目的:研究超长链脂肪酸延伸酶6(elongase of very long chain fatty acids 6, ELOVL6)在口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinoma, OSCC)中的生物学行为及探究其可能的机制。方法:(1)通过慢病毒转染构建OSCC细胞株中的ELOVL6的高...
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目的:研究超长链脂肪酸延伸酶6(elongase of very long chain fatty acids 6, ELOVL6)在口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinoma, OSCC)中的生物学行为及探究其可能的机制。方法:(1)通过慢病毒转染构建OSCC细胞株中的ELOVL6的高、低表达株,并通过qRT-PCR及蛋白质免疫印迹技术(Western Blot, WB)技术验证转染后细胞株ELOVL6的表达情况。(2)采用CCK8的方法来了解ELOVL6基因对OSCC细胞增殖的影响。(3)细胞划痕、Transwell迁移及侵袭实验观察ELOVL6的表达对OSCC细胞迁移、侵袭的影响。(4)靶向代谢中长链脂肪酸绝对定量分析明确ELOVL6在细胞中对脂肪酸表达的影响。(5)qRT-PCR检测脂肪酸合成相关基因的表达情况。(6)免疫荧光术检测ROS在ELOVL6敲除和ELOVL6过表达的OSCC细胞株中的情况。(7) qRT-PCR及WB检测在ELOVL6敲除和ELOVL6过表达的OSCC细胞株中内质网应激凋亡通路上的相关蛋白及基因的表达情况。结果:(1)通过慢病毒构建了高表达及敲低表达ELOVL6的稳态细胞株。(2)CCK8实验发现:在36h时,KD-ELOVL6组细胞的相对增殖率明显下降(P<0.0001);而OE-ELOVL6组细胞的相对增殖率升高(P<0.0001)。(3)细胞划痕、Tranwell细胞迁移及侵袭实验也发现:KD-ELOVL6组细胞的划痕闭合能力、细胞迁移、侵袭能力与对照组比较弱;而OE-ELOVL6组较强(P<0.05)。(4)在OE-ELOVL6的HN6细胞中棕榈酸表达下降,油酸等多种长链脂肪酸的表达均有不同程度的升高(P<0.05)。在OE-ELOVL6细胞中,ACS, ACC, SCD1, FAS的基因表达水平也出现了升高(P<0.05)。(5)在不同ELOVL6表达水平的细胞中,内质网应激凋亡通路上的相关蛋白(PERK, p-PERK, ATF4)及PERK基因未见差异表达(P>0.05)。(6)免疫荧光结果显示:ROS的表达情况与ELOVL6的表达呈现正相关(P<0.05)。结论:ELOVL6影响了OSCC的增殖、迁移及侵袭等行为,并可能通过长链脂肪酸的水平影响细胞内ROS的表达,从而影响肿瘤的行为。
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