检索结果-内蒙古大学图书馆

北京林业大学学报 2024年第4期46卷 84-90页

作者：孙玉凤谈家金袁裕超赵晓佳叶建仁南京林业大学林草学院南方现代林业协同创新中心江苏南京210037

【目的】阐明蜡样芽孢杆菌NJSZ-13中杀线蛋白酶ATP-α与ClpX的杀线分子机制,构建杀线蛋白酶ATP-α与ClpX的原核表达载体。【方法】克隆杀线蛋白酶编码基因atpA与clpX,利用基因工程手段对杀线蛋白酶编码基因进行PCR扩增,并与载体pET-21b... 详细信息

【目的】阐明蜡样芽孢杆菌NJSZ-13中杀线蛋白酶ATP-α与ClpX的杀线分子机制,构建杀线蛋白酶ATP-α与ClpX的原核表达载体。【方法】克隆杀线蛋白酶编码基因atpA与clpX,利用基因工程手段对杀线蛋白酶编码基因进行PCR扩增,并与载体pET-21b连接构建重组载体,提取重组质粒转入蛋白表达载体大肠杆菌BL21(DE3)。利用菌落PCR和测序验证转化效果。加入IPTG诱导蛋白表达,使用Ni-NTA柱进行重组蛋白的纯化,利用SDS-PAGE与Western blot验证ATP-α与ClpX纯化效果并进行杀线活性测定。【结果】菌落PCR验证和测序表明,重组载体中含有蛋白酶编码基因atpA与clpX,且基因序列与参考序列一致,证明目的基因已经成功插入BL21(DE3)表达载体中。SDSPAGE与Western blot验证表明,重组蛋白得到正确诱导与纯化,成功构建杀线蛋白酶ATP-α与ClpX的原核表达载体。杀线活性测定结果表明ATP-α与ClpX均具有较强的杀线效果。ATP-α在72 h达到66.75%的杀线率,ClpX在72 h达到75.46%的杀线率。同时,两个蛋白酶共同作用杀线能力显著增强,24 h便达到66.32%的杀线率,72 h杀线率达到91.01%。【结论】ATP-α与ClpX经原核表达及纯化后具有较高的杀线活性,且两者共同处理松材线虫,杀线效果更强,证明蛋白酶ATP-α与ClpX是重要的杀线因子,为设计和筛选杀线药物提供了新的线索和依据。

关键词：蜡样芽孢杆菌NJSZ-13 松材线虫 ATP-α ClpX 原核表达

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孝顺竹中笋箨衰老相关WRKY转录因子的鉴定与分析

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南京林业大学学报（自然科学版） 2023年第6期47卷 113-123页

作者：却枫刘庆楠查若飞魏强南京林业大学南方现代林业协同创新中心南京林业大学竹类研究院江苏南京210037

【目的】孝顺竹(Bambusa multipex)笋箨中含有大量的叶绿体,具有进行光合作用的功能,是竹秆快速生长时期的一个重要碳源。笋箨与所附着节间是一种“源-库”关系,其衰老对节间的伸长生长具有重要影响。通过鉴定和分析孝顺竹笋箨中衰老相... 详细信息

【目的】孝顺竹(Bambusa multipex)笋箨中含有大量的叶绿体,具有进行光合作用的功能,是竹秆快速生长时期的一个重要碳源。笋箨与所附着节间是一种“源-库”关系,其衰老对节间的伸长生长具有重要影响。通过鉴定和分析孝顺竹笋箨中衰老相关的WRKY转录因子,为研究笋箨的衰老机制和调控机制奠定基础。【方法】基于孝顺竹笋箨3代全长转录组数据库,使用HMMER软件进行WRKY转录因子的初步搜索,之后通过保守结构域分析和去冗余获得候选基因。与拟南芥(Arabidopsis thaliana)中已验证过的参与叶片衰老调控的WRKY转录因子进行同源性比对分析,以预测孝顺竹WRKY转录因子家族中参与衰老调控的成员。基于不同发育时期笋箨的2代转录组数据,分析候选BmWRKYs在笋箨发育不同阶段的表达模式以进行功能预测。通过检测叶绿素含量和膜离子渗透率对不同长度第3节间笋箨的发育状态进行鉴别,并进行实时荧光定量PCR实验对部分候选基因在笋箨不同发育时期的表达水平进行检测,以对WRKY基因家族中与笋箨衰老相关的成员进行进一步验证。【结果】在孝顺竹笋箨中共鉴定到83个蛋白质序列长度为119~1751个氨基酸的WRKY转录因子。基于蛋白质结构和系统发育分析,将83个BmWRKYs分为Ⅰ、Ⅱa—e和Ⅲ3大组,其中被鉴定为Ⅰ类的BmWRKY转录因子最多,为39个;Ⅱa、Ⅱb、Ⅱc、Ⅱd、Ⅱe亚家族分别有2、16、11、12和2个BmWRKY成员;仅有1个BmWRKY被鉴定为Ⅲ类WRKY转录因子。此外,通过与拟南芥基因组中已鉴定的衰老相关WRKY进行同源比对分析,共获得31个与笋箨衰老相关的候选基因BmWRKYs。基于候选基因BmWRKYs在孝顺竹笋箨不同发育时期的表达模式,将31个候选BmWRKYs分为a、b、c、d 4种类型。a类包括BmWRKY59、BmWRKY75、BmWRKY6、BmWRKY4、BmWRKY41、BmWRKY51、BmWRKY26、BmWRKY48、BmWRKY53、BmWRKY36、BmWRKY42、BmWRKY18和BmWRKY10;b类包括BmWRKY2、BmWRKY74、BmWRKY38、BmWRKY76、BmWRKY30、BmWRKY43、BmWRKY69和BmWRKY72;c类包括BmWRKY15、BmWRKY68、BmWRKY28、BmWRKY12和BmWRKY7;d类包括BmWRKY3、BmWRKY21、BmWRKY1、BmWRKY25和BmWRKY5。孝顺竹不同长度第3节间所附着的笋箨具有不同的发育状态,当第3节间长度在20~25 cm时叶绿素已开始出现降解。随着第3节间伸长生长减缓程度的增加,笋箨的衰老程度也在加剧,当节间长度为30cm左右时,笋箨已明显衰老。部分BmWRKYs在孝顺竹不同发育时期笋箨中的表达水平表明,a类BmWRKYs中,BmWRKY4、BmWRKY48和BmWRKY53可能是笋箨衰老的正调控因子,而d类中的BmWRKY21可能是孝顺竹笋箨衰老的负调控因子,并且在笋箨发育早期起作用。【结论】笋箨是孝顺竹节间快速生长阶段的重要碳源,其衰老涉及营养物质的再动员。对笋箨衰老调控的研究是节间快速伸长机制研究的一个重要切入点。本研究鉴定得到多个在孝顺竹笋箨衰老进程中具有重要潜在作用的BmWRKYs,研究结果将为今后深入分析WRKY转录因子调控笋箨衰老的分子机制奠定基础。

关键词： WRKY转录因子孝顺竹笋箨衰老

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蜡样芽孢杆菌NJSZ-13菌株对松材线虫产卵和繁殖的影响

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南京林业大学学报（自然科学版） 2021年第5期45卷 209-214页

作者：许嘉麟谈家金郝德君南京林业大学林学院南方现代林业协同创新中心江苏南京210037

【目的】已有研究表明蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)NJSZ-13菌株对于马尾松具有促生作用,且菌悬液的促生效果最佳。为了进一步解析和评价该菌对松材线虫的生防机理,在虫液和卵液中加入NJSZ-13菌株,研究该菌株对松材线虫的杀线效果以及... 详细信息

【目的】已有研究表明蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)NJSZ-13菌株对于马尾松具有促生作用,且菌悬液的促生效果最佳。为了进一步解析和评价该菌对松材线虫的生防机理,在虫液和卵液中加入NJSZ-13菌株,研究该菌株对松材线虫的杀线效果以及对其产卵、卵孵化和繁殖量的影响。【方法】首先通过离心将蜡样芽孢杆菌NJSZ-13菌株分成菌悬液、发酵液和发酵滤液,并调配成原液、5、10、100和1 000倍的稀释液,其中菌悬液和发酵液的原液浓度为3×108cfu/mL,以无菌水和NB培养基为对照。(1)用浸渍法测定NJSZ-13菌株在24 h和48 h对松材线虫的杀线效果。(2)挑取10对生长良好的雌雄4龄幼虫于1.5 mL离心管,用NJSZ-13菌株处理24 h后将虫卵从离心管冲洗到35 mm培养皿中,统计各处理的产卵量。(3)在35 mm小皿中加入1 mL无菌卵液(约含400个卵)和NJSZ-13菌株,统计12、24和36 h的孵化虫数。(4)将100μL线虫液(含500条松材线虫)与100μLNJSZ-13菌株混合接入60 mm培养皿的灰葡萄孢中,在25℃培养箱培养5 d,用贝尔曼法分离线虫并计数。【结果】(1)NJSZ-13菌株的发酵液和发酵滤液原液处理24 h后的杀线率即高达100%,而其菌悬液原液处理48 h后的杀线率仅为81.47%。(2)NJSZ-13菌株原液能极显著地抑制松材线虫产卵,随着稀释倍数的增大,这种抑制作用逐渐减小。(3)NJSZ-13菌株的10倍稀释液处理松材线虫卵,在12 h时极显著地抑制卵的孵化,在24 h时仍达到显著水平,在36 h时仅发酵液和发酵滤液有显著的抑制作用。100倍稀释液处理12 h时,发酵液和发酵滤液相对于对照有显著差异,其他处理时间点均无显著差异。(4)NJSZ-13菌株原液和5倍稀释液处理松材线虫,其繁殖力与对照组有显著差异(P<0.05)。10倍稀释液处理松材线虫时,菌悬液对线虫繁殖力无明显的影响,而发酵液和发酵滤液与对照有显著差异。【结论】蜡样芽孢杆菌NJSZ-13菌株的菌悬液、发酵液、发酵滤液均对松材线虫有杀线作用。其中,发酵液和发酵滤液的杀线效果更显著;NJSZ-13菌株能抑制松材线虫的产卵、卵孵化和繁殖,同样发酵液和发酵滤液的抑制效果较菌悬液明显。

关键词：松材线虫蜡样芽孢杆菌产卵孵化繁殖

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矢竹地下茎节间生长的解剖学和转录组研究

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南京林业大学学报（自然科学版） 2020年第3期44卷 33-40页

作者：向钰丁雨龙张春霞魏强南京林业大学南方现代林业协同创新中心南京林业大学竹类研究所江苏南京210037

【目的】竹鞭是散生竹的主茎,对竹子地下茎的研究对竹子生长发育意义重大。利用多学科方法,综合解析竹子地下茎节间生长的解剖学变化及其转录组特征。【方法】采用形态学观察结合石蜡切片、扫描电镜等方法观察矢竹(Pseudosasa japonica... 详细信息

【目的】竹鞭是散生竹的主茎,对竹子地下茎的研究对竹子生长发育意义重大。利用多学科方法,综合解析竹子地下茎节间生长的解剖学变化及其转录组特征。【方法】采用形态学观察结合石蜡切片、扫描电镜等方法观察矢竹(Pseudosasa japonica)地下茎生长过程中的形态学变化及解剖结构特征;并利用转录组测序结合生物信息学分析比较不同生长阶段节间转录组特征;差异表达基因利用MapMan软件进行可视化分析。【结果】矢竹地下茎的生长主要由竹鞭前端约14个处于不同生长发育阶段的节间生长引起。解剖学分析进一步表明,长度小于0.4cm的节间细胞具有较强的分裂能力;而1.0 cm长节间主要以细胞伸长生长为主。同时1.0 cm长节间基本组织细胞已具有显著的长、短细胞之分,且其导管细胞、纤维细胞等维管组织细胞较0.4 cm长节间的同类细胞在长度上更长,发育更为成熟。除此之外,相比于0.4 cm长节间,1.0 cm长节间髓组织已明显破裂,并初步形成了髓腔。通过比较0.4 cm长节间与1.0 cm长节间转录组图谱发现,差异表达基因从0.4 cm长节间中以细胞分裂与初生代谢基因表达为主,向1.0 cm长节间中以细胞壁合成、次生代谢基因表达为主进行转变。同时,1.0 cm长节间与细胞程序性死亡相关基因如乙烯信号通路及活性氧爆发相关基因也呈显著上调表达。【结论】矢竹地下茎节间在生长过程中存在一个明显的由细胞分裂为主向细胞伸长生长为主的转变。同时,在节间生长中还伴随一些发育过程的转变,如长、短细胞的发育,髓腔的形成。而这些过程的转变可能与细胞生长及细胞程序性死亡等相关基因的上调表达有关。

关键词：节间生长快速生长转录组测序活性氧细胞壁地下茎

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楸树嫩枝扦插生根发育及根系特征分析

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南京林业大学学报（自然科学版） 2020年第6期44卷 94-102页

作者：王改萍王良桂王晓聪张晨章雷刘彬南京林业大学林学院南方现代林业协同创新中心江苏南京210037

【目的】楸树大多自花不育,苗木主要通过营养繁殖获得,而高质量楸树苗木缺乏,扦插育苗存在繁殖系数低、质量参差不一等问题,影响了楸树的大面积推广利用。笔者探索不同处理方式下楸树嫩枝生根及不定根形成特点,初步筛选合适的楸树嫩枝... 详细信息

【目的】楸树大多自花不育,苗木主要通过营养繁殖获得,而高质量楸树苗木缺乏,扦插育苗存在繁殖系数低、质量参差不一等问题,影响了楸树的大面积推广利用。笔者探索不同处理方式下楸树嫩枝生根及不定根形成特点,初步筛选合适的楸树嫩枝生根方法,为揭示楸树嫩枝扦插生根机理并解决楸树扦插困难提供参考。【方法】以楸树品种‘8611’为试验材料,采用两因素(生根剂类型、枝条部位)完全随机试验,观察插穗在扦插生根过程中的动态变化并进行生根阶段划分;采用石蜡切片法,对不同生根阶段的插穗进行解剖结构分析;利用根系扫描仪测定根系的相关指标,并对各指标数据进行相关性分析和多重比较,得出楸树最优生根处理,明确楸树生根类型及时间。【结果】楸树扦插生根过程可以分为4个阶段:扦插3~7 d为愈伤组织的形成阶段;扦插7~18 d为不定根的诱导阶段;扦插18~20 d为不定根的发生阶段;扦插20 d以后为不定根的伸长阶段。不同生根剂及枝条不同部位的插穗对嫩枝扦插生根存在明显影响。穗条在不同部位间,枝条上部的插穗最易生根,但易腐烂;枝条中部制成的插穗生根效果最佳。不同激素处理中,GGR-6处理的插穗最易生根,生根效果最佳。在不同激素处理下枝条不同部位的生根率表现为:1000 mg/kg GGR-6处理的中部插穗生根效果最佳,生根率约92%。在形态解剖学观察中,未发现楸树‘8611’种存在潜伏根原基。【结论】楸树嫩枝扦插的生根时间约20 d,为诱导生根类型。采用嫩枝中部制成的插穗,通过1000 mg/kg GGR-6处理时生根效果最佳。

关键词：楸树嫩枝扦插解剖观察根系发育生根率

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我国用材林主要真菌病害致病机制及内生菌对病害的生防作用

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南京林业大学学报（自然科学版） 2022年第6期46卷 225-232页

作者：孙美玲黄麟叶建仁何姣王志南京林业大学林学院南方现代林业协同创新中心江苏南京210037

我国人工林面积居世界首位,但木材人均消费量仅为发达国家的1/5,木材对外依存度接近50%。用材林对我国木材安全、生态安全、森林碳汇和绿色发展具有重要意义,但用材林树种单一、生物多样性水平较低,林分结构简单,生物灾害频发,其中真菌... 详细信息

我国人工林面积居世界首位,但木材人均消费量仅为发达国家的1/5,木材对外依存度接近50%。用材林对我国木材安全、生态安全、森林碳汇和绿色发展具有重要意义,但用材林树种单一、生物多样性水平较低,林分结构简单,生物灾害频发,其中真菌病害已成为我国用材林的主要生物灾害。笔者围绕我国用材林树种重要真菌病害的致病机制和绿色防控等科学问题,综述了我国主要用材林树种的重要真菌病害种类、危害特点、病原致病分子机制和内生菌防治病害等方面的研究进展,并对未来用材林重要真菌病害的流行监测、病原-寄主互作、病害的栽培管理与可持续绿色防控等综合防控策略等进行了展望。

关键词：用材林真菌病害病原学致病机制绿色防控

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植物纤维素合成酶研究进展

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南京林业大学学报（自然科学版） 2022年第6期46卷 207-214页

作者：却枫查若飞魏强南京林业大学南方现代林业协同创新中心南京林业大学竹类研究所江苏南京210037

纤维素是自然界分布最广、含量最多的一种多糖,占植物碳含量的50%以上。在植物中,纤维素是细胞壁的主要组分和承重元件,由纤维素合成酶复合体(CSCs)在质膜上催化合成。笔者综述了纤维素合成酶(CESA)的类型、结构、互作基因及关于CSCs结... 详细信息

纤维素是自然界分布最广、含量最多的一种多糖,占植物碳含量的50%以上。在植物中,纤维素是细胞壁的主要组分和承重元件,由纤维素合成酶复合体(CSCs)在质膜上催化合成。笔者综述了纤维素合成酶(CESA)的类型、结构、互作基因及关于CSCs结构、组装、运输的研究进展。植物细胞壁分为初生细胞壁和次生细胞壁,不同类型细胞壁中控制纤维素合成的CSCs由不同类型的纤维素合成酶(CESA)构成,且CSCs中CESAs的比例可能具有物种特异性。大多数植物中CESAs的化学计量比都是1∶1∶1,但在杨树的应力木组织中次生细胞壁相关CESAs的化学计量比为8∶3∶1。CSCs在高尔基体上装配并通过跨高尔基体网络分泌到质膜,而质膜上CSCs的丰度和分布很大程度上决定了纤维素的定向沉积。纤维素的合成和定向沉积在植物生长发育及抵御胁迫过程中发挥重要的作用。目前已发现多个关键基因通过与CSCs中特定CESA互作来识别和调控CSCs的运输。CESAs基因的表达水平也是影响纤维素合成的重要因素,油菜素甾醇等激素能通过调控CESAs的表达来控制纤维素的合成。未来在CESA功能、CSCs结构模型、CSCs中不同类型CESA所占比例、CSCs组装和运输与纤维素合成速度之间的关系,以及CESA基因的表达调控机制等方面可运用基因编辑技术进一步开展工作,从而完善植物纤维素合成的调控机制。

关键词：纤维素纤维素合成酶(CESA) 纤维素合成酶复合体互作基因

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曲霉属bHLH转录因子的研究进展

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微生物学通报 2018年第10期45卷 2243-2253页

作者：庄淼金锋杰南京林业大学江苏省南方现代林业协同创新中心江苏南京210037

bHLH(Basichelix-loop-helix)转录因子广泛存在于真核生物中,它可以通过同源或异源二聚体的形式与基因启动子上的E-box结合来调控基因的表达。转录因子的bHLH家族由广泛涉及发育过程(包括细胞增殖和分化)的大量蛋白组成,在生物的生长发... 详细信息

bHLH(Basichelix-loop-helix)转录因子广泛存在于真核生物中,它可以通过同源或异源二聚体的形式与基因启动子上的E-box结合来调控基因的表达。转录因子的bHLH家族由广泛涉及发育过程(包括细胞增殖和分化)的大量蛋白组成,在生物的生长发育调控过程中起着极为重要的作用。本文对包括构巢曲霉、烟曲霉、米曲霉等曲霉属中现已发现bHLH转录因子的调控过程和生物功能进行概述,以期为深入研究曲霉属的生长发育及bHLH转录因子的功能提供理论参考。

关键词：曲霉属 bHLH 转录因子表型

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基于Sentinel-1A和Landsat 8数据的区域森林生物量反演

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中南林业科技大学学报 2020年第11期40卷 147-155页

作者：许振宇李盈昌李明阳李超汪霖南京林业大学南方现代林业协同创新中心江苏南京210037

【目的】结合主被动遥感数据,为基于不同遥感数据源、建模算法的亚热带森林生物量建模分析提供新思路。【方法】以湖南省郴州市桂东县2014年Landsat 8 OLI影像、2014年Sentine-1A影像、2014年43块森林资源连续清查固定样地数据为主要信... 详细信息

【目的】结合主被动遥感数据,为基于不同遥感数据源、建模算法的亚热带森林生物量建模分析提供新思路。【方法】以湖南省郴州市桂东县2014年Landsat 8 OLI影像、2014年Sentine-1A影像、2014年43块森林资源连续清查固定样地数据为主要信息源,借助于ENVI、SNAP、R等软件,分别采用主动式遥感(Sentinel-1A数据)、被动式遥感(Landsat 8 OLI数据)、主被动相结合(Sentinel-1A数据结合Landsat 8 OLI数据)3种数据集和多元线性回归、随机森林、人工神经网络、袋装算法等4种模型,进行区域森林地上生物量特征变量选取、参数建模、模型精度评价、生物量空间制图。【结果】1)在特征变量选择上,红波段(B4)、红外波段(B5)反射率及纹理特征,归一化植被指数(NDVI),交叉极化(VH)后向散射系数及其纹理特征,在森林生物量反演中具有重要作用;2)4种遥感估测模型精度比较分析表明,无论是单一数据源还是二者结合,随机森林算法预测精度最高,人工神经网络、袋装算法次之,多元线性回归最低;3)3种不同数据源的遥感估测综合精度,按照由高到低的顺序排列,主被动结合>被动式遥感>主动式遥感;4)桂东县森林生物量平均值为53.68 t/hm2,生物量高(>90 t/hm2)的林分面积比例只有16.03%,主要分布在海拔较高、坡度较陡的东南、西南部。【结论】Sentinel-1A和Landsat 8数据的结合在估测森林生物量方面具有重要作用。

关键词：森林生物量参数反演 Sentine-1A Landsat 8 桂东县

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应用双分子荧光互补技术分析米曲霉Fus3与Ste12之间的蛋白互作

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微生物学通报 2019年第2期46卷 269-277页

作者：庄淼张智敏王宝腾金锋杰南京林业大学江苏省南方现代林业协同创新中心江苏南京210037

【背景】双分子荧光互补(Bimolecularfluorescencecomplementation,BiFC)在水稻恶苗病菌(Fusarium fujikuroi)等微生物蛋白互作中的应用已有报道,但在工业菌株米曲霉(Aspergillus oryzae)中还未见应用。【目的】探究米曲霉中Fus3和Ste12蛋白在生长发育中可能存在的相互作用关系,建立在米曲霉活细胞中检测蛋白互作的方法,即BiFC体系。该系统可用于特异性、可视化米曲霉目标蛋白在活细胞中的定位,并且可以更加直观地探究蛋白之间是否存在相互作用。【方法】利用MultisiteGateway复杂载体构建技术,使用切开的绿色荧光蛋白,将荧光蛋白分子的两个片段N端和C端分别与米曲霉Fus3和Ste12蛋白融合,对获得的转化株进行荧光观察。通过BiFC系统检测蛋白之间的相互作用。【结果】成功转化的米曲霉菌丝中观察到荧光,Fus3和Ste12在米曲霉中存在相互作用。【结论】通过BiFC技术证实蛋白质Fus3和Ste12在无性繁殖菌株米曲霉体内发生互作,暗示它们通过互作可能参与除了有性生殖之外的其他细胞功能,并为米曲霉蛋白互作功能研究提供一种新的检测技术和方法。

关键词：米曲霉双分子荧光互补蛋白质相互作用

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