检索结果-内蒙古大学图书馆

SB203580对LPS诱导的肺泡巨噬细胞NR8383促炎表型的影响

宁夏医学杂志 2020年第2期42卷 108-110页

作者：李桂荣沈忱悠杨振坤谈建新赵晶晶邹健聂晓伟陈静瑜南京医科大学附属无锡人民医院临床研究中心江苏无锡214023 无锡市转化医学研究所江苏无锡214023 南京医科大学附属无锡人民医院胸心外科江苏无锡214023

目的探讨p38MAPK信号通路抑制剂SB203580对肺泡巨噬细胞促炎表型的影响。方法培养肺泡巨噬细胞NR8383,细胞融合至80%后铺6孔板,设3组为对照组,LPS组和SB203580组。LPS组中LPS的浓度为2μg/mL;SB203580组提前30 min加入SB203580,给药浓度... 详细信息

目的探讨p38MAPK信号通路抑制剂SB203580对肺泡巨噬细胞促炎表型的影响。方法培养肺泡巨噬细胞NR8383,细胞融合至80%后铺6孔板,设3组为对照组,LPS组和SB203580组。LPS组中LPS的浓度为2μg/mL;SB203580组提前30 min加入SB203580,给药浓度为50μM,然后给予LPS刺激。24 h后,收集3组细胞。提取细胞蛋白,用Western blot方法检测细胞中干扰素调节因子5(IRF5)、iNOS蛋白及NFκB信号通路关键蛋白的表达变化,细胞免疫荧光方法检测iNOS蛋白在NR8383细胞中的表达分布。结果 Western blot结果显示,LPS刺激NR8383细胞后IRF5表达上调(P<0.05),iNOS蛋白表达显著上调(P<0.05);细胞荧光实验显示iNOS蛋白荧光强度增加,p-NFκB p65蛋白高表达(P<0.05)。给予SB203580后,IRF5(P<0.05)、iNOS(P<0.05)、p-NFκB p65(P<0.05)蛋白的表达被抑制。结论 LPS刺激肺泡巨噬细胞NR8383,细胞呈现M1型促炎的表型,NFκB信号通路激活;给予SB203580后,肺泡巨噬细胞的促炎表型被抑制,同时抑制了NFκB信号通路激活,这为临床通过抑制肺泡巨噬细胞的促炎表型降低肺组织炎症损伤提供实验依据和治疗策略。

关键词：肺泡巨噬细胞促炎表型 SB203580

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

小鼠神经母细胞瘤N2a细胞不同分化培养方法的比较

引用

东南大学学报（医学版） 2019年第5期38卷 757-766页

作者：殷莹胡亚玲龚玲丽纪丽邹健南京医科大学附属无锡人民医院临床研究中心江苏无锡214023 无锡市转化医学研究所江苏无锡214023

目的:比较5种不同分化培养方法对小鼠神经母细胞瘤N2a细胞形态、分化情况、分化标志物及增殖、凋亡的影响。方法:N2a细胞分别以D10[DMEM+10%胎牛血清(FBS)]完全培养基和不同分化培养基D1(DMEM+1%FBS)、D0(不含FBS的DMEM培养基)、30%OM(D... 详细信息

目的:比较5种不同分化培养方法对小鼠神经母细胞瘤N2a细胞形态、分化情况、分化标志物及增殖、凋亡的影响。方法:N2a细胞分别以D10[DMEM+10%胎牛血清(FBS)]完全培养基和不同分化培养基D1(DMEM+1%FBS)、D0(不含FBS的DMEM培养基)、30%OM(DMEM+30%Opti-MEMⅠ)、D2+视黄酸(RA)(DMEM+2%FBS+10μmol·L-1 RA)和D1+RA(DMEM+1%FBS+10μmol·L-1RA)培养后显微镜眀场随机拍照,观察不同时间点的分化比例、突起长度及突起数量;免疫荧光染色和蛋白质印迹法检测神经元标志物的表达;EdU掺入流式细胞术、CCK-8和AnnexinⅤ/PI双染流式细胞术检测不同培养方法对细胞增殖和凋亡的影响。结果:中等密度培养条件下D0组72 h分化比例为(35.92±2.63)%,D1、30%OM、D2+RA和D1+RA组96 h分化比例分别为(10.40±2.05)%、(29.70±4.98)%、(11.37±2.56)%和(45.13±8.75)%;分化后神经元标志物微管蛋白beta-Ⅲ(βⅢ-tubulin)和生长相关蛋白43(GAP43)表达上调。D0组分化培养24 h后即可见长突起,突起以单支为主,但增殖能力较D10和30%OM组低,凋亡和死亡比例高,72 h后细胞状态差,大部分死亡。D1+RA组分化培养24 h也可见长突起,细胞呈多支生长,增殖能力也较D10和30%OM组低,凋亡和死亡比例高。30%OM组分化72 h才见较长突起,突起以两支为主,细胞增殖能力较D10组略低,但凋亡与D10组无显著差异。在低密度培养条件下30%OM可实现长时间分化培养,分化比例随培养时间的延长而增加,培养144 h分化比例达(56.22±6.27)%,突起长度(176.73±108.61)μm。结论:D0、30%OM和D1+RA分化培养方法均可实现较高比例的分化,D0和D1+RA分化和长突起的出现早于30%OM,但细胞增殖率低,凋亡比例高,不利于长时间培养;30%OM培养在低密度下可实现高分化比例和长突起,适合长时间分化培养。

关键词： N2a细胞分化培养增殖凋亡神经母细胞瘤小鼠

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

基于CRISPR/Cas9技术的SRSF9基因敲除对成胶质细胞瘤生物学功能的影响

引用

肿瘤 2018年第11期38卷 1011-1021页

作者：汪京京胡亚玲邹健张博穆会君殷莹南京医科大学附属无锡人民医院临床研究中心无锡市转化医学研究所江苏无锡214023

目的:基于成簇规律间隔短回文重复序列(clustered regulatory interspaced shortpalindromicrepeats,CRISPR)/Cas9系统构建富含丝氨酸/精氨酸剪切因子9(serine-arginine-rich splicing factor 9,SRSF9)基因敲除的人脑胶质瘤U87稳定细胞株,研究SRSF9在人成胶质细胞瘤中的生物学功能。方法:利用CRISPR/Cas9系统构建3个针对SRSF9基因的单链向导RNA(single guide RNA,sgRNA),将其转入胶质瘤U87细胞后,采用蛋白质印迹法鉴定SRSF9基因敲除效率。采用有限稀释法挑选出3株SRSF9基因敲除的U87单克隆细胞株并扩增,采用CCK-8法和EdU掺入的FCM法检测细胞体外增殖能力,采用平板克隆形成实验和干细胞成球实验分别检测细胞体外克隆形成和成球的能力,采用裸鼠皮下成瘤实验检测细胞体内成瘤的能力。结果:3条sgRNA成功插入慢病毒载体中,且序列正确。经慢病毒感染效率分析及蛋白质印迹法鉴定证明,SRSF9基因敲除的U87多克隆细胞株构建成功;经蛋白质印迹法和DNA测序确认SRSF9基因敲除的U87单克隆细胞株构建成功,序列发生移码突变。SRSF9基因敲除后,U87单克隆细胞的增殖和克隆形成能力均明显降低(P值均<0.05),肿瘤干细胞成球能力也明显下降(P <0.001),而且在裸鼠体内的成瘤能力明显减弱(P <0.01)。结论:成功建立基于CRISPR/Cas9技术的SRSF9基因敲除的脑胶质瘤U87细胞株,并通过功能实验证明SRSF 9是成胶质细胞瘤的一个关键致癌基因。

关键词：神经胶质瘤基因敲除技术细胞增殖基因,SRSF9 CRISPR/Cas9技术

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：