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生命的化学 2025年第1期45卷 43-54页

作者：欧阳雨欣胡密张杨恺林惠玲唐宛莹彭茂何平平欧阳新平南华大学衡阳医学院基础医学院生理学教研室神经科学研究所神经变性与认知障碍衡阳市重点实验室衡阳421001 湖南师范大学医学院生理学教研室模式动物与干细胞生物学湖南省重点实验室生殖与转化医学湖南省工程研究中心长沙410013 湖南师范大学医学院护理系长沙410013

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种慢性代谢性疾病,与血脂异常和炎症密切相关,但其发病机制尚未完全阐明。肠道菌群作为调节代谢的核心因素,能够产生多种代谢产物,并参与维持宿主稳态、营养物质代谢等过程。大量研究已证实肠道菌... 详细信息

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种慢性代谢性疾病,与血脂异常和炎症密切相关,但其发病机制尚未完全阐明。肠道菌群作为调节代谢的核心因素,能够产生多种代谢产物,并参与维持宿主稳态、营养物质代谢等过程。大量研究已证实肠道菌群在AS发展中的重要作用。本文综合当前研究,强调并阐述了肠道菌群失调及其相关代谢产物与AS之间的复杂联系,并探讨了以肠道菌群为靶点的新兴治疗方法与潜在作用,以期为预防和治疗AS提供新思路。

关键词：肠道菌群代谢产物动脉粥样硬化干预治疗

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社交环境下小鼠超声发声特征及机制的研究进展

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神经解剖学杂志 2021年第2期37卷 226-230页

作者：莫辉明赵秋影黄鑫陈娣刘海鹰王文挺杨彦玲延安大学医学院生理学教研室延安716000 空军军医大学基础医学院神经生物学教研室西安710032 空军军医大学西京医院神经内科西安710032 广州医科大学附属第二医院神经研究所广州510220

小鼠能够发出的超出人耳听域范围(>20 kHz)的声音,称之为超声发声(USVs),幼鼠在母婴分离、受到低温刺激和触觉刺激下可发出USVs,从而引起母鼠探索、哺乳和筑巢等母性行为。成年小鼠在求偶行为、领地社交和等级社交时发出USVs。作为... 详细信息

小鼠能够发出的超出人耳听域范围(>20 kHz)的声音,称之为超声发声(USVs),幼鼠在母婴分离、受到低温刺激和触觉刺激下可发出USVs,从而引起母鼠探索、哺乳和筑巢等母性行为。成年小鼠在求偶行为、领地社交和等级社交时发出USVs。作为一种无创的、灵敏的、可量化的以及在出生后即可记录的实验指标,小鼠US-Vs被广泛用于社会行为、情感表达以及相关神经系统疾病模型研究中。本文就实验室用小鼠USVs的发声特征、社交环境下的诱发因素和发声机制做一综述,为进一步加深对相关社交行为特征的认识和其内在神经机制的理解提供新思路。

关键词：超声发声社交隔离求偶行为小鼠

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shRNA沉默CBS基因的慢病毒载体构建及稳定转染PC12细胞系的建立

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激光生物学报 2016年第5期25卷 451-455页

作者：尹涵予廖志强尹蔚兰湖南省衡阳市第八中学湖南衡阳421008 南华大学医学院临床医学系湖南衡阳421001 南华大学医学院生理学教研室/神经生物学研究所湖南衡阳421001

目的:硫化氢是一种重要的气体信号分子,作为一种神经调质在神经系统中起重要作用。胱硫醚-β-合成酶(CBS)是脑内硫化氢合成的主要酶。构建针对大鼠CBS基因的shRNA干扰载体,稳定转染PC12细胞,观察该载体对PC12细胞CBS基因的沉默效应。方... 详细信息

目的:硫化氢是一种重要的气体信号分子,作为一种神经调质在神经系统中起重要作用。胱硫醚-β-合成酶(CBS)是脑内硫化氢合成的主要酶。构建针对大鼠CBS基因的shRNA干扰载体,稳定转染PC12细胞,观察该载体对PC12细胞CBS基因的沉默效应。方法:构建三条针对大鼠CBS基因的shRNA,经前期实验筛序一条最有效靶点与载体GV248(h U6-MCS-Ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin)连接,经转化及PCR阳性克隆筛选及测序鉴定。将LV-CBS-ShRNA慢病毒载体连同包装载体经脂质体2 000共转染到293T细胞,慢病毒包装后用荧光法进行滴度测定。将包装好的慢病毒转染到PC12细胞,用嘌呤霉素进行筛选,得到稳定转染LV-CBS ShRNA的PC12细胞。实时荧光定量PCR检测CBSmRNA的表达,Western-blot检测CBS蛋白的表达。结果:PCR扩增和测序结果证明,成功构建大鼠LV-CBS ShRNA慢病毒载体,经包装产生的慢病毒滴度为1×109TU/m L。与转染阴性对照慢病毒(LV-NC-ShRNA)的细胞比较,LV-CBS ShRNA慢病毒转染可使PC12的CBSmRNA和CBS蛋白表达分别下降51.2%和48%。成功构建CBS基因ShRNA干扰的PC12细胞株,为后续研究CBS在神经系统中的作用奠定基础。

关键词： RNA干扰 PC12 胱硫醚-β-合成酶转染慢病毒

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CBS过表达慢病毒载体构建及稳定转染PC12细胞系的建立

CBS过表达慢病毒载体构建及稳定转染PC12细胞系的建立

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湖南省生理科学会2015年度学术年会暨第十届理事会换届选举大会

作者：尹蔚兰廖志强阳柏成姜骆永文芳王芳邬力祥中南大学基础医学院生理学系南华大学生理学教研室/神经生物学研究所南华大学生理学教研室/神经生物学研究所中南大学基础医学院生理学系

目的硫化氢被认为是第三种气体信号分子,在神经系统中扮演重要的角色。脑内合成硫化氢的主要酶为胱硫醚-β-合成酶(CBS),因此研究CBS与神经系统疾病的关系具有重要意义。利用基因重组技术,构建CBS基因过表达载体,转染PC12细胞,建立CBS... 详细信息

目的硫化氢被认为是第三种气体信号分子,在神经系统中扮演重要的角色。脑内合成硫化氢的主要酶为胱硫醚-β-合成酶(CBS),因此研究CBS与神经系统疾病的关系具有重要意义。利用基因重组技术,构建CBS基因过表达载体,转染PC12细胞,建立CBS过表达的PC12细胞株并进行鉴定。方法根据Gene bank提供的CBS cDNA序列设计引物,PCR扩增CBS基因并将其慢病毒过表达载体GV341,将已构建的慢病毒载体对293T细胞进行转染,收集病毒上清,感染正常PC12细胞,用嘌呤霉素进行筛选,得到稳定转染CBS的PC12细胞。通过基因测序,实时荧光定量PCR、western-blot等对细胞株进行鉴定。结果测序鉴定重组慢病毒过表达载体CBS基因序列与genebank提供的CBS序列一致;荧光定量PCR和western-blot检测显示,与空载体组相比,转染GV341-CBS慢病毒表达载体组的PC12细胞,CBS的表达在mRNA和蛋白两个水平均增高,成功建立了PC12-CBS细胞系。结论成功构建CBS过表达的PC12细胞株,为研究CBS与神经系统疾病的关系提供了稳定的细胞株。

关键词：胱硫醚-β-合成酶慢病毒转染过表达 PC12细胞

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siRNA诱导CyclinB1沉默增加HePG2细胞对柔红霉素的敏感性(英文)

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生物化学与生物物理进展 2011年第6期38卷 551-557页

作者：张勇祖旭宇罗唯师唐圣松蒋宇扬南华大学病理学与病理生理学教研室衡阳421001 南华大学附属第一医院临床医学研究所衡阳421001 清华大学深圳研究生院广东省化学生物学重点实验室深圳518055 清华大学医学院北京100084

探讨了CyclinB1在肝癌药物耐受形成中的作用.用siRNA技术沉默CyclinB1在细胞中的表达,使用流式细胞仪技术分析细胞的凋亡和周期分布,用细胞克隆形成能力分析和细胞毒性实验分析细胞的增殖能力.由siRNA诱导的CyclinB1下调导致40%～50%肝... 详细信息

探讨了CyclinB1在肝癌药物耐受形成中的作用.用siRNA技术沉默CyclinB1在细胞中的表达,使用流式细胞仪技术分析细胞的凋亡和周期分布,用细胞克隆形成能力分析和细胞毒性实验分析细胞的增殖能力.由siRNA诱导的CyclinB1下调导致40%～50%肝癌细胞阻滞在G2/M期,并显著抑制肝癌细胞的单克隆形成能力;柔红霉素联合CyclinB1 siRNA较单独使用柔红霉素能更加有效地导致肝癌细胞凋亡,而在人正常肝细胞HL-7702中这种现象不明显.实验结果表明针对于CyclinB1的靶向性下调与肝癌药物的联合使用将有可能成为肝癌治疗的新策略.

关键词： CyclinB1 siRNA 柔红霉素药物协同作用耐药性

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岛叶的结构和功能改变参与高原环境适应

岛叶的结构和功能改变参与高原环境适应

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中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会

作者：张家兴石金富闫晓丹龚启勇刘一军翁旭初厦门大学医学院生理学和神经生物学教研室中国科学院心理研究所脑高级功能实验室 Huaxi Magnetic Resonance Research Center West China Hospital Sichuan University Departments of Psychiatry and Neuroscience University of Florida McKnight Brain Institute GainesvilleFL 32601USA

高原人群呼吸和心血管系统的适应得到了广泛研究。然而,调节这些系统活动的脑机制尚不清楚。人类的岛叶是主要内脏感觉区。研究表明,呼吸困难会激活岛叶,而呼吸困难又是高原呼吸适应过程中的一个最主要症状。岛叶又是控制交感神经和副... 详细信息

高原人群呼吸和心血管系统的适应得到了广泛研究。然而,调节这些系统活动的脑机制尚不清楚。人类的岛叶是主要内脏感觉区。研究表明,呼吸困难会激活岛叶,而呼吸困难又是高原呼吸适应过程中的一个最主要症状。岛叶又是控制交感神经和副交感神经介导的心血管调节最重要的皮层区域。因此,我们推测,高原环境的适应可能发生岛叶的结构和功能活动改变。本研究运用活体磁共振(MRI)技术对28个高原出生和生长17年以上的汉族人群进行了研究。他们的祖先移居海拔2 616～4200 m青藏高原3代以上。世居海平面附近匹配人群作为对照组。基于形态测量(voxel-based morphometry,VBM)的分析显示高原人群双侧岛叶前下端灰质密度丢失,其它脑区有扣带前回、前额叶和视觉皮层。基于弥散张量成像(diffusion tensorimaging,DTI)纤维追踪显示岛叶前下端与前额叶的纤维连接数量显著减少。基于静息态MRI的局部区域一致性(regional homogeneity,ReHo)分析显示岛叶前下端内部的细胞功能活动连接降低。为了进一步正式这些改变是否与高原呼吸功能有关,我们通过fMRI研究发现,与对照组比较,双侧岛叶前下端对最大呼吸任务(maximal inspiration)的反应能力减弱。而基于静息态MRI分析发现岛叶前下端与运动前区支配呼吸运动脑区细胞的功能连接代偿性增强。岛叶的结构和功能改变也影响到工作记忆能力。本研究在结构、细胞活动和功能连接方面表明岛叶可能参与了高原环境呼吸和心血管系统获得性适应。

关键词：高原环境功能连接静息态结构和功能

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脂肪分化相关蛋白通过酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1促进巨噬细胞脂质蓄积

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中国动脉硬化杂志 2008年第2期16卷 101-106页

作者：袁中华贾薇 Xi-Lin NIU 黄谙非刘录山易光辉王佐任重唐朝克田国平杨永宗南华大学心血管病研究所湖南省衡阳市421001 吉首大学医学院生理学教研室湖南省吉首市416000 美国北卡罗来纳大学医学院卡罗来纳心血管生物学中心教堂山27599 南华大学附属第二医院心血管内科湖南省衡阳市421001

目的观察高表达脂肪分化相关蛋白对酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达及脂质蓄积的影响。方法构建表达载体pcDNA3.1-HA-脂肪分化相关蛋白,使用THP-1巨噬细胞,通过瞬时转染使之高表达脂肪分化相关蛋白,依次用氧化型低密度脂蛋白和(或)丙... 详细信息

目的观察高表达脂肪分化相关蛋白对酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达及脂质蓄积的影响。方法构建表达载体pcDNA3.1-HA-脂肪分化相关蛋白,使用THP-1巨噬细胞,通过瞬时转染使之高表达脂肪分化相关蛋白,依次用氧化型低密度脂蛋白和(或)丙泮尼地处理。逆转录聚合酶链反应和Western blot检测酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1及脂肪分化相关蛋白的表达,油红O染色和高效液相色谱检测细胞内脂质的蓄积。结果随着氧化型低密度脂蛋白浓度的增加,巨噬细胞脂肪分化相关蛋白及酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达明显增强,两者呈伴行关系。丙泮尼地能抑制酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达上调,且随处理时间延长,其表达逐渐减少,并且能减少细胞内脂滴生成。与对照组相比,瞬时转染pcDNA3.1-HA-脂肪分化相关蛋白能使脂肪分化相关蛋白表达明显升高。高表达脂肪分化相关蛋白的巨噬细胞能使酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达增加,促进细胞内胆固醇酯蓄积,并协同增强氧化型低密度脂蛋白的作用。加入丙泮尼地后,高表达脂肪分化相关蛋白的作用被减弱。结论高表达脂肪分化相关蛋白能上调THP-1巨噬细胞酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达,促进细胞内脂质蓄积。脂肪分化相关蛋白可能通过酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1促进细胞内胆固醇酯的蓄积。

关键词：病理学与病理生理学脂肪分化相关蛋白酰基辅酶A: 胆固醇酰基转移酶1 胆固醇酯蓄积巨噬细胞

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C型钠尿肽压抑大鼠视网膜GABA能无长突细胞上的谷氨酸电流

C型钠尿肽压抑大鼠视网膜GABA能无长突细胞上的谷氨酸电流

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中国神经科学学会第六届学术会议暨学会成立十周年庆祝大会

作者：田苗杨雄里复旦大学神经生物学研究所青岛大学医学院生理学教研室复旦大学神经生物学研究所

＜正＞钠尿肽（NP）在中枢神经系统中有着广泛的分布,其家族成员主要包括ANP,BNP和CNP,经三种NP受体（NPR-A,NPR-B,NPR-C）行使其神经调质的功能。ANP和BNP主要与NPR-A和NPR-C结合,CNP主要与NPR-B和NPR-C结合。本工作应用全细胞膜片钳... 详细信息

＜正＞钠尿肽（NP）在中枢神经系统中有着广泛的分布,其家族成员主要包括ANP,BNP和CNP,经三种NP受体（NPR-A,NPR-B,NPR-C）行使其神经调质的功能。ANP和BNP主要与NPR-A和NPR-C结合,CNP主要与NPR-B和NPR-C结合。本工作应用全细胞膜片钳和免疫荧光双重标记技术,在原代培养的大鼠视网膜GABA能无长突细胞（AC）上,研究了NP对谷氨酸（Glu）电流的调制。建立了大鼠视网膜GABA能AC的原代培养体系,以新生大鼠视网膜为材料,采用酶消化法分离培养,在体外培养第十天后,以抗HPC-1（AC的特异标记物）和抗GABA抗体进行双重标记,表明几乎所有直径大于10μm的神经元均为GABA能AC。免疫组化结果显示,三种NP受体亚型在培养的GABA能AC上有不同的表达模式:NPR-B表达在胞膜上,NPR-A表达在胞质里, 而NPR-C在胞膜、胞质均无表达。应用膜片钳技术在GABA能AC上记录到Glu诱导的快速失敏的内向电流（τ-5ms）,这些电流为GYKI 52466完全压抑,表明Glu电流由AMPA亚型的Glu受体介导。CNP对Glu电流有明显的压抑作用,而ANP和BNP并无显著影响。HS-142-1（NPR-B 的特异性拮抗剂）在多数细胞上可翻转CNP对Glu电流的这种压抑作用,而cANF（NPR-C的特异性激动剂）不能模拟CNP的作用,提示CNP的作用可能经由NPR-B所介导,与免疫组化的结果相一致。进而,胞外施加可透膜的8-Br-cGMP也可压抑Glu电流,此时再施加CNP,Glu电流不再进一步被压抑。因此,CNP作用的可能途径是通过激活NPR-B使胞内cGMP增加,从而调制Glu电流。CNP的这种作用不仅能调制GABA能AC的反应特性,也有助于这些细胞对抗Glu可能引起的兴奋性毒性。

关键词： C型钠尿肽谷氨酸受体视网膜无长突细胞

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神经营养素受体p75^(NTR)介导的信号转导

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第2期21卷 258-260页

作者：魏传银王丽梅陈雪红路长林耿美玉中国海洋大学海洋药物与食品研究所山东淄博市第一医院骨外科山东淄博255200 青岛大学医学院病理生理学教研室第二军医大学神经生物学教研室

神经营养素(neurotrophin, NT)受体具有低亲和力的Mr为75 000 NT受体(75 KD NT receptor, p75NTR)和高亲和力的原肌球蛋白受体激酶(tropomyosin receptor kinase, Trk)受体家族两类.二者均为跨膜蛋白受体, 参与调节以神经元为主的某些... 详细信息

神经营养素(neurotrophin, NT)受体具有低亲和力的Mr为75 000 NT受体(75 KD NT receptor, p75NTR)和高亲和力的原肌球蛋白受体激酶(tropomyosin receptor kinase, Trk)受体家族两类.二者均为跨膜蛋白受体, 参与调节以神经元为主的某些细胞的生长、分化、存活、修复以及凋亡等多种生物学效应.研究表明, 二者间的信号转导及生物学效应既相互协同又彼此拮抗, 既紧密联系又有显著区别.Trk受体一般介导"正性"信号, 如促进神经元生长、维持其存活; 而p75NTR则具有多种生物学效应, 除可促进神经元存活、生长外, 还可诱导神经元凋亡、抑制神经元轴突生长以及参与细胞周期的调节, 即可介导"正性"和"负性"两种效应, 但以介导"负性"促凋亡效应为主, 这与p75NTR所在细胞的类型、生理与功能状态、发育阶段以及局部环境有关.……

关键词：神经营养素 p75^NTR 信号转导

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大鼠GDNF基因的克隆表达及对PC12工程细胞的影响

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基础医学与临床 2003年第3期23卷 263-268页

作者：王丽梅魏传垠陈雪红张磬陈哲宇丁达夫路长林第二军医大学神经生物学教研室上海200433 山东淄博卫生学校外科教研室淄博255200 青岛大学医学院病理生理学教研室青岛266021 中国科学院生物化学与细胞研究所蛋白质组学重点实验室上海200031

克隆与表达大鼠胶质细胞源性神经营养因子 (glialcellline derivedneurotrophicfactor,GDNF)并观察其对PC12工程细胞的影响。从新生 4天的SD大鼠海马组织中提取总RNA ,通过RT PCR方法 ,扩增出GDNFcDNA。构建表达质粒pET GDNF ,转化大肠... 详细信息

克隆与表达大鼠胶质细胞源性神经营养因子 (glialcellline derivedneurotrophicfactor,GDNF)并观察其对PC12工程细胞的影响。从新生 4天的SD大鼠海马组织中提取总RNA ,通过RT PCR方法 ,扩增出GDNFcDNA。构建表达质粒pET GDNF ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,IPTG诱导GDNF表达并在Ni2 + NTA柱上用一步复性法纯化和复性。把PCDNA3 0 GFRα1和pcDNA3 0 RET质粒双转染入PC12细胞 ,G4 18筛选稳定克隆 ,构建PC12工程细胞。用GDNF刺激工程细胞 ,3天后观察其存活和分化。大鼠GDNFcDNA的克隆与表达获得成功 ,纯化和复性的重组GDNF蛋白可显著增强PC12 GFRα1 RET工程细胞的存活和分化。初步明确GDNF诱导PC12工程细胞存活和分化是通过RET 依赖途径。

关键词：大鼠 GDNF基因胶质细胞源神经营养因子 PC12工程细胞影响基因表达反转录—聚合酶链反应

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