目的:观察apelin-13是否通过影响ABCA1蛋白水平从而调节Aβ代谢。方法:1Western blot检测PC-12细胞血管紧张素受体AT1相关的受体蛋白(putative recep tor p rotein related to the angiotensin recep tor AT1,APJ)表达,以确定PC-12细胞...
详细信息
目的:观察apelin-13是否通过影响ABCA1蛋白水平从而调节Aβ代谢。方法:1Western blot检测PC-12细胞血管紧张素受体AT1相关的受体蛋白(putative recep tor p rotein related to the angiotensin recep tor AT1,APJ)表达,以确定PC-12细胞存在apelin-13作用受体。2用不同浓度(1、10、100nmol/L)的apelin-13处理PC-12细胞24h及用100nmol/L apelin-13处理细胞24不同时间(12h、24h、48h)后,酶联免疫吸附法(ELISA)检测Aβ1-40及Aβ1-42水平,Western blot免疫印迹法检测APP、BACE1及NEP蛋白水平,根据试剂盒方法检测BACE1及NEP酶活性,RT-PCR检测ABCA1 m RNA水平,Western Blot检测ABCA1蛋白水平,液体闪烁计数法检测细胞内胆固醇的流出。3先使用ABCA1 Si RNA抑制PC-12细胞ABCA1蛋白表达,再使用100nmol/L apelin-13处理PC-12细胞24h,ELISA检测Aβ1-40及Aβ1-42水平,根据试剂盒方法检测BACE1及NEP酶活性。以确定ABCA1在apelin-13对PC-12细胞Aβ代谢影响中所起的作用。结果:1PC-12细胞存在APJ表达。2Apelin-13显著降低PC-12细胞Aβ1-40及Aβ1-42水平,对APP、BACE1及NEP蛋白表达无显著影响,降低BACE1酶活性,增加NEP酶活性,对ABCA1m RNA水平无影响,增加ABCA1蛋白水平,促进胆固醇流出,减少细胞内脂质蓄积。3使用ABCA1 Si RNA抑制PC-12细胞ABCA1蛋白表达后,apelin-13降低PC-12细胞Aβ1-40及Aβ1-42水平的作用显著减弱,其降低BACE1酶活性及增加NEP酶活性的作用显著抑制。结论:Apelin-13通过增加PC-12细胞ABCA1蛋白水平,从而减少Aβ水平。
暂无评论