孜高莉仇茜高超吴畏吴春香汪道武刁飞杨刘嘉茵南京医科大学第一附属医院生殖医学中心生殖医学国家重点实验室 210029

目的分析早孕期自然流产组织的染色体异常情况及其相关因素。方法收集2015年6月至2018年8月在南京医科大学第一附属医院生殖医学中心就诊的早孕期自然流产患者的流产绒毛或胎儿组织831例,通过二代测序技术(NGS)行染色体拷贝数分析,通过... 详细信息

目的分析早孕期自然流产组织的染色体异常情况及其相关因素。方法收集2015年6月至2018年8月在南京医科大学第一附属医院生殖医学中心就诊的早孕期自然流产患者的流产绒毛或胎儿组织831例,通过二代测序技术(NGS)行染色体拷贝数分析,通过统计学方法分析染色体异常与女方年龄、是否体外受精-胚胎移植(IVF-ET)妊娠、既往自然流产次数、既往有无活产分娩史之间的关系。结果在831例早孕期自然流产组织样本中,发现染色体异常461例(55.5%,461/831)。其中女方年龄(OR=1.107,95%CI为1.070~1.145)和活产分娩史(OR=1.909,95%CI为1.182~3.083)是早孕期自然流产组织染色体异常的正相关因素,既往自然流产次数(OR=0.807,95%CI为0.702~0.928)和IVF-ET妊娠(OR=0.554,95%CI为0.404~0.760)是早孕期自然流产组织染色体异常的负相关因素。结论胚胎染色体异常是早孕期自然流产的重要病因。女方年龄增加、有活产分娩史者染色体异常率增加,而既往自然流产次数增加、IVF-ET妊娠者染色体异常率下降。

关键词：染色体异常早孕期生殖医学中心活产早期自然流产分娩史胎儿组织流产次数

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果蝇睾丸基因敲除突变体的构建及表型分析

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遗传 2018年第6期40卷 478-487页

作者：唐浚博曹浩伟许蕊张丹丹黄娟南京医科大学基础医学院南京211166 南京医科大学生殖医学国家重点实验室南京211166

生殖系统功能的正常维持是物种繁衍的基础,需要多基因协同作用,但其中许多基因的具体功能和作用机制并不清楚。本研究选取了果蝇(Drosophila melanogaster)中8个在睾丸中表达、功能未知且与人(Homo sapiens)和小鼠(Mus musculus)高度同... 详细信息

生殖系统功能的正常维持是物种繁衍的基础,需要多基因协同作用,但其中许多基因的具体功能和作用机制并不清楚。本研究选取了果蝇(Drosophila melanogaster)中8个在睾丸中表达、功能未知且与人(Homo sapiens)和小鼠(Mus musculus)高度同源的基因(CG4161、CG11475、CG2921、CG10541、CG7276、CG3800、CG8117和CG16779),分析了它们在不同组织中的表达水平,并分别检测了它们在雄性生殖系统中的功能。在这8个基因中,前5个为睾丸优势表达基因,其余3个为全身性表达。首先,利用CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9)技术结合同源定向修复(homology-directed repair,HDR)在果蝇中对8个候选基因逐一进行敲除,建立了纯合的基因敲除突变品系;然后对这些品系的雄蝇进行了生育力测试及睾丸细胞学观察。结果显示,CG7276和CG3800基因敲除果蝇出现部分雄蝇不育且可育雄蝇后代数量较野生型显著下降。睾丸解剖观察显示CG7276和CG3800的功能缺失可导致雄蝇分别出现不同程度的精囊缩小及精原干细胞减少和细胞分布混乱;染色结果也提示CG7276和CG3800在精子的成熟过程中发挥一定作用。其他6个基因突变并未导致雄蝇育性变化或睾丸形态异常。这些突变体的获得及表型的初步分析为进一步研究基因功能及机制提供了良好的动物模型及基础。

关键词：睾丸 CRISPR/Cas9 果蝇基因敲除

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m6A识别蛋白Ythdf3在精子发生中的作用研究

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南京医科大学学报（自然科学版） 2019年第6期39卷 846-850页

作者：宋小玲刘媛媛王仿竹沈彬南京医科大学生殖医学国家重点实验室

目的:通过基因敲除模型研究N6-甲基腺嘌呤(m6A)识别蛋白Ythdf3在小鼠精子发生过程的调控作用。方法:利用CRISPR/Cas9技术构建Ythdf3基因敲除小鼠,通过免疫荧光和HE染色对敲除小鼠进行表型分析,研究Ythdf3在调控小鼠精子发生过程中的作... 详细信息

目的:通过基因敲除模型研究N6-甲基腺嘌呤(m6A)识别蛋白Ythdf3在小鼠精子发生过程的调控作用。方法:利用CRISPR/Cas9技术构建Ythdf3基因敲除小鼠,通过免疫荧光和HE染色对敲除小鼠进行表型分析,研究Ythdf3在调控小鼠精子发生过程中的作用。结果:免疫组化染色显示Ythdf3在精原及各级生精细胞核中均有表达;成功构建Ythdf3基因敲除小鼠模型;HE染色显示Ythdf3敲除小鼠睾丸各级生精时相及附睾尾精子与对照相比无明显异常。结论:在正常生理条件下,敲除Ythdf3不影响雄性小鼠精子发生。

关键词： CRISPR/Cas9 Ythdf3 精子发生

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男性不育相关代谢组学研究进展

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中华生殖与避孕杂志 2020年第10期40卷 864-870页

作者：吴华王晖钱云南京医科大学第二附属医院生殖医学科 210011 南京医科大学基础医学院组织胚胎学系南京医科大学生殖医学国家重点实验室211166

随着生活环境改变和社会压力增加,男性精液质量逐步下降,男性不育症发病率逐年上升,愈来愈受到人们关注。精液分析是目前诊断男性不育症的首选检查,但无法明确与男性不育症相关的精液代谢改变及其相关机制,且临床上尚存在部分不育症患... 详细信息

随着生活环境改变和社会压力增加,男性精液质量逐步下降,男性不育症发病率逐年上升,愈来愈受到人们关注。精液分析是目前诊断男性不育症的首选检查,但无法明确与男性不育症相关的精液代谢改变及其相关机制,且临床上尚存在部分不育症患者表现出正常的精液分析结果。代谢组学的出现有希望弥补精液分析的这些不足。代谢组学通过对样本中小分子代谢产物进行定性和定量分析,寻找疾病发生发展的生物标志物,为疾病诊疗提供新方法。近年来,各国学者利用代谢组学对不育男性的血清、精浆等样本进行研究,发现了多种可能与男性不育症相关的生物标志物,涉及氧化应激、能量代谢、信号转导中的多种通路。本文就近年来代谢组学在无精子症、少精子症、弱精子症、畸形精子症及不明原因男性不育症中的研究进展作一综述,以期为不育症的临床诊疗提供新思路。

关键词：男性不育症代谢组学代谢紊乱生物标志物潜在机制

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枸橼酸氯米芬卵巢温和刺激方案中鲜胚移植策略的探讨

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中华医学杂志 2015年第47期95卷 3859-3861页

作者：孟艳钱易黄存吴畏刘嘉茵生殖医学国家重点实验室南京医科大学第一附属医院生殖医学科210000

目的探讨在体外受精促性腺激素联合枸橼酸氯米芬全程使用的卵巢温和刺激方案中鲜胚移植的策略.方法回顾性分析2013年1月1日至2015年6月30日在南京医科大学第一附属医院生殖医学科行体外受精治疗使用促性腺激素联合枸橼酸氯米芬全程使... 详细信息

目的探讨在体外受精促性腺激素联合枸橼酸氯米芬全程使用的卵巢温和刺激方案中鲜胚移植的策略.方法回顾性分析2013年1月1日至2015年6月30日在南京医科大学第一附属医院生殖医学科行体外受精治疗使用促性腺激素联合枸橼酸氯米芬全程使用的卵巢温和刺激方案并行鲜胚移植的临床资料,共286例.比较移植日不同子宫内膜厚度的各组临床成功率.结果使用促性腺激素联合枸橼酸氯米芬全程使用的卵巢温和刺激方案,随着移植日子宫内膜厚度的增加枸橼酸氯米芬影响减少,当移植日子宫内膜厚度达到9 mm以上,鲜胚移植成功率与常规方案相近从而可以考虑鲜胚移植策略.结论使用促性腺激素联合枸橼酸氯米芬全程使用的卵巢温和刺激方案的患者,当移植日子宫内膜厚度达到9 mm以上时可以考虑行鲜胚移植。

关键词：卵巢刺激枸橼酸氯米芬胚胎移植子宫内膜厚度

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一个X连锁少汗型外胚层发育不良家系的EDA基因c．822G〉T突变分析

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中华医学遗传学杂志 2013年第3期30卷 270-273页

作者：孙雪萍沈鉴东吴畏谢佳孜高超覃莲菊崔毓桂刘嘉茵南京医科大学第一附属医院生殖医学科生殖医学国家重点实验室 210029

目的对1个少汗型外胚层发育不良家系进行ectodysplasinA（EDA）基因序列分析，为家系成员提供准确病因诊断和遗传咨询。方法抽取家系中先证者及有血缘关系的家系成员外周静脉血，常规提取基因组DNA，应用聚合酶链式反应、DNA测序技术分... 详细信息

目的对1个少汗型外胚层发育不良家系进行ectodysplasinA（EDA）基因序列分析，为家系成员提供准确病因诊断和遗传咨询。方法抽取家系中先证者及有血缘关系的家系成员外周静脉血，常规提取基因组DNA，应用聚合酶链式反应、DNA测序技术分析EDA基因编码区序列；选择103名无血缘关系正常人作为对照。结果在先证者及另1例男性患者的EDA基因第7外显子区域检出C．822G〉T突变，导致第274位的色氨酸变成了半胱氨酸（P．W274C），该突变位点未见文献报道。家系中的5名女性成员中检出C．822G〉T杂合突变，正常男性成员及103名正常对照均不存在此突变。结论EDA基因c．822G〉T突变为导致该家系成员少汗型外胚层发育不良的致病突变。

关键词：少汗型外胚层发育不良 EDA基因突变

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RNA结合蛋白的CLIP-seq数据的生物信息学分析流程建立及初步应用

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中国科学：生命科学 2021年第4期51卷 450-461页

作者：谢正尧臧敏李鑫徐宇君南京医科大学生殖医学国家重点实验室南京211166

近年来,紫外交联免疫沉淀结合高通量测序(UV cross-linking immunoprecipitation followed by high-throughput sequencing, CLIP-seq)成为鉴定RNA结合蛋白(RNA-binding proteins, RBP)的靶标序列和结合位点的新技术,为研究RNA结合蛋白功能、解析其分子机制提供了强有力的工具.尽管国际上已有应用CLIP技术的报道,但是实验方法周期长、技术性强,尤其是后续的数据处理和生物信息学分析令没有计算机基础和专职生物信息分析人员的实验室望而却步.基于2016年Van Nostrand等人优化的CLIP方法,本团队建立并完成了多个RBP在组织和细胞中的CLIP测序及数据的生物信息学分析流程,并验证了其可行性.本研究整合了多家实验室已公开发表的分析软件和脚本,对人前列腺癌DU145细胞系中的PUMILIO1(PUM1)蛋白CLIP-seq数据进行分析,总结出对于蛋白功能分析更有效的命令和参数,并建立了完整的生物信息学分析流程.运用该流程寻找PUM1蛋白在人前列腺癌发展中的潜在机制,本团队识别出PUM1在DU145细胞系中的1189个靶标,并发现PUM1主要结合其靶标mRNA的3′非翻译区(untranslated region, UTR)和转录终止位点(transcription termination sites, TTS)区域, UGUAHAUA(H代表A/U/C)基序(motif)为PUM1蛋白识别的特征性序列. PUM1可能通过结合靶标mRNA的3′UTR对靶标进行转录后调控,参与癌细胞的生长、分化等过程以及相关的癌症通路中.本团队还发现, PUM1在人前列腺癌细胞系中能够与其他物种或组织中类似的靶标结合,并且结合方式高度一致,这与该家族蛋白在RNA结合功能域和功能上的高度保守性相符合.因此,本文报道的技术方法和生物信息学分析流程可以为有兴趣开展RBP的靶标鉴定的研究人员提供一个一站式的方法学服务平台,也有助于推动转录后调控在疾病和发育中的机制研究和RBP的RNA调控等新兴领域的发展.

关键词： RNA结合蛋白紫外交联免疫沉淀高通量测序生物信息学 PUM1 前列腺癌 3′UTR

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睾丸优势表达的Boule蛋白影响果蝇发育

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中国科学：生命科学 2020年第4期50卷 438-445页

作者：夏文娟肖天衡黄娟徐宇君南京医科大学生殖医学国家重点实验室南京211166

boule基因是屈指可数的高度保守、横跨后生动物的调控多个物种精子发生所不可或缺的基因.在果蝇中,boule基因突变体bol1可导致雄性不育,而boule基因的大片段缺失突变体boule40却表现了致死表型,提示boule可能在胚胎发育过程中也起到一... 详细信息

boule基因是屈指可数的高度保守、横跨后生动物的调控多个物种精子发生所不可或缺的基因.在果蝇中,boule基因突变体bol1可导致雄性不育,而boule基因的大片段缺失突变体boule40却表现了致死表型,提示boule可能在胚胎发育过程中也起到一定的作用.为了验证这一假设,首先,本团队利用RT-PCR检测了boule基因在不同组织中的表达情况,并构建了GFP敲入突变体检测Boule蛋白在不同组织中的分布,结果表明boule mRNA及Boule蛋白在发育过程及成蝇的头、胸、腹中均存在.其次,构建了boule基因完全缺失突变体,发现在不同发育阶段均有致死发生.为了探寻这种影响是来自boule基因产生的蛋白还是非编码RNA或是内含子产生的未发现的基因,本团队又构建了boule基因单碱基缺失的移码突变体,发现同样有致死现象.最后,全身性过表达Boule蛋白也可导致果蝇发育过程中的逐渐死亡.以上结果都说明,果蝇体细胞中的Boule蛋白在发育过程中起重要作用,并需要进行精确调控.这一睾丸以外的作用目前只在昆虫中发现.

关键词： boule 果蝇睾丸精子发生体细胞发育

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出生队列技术规范第1部分:现场调查(T/CPMA 015.1-2020)

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中华预防医学杂志 2021年第3期55卷 324-327页

作者：中华预防医学会胡志斌不详南京医科大学公共卫生学院流行病学系南京医科大学生殖医学国家重点实验室211166

出生队列研究的现场调查围绕研究人群的环境、遗传、生活行为习惯等因素和生殖健康相关结局开展信息和生物样本采集,是出生队列建设不可或缺的重要基础。本文件就出生队列研究现场调查中的机构设置、现场准备、队列编码体系、研究对象... 详细信息

出生队列研究的现场调查围绕研究人群的环境、遗传、生活行为习惯等因素和生殖健康相关结局开展信息和生物样本采集,是出生队列建设不可或缺的重要基础。本文件就出生队列研究现场调查中的机构设置、现场准备、队列编码体系、研究对象招募及质量控制等主要工作制定规范。

关键词：队列研究规范出生队列现场调查

来源：评论

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