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中国人兽共患病学报 2012年第2期28卷 103-107页

作者：陈超群吴移谋任林刘良专南华大学医学院微生物学与免疫学教研室病原生物学研究所衡阳421001 南华大学附属第一医院衡阳421001

目的生物信息学分析肺炎嗜衣原体Cpn0797蛋白的结构,制备特异性的抗Cpn0797蛋白的单克隆抗体。方法用ProtParam、SignalP、NPS@、和PSORT等软件对Cpn0797蛋白的理化参数、信号肽、二级结构、蛋白亚细胞定位进行分析;原核表达纯化GST-Cpn... 详细信息

目的生物信息学分析肺炎嗜衣原体Cpn0797蛋白的结构,制备特异性的抗Cpn0797蛋白的单克隆抗体。方法用ProtParam、SignalP、NPS@、和PSORT等软件对Cpn0797蛋白的理化参数、信号肽、二级结构、蛋白亚细胞定位进行分析;原核表达纯化GST-Cpn0797融合蛋白,以其为免疫原免疫BALB/c小鼠,杂交瘤技术制备单克隆抗体,采用间接免疫荧光法鉴定单克隆抗体的亚类和特异性。结果生物信息学分析表明Cpn0797蛋白二级结构以无规则卷曲为主;成功地建立了能稳定分泌抗Cpn0797蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,单克隆抗体能特异性的识别Cpn0797内源性蛋白。结论成功制备特异性的Cpn0797单克隆抗体,为进一步探究Cpn0797蛋白的生物学功能提供实验基础。

关键词：肺炎嗜衣原体 Cpn0797 生物信息学单克隆抗体

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肺炎支原体P1蛋白片段免疫学活性及黏附功能的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2012年第8期32卷 706-710页

作者：朱翠明汪世平吴移谋高顺利余敏君陈曦中南大学湘雅医学院病原生物学系长沙410078 南华大学医学院微生物学与免疫学教研室南华大学第一附属医院儿科湖南省疾病预防控制中心

目的了解肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniace，Mp）P1蛋白第1125～1395氨基酸片段（P1C蛋白）的免疫学活性及其细胞黏附作用。方法构建用于表达重组P1C片段（rP1C）的原核表达载体pGEX6p-2／p1c，采用SDS-PAGE和Westernblot鉴定rP1C。... 详细信息

目的了解肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniace，Mp）P1蛋白第1125～1395氨基酸片段（P1C蛋白）的免疫学活性及其细胞黏附作用。方法构建用于表达重组P1C片段（rP1C）的原核表达载体pGEX6p-2／p1c，采用SDS-PAGE和Westernblot鉴定rP1C。采用基于GST的亲和层析法提纯rPIC，提纯的rPC免疫BALB／c小鼠，ELISA检测小鼠抗rP1C血清的效价。采用Westernblot检测rPIC对Mp感染患者血清的免疫反应性。采用间接免疫荧光法检测rP1C黏附HeLa细胞及其免疫血清黏附抑制作用。结果所构建的原核表达系统能有效表达相对分子质量约为66×10^3的可溶性rP1C。rP1C免疫小鼠后，其抗血清ELISA效价高达1：64000。rPIC能被Mp感染者血清及小鼠抗rPIC血清识别并与之结合。rP1C能黏附HeLa细胞，其抗血清可阻断Mp对HeLa细胞的黏附，该黏附阻断作用随抗血清浓度增高而增强。结论rP1C具有良好的免疫原性和免疫反应性及黏附细胞功能，可作为Mp疫苗及血清学检测的候选抗原。

关键词：肺炎支原体 P1蛋白片段免疫学活性黏附

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湖北省武汉地区啮齿动物汉坦病毒S基因的特征分析

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中华流行病学杂志 2012年第8期33卷 828-831页

作者：刘东瀛刘婧李金林陈文罗凡李晴杨占秋武汉大学医学病毒学研究所病毒学国家重点实验室430071 武汉大学医学病毒学研究所医学微生物学教研室430071 南通大学医学院厦门大学医学院基础医学部

目的了解湖北省武汉地区啮齿动物自然感染汉坦病毒（HV）情况以及流行的基因型和亚型。方法2000--2003年、2009--2011年秋冬季在武汉地区新洲、江夏区野外及居民区采用夹夜法捕鼠。对捕获的动物进行分类鉴定并取肺脏用间接免疫荧光法检... 详细信息

目的了解湖北省武汉地区啮齿动物自然感染汉坦病毒（HV）情况以及流行的基因型和亚型。方法2000--2003年、2009--2011年秋冬季在武汉地区新洲、江夏区野外及居民区采用夹夜法捕鼠。对捕获的动物进行分类鉴定并取肺脏用间接免疫荧光法检测病毒抗原。抗原阳性的样本，采用RT-PCR方法扩增部分S片段核苷酸序列，构建系统发生树并进行基因分型。结果2000--2003年捕获啮齿类动物437只，HV抗原阳性鼠肺标本24份，病毒携带率为5．49％。2009--2011年捕获啮齿类动物173只，HV抗原阳性鼠肺标本7份，病毒携带率为4．05％。褐家鼠为当地的优势鼠种。22份标本成功地用汉滩病毒（HTNV）、汉城病毒（SEOV）特异引物扩增部分S基因片段并测序。17只（13只褐家鼠，4只黑线姬鼠）鼠肺标本中扩增出SEOV部分S基因片段（nt588-1147），分别属于第3亚型和2个新的基因亚型。5只黑线姬鼠的鼠肺标本中扩增出HTNV部分S基因片段（nt615～1141），分别属于第7亚型和1个新的亚型。结论武汉地区流行的HV为SEOV和HTNV，并发现新的基因亚型，SEOV可能“溢出”感染黑线姬鼠。

关键词：汉坦病毒啮齿动物基因系统发生分析

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医学微生物学教学改革探讨

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基础医学教育 2012年第7期14卷 481-483页

作者：周洲李忠玉陈丽丽唐双阳游晓星南华大学基础医学院微生物学与免疫学教研室衡阳421001

医学微生物学是联系基础与临床的重要桥梁课程。在传统教学中,学生被动学习,兴趣不大,教学效果不佳。为提高医学微生物学的教学质量,尝试在教学理念和方法等方面进行了一些改革,在一定程度上克服了医学微生物学传统教学模式的弊端,调动... 详细信息

医学微生物学是联系基础与临床的重要桥梁课程。在传统教学中,学生被动学习,兴趣不大,教学效果不佳。为提高医学微生物学的教学质量,尝试在教学理念和方法等方面进行了一些改革,在一定程度上克服了医学微生物学传统教学模式的弊端,调动了学生的积极性,增强了学生的实践技能和综合素质,取得了良好的教学效果。

关键词：医学微生物学教学改革教学方法

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衣原体糖脂抗原对自然杀伤性T细胞生物学活性的影响

衣原体糖脂抗原对自然杀伤性T细胞生物学活性的影响

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2012全国临床微生物与感染免疫学术研讨会

作者：彭莹赵蕾刘露王红陈强高晓玲杨熙赵蔚明山东大学医学院医学微生物学教研室加拿大曼尼托巴大学医学微生物系

目的自然杀伤T细胞(NKT细胞)是一类具有重要免疫调节作用的特殊T细胞亚群,可识别由非经典的MHCI类分子CD1d递呈的糖脂类抗原,而不是肽类抗原。以往研究表明,衣原体在感染过程中可活化NKT细胞,并对其生物学活性产生影响。衣原体在生长繁... 详细信息

目的自然杀伤T细胞(NKT细胞)是一类具有重要免疫调节作用的特殊T细胞亚群,可识别由非经典的MHCI类分子CD1d递呈的糖脂类抗原,而不是肽类抗原。以往研究表明,衣原体在感染过程中可活化NKT细胞,并对其生物学活性产生影响。衣原体在生长繁殖过程中可分泌一种水溶性糖脂抗原(GLXA),与衣原体的感染相关,但GLXA与NKT细胞活性的关系尚不清楚。本研究拟探讨在衣原体感染过程中GLXA是否能够活化NKT细胞及其对NKT细胞生物学活性的影响。方法体外实验,采用GLXA-CD1d-NKT杂交瘤共培养系统,检测在体外细胞水平上GLXA对NKT细胞的活化作用。体内试验,采用NKT缺陷小鼠和野生型小鼠,尾静脉给予GLXA,分别于注射后2 h和12 h检测小鼠血清中IL-4和IFN-γ的分泌水平。小鼠腹腔给予GLXA,用流式细胞术检测NKT细胞的活化、细胞内细胞因子染色检测IL-4和IFN-γ的分泌。结果 GLXA可在体外共培养系统中活化NKT杂交瘤细胞,促使NKT杂交瘤细胞分泌IL-2。体内实验表明:GLXA可促使野生型小鼠的血清中产生较高水平的IL-4和IFN-γ,但在NKT缺陷小鼠体内没有发现这种现象。在流式细胞术检测中,GLXA可在体内促进NKT表面活化标志CD69的表达,并诱导NKT细胞分泌较高水平的IL-4和IFN-γ。结论以上实验初步证明,GLXA可在体内和体外活化NKT细胞,并促进其分泌IL-4和IFN-γ,从而影响NKT细胞的生物学活性和对衣原体感染的免疫调节作用。该研究进一步完善了衣原体感染过程中对宿主免疫的作用机制,并为以GLXA为靶点的疫苗研究奠定了新的理论基础。

关键词：糖脂抗原衣原体 NKT细胞

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活化NKT细胞在小鼠衣原体生殖道感染中作用的研究

活化NKT细胞在小鼠衣原体生殖道感染中作用的研究

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2012全国临床微生物与感染免疫学术研讨会

作者：王红赵蕾彭莹刘娟齐眉陈强杨熙赵蔚明山东大学医学院医学微生物学教研室加拿大曼尼托巴大学医学微生物系

目的分析自然杀伤T(NKT)细胞在小鼠衣原体生殖道感染中的作用并初步探讨其作用机制。方法雌性BALB/c小鼠腹腔注射NKT细胞特异性刺激物α-galactosylceramide(α-半乳糖神经酰胺)或vehicle(溶媒对照)后阴道接种衣原体(***)。不同时间点... 详细信息

目的分析自然杀伤T(NKT)细胞在小鼠衣原体生殖道感染中的作用并初步探讨其作用机制。方法雌性BALB/c小鼠腹腔注射NKT细胞特异性刺激物α-galactosylceramide(α-半乳糖神经酰胺)或vehicle(溶媒对照)后阴道接种衣原体(***)。不同时间点取小鼠阴道拭子检测衣原体存活数(IFU),同时对小鼠生殖道标本进行病理组织学分析。小鼠生殖道局部引流淋巴结NKT细胞用四聚体染色后,流式细胞术分析细胞的活化情况。利用RT-PCR方法对感染小鼠生殖道组织细胞因子的表达。ELISA检测生殖道引流淋巴结和生殖道冲洗液的细胞因子模式。结果与对照组小鼠相比,α-半乳糖神经酰胺处理组小鼠对衣原体感染体抗力较强,阴道衣原体IFU明显低于对照组存活数较低(P<0.05)。生殖道组织的肉眼及镜下观察发现α-半乳糖神经酰胺处理组小鼠较少发生子宫角扩张和输卵管积水;生殖道局部组织炎症病变较轻。流式检测结果表明,α-半乳糖神经酰胺处理组小鼠的NKT(CD1d tetramer+TCRβ+)细胞以及CD69+NKT细胞的比例较对照组明显增加。荧光定量PCR结果显示,实验组小鼠生殖道组织中IFN-γ和IL-12 mRNA表达水平升高,而IL-10水平下降,与小鼠生殖道引流淋巴结培养上清和生殖道冲洗液的ELISA结果一致。结论经α-半乳糖神经酰胺活化的NKT细胞对生殖道***感染有保护性作用,其保护性作用的发挥与促进宿主抗衣原体生殖道感染的Th1免疫反应有关。

关键词： NKT细胞 α-半乳糖神经酰胺衣原体生殖道感染

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肺炎支原体脂质相关膜蛋白在动脉粥样硬化发生发展中的作用机制

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中国动脉硬化杂志 2012年第9期20卷 773-776页

作者：朱翠明汪世平游晓星曾焱华陈曦中南大学湘雅医学院病原生物学科湖南省长沙市410078 南华大学医学院微生物学与免疫学教研室湖南省衡阳市421001 湖南省疾病预防控制中心湖南省长沙市410078

目的研究肺炎支原体脂质相关膜蛋白对巨噬细胞分泌细胞因子和诱导巨噬细胞凋亡的影响,初步探讨肺炎支原体引起动脉粥样硬化的机制。方法用ELISA检测肺炎支原体脂质相关膜蛋白诱导体外培养的巨噬细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的... 详细信息

目的研究肺炎支原体脂质相关膜蛋白对巨噬细胞分泌细胞因子和诱导巨噬细胞凋亡的影响,初步探讨肺炎支原体引起动脉粥样硬化的机制。方法用ELISA检测肺炎支原体脂质相关膜蛋白诱导体外培养的巨噬细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量;用流式细胞术检测脂质相关膜蛋白诱导巨噬细胞的凋亡率;West-ern blot方法检测经脂质相关膜蛋白作用的巨噬细胞NF-κB的激活和NF-κB抑制剂吡咯啉烷二甲基硫脲对巨噬细胞分泌细胞因子和诱导巨噬细胞凋亡的影响。结果脂质相关膜蛋白能促进巨噬细胞分泌高水平的TNF-α、IL-1β和IL-6和发生凋亡;并能使NF-κB从细胞浆中转位到细胞核内;吡咯啉烷二甲基硫脲能显著抑制巨噬细胞NF-κB的激活,且能抑制脂质相关膜蛋白诱导的巨噬细胞分泌细胞因子和发生凋亡。结论肺炎支原体脂质相关膜蛋白可通过激活NF-κB诱导巨噬细胞分泌前炎症细胞因子和促进凋亡,可能在动脉粥样硬化的发病中起重要作用。

关键词：肺炎支原体脂质相关膜蛋白前炎症因子细胞凋亡动脉粥样硬化

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α-galactosylceramide活化NKT细胞在宿主抵抗衣原体生殖道感染中的作用

α-galactosylceramide活化NKT细胞在宿主抵抗衣原体生殖道感染中...

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中国微生物学会2012感染与免疫学术研讨会

作者：王红赵蕾彭莹刘娟齐眉陈强杨熙赵蔚明山东大学医学院医学微生物学教研室山东省济南市文化西路44号250012 加拿大曼尼托巴大学医学院微生物学和免疫系

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衣原体感染中NKT细胞影响NK细胞IFN-γ的产生和杀伤功能

衣原体感染中NKT细胞影响NK细胞IFN-γ的产生和杀伤功能

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2012全国临床微生物与感染免疫学术研讨会

作者：赵蕾高晓玲 Antony George Joyee 白虹赵蔚明杨熙山东大学医学院医学微生物学教研室 Laboratory for Infection and Immunity Departments of Medical Microbiology and ImmunologyFaculty of MedicineUniversity of Manitoba

目的自然杀伤T细胞(NKT细胞)是一类独特的T淋巴细胞亚群。NKT细胞作为一种调节细胞能够影响多种免疫细胞的功能。以往有研究利用α-GalCer对NKT细胞的特异性激活作用揭示了NKT细胞对NK细胞的调节作用,但是这种调节是否在天然微生物感染... 详细信息

目的自然杀伤T细胞(NKT细胞)是一类独特的T淋巴细胞亚群。NKT细胞作为一种调节细胞能够影响多种免疫细胞的功能。以往有研究利用α-GalCer对NKT细胞的特异性激活作用揭示了NKT细胞对NK细胞的调节作用,但是这种调节是否在天然微生物感染中同样发挥作用目前尚不清楚。方法本研究在Chlamydia muridarum(Cm)小鼠呼吸道感染模型中,利用NKT细胞缺陷小鼠和抗体封闭(antiCD1dmAb)策略,对衣原体感染过程中NKT细胞是否能够影响NK细胞的免疫应答进行了研究。结果首先,在体外实验中我们发现Cm体外感染迅速增加了CD69在NK及NKT细胞上的表达,诱导了NK和NKT细胞IFN-γ的迅速产生。而相对与野生型小鼠,NKT KO小鼠的NK细胞CD69表达显著降低,同样,用抗体封闭CD1d与TCR的相互作用从而阻断NKT细胞的活化也显著抑制了NK细胞CD69的表达和IFN-γ的产生。其次,在体内感染实验中,2种细胞在肺部淋巴细胞中百分比和绝对数均显著增加,同时肺NKT细胞和NK细胞均增加了CD69的表达。NKT KO鼠在Cm感染后,脾和肺NK(CD3-NK1.1+)的百分比和绝对数均显著低于野生型小鼠。有趣的是,感染后3 d,NKT缺陷小鼠的肺和脾脏中产IFN-γ的NK细胞的百分比明显低于野生型小鼠。相反,NKT缺陷小鼠的肺和脾脏NK细胞在YAC-1的刺激下脱颗粒的水平(即CD107a的表达)反而明显高于野生型小鼠。以上结果表明:在Cm感染过程中NKT细胞促进了NK细胞的扩增和活化,增强了NK细胞IFN-γ的产生但却抑制了其杀伤功能,揭示了NKT细胞对NK细胞产生IFN-γ以及对靶细胞杀伤的不同调节效应。结论上述研究结果展示了感染中固有免疫细胞间相互作用的复杂性,有利于加深我们对衣原体感染中免疫调节的理解。

关键词：衣原体杀伤功能 IFNγ 自然杀伤细胞自然杀伤T细胞

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梅毒螺旋体膜蛋白DNA疫苗的优化及免疫策略的初步研究

梅毒螺旋体膜蛋白DNA疫苗的优化及免疫策略的初步研究

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纪念中国微生物学会成立六十周年大会暨2012年中国微生物学会学术年会

作者：赵飞骏吴移谋湖南省衡阳市常胜西路28号南华大学医学院微生物学与免疫学教研室 421001

本研究是在首次完成Tp单基因DNA疫苗筛选构建及免疫活性初步研究工作的基础上，将具有显著免疫佐剂效应的IL-2基因插入己真核表达重组体pcDNA3.1(+)/Gpd中，融合构建多价DNA疫苗，用壳聚糖(CS)纳米颗粒包被后导入新西兰兔体内，利用CS... 详细信息

本研究是在首次完成Tp单基因DNA疫苗筛选构建及免疫活性初步研究工作的基础上，将具有显著免疫佐剂效应的IL-2基因插入己真核表达重组体pcDNA3.1(+)/Gpd中，融合构建多价DNA疫苗，用壳聚糖(CS)纳米颗粒包被后导入新西兰兔体内，利用CS纳米颗粒高效的基因转导能力及IL-2的佐剂效应诱导动物细胞表达免疫原性更强的融合蛋白，强化免疫应答;同时采用核酸疫苗初免、含CpG序列的寡脱氧核苷酸(CpG ODN)-Tp膜蛋白黏膜免疫加强的疫苗接种策略，以期全面激发机体免疫系统，尤其黏膜免疫，建立高效抗Tp感染的动物模型，为研制人用的高效疫苗预防梅毒打下基础。

关键词：梅毒螺旋体膜蛋白 DNA疫苗免疫机制

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