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中国临床康复 2006年第24期10卷 82-84页

作者：徐海祥杨笛卞智萍徐晋丹张寄南南京医科大学第一附属医院心血管病研究所

目的:制备抗人脑钠肽单克隆抗体并对其进行初步鉴定。方法:实验于2004-12/2006-02在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所进行。利用碳化二亚胺法将合成的人脑钠肽与牛血清白蛋白偶联制备完全抗原,反复免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技... 详细信息

目的:制备抗人脑钠肽单克隆抗体并对其进行初步鉴定。方法:实验于2004-12/2006-02在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所进行。利用碳化二亚胺法将合成的人脑钠肽与牛血清白蛋白偶联制备完全抗原,反复免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术将免疫小鼠的脾细胞与Balb/c小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)在PEG下融合,HAT选择性培养,间接酶联免疫吸附方法对细胞培养上清检测、筛选,选择筛选结果脑钠肽抗体阳性的细胞株连续进行3次亚克隆,建立稳定分泌脑钠肽单克隆抗体的杂交瘤细胞株。扩大培养阳性单克隆细胞株后,腹腔注射小鼠,制备腹水。对腹水亲和层析纯化,所得的单克隆抗体行初步鉴定。结果:免疫小鼠血清呈脑钠肽抗体阳性,经筛选得到3株稳定分泌脑钠肽单克隆抗体的杂交瘤细胞株,纯化的单克隆抗体经鉴定为IgG型,蛋白质印迹分析证实单克隆抗体可特异识别脑钠肽,具备较高的特异性及敏感性。结论:成功制备了3株抗脑钠肽特异性的单克隆抗体,可用于脑钠肽免疫检测方法的建立。

关键词：利钠肽,脑抗体,单克隆酶联免疫吸附测定印迹法,蛋白质

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城乡队列人群脑卒中发病差异及其影响因素的前瞻性研究

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中华流行病学杂志 1995年第5期16卷 278-280页

作者：杜福昌王海燕姚才良朱杰王敬良董璜瑛邹志芬张淑莲钱德音南京医科大学第一附属医院心血管病研究所南京医科大学流行病学教研室南京1014所医院南京医科大学职工医院江苏海门心血管病防治办公室

在城市７７８名农村１０３１名队列人群中分别进行了为期１５年及１１年的前瞻性观察。城市组脑卒中平均年标化发病率９５．７／１０万，较农村组１８３．１／１０万明显为低。其发病率差异的主要影响因素除年龄外为农村人群的高嗜酒率... 详细信息

在城市７７８名农村１０３１名队列人群中分别进行了为期１５年及１１年的前瞻性观察。城市组脑卒中平均年标化发病率９５．７／１０万，较农村组１８３．１／１０万明显为低。其发病率差异的主要影响因素除年龄外为农村人群的高嗜酒率、高吸烟率、心电图异常及女性收缩压的增高。另外血胆固醇水平偏低也可能为影响农村脑卒中特别是脑出血高发的因素之一。

关键词：影响因素前瞻性观察中风发病率

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人心脏型脂肪酸结合蛋白的纯化与鉴定

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第27期11卷 5387-5390页

作者：季鹏顾春荣卞智萍陈相健张寄南杨笛南京医科大学第一附属医院心血管病研究所江苏省南京市210029

目的:以往的心脏型脂肪酸结合蛋白多来自牛、鼠等动物心肌组织,本实验构建了人左心室心肌组织纯化心脏型脂肪酸结合蛋白的新方法。方法:实验于2005-01/03在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所完成。①实验材料:人心室肌由南京医科... 详细信息

目的:以往的心脏型脂肪酸结合蛋白多来自牛、鼠等动物心肌组织,本实验构建了人左心室心肌组织纯化心脏型脂肪酸结合蛋白的新方法。方法:实验于2005-01/03在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所完成。①实验材料:人心室肌由南京医科大学第一附属医院心血管病研究所提供。②实验过程:取20g人左心室肌在缓冲液中匀浆,多步骤离心后以(NH4)2SO4进行盐析→再次离心→沉淀缓冲液重悬透析得蛋白粗提液→Sephadex G-75凝胶过滤→电泳确定主要蛋白条带的收集管号合并收集→QSepharose Fast Flow阴离子交换层析→聚乙二醇浓缩→缓冲液透析得人心脏型脂肪酸结合蛋白。③实验评估:以SIGMA公司人心脏型脂肪酸结合蛋白为对照标准品;以Tricine-SDS-PAGE电泳鉴定相对分子质量;以鼠抗人脂肪酸结合蛋白单克隆抗体及羊抗鼠IgG对其进行Western印迹检测鉴定其特异性。结果:①Sephadex G-75凝胶过滤柱层析结果:各组分经Tricine-SDS-PAGE电泳检测证实,部分收集管中存在相对分子质量约14400的人心脏型脂肪酸结合蛋白。②阴离子交换柱层析结果:在洗脱液NaCl浓度达6mmol/L时,出现蛋白峰,人心脏型脂肪酸结合蛋白被洗脱;NaCl浓度达20mmol/L时,蛋白峰降至基线,蛋白洗脱结束。③纯化的人心脏型脂肪酸结合蛋白鉴定结果:经电泳显示其相对分子质量约为14000,纯度约为90%;Western印迹证实其可被抗人脂肪酸结合蛋白单克隆抗体特异识别,与对照标准品SIGMA公司人心脏型脂肪酸结合蛋白结果一致。实验从20g湿重心室肌中共纯化得到15.4mg心脏型脂肪酸结合蛋白,得率为0.77mg/g。结论:Sephadex G-75凝胶过滤柱层析及阴离子交换柱层析相结合,可用于人心脏型脂肪酸结合蛋白的纯化。

关键词：载体蛋白质类人分离和提纯组织构建

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寻找一种诊治心肌损伤的新方法:鼠抗人cTnI单抗Fab段基因克隆和序列分析(英文)

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中国临床康复 2005年第19期9卷 213-215,i004页

作者：李妍妍杨笛刘剑南卞智萍徐晋丹陈相健顾春荣张寄南南京医科大学第一附属医院心血管病研究所江苏省南京市210029

背景:为将鼠抗人cTnI单克隆抗体应用人体进行体内诊断或作为治疗心肌损伤的药物载体,必须降低鼠源性抗体的免疫源性,克服其人抗鼠抗体反应,需要对其进行人源化改造。目的:克隆鼠抗人cTnI单克隆抗体Fab段基因并进行序列分析。设计:单一... 详细信息

背景:为将鼠抗人cTnI单克隆抗体应用人体进行体内诊断或作为治疗心肌损伤的药物载体,必须降低鼠源性抗体的免疫源性,克服其人抗鼠抗体反应,需要对其进行人源化改造。目的:克隆鼠抗人cTnI单克隆抗体Fab段基因并进行序列分析。设计:单一样本研究。单位:一所医科大学附属医院的心血管病研究所。材料:本实验于2003-01/2004-05在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所完成。分泌鼠抗人cTnI单克隆抗体的杂交瘤细胞株(JS200202)由南京医科大学第一附属医院心血管病研究所提供。方法:设计扩增鼠IgG重链Fd段及κ轻链引物,从分泌cTnI单抗的杂交瘤细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增,对扩增产物进行分子克隆、测序及序列分析。主要观察指标:重链Fd段和κ轻链基因序列及其所属亚型。结果:重链和轻链引物分别扩增出一约700bp和800bpDNA片段。经序列分析,与已发表的鼠IgG基因序列对比,其核苷酸及其所推导的氨基酸序列符合鼠IgG1Fab段特征。在GenBank登录,登录号为AY484430(重链),AY484431(轻链);氨基酸序列登录号为AAR83243(重链),AAR83244(轻链)。结论:本实验室获得了完整的鼠源性抗人cTnI单克隆抗体Fab段基因,为鼠抗人cTnI单克隆抗体的人源化改造奠定了基础。

关键词：抗体,单克隆基因序列分析聚合酶链反应

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冠状动脉旁路移植术近端吻合的新方法

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中华胸心血管外科杂志 2009年第2期25卷 136-137页

作者：陈鑫石开虎徐明陈绪军汪黎明蒋英硕南京医科大学附属南京第一医院南京市心血管病研究所胸心血管外科 210006

我们自行设计了一种无需运用近端吻合装置和侧壁钳，便可行近端吻合的方法，操作方便、经济实用、容易掌握、易于推广，可常规用于各种冠状动脉旁路移植术（CABG）的近端吻合，临床应用效果良好。

关键词：冠状动脉旁路移植术端吻合临床应用效果经济实用

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OX40L在C57BL/6与BALB/c小鼠组织的差异性表达及分析

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中国组织工程研究与临床康复 2010年第7期14卷 1248-1252页

作者：韩学府王飞朱舒舒徐晋妉张寄南杨笛南京医科大学第一附属医院心血管病研究所江苏省南京市210029

背景:有研究发现C57BL/6小鼠对动脉粥样硬化易感,而BALB/c小鼠却对动脉粥样硬化不易感。OX40L的表达情况与动脉粥样硬化的狭窄程度和心肌梗死的严重度相关,其在两种品系小鼠中是否存在表达差异?目的:分析OX40L在BALB/c和C57BL/6小鼠心... 详细信息

背景:有研究发现C57BL/6小鼠对动脉粥样硬化易感,而BALB/c小鼠却对动脉粥样硬化不易感。OX40L的表达情况与动脉粥样硬化的狭窄程度和心肌梗死的严重度相关,其在两种品系小鼠中是否存在表达差异?目的:分析OX40L在BALB/c和C57BL/6小鼠心脏、大脑、肾脏、骨骼肌和脾脏组织的表达差异。方法:取C57BL/6和BALB/c小鼠心脏、大脑、肾脏、骨骼肌和脾脏组织,以Trizol提取总RNA,RIPABuffer提取组织总蛋白。采用RT-PCR和WesternBlot方法检测两种品系小鼠心脏、脑、肾脏、脾脏和骨骼肌的OX40LmRNA和蛋白的表达。OX40L在两种品系小鼠不同器官间的表达差异。结果与结论:RT-PCR结果显示,C57BL/6小鼠心脏OX40LmRNA表达显著高于BALB/c小鼠(P<0.05),脾脏OX40LmRNA表达明显低于BALB/c小鼠(P<0.05),两种品系小鼠大脑、肾脏及骨骼肌OX40LmRNA表达差异无显著性意义;WesternBlot结果显示,两种品系小鼠OX40L的蛋白表达均在心脏最高;C57BL/6小鼠心、脑及肾OX40L蛋白表达均显著高于BALB/c小鼠(P<0.05),两种品系小鼠骨骼肌和脾脏OX40L蛋白表达差异无显著性意义。两个品系小鼠OX40LmRNA的表达水平与蛋白表达水平不完全一致。C57BL/6小鼠心脏中OX40LmRNA转录水平较BALB/c高,但在脾脏中表达量较后者低;C57BL/6小鼠心脏、大脑和肾脏OX40L蛋白水平均较BALB/c小鼠高;两种品系小鼠之间的表达差异提示OX40L可能与C57BL/6小鼠易感动脉粥样硬化有关。

关键词： OX40L mRNA 蛋白表达组织工程动脉粥样硬化

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心肌肌钙蛋白I磷酸化及降解与肥厚型心肌病

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中国临床康复 2006年第16期10卷 49-51,i0002页

作者：朱春霞吴恒芳马继政朱舒舒陈相健卞智萍徐晋妉杨笛张寄南南京医科大学第一附属医院心血管病研究所江苏省南京市210029

目的:观察心肌肌钙蛋白I在肥厚型心肌病小鼠心肌组织中的磷酸化与降解作用。方法:实验于2005-03/2006-01在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所及南京医科大学动物中心SPF级动物房进行。取4周龄BALB/c雌鼠12只,随机分为模型组6只,... 详细信息

目的:观察心肌肌钙蛋白I在肥厚型心肌病小鼠心肌组织中的磷酸化与降解作用。方法:实验于2005-03/2006-01在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所及南京医科大学动物中心SPF级动物房进行。取4周龄BALB/c雌鼠12只,随机分为模型组6只,正常对照组6只,适应性饲养1周后模型组小鼠转染带有EGFP报告基因的CTnIArg146Trp突变基因。饲养至20周龄时二维超声心动图检测证实模型组小鼠室间隔肥厚,断颈处死两组小鼠后,称取小鼠心脏质量(湿),心尖部心肌组织光镜病理学检查,小鼠心肌组织进行WesternBlotting检测重组蛋白、肌钙蛋白I的磷酸化及降解表达,GAPDH作为内参半定量。结果:12只小鼠进入结果分析。①模型组小鼠心脏明显增大,心脏质量(湿)/体质量比显著高于正常对照组(P<0.01);模型组小鼠心肌细胞肥大、排列紊乱、间质血管增生、少量炎性细胞浸润;两组血清肌钙蛋白I水平均正常(P>0.05)。②模型组小鼠心肌组织用抗EGFP单克隆抗体在Mr55000,24000检测到突变CTnI-EGFP及其降解片断表达。③模型组在Mr55000,30000,28000分别检测到磷酸化突变CTnI-EGFP、内源性肌钙蛋白I及其降解片断表达,正常对照组在Mr30000见磷酸化肌钙蛋白I表达,模型组内源性磷酸化肌钙蛋白I表达明显高于对照组(1.18±0.15,0.97±0.15,P<0.05)。④去磷酸化抗肌钙蛋白I单克隆抗体在Mr55000,28000,检测到去磷酸化突变肌钙蛋白I-EGFP、内源性肌钙蛋白I降解片断表达,正常对照组未见去磷酸化肌钙蛋白I表达;用针对不同位点的抗肌钙蛋白I单克隆抗体3E3,2I-14,8I-7,MF4分别在Mr55000,30000,28000检测到突变CTnI-EGFP、内源性肌钙蛋白I及其降解片断表达,正常对照组在Mr30000,见肌钙蛋白I表达,未见降解片断。结论:AdcCTnIArg146Trp-EGFP突变基因在小鼠体内成功转染心肌组织并有明显表达及降解片断出现,小鼠心脏呈现明显室间隔肥厚;小鼠内源性肌钙蛋白I磷酸化表达增强、降解与心肌肥厚的发生、发展及心肌功能的改变可能有关,但两者之间因果关系及确切机制还有待于进一步研究。

关键词：肌钙蛋白I 心肌心肌病,肥厚性

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人心肌肌钙蛋白I的纯化及鉴定

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临床检验杂志 2004年第1期22卷 9-11页

作者：卞智萍杨笛顾春荣徐晋丹杨国平张寄南南京医科大学第一附属医院心血管病研究所南京210029

目的　提取和纯化人心肌肌钙蛋白I。方法　心室肌经匀浆、离心、盐析提取 ,CMSephadexC 5 0柱层析 ,DEAESephadexA 5 0柱层析制备人cTnI ;经 (cTnI)活性检测、SDS PAGE、westernblot鉴定。结果　从 6 5 g湿重心肌中获得 4 .1mgcTnI ,分... 详细信息

目的　提取和纯化人心肌肌钙蛋白I。方法　心室肌经匀浆、离心、盐析提取 ,CMSephadexC 5 0柱层析 ,DEAESephadexA 5 0柱层析制备人cTnI ;经 (cTnI)活性检测、SDS PAGE、westernblot鉴定。结果　从 6 5 g湿重心肌中获得 4 .1mgcTnI ,分子量约为 2 4 0 0 0 ,纯度约为 84 %。结论　纯化的cTnI可被cTnI单克隆抗体特异识别 ,本实验从人心肌中成功制备cTnI。

关键词：人心肌肌钙蛋白I 纯化鉴定急性心肌梗死诊断

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血清心肌肌钙蛋白I对急性病毒性心肌炎心肌损伤诊断的价值

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临床心血管病杂志 2000年第12期16卷 557-559页

作者：陆曙陈相健杨笛徐晋丹方五旺张寄南南京医科大学第一附属医院心血管病研究所南京210029

目的 :探讨病毒性心肌炎 (VMC)小鼠血清心肌肌钙蛋白 I(c Tn I)含量与心肌组织病理改变的关系 ,为临床诊断 VMC心肌损伤提供依据。方法 :用柯萨奇 B3亲心肌病毒株 (CVB3m)制备小鼠 VMC模型 ;分别于感染病毒后第 8、15天及第 3个月 ,观测... 详细信息

目的 :探讨病毒性心肌炎 (VMC)小鼠血清心肌肌钙蛋白 I(c Tn I)含量与心肌组织病理改变的关系 ,为临床诊断 VMC心肌损伤提供依据。方法 :用柯萨奇 B3亲心肌病毒株 (CVB3m)制备小鼠 VMC模型 ;分别于感染病毒后第 8、15天及第 3个月 ,观测 VMC小鼠血清 c Tn I含量、心肌坏死病理组织学积分 (HSN)和心肌炎症组织学积分 (HSI) ,并探讨其相互关系。结果 :VMC小鼠心肌损伤以感染后第 8天最为显著 (P <0 .0 5 ) ,此时血清 c Tn I含量与 HSN(r =0 .6 96 ,P <0 .0 5 )及 HSI(r =0 .76 0 ,P <0 .0 5 )之间呈正相关。结论 :血清 c Tn I能确切地反映急性期 VMC小鼠心肌损伤的程度 ,是 VMC心肌损伤的可靠而敏感的检测指标。

关键词：病毒性心肌炎肌钙蛋白Ⅰ

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急性冠脉综合征血小板反应素-1基因多态性研究

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中国实用内科杂志 2006年第8期26卷 605-608页

作者：戴健杨志健马继政刘剑南杨笛张寄南南京医科大学第一附属医院心血管病研究所

目的探讨血小板反应素-1(TSP-1)基因第13外显子单核苷酸多态性(SNPs),致TSP-1蛋白第700位氨基酸、丝氨酸转换为天冬氨酸(700N→S)与中国汉族人急性冠脉综合征(ACS)的相关性。方法应用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性技术(PCR-RFLP),... 详细信息

目的探讨血小板反应素-1(TSP-1)基因第13外显子单核苷酸多态性(SNPs),致TSP-1蛋白第700位氨基酸、丝氨酸转换为天冬氨酸(700N→S)与中国汉族人急性冠脉综合征(ACS)的相关性。方法应用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性技术(PCR-RFLP),筛查了南京医科大学第一附属医院2003-11～2005-09的323例汉族ACS患者和273名对照组TSP-1基因第13外显子钙结合活性片段8831A→G,对筛查到含有突变的片段进行序列测定,并与正常序列进行对照分析。结果对照组TSP-1基因8831A→G变异频数明显低于西方人,与西方人群比较差异有显著性(0.4%对11%,P<0.001);TSP-1基因8831A→G不是中国汉人ACS发生的独立危险因素(GA对AA∶OR=1.699,95%CI为0.309～9.348,P=0.538)。结论TSP-1基因8831A→G在中国汉人中发生频率低,与汉族人ACS发生无相关性,补充了TSP-1基因SNPs的中国汉人数据库信息。

关键词：冠状动脉疾病血小板反应素-1基因单核苷酸多态性聚合酶链反应-限制性片断长度多态性技术 DNA序列分析

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