检索结果-内蒙古大学图书馆

林业科学 2009年第2期45卷 17-21页

作者：杨春霞李火根程强陈英南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室南京210037 江西省林业科学院南昌330032

以美洲黑杨杂种优良无性系南林895杨为转基因受体材料,利用农杆菌介导法转化与逆境胁迫相关的DREB1C基因。经潮霉素筛选,共获得80株抗性植株,经PCR及RT-PCR检测有30株抗性植株呈阳性,初步证明DREB1C基因已整合到南林895杨基因组中。抗... 详细信息

以美洲黑杨杂种优良无性系南林895杨为转基因受体材料,利用农杆菌介导法转化与逆境胁迫相关的DREB1C基因。经潮霉素筛选,共获得80株抗性植株,经PCR及RT-PCR检测有30株抗性植株呈阳性,初步证明DREB1C基因已整合到南林895杨基因组中。抗性试验结果初步表明,转基因植株的抗旱、耐盐性均有所提高。

关键词：南林895杨 DREB1C基因遗传转化抗旱耐盐性

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中国鹅掌楸纤维素合酶的CRISPR/Cas9基因敲除系统的gRNA表达载体构建

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分子植物育种 2017年第6期15卷 2195-2199页

作者：徐惠芳金磊磊徐璇许梦璐张芳超郑晨陈金慧南京林业大学林学院林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室南京210037 南京林业大学南方现代林业协同创新中心南京210037

CRISPR/Cas系统最早发现于细菌,对入侵的病毒或噬菌体DNA具有免疫作用。基于CRISPR/Cas的免疫机制,设计开发的CRISPR/Cas9基因编辑系统已经成为真核生物基因编辑的主流工具,在拟南芥、水稻等高等植物的基因组功能研究中已经广泛应用。... 详细信息

CRISPR/Cas系统最早发现于细菌,对入侵的病毒或噬菌体DNA具有免疫作用。基于CRISPR/Cas的免疫机制,设计开发的CRISPR/Cas9基因编辑系统已经成为真核生物基因编辑的主流工具,在拟南芥、水稻等高等植物的基因组功能研究中已经广泛应用。本研究以中国鹅掌楸纤维素合酶(Cellulose synthase,CESA)为研究对象,首次构建了具有表达中国鹅掌楸纤维素合酶(Cellulose synthase,CESA)gRNA(guide RNA)的CRISPR/Cas9基因敲除系统,以LcCESA1基因外显子5'端的第一个外显子区域的GN19NGG序列设计gRNA引物;以p201N-Cas9为载体,Gibson Assembly誖Master Mix为连接酶,通过Gibson Assembly连接技术,将CESA1-gRNA连入p201N-Cas9中,获得p201N-Cas9-CESA1-gRNA载体。根据载体中插入序列,设计了两对检测引物,经PCR鉴定,均获得了相应大小的序列;测序分析进一步证实确认gRNA已经完整准确地连入载体。p201N-Cas9-CESA1-gRNA载体能对CESA1基因进行定向编辑,对后续研究鹅掌楸纤维素合酶的基因功能具有重要意义。

关键词： CRISPR/Cas9系统中国鹅掌楸 gRNA 载体构建

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6个杂交鹅掌楸无性系的抗旱性比较

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南京林业大学学报(自然科学版) 2009年第2期33卷 39-42页

作者：孙志勇王维季孔庶南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室保定职业技术学院

以6个杂交鹅掌楸无性系(NE04、NE22、NE23、NE25、NE38、NE78)的1年生扦插苗为试材,研究了干旱胁迫条件下各无性系叶片相对含水量、质膜相对透性、可溶性蛋白质和游离脯氨酸含量、超氧化物歧化酶及抗坏血酸过氧化物酶活性等的变化。结... 详细信息

以6个杂交鹅掌楸无性系(NE04、NE22、NE23、NE25、NE38、NE78)的1年生扦插苗为试材,研究了干旱胁迫条件下各无性系叶片相对含水量、质膜相对透性、可溶性蛋白质和游离脯氨酸含量、超氧化物歧化酶及抗坏血酸过氧化物酶活性等的变化。结果表明:各无性系随胁迫程度加剧,相对含水量减少,质膜透性增大,可溶性蛋白质和游离脯氨酸含量增加,超氧化物歧化酶活性上升,抗坏血酸过氧化物酶活性表现出"先升后降"趋势,但各指标变化幅度因无性系不同而异。采用隶属函数法对上述指标进行综合分析,可得出其抗旱能力从大到小依次为:NE25、NE78、NE22、NE04、NE38、NE23。

关键词：杂交鹅掌楸无性系抗旱性隶属函数法

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亚美马褂木在我国丘陵山区的造林示范与推广

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林业科技开发 2015年第5期29卷 1-4页

作者：王章荣高捍东南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建重点实验室南京210037 国家林业局林木种子中心南京林业大学林学院

就亚美马褂木在湖北省低山丘陵地区引种试验与造林示范的关键技术成果进行总结.自2006年以来,在湖北京山县丘陵山区已营造了333.3 hm2亚美马褂木工业人工林.林木生长旺盛,树干通直圆满,胸径年平均生长量为1.5 ～2.0 cm,树高年平均生长量... 详细信息

就亚美马褂木在湖北省低山丘陵地区引种试验与造林示范的关键技术成果进行总结.自2006年以来,在湖北京山县丘陵山区已营造了333.3 hm2亚美马褂木工业人工林.林木生长旺盛,树干通直圆满,胸径年平均生长量为1.5 ～2.0 cm,树高年平均生长量为1.5～2.0m,结果表明亚美马褂木是丘陵山地造林的优良树种.成功营造大面积亚美马褂木人工林的关键技术是：选用纯正的亚美马褂木良种壮苗造林,把好种苗关;选择土层深厚、排水良好的立地条件造林,把好立地关;采用高标准整地、抓住深秋初春的良好造林时机,做好幼林抚育管护,确保造林成活、成林,把好关键技术措施关;校企合作产学研结合,确保营林关键生产技术顺利实施.

关键词：亚美马褂木良种造林适地适树校企合作

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CRISPR/Cas技术及其作用机理

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分子植物育种 2022年第7期20卷 2310-2319页

作者：毛金燕翟惠王洁侯静南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室南京210037 南京林业大学林学院南方现代林业协同创新中心南京210037

CRISPR/Cas(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated)系统是一种原核生物的免疫系统,能够抵御外来病毒、质粒等遗传元件的入侵,为自身提供了获得性免疫保护机制。该系统具有操作简单、高效等优点... 详细信息

CRISPR/Cas(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated)系统是一种原核生物的免疫系统,能够抵御外来病毒、质粒等遗传元件的入侵,为自身提供了获得性免疫保护机制。该系统具有操作简单、高效等优点,通过改造使其成为了锌指核酸酶(ZFNs)技术和转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)技术之后的第三代定点编辑技术。目前,Cas9、Cas12、Cas13、Cas14等Cas蛋白相继出现,这些CRISPR/Cas系统在RNA的指导下,可对靶向的双链DNA、单链RNA和单链DNA进行编辑,在基因敲除或替换、转录调控、表观遗传调控、荧光成像及分子检测等领域具有广阔的应用前景。本研究将对CRISPR/Cas系统的来源、结构及其作用机理进行介绍,以期为CRISPR/Cas系统的应用研究提供一些有益参考。

关键词： CRISPR/Cas 定点编辑双链DNA 单链RNA 单链DNA

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凝结芽孢杆菌N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶基因的克隆鉴定及酶学性质

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林业工程学报 2017年第2期2卷 70-75页

作者：夏美娟宦才辉姜婷郑兆娟欧阳嘉南京林业大学化学工程学院南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室南京210037

N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAGase)是微生物几丁质酶系中不可缺少的一部分,近年来由于其在几丁质降解过程中的特殊作用而受到关注。笔者从凝结芽孢杆菌NL01基因组上克隆获得了1个假定的N-乙酰-β-D-氨... 详细信息

N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAGase)是微生物几丁质酶系中不可缺少的一部分,近年来由于其在几丁质降解过程中的特殊作用而受到关注。笔者从凝结芽孢杆菌NL01基因组上克隆获得了1个假定的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶基因,长度为1 761 bp,编码586个氨基酸,蛋白质理论分子量为64.5 k Da,编码氨基酸序列与已报道的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶相似性仅为38%。将该基因克隆至表达载体pETDuet-1上,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行重组表达,结果显示重粗酶具有N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力,经镍柱纯化获得纯酶的比酶活为74.3 U/mg。对重组酶酶学性质研究发现,该酶是一种新型耐高温N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶。最适pH为5.5,最适温度为75℃,pH和热稳定性较好,在pH 3.5~7.5范围内比较稳定,在不高于65℃条件下热处理30 min后,酶活力可以保持在70%以上。

关键词：凝结芽孢杆菌 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶表达纯化酶学性质

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CRISPR/Cas9系统介导的基因编辑文库筛选在植物中的应用

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分子植物育种 2021年第18期19卷 6051-6058页

作者：王洁吴怀通南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室南京210037 南京林业大学林学院南方现代林业协同创新中心南京210037

CRISPR/Cas9系统通过对基因的定向编辑,对基因组编辑产生了革命性的影响,成功促进了突变体筛选在基因组水平上的新发展。虽然该系统构建突变体文库速度快,针对性强,且具有巨大的应用前景,目前在一些重要作物的研究中已取得了重要进展,... 详细信息

CRISPR/Cas9系统通过对基因的定向编辑,对基因组编辑产生了革命性的影响,成功促进了突变体筛选在基因组水平上的新发展。虽然该系统构建突变体文库速度快,针对性强,且具有巨大的应用前景,目前在一些重要作物的研究中已取得了重要进展,但其在木本植物中的应用仍处于初级阶段。本研究总结了CRISPR/Cas9系统在植物基因编辑文库构建方面的应用,探究该系统如何应用于构建突变敲除体库。将构建基因编辑突变体文库作为深入研究基因功能的手段,本研究综述的信息将对推进木本植物相关研究提供有益的借鉴。

关键词：基因组编辑 CRISPR/Cas9 突变体文库基因功能

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3种木薯全基因组的密码子偏好性模式与变异来源比较

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应用与环境生物学报 2021年第4期27卷 1013-1021页

作者：王占军丁亮蔡倩文李杰吴子琦姚怀桐王悦焦春燕欧祖兰徐忠东施季森陈金慧合肥师范学院生命科学学院合肥230601 南京林业大学林木遗传和生物技术省部共建教育部重点实验室/南京林业大学南方现代林业协同创新中心南京210037

密码子偏好性研究有利于了解基因表达特征、探索遗传进化规律及为分子育种提供依据.综合运用Perl语言和Codon W1.4.2、SPSS23.0等软件,系统分析3种木薯基因组的编码基因序列,从而得出密码子使用特征并明确影响密码子使用的变异来源.结... 详细信息

密码子偏好性研究有利于了解基因表达特征、探索遗传进化规律及为分子育种提供依据.综合运用Perl语言和Codon W1.4.2、SPSS23.0等软件,系统分析3种木薯基因组的编码基因序列,从而得出密码子使用特征并明确影响密码子使用的变异来源.结果显示,3种木薯基因组的密码子在使用模式上具有较高的相似性:总碱基组成在3种木薯中差异较小,都是A/T含量较高,而G/C含量较低,且均偏好使用A/T结尾;通过RSCU(同义密码子相对使用度)值比较分析发现,3种木薯有27个共同的偏好密码子,其中以A/T结尾的密码子达85%以上;RFSC(同义密码子相对使用频率)值显示出3种木薯具有14个相同的高频密码子;其基因的异源表达受体优先选择拟南芥、烟草和毛果杨;密码子偏好性主要受自然选择影响,同时也受到突变压力等其他因素的影响.本研究表明3种木薯基因组的密码子使用模式高度相似且主要受自然选择影响,结果可为将来研究木薯的进化规律和提高外源基因表达效率提供重要依据.

关键词：木薯全基因组序列密码子偏好性进化规律异源表达

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比拉底白刺苗期抗旱性分析

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南京林业大学学报(自然科学版) 2015年第6期39卷 51-55页

作者：鲁路张景波陈金慧周艳威成铁龙林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室南京林业大学林学院中国林业科学研究院沙漠林业实验中心

为研究澳大利亚荒漠植物比拉底白刺的抗旱性,以比拉底白刺幼苗作为研究材料,在100 mmol/L甘露醇溶液模拟干旱的环境下,观察了植物形态变化,测定了植物的相对含水量(relative water content,RWC)、过氧化物酶活性(peroxidase,POD)、丙二... 详细信息

为研究澳大利亚荒漠植物比拉底白刺的抗旱性,以比拉底白刺幼苗作为研究材料,在100 mmol/L甘露醇溶液模拟干旱的环境下,观察了植物形态变化,测定了植物的相对含水量(relative water content,RWC)、过氧化物酶活性(peroxidase,POD)、丙二醛(malondiadehyde,MDA)以及游离脯氨酸(proline,Pro)含量的动态变化。结果表明,干旱处理过程中,比拉底白刺叶片从基部往上逐渐萎蔫变黄,推测其通过保护顶芽的生命力以适应干旱环境;相对含水量前期相对稳定,后逐渐下降;POD活性先缓慢升高,后快速上升;游离Pro浓度总体呈上升趋势;MDA含量先升后降。差异显著性分析表明,与对照相比,POD和游离Pro的变化趋势与对照组相比差异显著,说明二者与比拉底白刺的抗旱性具有相关性,通过减少质膜过氧化保护细胞完整性;MDA含量变化不明显,可能由于POD和游离脯氨酸的作用使得白刺细胞的膜脂系统未遭受活性氧自由基的强烈攻击。

关键词：比拉底白刺苗生理指标测定抗旱性分析

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麻疯树PIN基因家族的鉴定与生物信息学分析

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分子植物育种 2015年第5期13卷 1111-1122页

作者：王占军杨立伟徐忠东欧祖兰袁华玲任意飞齐璐璐何子昂陈延松合肥师范学院生命科学学院合肥230601 南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室南京210037

PIN基因家族是一类调控植物生长素极性运输的重要载体元件。本研究利用功能已知的拟南芥PIN蛋白家族为参考序列,在麻疯树全基因组数据中共鉴定出9条PIN基因,并针对9条JcPIN基因开展系统的生物信息学研究,开展进化树构建和基序分析以及... 详细信息

PIN基因家族是一类调控植物生长素极性运输的重要载体元件。本研究利用功能已知的拟南芥PIN蛋白家族为参考序列,在麻疯树全基因组数据中共鉴定出9条PIN基因,并针对9条JcPIN基因开展系统的生物信息学研究,开展进化树构建和基序分析以及基因表达研究和密码子偏好性解析。结果发现:9条麻疯树PIN蛋白多属于由碱性氨基酸组成的稳定蛋白,均为位于细胞质膜上的非分泌蛋白;蛋白家族含有保守的N末端结构域,二级结构与拟南芥PIN蛋白相似;进化结果表明麻疯树PIN基因与毛果杨PIN基因家族关系最近;表达分析发现了4个可信度较高的麻疯树PIN基因,密码子偏好性分析确定了13个高频密码子,揭示了异源表达JcPIN时需要改造的密码子。研究结果可为将来开展麻疯树PIN基因家族的功能研究奠定重要基础,也为麻疯树其他基因家族和其他拥有大量数据的植物基因家族研究提供参考。

关键词：麻疯树生长素 PIN基因家族生物信息学

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