检索结果-内蒙古大学图书馆

南京林业大学学报(自然科学版) 2025年第1期49卷 59-70页

作者：李慧侯立娜王天琪毕宁宁李圣波刘忠华北京林业大学林木遗传育种国家工程实验室林木花卉遗传育种教育部重点实验室国家林业和草原局花卉育种与生物工程重点开放实验室北京林业大学生物科学与技术学院山东亚特生态技术有限公司

【目的】皱皮木瓜（Chaenomeles speciosa）具有较高的观赏价值食用价值与药用价值，我国是皱皮木瓜的起源分布中心，研究皱皮木瓜种质资源遗传多样性，并构建品种分子身份证，以解决近年来因缺乏品种间统一的分类标准，同名异种、同种... 详细信息

【目的】皱皮木瓜（Chaenomeles speciosa）具有较高的观赏价值食用价值与药用价值，我国是皱皮木瓜的起源分布中心，研究皱皮木瓜种质资源遗传多样性，并构建品种分子身份证，以解决近年来因缺乏品种间统一的分类标准，同名异种、同种异名和品种间来源及演化不清等问题。【方法】以收集的168份皱皮木瓜种质资源为材料，利用SSR标记结合毛细管电泳法对木瓜遗传多样性和群体内遗传分化程度进行分析，根据观测等位基因数（Na）、Shannon's信息指数（I）和多态性信息含量（PIC）的筛选能区分全部种质的引物组合，并基于字符串编码构建DNA分子身份证。【结果】26对引物在168个皱皮木瓜品种中共扩增出304个等位基因，平均每个位点扩增出11.577个；期望杂合度（He）、I和PIC的平均值分别为0.748、1.731和0.607。根据聚类分析的结果可将该群体分为2大类，进一步分为6个类群；种群结构分析将供试材料分为2个亚类。从26对引物中筛选出11对核心引物构建了168份皱皮木瓜种质资源的条形码和二维码身份证。【结论】所选扩增位点的变异程度高、鉴别力度大，在进行遗传多样性分析、核心引物筛选，以及指纹图谱构建中可优先选用。该研究为皱皮木瓜的良种鉴定、遗传资源管理及种质资源数据库的构建等提供了参考。

关键词：皱皮木瓜遗传多样性 SSR 分子身份证

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基于转录组测序的关联分析定位裂叶桦叶形调控基因

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南京林业大学学报(自然科学版) 2024年第1期48卷 39-46页

作者：顾宸瑞袁启航姜静穆怀志刘桂丰林木遗传育种全国重点实验室(东北林业大学) 北华大学林学院

【目的】针对调控裂叶桦(Betula pendula‘Dalecarlica’)叶形的基因进行初步定位，筛选并注释可能的候选基因，为后续的验证实验和机理研究奠定基础。【方法】以来自1株裂叶桦母树的24株子代个体为试验材料，其包括了正常叶、浅裂叶、... 详细信息

【目的】针对调控裂叶桦(Betula pendula‘Dalecarlica’)叶形的基因进行初步定位，筛选并注释可能的候选基因，为后续的验证实验和机理研究奠定基础。【方法】以来自1株裂叶桦母树的24株子代个体为试验材料，其包括了正常叶、浅裂叶、深裂叶等类型，扫描每单株的5个叶片，使用衡量叶片不规则度的指标计算每株个体的叶形不规则度，分析个体之间的差异显著性，测定每单株RNA-Seq数据，分析其中的SNP/InDel信息，并结合叶片不规则度进行关联分析，划定关联区。根据RNA-Seq数据分析实验材料全基因组的基因表达量，计算基因差异显著性，继而挑选出关联区中的差异基因。将关联区中受关联性SNP影响的基因和差异表达的基因作为候选基因，使用在线数据库进行基因功能注释。【结果】试验群体叶形不规则度的变异系数达60.51%,满足关联分析的需求。对实验群体全基因组中1 367 359个SNP/InDel标记的关联分析结果显示，裂叶桦叶形调控基因所在的关联区长9.18 MbP,包含400个基因，关联区内61个关联性SNP影响了17个基因的编码。基因表达量分析结果显示，关联区中有25个基因在不同叶形桦树之间存在极显著差异(P<0.01)。对上述候选基因进行功能注释，根据注释结果，预测其中3个转录因子和1个生长素转运蛋白可能是调控裂叶桦叶形的关键基因。【结论】调控裂叶桦叶片分裂性状的基因定位在7号染色体7466344—16651477的区间，包含候选基因40个。根据基因注释结果，建议后续研究重点针对其中3个转录因子和1个生长素外排体基因开展。

关键词：裂叶桦叶形转录组测序关联分析

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CRISPR/Cas9核糖核蛋白介导的无T-DNA插入的白桦BpGLK1精准突变

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南京林业大学学报(自然科学版) 2024年第1期48卷 11-17页

作者：王伟邱志楠李爽白向东刘桂丰姜静林木遗传育种全国重点实验室(东北林业大学)

【目的】CRISPR/Cas9 RNP系统是一种高效的基因编辑技术，具有简单、精准等特点，已被广泛应用于动、植物的基因编辑研究中。目前，通过微粒轰击技术将Cas9蛋白和gRNA核糖核蛋白复合体(RNP)导入受体细胞，获得无选择标记的基因编辑植物... 详细信息

【目的】CRISPR/Cas9 RNP系统是一种高效的基因编辑技术，具有简单、精准等特点，已被广泛应用于动、植物的基因编辑研究中。目前，通过微粒轰击技术将Cas9蛋白和gRNA核糖核蛋白复合体(RNP)导入受体细胞，获得无选择标记的基因编辑植物，该技术的提出为快速创制植物突变体提供了崭新思路。【方法】本研究以白桦(Betula platyphylla×***)BpGLK1基因为编辑的靶基因，采用CRISPR/Cas9 RNP技术开展无T-DNA插入的BpGLK1基因编辑。在白桦BpGLK1基因的第1外显子处设计靶位点，采用PCR扩增技术获得BpGLK1-E1靶位点片段；采用酶切及连接技术构建pAbAi-BpGLK1-E1重组质粒，将该质粒线性化后与Cas9蛋白作用，体外检测CRISPR/Cas9 RNP活性及gRNA的精准性。以白桦合子胚诱导的愈伤组织为受体，采用微粒轰击技术进行BpGLK1定向诱变。【结果】CRISPR/Cas9 RNP体外活性检测显示：Cas9蛋白及gRNA复合体具有裂解活性，可在BpGLK1靶位点的特定位点进行有效切割。以白桦成熟胚为材料，在无光照条件下培养25 d左右可获得幼嫩愈伤组织，以其为受体在轰击距离为12 cm、7 584.5 kPa条件下，用包被Cas9蛋白与gRNA(RNP)金粒进行轰击，随后经过分化培养及继代培养可获得叶色呈现黄绿色的glkc突变株，测序结果显示，该突变株的BpGLK1基因产生18 bp的纯合缺失突变。【结论】利用CRISPR/Cas9编辑技术可实现无T-DNA插入的白桦BpGLK1精准突变。

关键词： CRISPR/Cas9系统无T-DNA插入基因编辑白桦

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日本落叶松内源GUS基因鉴定及其酶活性分析

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林业科学研究 2024年第6期37卷 86-92页

作者：叶查龙张陈谊杨玲孙晓梅李万峰林木遗传育种全国重点实验室国家林业和草原局林木培育重点实验室中国林业科学研究院林业研究所北京100091 林木遗传育种全国重点实验室东北林业大学林学院黑龙江哈尔滨150040

[目的]研究日本落叶松内源β-葡糖苷酸酶(GUS)基因及其酶活性,分析GUS作为报告基因的可靠性。[方法]利用pCAMBIA1301载体上的GUS基因序列在日本落叶松参考基因组中进行比对,鉴定并克隆出日本落叶松GUS(LaGUS)基因。在NCBI利用blastp查... 详细信息

[目的]研究日本落叶松内源β-葡糖苷酸酶(GUS)基因及其酶活性,分析GUS作为报告基因的可靠性。[方法]利用pCAMBIA1301载体上的GUS基因序列在日本落叶松参考基因组中进行比对,鉴定并克隆出日本落叶松GUS(LaGUS)基因。在NCBI利用blastp查找其他物种中LaGUS的同源序列并构建进化树。利用已有的转录组数据和实时荧光定量PCR分析LaGUS基因在日本落叶松中的表达模式。利用组织化学的方法,以X-gluc作为GUS酶反应底物,检测日本落叶松体细胞胚胎发生过程中内源GUS的酶活性。[结果]在日本落叶松中鉴定到一个LaGUS基因,CDS长3435 bp,编码1144个氨基酸。25种植物中具有与LaGUS基因相似的序列。LaGUS基因的表达量在活动期高于休眠期,在体胚苗中高于在胚性愈伤组织和体细胞胚胎中。组织化学染色表明,日本落叶松胚性愈伤组织、体细胞胚胎和体胚苗在室温下染色6 d时均观察到蓝色,但体胚苗的染色程度高于胚性愈伤组织和体细胞胚胎。[结论]日本落叶松具有内源GUS活性,在基因工程中利用GUS作为报告基因可能存在一定干扰。

关键词：日本落叶松内源GUS 体细胞胚胎发生报告基因

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转基因小黑杨根际土壤微生物群落特征研究

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南京林业大学学报(自然科学版) 2023年第1期47卷 199-208页

作者：王阳王伟姜静顾宸瑞杨蕴力林木遗传育种国家重点实验室(东北林业大学)

【目的】根际土壤细菌及真菌群落组成不仅受植物种类及植物生长时期等影响，外源基因的导入也可改变根际微生物群落组成。通过基因工程技术获得的转betA或转TaLEA基因小黑杨(populus simonii x ***)能够提高甜菜碱或晚期胚胎富集蛋白的... 详细信息

【目的】根际土壤细菌及真菌群落组成不仅受植物种类及植物生长时期等影响，外源基因的导入也可改变根际微生物群落组成。通过基因工程技术获得的转betA或转TaLEA基因小黑杨(populus simonii x ***)能够提高甜菜碱或晚期胚胎富集蛋白的含量，进而增强转基因植物的抗旱耐盐性，PsnWRKY70是胁迫应答信号转导网络中的负调控因子，WRKY70干扰表达小黑杨的耐盐性显著高于对照株系。在明确了转betA、转TaLEA、转WRKY70小黑杨抗旱耐盐性的同时，开展转基因小黑杨根际土壤细菌、真菌群落组成分析，为其环境生态安全性评价提供参考。【方法】以2年生转TaLEA、betA、WRKY70基因小黑杨及对照野生型(WT)小黑杨根际土壤为试材，利用Illumina-Miseq高通量测序平台对根际土壤微生物进行16S rRNA和ITS测序分析，对根际土壤细菌和真菌群落丰富度和多样性变化、结构差异性、群落组成进行分析，了解转基因活动对小黑杨根际土壤微生物组成的影响。【结果】Alpha多样性分析显示，针对根际细菌群落组成，转betA小黑杨的Simpson指数显著低于WT小黑杨，而转WRKY70小黑杨观察物种数、Shannon及Simpson指数均显著低于WT小黑杨。针对根际真菌群落组成，3种转基因小黑杨的各项Alpha指数均显著低于WT小黑杨。韦恩图、主成分分析和聚类热图结果显示，在与WT小黑杨根际土壤细菌和真菌群落结构相似性上，转TaLEA小黑杨与WT小黑杨的群落差异较小，转betA小黑杨与转WRKY70小黑杨的群落组成更接近。基于属水平上的组成和丰度分析显示，转基因小黑杨根际土壤中，产黄杆菌属(Rhodanobacter)、芽单胞菌属(Gemmatimonas)等有益细菌相对丰度均有不同程度提高；而有益菌根真菌丝盖伞属(Inocybe)丰度在转TaLEA、转betA小黑杨中显著高于另外两个样品，小球孢盘菌属(Sphaerosporella)、粘滑菇属(Hebeloma)、蜡蘑属(Laccaria)丰度仅在转TaLEA小黑杨中显著提高；相反，亚隔孢壳属(Didymella)和背芽突霉属(Cadophora)等致病真菌丰度较WT小黑杨的降低85%以上。【结论】这些结果表明转基因活动可能利于植物生长并提升其抗逆性，但这些有益微生物是否发挥了重要作用并在实际环境中长期存在，仍需开展更多研究。

关键词：转基因小黑杨根际细菌真菌群落变异

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基因组精准编辑技术及其在林木育种中的应用

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南京林业大学学报(自然科学版) 2025年第1期49卷 11-20页

作者：姜波安新民林木遗传育种全国重点实验室林木育种与生态修复国家工程中心林木分子设计育种高精尖创新中心林木花卉遗传育种教育部重点实验室树木花卉育种生物工程国家林业和草原局重点实验室北京林业大学生物科学与技术学院

基因组精准编辑技术正在重新定义对生命奥秘的理解，其核心在于能够在特定的基因组位点精确地插入、删除或替换DNA序列，从而实现对生物体内遗传信息的定向精准编辑。这些技术已经成为现代生物领域研究的基石，从早期的探索到CRISPR系... 详细信息

基因组精准编辑技术正在重新定义对生命奥秘的理解，其核心在于能够在特定的基因组位点精确地插入、删除或替换DNA序列，从而实现对生物体内遗传信息的定向精准编辑。这些技术已经成为现代生物领域研究的基石，从早期的探索到CRISPR系统的开创性应用，每一步都展示了科学探索的深远影响。CRISPR系统的应用带来了基因组编辑的巨大飞跃，它催化了更精准的编辑工具出现，如碱基编辑器和先导编辑器等，它们显著增强了精准编辑基因组的能力。这一历史性转变已经在农业改良、疾病治疗等领域展现出巨大的潜力。基因编辑技术的应用前景广阔，CRISPR/Cas系统能敲除多个基因，具有高靶向效率、易于设计和操作，且成本较低等优点，因此在作物、林木遗传改良中被广泛应用；但它也有不少不足之处，而每一款新编辑工具的出现都使这一技术得以不断完善。随着技术的不断进步，基因编辑技术有望在未来解决更多复杂的生物学问题，为人类健康和农林业发展带来更多的创新和突破力。

关键词： CRISPR Cas9 胞嘧啶碱基编辑器腺嘌呤碱基编辑器糖基化酶碱基编辑器双碱基编辑器先导编辑器

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杨树PtoXTH34基因过表达提高烟草抗旱性

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北京林业大学学报 2025年第1期47卷 63-71页

作者：郝玄瑞姜妍王宇倩盖颖林木遗传育种全国重点实验室树木花卉育种生物工程国家林业和草原局重点实验室北京林业大学生物科学与技术学院北京100083

【目的】探究杨树木葡聚糖内转糖苷酶/水解酶基因PtoXTH34在植物响应干旱胁迫过程中发挥的功能。【方法】将杨树PtoXTH34基因在烟草中异源表达,并进行干旱胁迫,分析过表达烟草表型以及光合作用、抗逆等指标的变化。【结果】(1)过表达Pto... 详细信息

【目的】探究杨树木葡聚糖内转糖苷酶/水解酶基因PtoXTH34在植物响应干旱胁迫过程中发挥的功能。【方法】将杨树PtoXTH34基因在烟草中异源表达,并进行干旱胁迫,分析过表达烟草表型以及光合作用、抗逆等指标的变化。【结果】(1)过表达PtoXTH34基因能够显著降低离体烟草叶片的失水率。(2)干旱处理14 d后,对照植株出现明显的枯萎现象,而过表达PtoXTH34烟草叶片生长良好,仍为绿色,且过表达PtoXTH34植株的株高和茎直径均显著高于对照植株。(3)干旱处理14 d后,对照植株的净光合速率、气孔导度和蒸腾速率均趋近于0,而过表达PtoXTH34烟草的各项光合指标均极其显著高于对照植株,且高于干旱处理前。(4)干旱处理14 d后,对照植株体内的H2O2和MDA含量均出现大幅上升,且显著高于过表达PtoXTH34植株,对照植株出现活性氧积累现象,且叶片损伤程度较大,而过表达PtoXTH34植株并未出现此现象。【结论】过表达PtoXTH34烟草通过降低叶片失水率,提升光合作用,清除活性氧积累,进而提高植株的抗旱性。本研究为揭示杨树PtoXTH34的基因功能奠定了基础,丰富了林木分子育种的基因资源。

关键词：杨树基因表达木葡聚糖内转糖苷酶/水解酶基因抗旱性光合作用烟草

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Th2CysPrx基因提高酿酒酵母多种胁迫耐受性研究

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南京林业大学学报(自然科学版) 2022年第4期46卷 87-94页

作者：王媛媛刘百超姜波王丹妮高彩球东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室

【目的】过氧化还原蛋白是生物体调节体内氧化还原系统的一种重要蛋白质，在植物生长代谢中起重要作用。前期研究发现过表达刚毛柽柳Th2CysPrx基因的烟草和柽柳中4种抗氧化酶基因（ThGSTZ1、ThGPX、ThSOD和ThPOD）的表达水平上调，转基... 详细信息

【目的】过氧化还原蛋白是生物体调节体内氧化还原系统的一种重要蛋白质，在植物生长代谢中起重要作用。前期研究发现过表达刚毛柽柳Th2CysPrx基因的烟草和柽柳中4种抗氧化酶基因（ThGSTZ1、ThGPX、ThSOD和ThPOD）的表达水平上调，转基因植株的NaCl胁迫耐受性提高。本实验探究Th2CysPrx基因除了响应NaCl胁迫应答，是否还参与其他盐胁迫和其他胁迫的应答。【方法】将Th2CysPrx构建到pYES2酵母表达载体上，转化到酿酒酵母INVSC1细胞中，分析比较重组酵母（pYES2-Th2CysPrx）和对照酵母（pYES2）细胞在各种非生物胁迫后的生长情况。【结果】过表达Th2CysPrx基因的重组酵母细胞在低温、KCl和LiCl胁迫后存活率与对照相比差异不显著；但H2O2、NaCl或NaHCO3胁迫后酵母细胞的存活率显著提高。此外，高于0.5 mol/L山梨醇或高温（达到44℃）,或低于质量分数0.007%CdCl2胁迫后，过表达Th2CysPrx基因能显著提高重组酵母的细胞存活率。【结论】Th2CysPrx基因可以显著增强酵母细胞对NaCl和NaHCO3胁迫的耐受能力，以及特定的渗透胁迫、高温胁迫、氧化胁迫和重金属胁迫的耐受能力，但对低温、KCl和LiCl胁迫耐受能力无明显影响。

关键词：刚毛柽柳酵母过氧化物还原酶(Prxs) 非生物胁迫

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基于转基因741杨与新疆杨杂交创制抗虫非整倍体毛白杨新种质

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北京林业大学学报 2024年第12期46卷 92-102页

作者：齐婉芯陈婷婷宋佳力安新民北京林业大学生物科学与技术学院林木遗传育种全国重点实验室林木育种与生态修复国家工程中心林木花卉遗传育种教育部重点实验室树木花卉育种生物工程国家林业和草原局重点实验室北京100083

【目的】以转BtCry3A基因三倍体741杨为母本与二倍体新疆杨为父本进行人工杂交,以期快速获得非整倍体毛白杨抗虫优良新种质。【方法】采集转基因741杨雌花枝、新疆杨雄花枝进行人工授粉杂交,收集即将脱落的花序,通过胚挽救技术获得杂交... 详细信息

【目的】以转BtCry3A基因三倍体741杨为母本与二倍体新疆杨为父本进行人工杂交,以期快速获得非整倍体毛白杨抗虫优良新种质。【方法】采集转基因741杨雌花枝、新疆杨雄花枝进行人工授粉杂交,收集即将脱落的花序,通过胚挽救技术获得杂交子代。通过聚合酶链式反应(PCR)检测杂交子代是否含有BtCry3A基因;通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)对BtCry3A基因在母本与子代中的表达量进行分析。以二倍体新疆杨为参照,通过流式细胞技术检测杂交子代的倍性;并对子代幼苗表型进行初步观测分析。【结果】(1)通过对未发育成熟种子进行胚挽救获得8个杂交子代,其中6个杂交子代后续生长状态良好,5个子代遗传了母本的BtCry3A基因。(2)RT-qPCR检测显示,BtCry3A基因在5个子代中的表达量均高于母本,其中3#表达量为母本12倍;(3)初步判定子代1#为超四倍体,子代2#、4#、8#为非整倍体,子代3#可能为非整倍体或四倍体;(4)杂交子代表型差异大,5个杂交子代叶形、叶片大小、节间距等均不相同,其中3#和8#生长势优于亲本。【结论】通过转BtCry3A基因三倍体741杨与二倍体新疆杨杂交,快速获得了具有BtCry3A抗虫基因且发生形态变异的非整倍体毛白杨新种质,其中子代3#因抗虫基因表达量显著高于母本,且生长势优于双亲,可作为优良潜在非整倍体毛白杨新种质进行后续抗虫性测试。

关键词：毛白杨抗虫人工杂交非整倍体新种质创制

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文冠果BZR1基因家族鉴定及功能分析

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南京林业大学学报(自然科学版) 2025年第2期49卷 12-22页

作者：许慧慧班卓王晨雪毕泉鑫刘肖娟王利兵中国林业科学研究院林业研究所国家林业和草原局林木培育重点实验室林木遗传育种全国重点实验室

【目的】探究文冠果(Xanthoceras sorbifolium)BrassinazoleResistance1(BZR1)基因家族成员的特征及其在非生物胁迫响应中的作用，为文冠果XsBZR1基因功能的研究和抗逆新品种的选育提供理论参考。【方法】利用生物信息学方法鉴定并系统... 详细信息

【目的】探究文冠果(Xanthoceras sorbifolium)BrassinazoleResistance1(BZR1)基因家族成员的特征及其在非生物胁迫响应中的作用，为文冠果XsBZR1基因功能的研究和抗逆新品种的选育提供理论参考。【方法】利用生物信息学方法鉴定并系统分析文冠果XsBZR1基因家族；构建35S::XsBZR1-eYFP融合蛋白，对XsBZR1进行亚细胞定位分析；通过实时荧光定量PCR技术分析XsBZR1基因在非生物胁迫下的表达模式；构建XsBZR1-9基因的过表达载体并转化到拟南芥(Arabidopsis thaliana)中，观察转基因株系与野生型植株在盐胁迫处理下的生长情况。【结果】(1)在文冠果基因组中共鉴定出9个BZR1基因，分别命名为XsBZR1-1—XsBZR1-9,这些基因不均匀地分布在6条染色体上。(2)系统进化和共线性分析表明，XsBZR1蛋白与双子叶植物的BZR 1转录因子亲缘关系更为密切。(3)XsBZR1基因的启动子区域具有大量的光响应、激素响应元件以及胁迫应答响应元件。(4)亚细胞定位结果和预测结果一致，9个XsBZR1均定位于细胞核。(5)qRT-PCR分析表明，9个XsBZR1基因在不同的非生物胁迫下表现出不同的表达模式。除XsBZR1-7外，其余XsBZR1基因在低温胁迫下3 h时迅速上调表达；盐胁迫下XsBZR1的表达量呈现较大的差异性，XsBZR1-3/4/5/7的表达受到盐胁迫的显著抑制，而XsBZR1-1和XsBZR1-9在盐胁迫处理9 h时表达量提高到约20倍；XsBZR1-3/7/8/9在干旱处理9 h时表达量提高到2倍以上，而其余XsBZR1在干旱处理下的表达水平变化不大；9个XsBZR1均受到ABA的诱导表达，其中XsBZR1-8在ABA处理9 h时表达量提高到35倍。(6)在拟南芥中过表达XsBZR1-9发现，转基因植株在盐胁迫处理后的主根长度显著高于野生型植株。【结论】XsBZR1家族成员参与了文冠果非生物胁迫响应，过表达XsBZR1-9显著提高植物对盐胁迫的耐受性，这为进一步分析XsBZR1基因在文冠果抗逆机制中的作用奠定了基础。

关键词：文冠果 BZR1转录因子非生物胁迫基因过表达盐胁迫响应 XsBZR1-9

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