检索结果-内蒙古大学图书馆

南京农业大学学报 2024年第1期47卷 166-173页

作者：陈培勇蔡玉杨花徐辉王锋张艳丽南京农业大学动物科技学院羊业科学研究所江苏南京210095

[目的]本研究旨在探究神经营养因子酪氨酸激酶B受体(Trkb)基因对湖羊垂体促性腺激素分泌的影响。[方法]利用qPCR方法对Trkb进行组织表达谱分析;构建Trkb过表达载体并转染至湖羊垂体细胞,利用qPCR、Western blot、EdU以及ELISA等技术检... 详细信息

[目的]本研究旨在探究神经营养因子酪氨酸激酶B受体(Trkb)基因对湖羊垂体促性腺激素分泌的影响。[方法]利用qPCR方法对Trkb进行组织表达谱分析;构建Trkb过表达载体并转染至湖羊垂体细胞,利用qPCR、Western blot、EdU以及ELISA等技术检测过表达Trkb对垂体细胞增殖及促性腺激素分泌的影响。[结果]Trkb在湖羊心、肝、脾、肺、肾以及下丘脑和垂体等各个组织中均有表达,但在垂体中表达水平显著高于其他组织(P<0.05)。Trkb在湖羊垂体组织不同发育阶段差异表达,其中在6月龄垂体组织中高表达(P<0.05),在5日龄和3月龄表达水平较低。与对照组相比,过表达Trkb基因显著促进了垂体细胞增殖率(P<0.05),增殖标记基因Pcna表达水平与Bcl2/Bax比值均显著提高(P<0.05)。此外,过表达Trkb显著提高了促性腺激素相关基因Fshβ和Lhβ的表达水平,促进了垂体细胞促卵泡素(FSH)分泌(P<0.05)。[结论]过表达Trkb能够显著促进湖羊垂体细胞增殖,降低细胞凋亡水平从而显著提高促性腺激素的分泌水平。本研究初步验证Trkb基因在湖羊垂体细胞中功能,为深入研究Trkb调控垂体功能的分子机制提供了试验依据。

关键词：湖羊垂体酪氨酸激酶B受体(Trkb) 细胞增殖促性腺激素

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肺炎支原体感染评价方法的比较研究

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生物技术通报 2025年第1期41卷 110-119页

作者：李志强王吉英袁厅王佳韦艳娜王玉格李少丽邵国青冯志新于岩飞湖南农业大学动物医学院长沙410125 江苏省农业科学院兽医研究所南京210014 怀化职业技术学院动物科技学院怀化418099 首都儿科研究所北京100020 南京农业大学动物医学院南京210095

【目的】以小鼠为动物模型,分析肺炎支原体感染(Mycoplasma pneumoniae infection, MPI)的特性并对病变评价标准进行比较分析,为MPI统一评价方法的提出提供参考。【方法】利用BALB/c小鼠经滴鼻途径,两次感染5×10^(7) CCU的*** M129... 详细信息

【目的】以小鼠为动物模型,分析肺炎支原体感染(Mycoplasma pneumoniae infection, MPI)的特性并对病变评价标准进行比较分析,为MPI统一评价方法的提出提供参考。【方法】利用BALB/c小鼠经滴鼻途径,两次感染5×10^(7) CCU的*** M129株,14 d后检测小鼠体重、肺脏大体病变、肺组织病理变化及其两种定量分析方法、肺组织病原载量、外周血T淋巴细胞亚群和血清中IL-6的表达水平等指标,分析M. pneumoniae感染特性并对病变评价标准进行比较分析。【结果】感染M129菌株14 d后,BALB/c小鼠血清中IL-6表达水平上升;肺脏出现明显的实变,肺组织切片可见大量中性粒细胞浸润,并可观察到肺泡间隔增厚。采用两种方法对肺脏病理切片的病变程度进行比较评分,发现美国胸科学会(American Thoracic Society, ATS)开发的肺损伤病理学评分系统相较于26分法能更为精细更加客观地反应肺部病变情况。感染导致小鼠炎症反应的发生并最终引起小鼠体重的显著降低。另一方面,肺部病原载量结果显示,M129株感染小鼠14 d后肺部病原载量极低;T细胞亚群流式检测分析显示,机体产生了偏向CD4^(+)T细胞的免疫,提示M. pneumoniae感染与机体免疫互相博弈,机体的免疫反应可能会逐渐清除肺部的病原。【结论】M. pneumoniae经鼻感染能导致BALB/c小鼠发生系统性炎症反应。对于肺组织病的评价,ATS肺损伤病理学评分系统相较于26分法更为精细客观,有利于不同研究之间的比较分析。

关键词：肺炎支原体小鼠感染模型肺脏病变病理评分系统免疫清除

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新生代特提斯海峡关闭过程及其圈层耦合效应

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科学通报 2024年第2期69卷 184-199页

作者：孙继敏沙金庚王世骐中国科学院地质与地球物理研究所北京100029 中国科学院大学地球与行星科学学院北京100049 中国科学院南京地质与古生物研究所南京210008 中国科学院古脊椎动物与古人类研究所北京100044

新生代是地球历史上岩石圈、水圈、大气圈、生物圈发生宏观巨变的重要地质时期,包括了冈瓦纳大陆的快速裂解、海峡的开启与闭合、海洋与大气环流的重组、温室到冰室的气候转型以及动植物的快速演替,因而是开展圈层耦合研究的关键地质时... 详细信息

新生代是地球历史上岩石圈、水圈、大气圈、生物圈发生宏观巨变的重要地质时期,包括了冈瓦纳大陆的快速裂解、海峡的开启与闭合、海洋与大气环流的重组、温室到冰室的气候转型以及动植物的快速演替,因而是开展圈层耦合研究的关键地质时期.本文以特提斯海峡为例,从地球系统科学角度,阐述特提斯海峡的闭合过程、时间及其对生物圈、海洋环流、大气圈的链式影响和反馈.核心思想如下:特提斯海峡自渐新世至中-中新世晚期(34∼12.8 Ma)历经了阶段性的演化过程,渐新世时期的特提斯海峡很好地连通了低纬度的印度洋-古地中海-大西洋;早中新世时(21∼19 Ma),伴随着非洲-阿拉伯板块与欧亚大陆的汇聚,海峡的连通能力下降了90%;中-中新世气候适宜期(17∼15 Ma)以海岸潟湖相为主、夹浅海相环境;15∼12.8 Ma期间演化为陆相环境为主、夹短暂的周期性海侵,且具有10万年的准周期;12.8 Ma之后,海峡永久关闭.特提斯海峡的闭合过程对生物圈产生了显著影响,伴随海峡的逐渐闭合,海洋无脊椎动物的腹足类、棘皮类,逐渐从特提斯海向印度洋、西太平洋迁移.对哺乳动物而言,尽管早中新世已经有零星的哺乳动物在非洲-阿拉伯与欧亚大陆之间迁徙,但真正大规模的哺乳动物双向迁徙主要发生在18∼17 Ma之后.此时,以海岸潟湖相为主的海峡已不足以构成善于利用迁徙路径的哺乳动物的地理屏障,表现为非洲的灵长类、长鼻类、蹄兔类等向欧亚大陆迁徙.而欧亚大陆的食肉类、犀类、猪类、反刍类、啮齿类等向非洲-阿拉伯迁徙.特提斯海峡的关闭对海洋环流也有重要影响,主要表现为特提斯海峡的关闭减少了来自低纬的温暖、高盐海水向大西洋及印度洋南部的注入,由此降低了低纬的热量向南半球高纬的径向输送,在一定程度上加强了东南极冰盖的扩张及南极的变冷.特提斯海的退缩以及特提斯海峡在13 Ma左右的永久关闭,也深刻影响到南亚季风环流,表现为索马里急流和南亚季风的加强.

关键词：阿拉伯与欧亚大陆汇聚特提斯海峡闭合海陆分布地球圈层相互作用环境效应

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鸟苷酸结合蛋白2b在牛分枝杆菌诱导巨噬细胞极化过程中的作用

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畜牧兽医学报 2024年第6期55卷 2641-2651页

作者：于有利王建东郭亚男张久盘薛峰曹钰莹宁夏农林科学院动物科学研究所银川750002 南京农业大学动物医学院南京210095

旨在探究鸟苷酸结合蛋白2b (guanylate-binding protein 2b, GBP2b)对***感染的小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7细胞M1、M2型极化的调控及其介导的信号通路。通过小干扰RNA下调RAW264.7巨噬细胞内GBP2b表达,分别利用qRT-PCR、Western blot... 详细信息

旨在探究鸟苷酸结合蛋白2b (guanylate-binding protein 2b, GBP2b)对***感染的小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7细胞M1、M2型极化的调控及其介导的信号通路。通过小干扰RNA下调RAW264.7巨噬细胞内GBP2b表达,分别利用qRT-PCR、Western blot和流式细胞术检测M1、M2型巨噬细胞表面标志物以及依赖MyD88信号通路关键蛋白表达情况;双萤光素酶报告基因检测GBP2b对NF-κB转录调控。结果表明GBP2b在***感染的巨噬细胞内高表达.下调RAW264.7巨噬细胞的GBP2b后再经***感染24 h, M1巨噬细胞表面标志物表达下调,而对M2巨噬细胞表面标志物表达无显著影响。下调GBP2b后抑制了NF-κB的转录启动,依赖MyD88信号通路相关蛋白随GBP2b的下调而下调。结果表明,GBP2b主要通过依赖MyD88信号通路促进***感染的RAW264.7巨噬细胞向M1表型极化和炎性反应,从而有助于巨噬细胞清除胞内***。

关键词：牛分枝杆菌鸟苷酸结合蛋白2b 巨噬细胞 M1极化 M2极化

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鸭骨骼肌发育相关基因的表达和相关性分析

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南京农业大学学报 2024年

作者：陆应林周竞何宗亮虞德兵李帆曹恒张星雨嵇宏杰吕鲲鹏于敏莉南京农业大学动物科技学院南京市畜牧家禽科学研究所

[目的]本研究通过分析鸭肌肉发育关键基因的mRNA表达水平与甲基化水平的相关性，探讨DNA甲基化在鸭肌纤维生长中的调控作用。[方法]鸭胚孵化至21天和28天时，采集雄性鸭胚的胸肌和腿肌样本，通过亚硫酸氢盐测序技术分析目的基因的甲基... 详细信息

[目的]本研究通过分析鸭肌肉发育关键基因的mRNA表达水平与甲基化水平的相关性，探讨DNA甲基化在鸭肌纤维生长中的调控作用。[方法]鸭胚孵化至21天和28天时，采集雄性鸭胚的胸肌和腿肌样本，通过亚硫酸氢盐测序技术分析目的基因的甲基化水平；出雏后，育雏期（0-2周）雏鸭进行网床养殖，育成期（3-7周）鸭进行大棚旱养，分别于1天、1周、3周、5周和7周龄时随机选取12只体重相近的公鸭进行屠宰。通过HE染色对肌纤维形态进行观察和分析；定量PCR技术分析鸭生长期骨骼肌中候选基因及DNA甲基化调控相关基因的表达变化；通过相关性分析研究候选基因在鸭生长期的调控作用。[结果]胸肌重和胸肌率从第5周（W5）开始显著增加（P < 0.05），而腿肌重和腿肌率从第3周（W3）开始迅速增加（P < 0.05）。从W3开始，骨骼肌的直径和面积都有显著增长（P < 0.05）。在胸肌中，Erbin和Klhl38在W3表现出较高的表达水平（P < 0.05）。此外，胸肌中的Mylk2和Got1在W5达到峰值（P < 0.05），相反，Klf2在W5达到最低点（P < 0.05）。在胸肌发育过程中，Tet1和Tet3的表达呈现先下降后上升的趋势（P < 0.05）；Tet2、Dnmt1、Dnmt3a和Dnmt3b的表达量在W5显著升高（P < 0.05）。在腿肌中，Dnmt3a和Dnmt3b的表达量在W3显著升高（P < 0.05）。相关性分析表明，在胸肌和腿肌中Tet2与Erbin、Mylk2和Got1这3个基因的表达均呈显著正相关（P < 0.01）；Dnmt1与Mylk2的表达呈显著正相关（P < 0.01）；胸肌肌纤维面积与Mylk2和Got1显著正相关，而与Klf2和Klhl38则呈现显著负相关（P < 0.05）。[结论]本研究揭示了DNA甲基化及肌肉发育相关基因在鸭骨骼肌生长发育过程中的作用。为进一步研究鸭肌纤维生长过程的调控机制提供了新的思路，为鸭肉生产性能的提高提供了理论依据。

关键词：鸭生长期肌肉生长候选基因 DNA甲基化相关性分析

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氧化石墨烯量子点对鸡卵清蛋白递送-免疫增强佐剂效力评估

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无机化学学报 2024年第6期40卷 1065-1078页

作者：许泽玉党安雷邓碧华左晓昕卢宇杨平尹文竹江苏省农业科学院动物免疫工程研究所南京210014 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心泰州225300 南京农业大学动物医学院南京210095

利用改进的Hummers法氧化鳞片石墨,获得富含羟基和羧基的氧化石墨烯量子点(GOQDs)。通过透射电子显微镜、X射线衍射、红外光谱及拉曼光谱测试表征其理化性质。此外,利用鸡卵清蛋白(OVA)作为模式抗原,构筑GOQDs/OVA纳米疫苗并评估其载量... 详细信息

利用改进的Hummers法氧化鳞片石墨,获得富含羟基和羧基的氧化石墨烯量子点(GOQDs)。通过透射电子显微镜、X射线衍射、红外光谱及拉曼光谱测试表征其理化性质。此外,利用鸡卵清蛋白(OVA)作为模式抗原,构筑GOQDs/OVA纳米疫苗并评估其载量、安全性、免疫效力等。结果显示,GOQDs/OVA纳米疫苗直径在5 nm左右,具有高度的水分散性和稳定性。其对OVA的最大负载量约为500 mg·g^(-1),在pH=5.5和7.4环境下24 h的释放率分别为74.65%和56.93%,表现出pH刺激响应释放性能。当GOQDs浓度在500μg·mL^(-1)以下时,不会引起溶血、细胞损伤、重要组织发生病变等现象。免疫后,与OVA单独免疫对照组相比,GOQDs/OVA纳米疫苗可以诱导产生高水平的免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白G1(IgG1)及免疫球蛋白G2a(IgG2a)抗体,提高白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-4和IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和γ干扰素(IFN-γ)的分泌,同时促进脾中辅助性(CD4+)和细胞毒性(CD8+)T淋巴细胞百分比的增加。

关键词：氧化石墨烯量子点佐剂吸附抗体

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秋季不同牛舍环境参数及其对荷斯坦牛泌乳性能、生理和血液生化指标的影响

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南京农业大学学报 2023年第6期46卷 1134-1141页

作者：夏海斌王健翟云飞徐洁曾涵芳韩兆玉南京农业大学动物科技学院乳牛科学研究所江苏南京210095 伊犁州畜牧科学研究所新疆伊宁835000

[目的]本试验旨在测定秋季不同牛舍(开放牛舍和恒温牛舍)环境参数,探究牛舍类型对荷斯坦牛各项指标(生理指标、泌乳性能和血液生化指标等)的影响。[方法]每天距离地面1.5 m处测定奶牛所在牛舍区域的温度、相对湿度(RH)、风速和CO_(2)、N... 详细信息

[目的]本试验旨在测定秋季不同牛舍(开放牛舍和恒温牛舍)环境参数,探究牛舍类型对荷斯坦牛各项指标(生理指标、泌乳性能和血液生化指标等)的影响。[方法]每天距离地面1.5 m处测定奶牛所在牛舍区域的温度、相对湿度(RH)、风速和CO_(2)、NH_(3)、PM_(10)和PM_(2.5)浓度,同时测定舍外温度和RH,并计算温湿指数(THI),连续测定7 d。试验期间,记录奶牛生理指标、反刍行为、泌乳性能和奶牛舒适度数据,并在第7天下午挤奶后于尾静脉采集血液,制作血清用试剂盒测定血清生化指标。[结果]开放牛舍和恒温牛舍之间的温度、RH、THI和CO_(2)浓度无显著差异(P>0.05),恒温牛舍风速极显著高于开放牛舍(P<0.01),恒温牛舍有害气体和悬浮颗粒物含量在13:00最低。与开放牛舍奶牛相比,恒温牛舍奶牛直肠温度和呼吸频率极显著降低(P<0.01),产奶量增长速度更慢,乳中体细胞数则极显著增加(P<0.01)。此外,恒温牛舍的奶牛舒适度更高。在血清免疫指标上,恒温牛舍奶牛肿瘤坏死因子α和免疫球蛋白G含量极显著高于(P<0.01)开放牛舍,白介素6含量显著高于开放牛舍(P<0.05)。[结论]基于测定的环境参数、奶牛生理指标和舒适度,恒温牛舍能够在秋季为奶牛提供较适宜环境,但试验牛产奶量增长速度较开放牛舍慢,乳中体细胞数高,机体炎症反应较强,需要注重奶牛产后护理和疾病诊治,并加强牛舍消毒。

关键词：牛舍类型环境参数生理指标泌乳性能

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基于CRISPR/Cas9系统构建绵羊VASA基因敲入载体及验证

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生物工程学报 2023年第10期39卷 4219-4233页

作者：杨花刘孜斐吕文莉王锋张艳丽南京农业大学动物科技学院羊业科学研究所江苏南京210095

本研究旨在探索VASA基因在绵羊睾丸发育中的表达变化,并通过构建VASA基因敲入载体,为下一步进行绵羊生殖细胞体外诱导分化研究提供基础。采集性成熟前后即3月龄(3-month-old,3M)和9月龄(9-month-old,9M)绵羊睾丸组织,利用实时荧光定量PC... 详细信息

本研究旨在探索VASA基因在绵羊睾丸发育中的表达变化,并通过构建VASA基因敲入载体,为下一步进行绵羊生殖细胞体外诱导分化研究提供基础。采集性成熟前后即3月龄(3-month-old,3M)和9月龄(9-month-old,9M)绵羊睾丸组织,利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和Western blotting技术分析VASA基因的差异表达,并利用免疫组织化学技术对VASA基因的表达定位进行分析。设计靶向VASA基因的向导RNA(guide RNA,gRNA),并构建同源重组载体,进行质粒转染绵羊耳成纤维细胞。结合CRISPR/dCas9技术对VASA基因进行激活,进一步验证载体效率。结果表明,VASA基因随着绵羊睾丸发育,表达水平极显著增加(P<0.01),且主要定位在精母细胞和圆形精子细胞中。利用CRISPR/Cas9系统构建了VASA基因敲入载体,联合pEGFP-PGKpuro-VASA载体转染耳成纤维细胞,CRISPR/dCas9系统激活后,耳成纤维细胞成功表达VASA基因。结果提示,VASA基因在绵羊睾丸发育和精子发生中发挥潜在功能,且通过CRISPR/Cas9系统可在体外构建VASA基因敲入载体,为下一步探究VASA基因对绵羊雄性生殖细胞的发育和分化提供有效的研究手段。

关键词： VASA CRISPR/Cas9 CRISPR/dCas9 敲入绵羊

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湖羊lncRNA-269的鉴定及转录调控分析

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南京农业大学学报 2024年第1期47卷 174-182页

作者：舒嘉傲曹少先孟春花钱勇张俊张建丽丁强李隐侠李齐发南京农业大学动物科技学院江苏南京210095 江苏省农业科学院畜牧研究所江苏南京210014

[目的]本文旨在研究湖羊长链非编码RNA-269(long no-coding RNA-269,lncRNA-269)序列特征、表达模式和转录调控,为后续开展lncRNA-269的功能研究提供理论基础。[方法]以湖羊为研究对象,采用5′/3′RACE结合PCR扩增方法获得其序列全长,利... 详细信息

[目的]本文旨在研究湖羊长链非编码RNA-269(long no-coding RNA-269,lncRNA-269)序列特征、表达模式和转录调控,为后续开展lncRNA-269的功能研究提供理论基础。[方法]以湖羊为研究对象,采用5′/3′RACE结合PCR扩增方法获得其序列全长,利用RT-qPCR方法鉴定其在湖羊组织中的表达模式,并利用PCR方法扩增其启动子区,鉴定其启动子区特征,分析其转录调控情况。[结果]湖羊lncRNA-269全长3 146 bp,组织表达谱显示其在湖羊各组织中广泛表达,且在健康卵泡中显著高表达,其表达水平与NR5A1 mRNA水平和血清中雌二醇(E_(2))水平呈正相关。荧光素酶活性分析发现在lncRNA-269启动子区的-359~-17 nt有1个转录激活基序,在-1 485~-942 nt有1个转录抑制基序。JASPAR软件预测发现在lncRNA-269转录抑制启动子区域存在FOXO3、PDX1等转录因子结合位点,在转录激活区域有SMAD4、YY1等转录因子结合位点。过表达SMAD4可显著提升lncRNA-269启动子区荧光素酶活性,染色质免疫沉淀(ChIP)-PCR试验进一步确认了SMAD4特异性与lncRNA-269启动子区结合。[结论]湖羊lncRNA-269在健康卵泡中显著高表达,其启动子区存在一个转录激活区域和一个转录抑制区域,转录因子SMAD4可通过与lncRNA-269启动子区结合显著上调lncRNA-269的启动子活性。

关键词：湖羊卵巢卵泡 lncRNA-269 5′/3′RACE 染色质免疫沉淀(ChIP)

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O-抗原糖基转移酶对嗜水气单胞菌环境适应性及致病性的影响

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南京农业大学学报 2024年第6期47卷 1113-1121页

作者：裴建武唐玉屏徐蒙万夕和董雨豪刘永杰南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省海洋水产研究所江苏南通226000

[目的]本文旨在探究4种O-抗原糖基转移酶(glycosyltransferase,GT)对嗜水气单胞菌NJ-35环境适应性和毒力的影响。[方法]采用同源重组技术构建GT基因缺失株ΔGT-1、ΔGT-2、ΔGT-3和ΔGT-4,比较缺失株与野生株在体外生长、抗应激、抗吞... 详细信息

[目的]本文旨在探究4种O-抗原糖基转移酶(glycosyltransferase,GT)对嗜水气单胞菌NJ-35环境适应性和毒力的影响。[方法]采用同源重组技术构建GT基因缺失株ΔGT-1、ΔGT-2、ΔGT-3和ΔGT-4,比较缺失株与野生株在体外生长、抗应激、抗吞噬、细胞黏附能力、对斑马鱼毒力以及脂多糖(LPS)表达量等方面的差异。[结果]在含有20 g·L^(-1)NaCl的高渗LB(Luria-Bertani)培养基中,相比野生(WT)菌株,4个缺失株生长均未发生明显变化;在2 mmol·L^(-1)H _(2)O_(2)的强氧化应激条件下,4个缺失株抗氧化能力显著降低,特别是缺失株ΔGT-3存活率下降90%,ΔGT-4存活率下降86.5%,另外2株缺失株存活率下降近40%;在LB培养基(pH5.0)中作用30 min,4个缺失株存活率相比野生株均明显降低,其中ΔGT-3存活率下降近30%;4个缺失株对上皮细胞的黏附能力均显著降低,抗吞噬能力均显著增强;相比野生株,ΔGT-4对斑马鱼半数致死量(LD 50)上升近20倍,其他缺失株的毒力无明显变化;4个缺失株的LPS表达量均降低,且ΔGT-1和ΔGT-4的LPS最高分子质量条带出现缺失。[结论]O-抗原糖基转移酶有助于嗜水气单胞菌抵抗酸应激和氧化应激环境,并在该菌的黏附和毒力上发挥重要作用。

关键词：嗜水气单胞菌 O-抗原糖基转移酶环境适应性毒力

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