检索结果-内蒙古大学图书馆

南京师大学报（自然科学版） 2017年第2期40卷 65-71页

作者：孙宾刘莹莹李鹏严洁周开亚南京师范大学生命科学学院江苏省生物多样性与生物技术重点实验室与江苏省水生甲壳动物病害重点实验室江苏南京210023

利用Illumina/Solexa高通量测序技术,开展了中华绒螯蟹和长江华溪蟹胚胎的小RNA深度测序.对测序结果进行生物信息学分析,分别筛选获得中华绒螯蟹的8 569 743条和长江华溪蟹的8 719 465条干净序列(Clean Unique Reads),长度分布在20 nt^2... 详细信息

利用Illumina/Solexa高通量测序技术,开展了中华绒螯蟹和长江华溪蟹胚胎的小RNA深度测序.对测序结果进行生物信息学分析,分别筛选获得中华绒螯蟹的8 569 743条和长江华溪蟹的8 719 465条干净序列(Clean Unique Reads),长度分布在20 nt^22 nt区间内的分别占有30.47%(Ejs-OB:中华绒螯蟹胚胎测序文库)和30.38%(SY-OJC:长江华溪蟹胚胎测序文库).用SOAP程序将小RNA定位到基因组,结果 Ejs-OB中分析筛选出5 745 279个小RNA,其中13 472种小RNA与基因组的序列匹配;SY-OJC中分析筛选出4 397 509个小RNA,其中18 407种小RNA与基因组的序列匹配.分类注释的结果显示,中华绒螯蟹和长江华溪蟹分别有6 293 445(Ejs-OB)和5 596 614(SY-OJC)条miRNA候选序列,但未预测发现新miRNA.在表达水平的差异分析结果中发现miR-1183、miR-1357、miR-1591、miR-2382的表达水平上调且差异显著.在两文库中搜寻到一些共同miRNA*序列,其中miR-139*、miR-1419g*、miR-1798*、miR-202*、miR-2068*和miR-454*也是表达变异较大.这些结果表明,miRNA可能在调控与中华绒螯蟹和长江华溪蟹胚胎发育相关的基因表达中起重要作用.

关键词：中华绒螯蟹长江华溪蟹小RNA miRNA

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红螯螯虾酚氧化酶原及其特性研究(英文)

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水生生物学报 2015年第1期39卷 117-125页

作者：顾伟陈静黄艳青靳明建孟庆国王文南京师范大学生命科学学院江苏省生物多样性与生物技术重点实验室江苏省水生甲壳动物病害重点实验室南京210023 中国水产科学研究院东海水产研究所农业部海洋与河口渔业资源及生态重点开放实验室上海200090 江苏省如东县渔业技术推广站南通226400

采用同源克隆策略和RACE技术,从红螯螯虾Cherax quadricarinatus血细胞中克隆得到酚氧化酶原基因的全长c DNA序列,共2951 bp,开放读码框为1995 bp,编码665个氨基酸。预测的分子量和等电点分别为75.7 k D和6.23。酚氧化酶原含有两个推测... 详细信息

采用同源克隆策略和RACE技术,从红螯螯虾Cherax quadricarinatus血细胞中克隆得到酚氧化酶原基因的全长c DNA序列,共2951 bp,开放读码框为1995 bp,编码665个氨基酸。预测的分子量和等电点分别为75.7 k D和6.23。酚氧化酶原含有两个推测的tyrosinase copper-binding motifs(带有六个组氨酸残基)和一个thiol-ester-like motif,这些特征和其他甲壳动物的酚氧化酶原特征相同。红螯螯虾酚氧化酶原氨基酸序列与通讯螯虾Pacifastacus leniusculus、欧洲龙虾Homarus gammarus、美洲龙虾Homarus americanus和克氏原螯虾Procambarus clarkii酚氧化酶原的相似率分别为68%、63%、63%和59%。酚氧化酶原基因双酶切后连接入p ET-28a原核表达载体,转化到大肠杆菌BL21后重组表达酚氧化酶原蛋白。在重组蛋白纯化后,免疫新西兰大耳兔制备得到的酚氧化酶原多克隆抗体,其效价大于1︰12800。红螯螯虾血淋巴、肝和鳃组织中的酚氧化酶原m RNA表达和酚氧化酶活性较高,而神经、心、肠和肌肉中较低。中华绒螯蟹螺原体和嗜水气单胞菌免疫红螯螯虾后,血淋巴细胞、肝和鳃组织中的酚氧化酶原和酚氧化酶活性在免疫后的不同时间均出现了显著性的增加,此结果表明酚氧化酶原和酚氧化酶在红螯螯虾对抗细菌感染的过程中起到重要的免疫作用。此结果为进一步深入研究酚氧化酶原基因和酚氧化酶的功能及其调控机理奠定基础。

关键词：酚氧化酶原中华绒螯蟹螺原体嗜水气单胞菌红螯螯虾

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日本沼虾两种抗脂多糖因子的特性研究（英文）

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水生生物学报 2017年第5期41卷 977-983页

作者：王英慧修云吉顾伟孟庆国王文南京师范大学生命科学学院江苏省生物多样性与生物技术重点实验室江苏省水生甲壳动物病害重点实验室南京210023 中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部海洋渔业可持续发展重点实验室青岛266071 海洋科学与技术国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室青岛266200

为了研究抗脂多糖因子ALFs在日本沼虾先天性免疫中的功能作用,研究从日本沼虾中克隆了2种抗脂多糖因子Mn ALF1、Mn ALF2。Mn ALF1 c DNA全长1008 bp,编码121个氨基酸;Mn ALF2 c DNA全长836 bp,编码124个氨基酸。这2种氨基酸均包含有一... 详细信息

为了研究抗脂多糖因子ALFs在日本沼虾先天性免疫中的功能作用,研究从日本沼虾中克隆了2种抗脂多糖因子Mn ALF1、Mn ALF2。Mn ALF1 c DNA全长1008 bp,编码121个氨基酸;Mn ALF2 c DNA全长836 bp,编码124个氨基酸。这2种氨基酸均包含有一个信号肽序列和一个LPS结合位点,并且在结合位点的两端(N-端和C-端)都有2个保守的半胱氨酸残基。这2种Mn ALFs与之前发现的甲壳动物的ALFs是非常相似的。q RT-PCR结果显示Mn ALFs在所有被检测的组织中均有表达。其中Mn ALF1主要在心脏和小肠内表达,而Mn ALF2则主要在血细胞和肝胰脏中表达。在用嗜水气单胞菌刺激之后发现2种Mn ALFs在心脏、小肠、血细胞、肝胰脏中都呈现出明显的时间依赖表达模式(Mn ALF1在刺激之后呈现出先减少后增加的趋势,之后分别在不同组织的不同时间点达到最大值;然而,对于Mn ALF2,在心脏和小肠中先减少后增加,在血细胞和肝胰脏中呈现出先增加后减少,最后都在24h达到最大值)。结果提示这2种Mn ALF具有不同的组织特异性,并且在细菌侵染的免疫防御中起着重要的保护作用。

关键词：日本沼虾抗脂多糖因子表达分析嗜水气单胞菌

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中华绒螯蟹螺原体类螺旋蛋白SLP25对中华绒螯蟹和RAW264.7细胞免疫反应的研究

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南京师大学报（自然科学版） 2013年第2期36卷 78-83,90页

作者：孟庆国陈静黄艳青靳明建顾伟王文南京师范大学生命科学学院江苏省生物多样性与生物技术重点实验室江苏省水生甲壳动物病害重点实验室江苏南京210023 中国水产科学研究院东海水产研究所农业部海洋与河口渔业资源及生态重点开放实验室上海200090 江苏省如东县渔业技术推广站江苏如东226400

中华绒螯蟹螺原体是一种引起中华绒螯蟹颤抖病的新型病原微生物,对中华绒螯蟹养殖业造成了很大的损失.本文研究了螺原体的一个特有蛋白——螺旋蛋白所引起的中华绒螯蟹和小鼠RAW264.7细胞的免疫反应.克隆和原核表达中华绒螯蟹螺原体类... 详细信息

中华绒螯蟹螺原体是一种引起中华绒螯蟹颤抖病的新型病原微生物,对中华绒螯蟹养殖业造成了很大的损失.本文研究了螺原体的一个特有蛋白——螺旋蛋白所引起的中华绒螯蟹和小鼠RAW264.7细胞的免疫反应.克隆和原核表达中华绒螯蟹螺原体类螺旋蛋白SLP25后,用以感染中华绒螯蟹和小鼠巨噬细胞RAW264.7,用实时定量PCR和Western Blot的方法检测宿主免疫相关基因或蛋白表达量的变化.类螺旋蛋白SLP25刺激后,中华绒螯蟹的抗脂多糖因子、酚氧化酶原、消极素轻链和Peroxiredoxin 6等基因的mRNA表达量变化显著;RAW264.7细胞内的TNF-α、IL-1β和IL-10等基因的mRNA表达量变化显著,而TGF-β1和CD40的mRNA表达量变化不显著;同时RAW264.7细胞内P38和ERK蛋白的磷酸化水平变化显著,而JNK蛋白的磷酸化水平变化不显著.通过本文的研究表明类螺旋蛋白SLP25可以引起宿主广泛的免疫变化,进而证明其是重要的毒力相关因子.

关键词：螺原体中华绒螯蟹螺旋蛋白免疫反应

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中华绒螯蟹螺原体对中华绒螯蟹和RAW264.7细胞免疫反应研究

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南京师大学报（自然科学版） 2012年第2期35卷 77-82,88页

作者：孟庆国黄艳青靳明建顾伟王文南京师范大学生命科学学院江苏省生物多样性与生物技术重点实验室江苏省水生甲壳动物病害重点实验室江苏南京210046 中国水产科学研究院东海水产研究所农业部海洋与河口渔业资源及生态重点开放实验室上海200090 江苏省如东县渔业技术推广站江苏南通226400

中华绒螯蟹螺原体是一种引起中华绒螯蟹颤抖病的新型病原微生物,对中华绒螯蟹养殖业造成了很大的损失.虽然很多无脊椎动物免疫反应的研究已经报道,但是螺原体引起宿主免疫反应的研究目前还未见报道.中华绒螯蟹螺原体既可以感染中华绒螯... 详细信息

中华绒螯蟹螺原体是一种引起中华绒螯蟹颤抖病的新型病原微生物,对中华绒螯蟹养殖业造成了很大的损失.虽然很多无脊椎动物免疫反应的研究已经报道,但是螺原体引起宿主免疫反应的研究目前还未见报道.中华绒螯蟹螺原体既可以感染中华绒螯蟹,也可以感染乳鼠.本文在动物个体水平上研究了中华绒螯蟹螺原体与中华绒螯蟹的免疫关系,中华绒螯蟹经螺原体刺激后,其体内抗脂多糖因子、酚氧化酶原、酚氧化酶原激活因子、消极素轻链等基因的mRNA的表达水平显著上升,而抗氧化蛋白Prx 6的表达量显著下降.本文还在细胞水平研究了中华绒螯蟹螺原体与小鼠巨噬细胞之间的免疫关系,中华绒螯蟹螺原体刺激后,细胞中CD40、IL-1β、IL-10基因的mRNA表达量显著下降,而TGF-β1和TNF-α等基因的表达量上升.本实验结果说明螺原体可以引起寄主很广泛的免疫反应.

关键词：中华绒螯蟹 RAW264.7细胞螺原体免疫反应

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红螯螯虾冷休克蛋白Y-box编码基因的克隆及表达分析

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淡水渔业 2012年第6期42卷 14-20页

采用RT-PCR和RACE技术,从红螯螯虾(Cherax quadricarinatus)血细胞中分离到冷休克蛋白Y-box编码基因的cDNA序列。结果显示,冷休克蛋白Y-box编码基因的长度为1 733 bp,其中包括82 bp的5'非翻译区、676 bp的3'非翻译区和975 bp的... 详细信息

采用RT-PCR和RACE技术,从红螯螯虾(Cherax quadricarinatus)血细胞中分离到冷休克蛋白Y-box编码基因的cDNA序列。结果显示,冷休克蛋白Y-box编码基因的长度为1 733 bp,其中包括82 bp的5'非翻译区、676 bp的3'非翻译区和975 bp的编码序列,可编码324个氨基酸。理论相对分子质量和等电点分别为35 800和9.81。结构域分析和序列比对显示,红螯螯虾冷休克Y-box蛋白由3部分组成:富含丙氨酸或脯氨酸区域、冷休克结构域和带电荷区域,其中冷休克结构域高度保守。系统进化树分析表明,红螯螯虾冷休克Y-box蛋白与水蚤等节肢动物冷休克Y-box蛋白聚类,且三级结构非常相似。最适温度养殖条件下,冷休克蛋白Y-box的虾组织分布特异性研究表明,红螯螯虾神经组织的冷休克蛋白Y-box转录活性最强,而后依次为肝脏、血淋巴和鳃,在肠和心脏中也有活性,在肌肉组织中转录保持较低水平,揭示神经组织是重要的冷休克Y-box蛋白表达区。

关键词：红螯螯虾(Cherax quadricarinatus) 冷休克Y—box蛋白克隆实时荧光定量PCR

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中华绒螯蟹螺原体分泌蛋白鉴定及其在侵染过程中的功能研究

中华绒螯蟹螺原体分泌蛋白鉴定及其在侵染过程中的功能研究

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第十届世界华人虾蟹养殖研讨会暨2016年中国河蟹产业发展高峰论坛

作者：宁明晓毕京秀王文孟庆国南京师范大学生命科学学院水生甲壳动物疾病重点实验室江苏省生物多样性和生物技术重点实验室中国江苏省南京市栖霞区仙林街道文苑路1号210023

Sec途径(分泌途径,Secretion pathway)是蛋白质转运的主要途径。其中,SecA ATPase是蛋白质转运途径中的“动力泵”,它通过ATP的水解循环驱使蛋白质前体穿过细菌内膜。为了研究中华绒螯蟹螺原体分泌蛋白的功能,我们克隆了SecA这个基因,...

Sec途径(分泌途径,Secretion pathway)是蛋白质转运的主要途径。其中,SecA ATPase是蛋白质转运途径中的“动力泵”,它通过ATP的水解循环驱使蛋白质前体穿过细菌内膜。为了研究中华绒螯蟹螺原体分泌蛋白的功能,我们克隆了SecA这个基因,分析核酸序列可知其开放阅读框(ORF)为2391bp,编码796个氨基酸,SecA重组蛋白在大肠杆菌BL21表达载体中表达。本实验运用Pull-down技术,筛选SecA ATPase与螺原体体内的互作蛋白,进行SDS-PAGE电泳分离SecA和互作蛋白,切胶回收互作蛋白进行质谱鉴定、蛋白测序以筛选互作的毒力蛋白,得到的互作蛋白为GAPA(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)。为了研究其在侵染及免疫方面的功能,本实验克隆了GAPA这个基因,分析核酸序列可知其开放阅读框(ORE)为999bp,编码332个氨基酸,GAPA重组蛋白在大肠杆菌BL21表达载体中表达。据其它文献报道,GAPA是糖酵解反应中的一个酶,在多种细菌和真核生物中被发现该蛋白分部在细胞膜上,在某些情况下,已经被证明GAPA有助于入侵宿主组织。

关键词：

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中华绒螯蟹MBP在螺原体侵染过程中的功能研究

中华绒螯蟹MBP在螺原体侵染过程中的功能研究

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第十届世界华人虾蟹养殖研讨会暨2016年中国河蟹产业发展高峰论坛

作者：毕京秀宁明晓王文孟庆国南京师范大学生命科学学院水生甲壳动物疾病重点实验室江苏省生物多样性和生物技术重点实验室中国江苏省南京市栖霞区仙林街道文苑路1号210023

MBP(甘露糖结合蛋白)是一种存在于中华绒螯蟹血清中的c型凝集素.MBP通过结合病原生物表面的甘露糖等糖基受体调节吞噬作用,在机体的固有免疫应答过程中发挥重要作用.为了研究其在侵染及免疫方面的功能,克隆了MBP这个基因,分析核酸序列...

MBP(甘露糖结合蛋白)是一种存在于中华绒螯蟹血清中的c型凝集素.MBP通过结合病原生物表面的甘露糖等糖基受体调节吞噬作用,在机体的固有免疫应答过程中发挥重要作用.为了研究其在侵染及免疫方面的功能,克隆了MBP这个基因,分析核酸序列可知其全长为1154bp,开放阅读框(ORF)为915bp,编码304个氨基酸,并将MBP重组蛋白在大肠杆菌BL21表达载体中表达,以纯化后的MBP重组蛋白作为抗原免疫新西兰兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA法检测抗血清的效价.之后通过Far-Western Blotting技术筛选MBP与螺原体的互作蛋白,质谱分析与螺原体互作的蛋白有Mreb3和SLP蛋白.Mreb3蛋白是中华绒螯蟹螺原体的骨架蛋白,该蛋白有维持螺原体独特的螺旋细胞结构的作用.本实验克隆了Mreb3这个基因,分析核酸序列可知其开放阅读框(ORE)为1059bp,编码352个氨基酸,并将Mreb3重组蛋白在大肠杆菌BL21表达载体中表达,得到约39KDa的重组蛋白,并进行了多克隆抗体的制备和效价检测.SLP是中华绒螯蟹螺原体的类螺旋蛋白,基于本课题组对SLP的研究,表明SLP可以引起宿主一系列免疫反应,包括免疫相关基因的明显表达和蛋白激酶磷酸化水平的提高等.再次通过Far-Western Blotting技术,验证螺原体刺激中华绒螯蟹时,SLP和Mreb3蛋白是否与中华绒螯蟹的MBP蛋白发生互作,结果表明,两者均与中华绒螯蟹的MBP蛋白发生互作.为了进一步验证MBP与Mreb3以及SLP之间的相互作用,本研究拟进行免疫共沉淀、激光共聚焦实验、交叉中和实验、过表达及DSRNA干扰技术研究互作蛋白的功能.通过以上实验拟阐明螺原体在侵染中华绒螯蟹血细胞过程中MBP与SLP以及Mreb3之间存在相互作用.

关键词：

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