检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术通报 2014年第1期30卷 93-99页

作者：许玉兰张瑞丽田斌蔡年辉康向阳段安安北京林业大学林木育种国家工程实验室北京100083 西南林业大学国家林业局西南地区生物多样性保育重点实验室昆明650224

采用磁珠富集法构建云南松微卫星富集文库。云南松基因组DNA经RsaⅠ酶切,与特定接头连接,再用接头特异引物进行PCR扩增。连接扩增产物与用生物素标记的(AG)12、(AT)12、(CG)12、(GT)12、(ACG)12、(ACT)12和(CCA)8探针杂交,通过链霉亲和... 详细信息

采用磁珠富集法构建云南松微卫星富集文库。云南松基因组DNA经RsaⅠ酶切,与特定接头连接,再用接头特异引物进行PCR扩增。连接扩增产物与用生物素标记的(AG)12、(AT)12、(CG)12、(GT)12、(ACG)12、(ACT)12和(CCA)8探针杂交,通过链霉亲和素偶联的磁珠捕捉含接头和微卫星序列的片段并扩增,将获得的片段连接到pMD-19T载体上,转化至大肠杆菌JM109感受态细胞中,成功构建了云南松微卫星富集文库。通过PCR检测从文库中筛选阳性克隆,在383富集阳性菌落中获得阳性克隆257个,经测序分析,在获得的159条序列中,有143条含有SSR,其中完美型占65.73%,非完美型占23.78%,混合型占10.49%。结果表明,磁珠富集法构建云南松基因组微卫星文库高效、可行的,文库的构建为微卫星位点的分离、遗传多样性的分析等奠定基础。

关键词：云南松富集文库微卫星

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基于SSR标记构建白蜡种质资源分子身份证

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山东农业科学 2015年第5期47卷 6-9,22页

作者：胡春龙张晨刘翠兰李丽燕丽萍吴德军夏阳邢世岩王开芳山东农业大学林学院山东泰安271018 山东省林业科学研究院山东济南250014 山东省林木遗传改良重点实验室山东济南250014

以山东省林业科学研究院寿光试验站收集的46份白蜡为试验材料，对白蜡种质资源分子身份证的构建进行探究。利用SSR标记技术对白蜡试材进行区分，从150对引物中筛选出11对SSR引物对选定白蜡试材进行扩增，每个引物可以检测到3-5个基因型... 详细信息

以山东省林业科学研究院寿光试验站收集的46份白蜡为试验材料，对白蜡种质资源分子身份证的构建进行探究。利用SSR标记技术对白蜡试材进行区分，从150对引物中筛选出11对SSR引物对选定白蜡试材进行扩增，每个引物可以检测到3-5个基因型，平均每对引物扩增出2．52条带和2．09条多态性带，平均多态性位点百分率为82．93％。将11对引物及其检测出的等位基因依次赋值，构建了供试白蜡种质资源的分子身份证，能够达到区分各品种的目的。

关键词：白蜡 SSR 分子身份证

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拟南芥转录因子WRKY18在花粉发育中的功能分析

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电子显微学报 2014年第2期33卷 156-162页

作者：荀志丽李雪萍张丹丹陆海刘頔北京林业大学生物科学与技术学院林木育种国家工程实验室林木花卉遗传育种教育部重点实验室国家林业局树木花卉育种与生物工程重点开放实验室北京100083 河南科技大学林学院河南洛阳471003

WRKY蛋白是近年来在植物中发现的一类转录因子家族,本研究从拟南芥中克隆得到转录因子WRKY18的DNA序列,利用荧光体式显微镜观察酵母单杂交菌落,确定了该转录因子与DNA序列TTGACT结合。分别通过半定量、实时荧光定量PCR技术检测其在不同... 详细信息

WRKY蛋白是近年来在植物中发现的一类转录因子家族,本研究从拟南芥中克隆得到转录因子WRKY18的DNA序列,利用荧光体式显微镜观察酵母单杂交菌落,确定了该转录因子与DNA序列TTGACT结合。分别通过半定量、实时荧光定量PCR技术检测其在不同组织及花药发育不同时期的表达,发现该转录因子为组成型表达。该基因在成熟拟南芥根、茎、叶、花的各个组织中均有表达,而在花药发育的9、10时期表达量显著高于其它时期。分别使用扫描电子显微镜和光学显微镜观察比较突变体与野生型植株的花粉形态差异和花粉萌发情况,发现WRKY18对拟南芥花粉发育有重要影响,WRKY18缺失造成拟南芥花粉外形异常、花粉萌发率降低。本研究对进一步分析转录因子WRKY18在拟南芥花粉发育过程中的表达与调控作用具有一定的基础意义。

关键词：拟南芥转录因子 WRKY18 表达分析花粉发育

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云南松基因组微卫星富集文库的序列特征分析

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生物技术 2014年第4期24卷 62-66页

作者：许玉兰白青松张瑞丽田斌王大玮何承忠蔡年辉康向阳段安安北京林业大学/林木育种国家工程实验室北京100083 西南林业大学/国家林业局西南地区生物多样性保育重点实验室云南昆明650224

目的：分析基因组微卫星富集文库的序列特征，探索云南松基因组微卫星的分布特征或变异规律。方法：采用磁珠富集法，从云南松基因组DNA的RsaI酶切产物中富集微卫星片段，富集片段经洗脱分离、载体连接及转化等环节，对富集文库鉴定和... 详细信息

目的：分析基因组微卫星富集文库的序列特征，探索云南松基因组微卫星的分布特征或变异规律。方法：采用磁珠富集法，从云南松基因组DNA的RsaI酶切产物中富集微卫星片段，富集片段经洗脱分离、载体连接及转化等环节，对富集文库鉴定和测序，分析序列特征。结果：在测序获得的159条序列中，有143条序列含有重复次数不少于3次的微卫星序列，序列长度为135～1138bp，平均520bp，克隆比例为89．94％。在这些序列中，以二核苷酸重复类型最多（56．64％），其次是三核苷酸，有51条（35．66％），此外，出现少量（7．70％）重复类型为4—6bp的微卫星序列；各重复单元的碱基组成以探针及其互补序列为主，并出现少量的非探针类型；重复次数介于3—15，随着重复单元长度的增加而出现的频率降低。结论：分析了云南松基因组微卫星富集文库微卫星重复类型、重复单元碱基组成及其序列长度变异，为进一步分析云南松基因组微卫星的分布特征或变异规律奠定基础，进而为开发SSR引物提供基础信息。

关键词：云南松微卫星 SSR频率

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毛白杨抗病相关转录因子基因PtWRKY1的表达特性分析

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基因组学与应用生物学 2014年第4期33卷 853-859页

作者：项争蔡兼谌殷蕾钮俊刘雪萍胡惠雯侯欣瑜林善枝北京林业大学生物科学与技术学院林木育种国家工程实验室林木花卉遗传育种教育部重点实验室北京100083

WRKY转录因子作为植物特有的一类重要转录调控因子,广泛参与植物对生物和非生物胁迫的应答反应及形态发育和组织衰老等,已引起人们的关注。本文以前期克隆得到的毛白杨WRKY转录因子基因(命名为PtWRKY1)为研究对象,开展其基因枪介导洋葱... 详细信息

WRKY转录因子作为植物特有的一类重要转录调控因子,广泛参与植物对生物和非生物胁迫的应答反应及形态发育和组织衰老等,已引起人们的关注。本文以前期克隆得到的毛白杨WRKY转录因子基因(命名为PtWRKY1)为研究对象,开展其基因枪介导洋葱表皮细胞瞬时表达、外源信号分子(水杨酸SA,茉莉酸MeJA,脱落酸ABA)诱导表达、转PtWRKY1基因烟草植株的烟草花叶病毒(TMV)接种实验以及抗病相关基因表达的实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)分析等研究。结果表明,PtWRKY1基因编码蛋白定位于细胞核,SA、ABA及MeJA处理均可诱导PtWRKY1基因表达,但不同诱导因子对PtWRKY1表达量的影响存在一定差异;同时,TMV侵染实验发现外源PtWRKY1表达能增强转基因烟草抗TMV能力,qRT-PCR分析表明PtWRKY1基因及膜保护性酶(POD,SOD,CAT)基因均受TMV诱导而增强表达。本文研究结果可为后续开展毛白杨转录因子PtWRKY1的功能鉴定及应用奠定基础。

关键词：毛白杨 WRKY转录因子 PtWRKY1 表达分析抗病性

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河北省华北落叶松天然群体遗传多样性分析

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植物遗传资源学报 2014年第3期15卷 465-471页

作者：范英明张登荣于大德张炎董明亮张鸿景张金凤林木育种国家工程实验室/林木、花卉遗传育种教育部重点实验室/国家林业局树木花卉育种与生物工程重点开放实验室/北京林业大学生物科学与技术学院北京100083 四川省西昌市凉北林业局西昌615000 河北省林业科学研究院石家庄050061

以来自河北8个群体共312个华北落叶松天然个体为材料,利用10对SSR引物对群体进行扩增,所得数据用于其遗传多样性和遗传结构的研究。结果表明：10对SSR位点共检测到42个位点,平均每个位点有4.2个等位基因,位点的等位基因数（Na）为2～6... 详细信息

以来自河北8个群体共312个华北落叶松天然个体为材料,利用10对SSR引物对群体进行扩增,所得数据用于其遗传多样性和遗传结构的研究。结果表明：10对SSR位点共检测到42个位点,平均每个位点有4.2个等位基因,位点的等位基因数（Na）为2～6个。群体平均等位基因数为3.36,Shannon指数（I）平均为0.749,观察杂合度Ho为0.405、期望杂合度He为0.423,来自河北北部的围场台子水和吉字以及兴隆雾灵山的多样性水平最高,南部的阜平群体多样性水平最低。AMOVA分子差异分析显示3%的遗传变异存在于群体间,97%的遗传变异则存在于群体内,基因分化系数Gst仅为0.028,表明华北落叶松在河北的群体分化很低。聚类结果表明河北围场两个群体为一类,蔚县、隆化和涿鹿为一类,阜平和赤城为一类,兴隆雾灵山群体距离其他较远。多样性北部群体较高,南部较低,表明华北落叶松可能的衍化方向是从北向南,印证了北部可能是起源中心的结论。

关键词：华北落叶松 SSR分子标记遗传多样性群体结构

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玉米SSR分子标记试验体系优化及其遗传多样性研究

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黑龙江农业科学 2014年第9期 1-7页

作者：张勇北京林业大学生物科学与技术学院北京林业大学林木育种国家工程实验室/林木花卉遗传育种教育部重点实验室北京100083

为优化玉米SSR分子标记体系,丰富种质资源的多样性,以基础玉米自交系CK及其诱变系M为材料,优化了SSR分子标记试验体系,并对诱变玉米自交系遗传多样性进行了分析。结果表明：（1）优化后SSR分子标记试验体系,可以有效提高试验效率,减少... 详细信息

为优化玉米SSR分子标记体系,丰富种质资源的多样性,以基础玉米自交系CK及其诱变系M为材料,优化了SSR分子标记试验体系,并对诱变玉米自交系遗传多样性进行了分析。结果表明：（1）优化后SSR分子标记试验体系,可以有效提高试验效率,减少试验误差;（2）利用23对SSR引物对诱变玉米自交系进行PCR扩增,共扩增得到59个等位基因,平均每对引物检测到2.565个等位基因;位点的多态信息量（PIC）和基因型多样性指数变化范围为0.110～0.525和0.234～1.061,平均值分别为0.331和0.643,说明基础材料CK与诱变材料存在真实的遗传差异。

关键词： SSR 体系优化遗传多样性

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油松端粒酶活性的测定方法

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中国农学通报 2014年第13期30卷 10-14页

作者：任兰芳慕莹荀志丽胡旭东要笑云陆海李凤兰刘頔北京林业大学生物科学与技术学院/林木育种国家工程实验室/林木花卉遗传育种教育部重点实验室/国家林业局树木花卉育种与生物工程重点开放实验室北京100083

端粒酶具有修复延伸端粒的功能,对于维持真核生物染色体的完整性至关重要,因此对其活性的测定有着重要意义。通过大量的摸索实验,将常用于动物细胞端粒酶活性检测的端粒末端重复序列扩增法(TRAP法)运用到对植物材料的检测中来,对北方常... 详细信息

端粒酶具有修复延伸端粒的功能,对于维持真核生物染色体的完整性至关重要,因此对其活性的测定有着重要意义。通过大量的摸索实验,将常用于动物细胞端粒酶活性检测的端粒末端重复序列扩增法(TRAP法)运用到对植物材料的检测中来,对北方常见木本植物油松进行了端粒酶活性测定。基于TRAP法的原理,对体外延伸、引物选择、退火温度、电泳检测等实验条件进行优化。结果表明,油松端粒酶活性测定的最佳体外延伸条件为30℃延伸1 h,最适前导链引物和反向引物分别为TS21和ACX,PCR退火温度为61.8℃,电泳检测使用Gene Finder核酸染料染色效果更好,建立了一种有效测定木本植物油松松针叶端粒酶活性的测定方法。

关键词：油松端粒酶 TRAP法优化

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月季育种技术研究进展

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中国农学通报 2015年第13期31卷 130-134页

作者：范莉娟周燕高述民北京林业大学生物科学与技术学院北京100083 北京市园林科学研究院绿化植物育种北京市重点实验室北京100102

月季育种技术近年来有了长足的发展并取得了丰硕的成果,通过对引种筛选育种、杂交育种、芽变育种、诱变育种、分子育种等主要育种技术近年来国内外研究成果的报道,总结了各育种技术的特点及应用情况,并进行了展望,提出将分子育种技术的... 详细信息

月季育种技术近年来有了长足的发展并取得了丰硕的成果,通过对引种筛选育种、杂交育种、芽变育种、诱变育种、分子育种等主要育种技术近年来国内外研究成果的报道,总结了各育种技术的特点及应用情况,并进行了展望,提出将分子育种技术的先进手段与传统的杂交育种技术相结合,并且注重国际交流以学习先进技术和经验,同时深入对月季发育的细胞学及分子生物学机理的研究,才能更有效地获得新品种的观点,以期为月季育种工作提供参考,缩小与国际先进水平的差距。

关键词：月季育种技术杂交育种分子育种

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毛果杨PtrAP1-2基因启动子的克隆及其瞬时表达分析

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植物生理学报 2013年第6期49卷 591-597页

作者：陈仲王佳安新民北京林业大学林木育种国家工程实验室林木花卉遗传育种教育部重点实验室国家林业局树木花卉育种与生物工程重点开放实验室北京100083

为了研究杨树AP1同源基因的表达规律,利用PCR技术从毛果杨基因组DNA中克隆出PtrAP1-2基因上游一段2103bp序列。联合使用PLACE和PlantCARE在线软件分析序列,结果表明该序列含有TATA-box和CAAT-box启动子基本元件,另外含有MRE、GT1-motif... 详细信息

为了研究杨树AP1同源基因的表达规律,利用PCR技术从毛果杨基因组DNA中克隆出PtrAP1-2基因上游一段2103bp序列。联合使用PLACE和PlantCARE在线软件分析序列,结果表明该序列含有TATA-box和CAAT-box启动子基本元件,另外含有MRE、GT1-motif、AE-box、TCT-motif和Box4多种光响应元件,因此,PtrAP1-2可能与植物开花过程紧密相关。在序列分析的基础上,构建了PtrAP1-2基因启动子驱动GUS报告基因的植物表达载体,命名为PtrAP1-2pro::GUS。利用农杆菌介导的瞬时表达法转化烟草,结果表明PtrAP1-2启动子可以驱动GUS基因在烟草萼片和花瓣中特异表达,在根、茎、叶、雄蕊和心皮等其他组织部位里没有GUS表达活性,这表明PtrAP1-2pro为花器官特异表达启动子。

关键词：毛果杨 AP1 启动子 GUS 瞬时表达

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