检索结果-内蒙古大学图书馆

中南医学科学杂志 2019年第2期47卷 113-119页

作者：刘冰彭莉黎丽梁瑜胡丽肖建华南华大学衡阳医学院病原生物学研究所湖南省特殊病原体防控重点实验室湖南省分子靶标新药研究协同创新中心湖南衡阳421001

本文探讨TLRs信号途径是否为日本血吸虫抗原分子的模式识别受体,参与血吸虫病肝虫卵肉芽肿的炎症病变。采用日本血吸虫抗原分子刺激小鼠腹腔巨噬细胞,ELISA及Western blot分别检测细胞因子和NF-κB的变化状况。构建日本血吸虫病肝虫卵... 详细信息

本文探讨TLRs信号途径是否为日本血吸虫抗原分子的模式识别受体,参与血吸虫病肝虫卵肉芽肿的炎症病变。采用日本血吸虫抗原分子刺激小鼠腹腔巨噬细胞,ELISA及Western blot分别检测细胞因子和NF-κB的变化状况。构建日本血吸虫病肝虫卵肉芽肿的小鼠模型,小鼠肝组织中TLR2、TLR4蛋白及mRNA的变化情况分别使用FCM和Real-time PCR检测。经抗原分子刺激后巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α和IL-6显著增高,与PBS组比较差异显著(P<0. 01)。IκB蛋白表达水平在刺激30 min后显著降低。Balb/c小鼠感染日本血吸虫后TLR2、TLR4蛋白及其mRNA含量以及IL-1β、TNF-α、IL-6、ALT与AST含量均显著性升高,与未感染组比较变化显著(P<0. 05)。表明TLRs信号途径可能是日本血吸虫抗原分子的模式识别受体,并被其激活;而且TLRs信号途径在血吸虫病肝虫卵肉芽肿的形成中发挥重要作用。

关键词： TLRs途径日本血吸虫病肝虫卵肉芽肿

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梅毒螺旋体硫氧还蛋白的原核表达、纯化及抗氧化活性分析

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基因组学与应用生物学 2018年第1期37卷 280-285页

作者：李冉辉杨杰陈飞胡楚晖赵飞骏南华大学病原生物学研究所特殊病原体放空湖南省重点实验室衡阳421001 湖南省分子靶标新药研究协同创新中心衡阳421001 南华大学医学院卓越医师班衡阳421001

本研究利用生物信息学方法预测梅毒螺旋体（Treponema pallidum,Tp）Trx蛋白的生物学性质。Trx蛋白无信号肽,定位在细胞质。二级结构无规卷曲占41.9%,β片层为55%,使用枯草芽胞杆菌Trx蛋白结构（PDB：2gzz.1.A）进行同源建模,获得Trx蛋... 详细信息

本研究利用生物信息学方法预测梅毒螺旋体（Treponema pallidum,Tp）Trx蛋白的生物学性质。Trx蛋白无信号肽,定位在细胞质。二级结构无规卷曲占41.9%,β片层为55%,使用枯草芽胞杆菌Trx蛋白结构（PDB：2gzz.1.A）进行同源建模,获得Trx蛋白三级结构。根据TpTrx基因序列设计引物,以TpDNA为模板,PCR扩增得到大小为318 bp的Trx基因,然后将其连接到pET30a构建重组质粒pET30-Trx,将该重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）,得到重组菌大肠杆菌。利用IPTG诱导目的蛋白表达,该质粒编码的重组Trx蛋白分子量约为16 kDa。使用Ni^（2＋）亲和层析纯化获得重组Trx蛋白,发现Trx蛋白具有二硫键还原酶活性。利用菌落计数法观察重组大肠杆菌在H_2O_2胁迫下的存活率,发现能表达Trx蛋白的大肠杆菌存活率高于对照。本研究利用生物信息学方法分析了TpTrx蛋白的性质,并发现它具有抗氧化功能,本研究为解析Tp的抗氧化机制提供实验依据。

关键词：梅毒螺旋体生物信息学硫氧还蛋白基因克隆

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结核病阳性血清特异结合蛋白的筛选与鉴定

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生物技术 2019年第3期29卷 240-244页

作者：易小妹王丽罗丹王忠刚李玲玲廖雅婷曾焱华南华大学衡阳医学院病原生物学研究所特殊病原体防控湖南省重点实验室湖南省分子靶标新药研究协同创新中心湖南衡阳421001 南华大学附属第一医院生殖医学中心湖南衡阳421001 南华大学附属公共卫生医院检验科湖南衡阳421000

[目的]从T7噬菌体展示的结核分枝杆菌基因组DNA文库中筛选结核病阳性血清特异结合蛋白。[方法]以饱和硫酸铵法初步纯化的结核病阳性血清为靶分子,对结核分枝杆菌基因组DNA文库进行3轮生物淘选;PCR扩增阳性噬菌体的外源DNA片段,测序后进... 详细信息

[目的]从T7噬菌体展示的结核分枝杆菌基因组DNA文库中筛选结核病阳性血清特异结合蛋白。[方法]以饱和硫酸铵法初步纯化的结核病阳性血清为靶分子,对结核分枝杆菌基因组DNA文库进行3轮生物淘选;PCR扩增阳性噬菌体的外源DNA片段,测序后进行BLAST分析;间接ELISA和斑点免疫印迹试验检测阳性噬菌体与结核病阳性血清能否特异结合。[结果]经过3轮生物淘选,与结核病阳性血清特异结合的噬菌体得到明显富集;BLAST结果表明随机挑取的19个阳性噬菌体包括4种不同的序列,其中编码核糖激酶的序列出现次数最多;这些代表性噬菌体均能与结核病阳性血清特异结合。[结论]成功筛选到能与结核病阳性血清特异结合的4种蛋白,其中核糖激酶可能为与结核病阳性血清特异结合的优势抗原。

关键词： T7噬菌体结核分枝杆菌基因组DNA文库优势抗原

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结核分枝杆菌RD区蛋白研究进展

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中国人兽共患病学报 2018年第4期34卷 362-371页

作者：李文彬万康林南华大学医学院病原生物学研究所/特殊病原体防控湖南省重点实验室/湖南省分子靶标新药研究协同创新中心衡阳421001 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所/传染病预防控制国家重点实验室/传染病诊治协同创新中心北京102206

由病原菌结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)引发的结核病是一种严重危害人类健康的传染病。根据世界卫生组织的《全球结核病报告2017》年报指出:2016年新增结核病感染者1 040万例,其中死亡人数达到167万例,死于HIV共感染的... 详细信息

由病原菌结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)引发的结核病是一种严重危害人类健康的传染病。根据世界卫生组织的《全球结核病报告2017》年报指出:2016年新增结核病感染者1 040万例,其中死亡人数达到167万例,死于HIV共感染的人数37万。随着多耐药性菌株和HIV共感染等出现,使得结核病的预防和治疗形式愈加严峻,积极研发新型结核疫苗十分必要。结核分枝杆菌RD区编码蛋白在结核病新型疫苗研发及新型诊断方法建立中具有重要的潜在意义及应用价值。本文主要介绍结核分枝杆菌基因组RD区及其编码蛋白的研究进展。

关键词：结核分枝杆菌 RD区蛋白诊断

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肺炎支原体致炎的分子机制研究进展

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免疫学杂志 2017年第7期33卷 639-644页

作者：罗浩荡游晓星吴移谋南华大学医学院病原生物学研究所特殊病原体防控湖南省重点实验室湖南省分子靶标新药研究协同创新中心衡阳421001

肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)是引起社区获得性肺炎的主要致病菌,以儿童多见,也可见于婴儿和老年患者。迄今为止Mp的致病性与致病机制尚不完全清楚。研究表明Mp感染后的炎症反应是支原体肺炎发生的主要机制,其致病机制主要包括... 详细信息

肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)是引起社区获得性肺炎的主要致病菌,以儿童多见,也可见于婴儿和老年患者。迄今为止Mp的致病性与致病机制尚不完全清楚。研究表明Mp感染后的炎症反应是支原体肺炎发生的主要机制,其致病机制主要包括3个方面:(1)Mp膜脂蛋白经机体TLR2识别后激活固有免疫系统,通过一系列信号转导途径诱导单核、巨噬细胞以及自然杀伤细胞等产生相应的促炎细胞因子和炎症介质;(2)Mp黏附至宿主细胞后可通过与TLR4相互作用诱导巨噬细胞自噬,最终诱导促炎细胞因子分泌;(3)Mp CARDS毒素可激活炎症小体,促进IL-1β分泌。因此,明确Mp的致病机制有助于现代治疗和预防性药物靶点的开发提供新的思路。

关键词：肺炎支原体脂蛋白细胞黏附

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穿透支原体铁蛋白的原核表达、纯化及生物信息学分析

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生物技术 2018年第4期28卷 350-354页

作者：何玲雷蕾李冉辉曾焱华南华大学病原生物学研究所特殊病原体防控湖南省重点实验室湖南省分子靶标新药研究协同创新中心湖南衡阳421001 邵阳学院医学检验学院湖南邵阳422000 中国人民解放军第一医院呼吸内科甘肃兰州730000

[目的]表达纯化穿透支原体(Mycoplasma penetrans)铁蛋白(Ferritin)并利用生物信息学方法分析该蛋白的生物学特性。[方法]从NCBI网站上查到Mpe Ferritin的DNA和蛋白序列,并合成Ferritin基因,设计PCR引物,以合成基因为模板扩增Ferritin片... 详细信息

[目的]表达纯化穿透支原体(Mycoplasma penetrans)铁蛋白(Ferritin)并利用生物信息学方法分析该蛋白的生物学特性。[方法]从NCBI网站上查到Mpe Ferritin的DNA和蛋白序列,并合成Ferritin基因,设计PCR引物,以合成基因为模板扩增Ferritin片段,将其与pET15b载体连接,将连接产物转化到大肠杆菌Top10感受态细胞。挑取阳性菌落,利用PCR和测序验证,提取质粒pET15b-Ferritin并将其转化到大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导目的蛋白表达,并使用Ni2+亲和法纯化Ferritin蛋白。然后用生物信息学方法分析Ferritin蛋白的生物学特性。[结果]Mpe Ferritin基因全长为540 bp,编码180个氨基酸。成功构建重组质粒pET15b-Ferritin,表达并纯化得到Ferritin蛋白。Ferritin蛋白定位于细胞质,无信号肽。它的α-螺旋占71.5%,β-转角占6.7%,延伸链占5.0%,无规卷曲占16.8%。由24个同源Ferritin蛋白分子组成24聚体。[结论]通过基因工程方法纯化得到Ferritin蛋白并分析了Ferritin的生物学性质。

关键词：穿透支原体 Ferritin蛋白基因克隆蛋白表达与纯化生物信息学

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环二鸟苷酸调控细菌生物膜形成的研究进展

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中南医学科学杂志 2017年第3期45卷 318-320页

作者：胡继宏朱翠明南华大学医学院病原生物学研究所特殊病原体防控湖南省重点实验室湖南衡阳421001 湖南省分子靶标新药研究协同创新中心

生物膜(BF)是细菌附着到接触物表面形成的多细胞群体,生物膜的形成不仅有利于细菌的生存,同时也增强了感染性。环二鸟苷酸(C-di-GMP)是群体感应系统中的一种重要的胞内信号分子。包含GGDEF结构域的鸟苷酸环化酶(DGCs)可将两分子的GTP合... 详细信息

生物膜(BF)是细菌附着到接触物表面形成的多细胞群体,生物膜的形成不仅有利于细菌的生存,同时也增强了感染性。环二鸟苷酸(C-di-GMP)是群体感应系统中的一种重要的胞内信号分子。包含GGDEF结构域的鸟苷酸环化酶(DGCs)可将两分子的GTP合成C-di-GMP,并在含有EAL和HD-GYP结构域的磷酸二酯酶(PDEs)作用下水解。C-di-GMP的水平在这两种酶调节下发生改变,通过影响下游受体调控细菌的毒性、运动性、纤维素合成、黏附性、生物膜形成等多种功能。本文就细菌生物膜形成和C-di-GMP的调节作用的研究进展做一综述。

关键词：生物膜环二鸟苷酸细菌感染

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鹦鹉热衣原体T3SS假定蛋白CPSIT 0959的鉴定及功能初步研究

鹦鹉热衣原体T3SS假定蛋白CPSIT 0959的鉴定及功能初步研究

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2017年第二届全国特殊病原体学术会议

作者：文雅婷徐嫚谈园旷星星吴移谋南华大学医学院病原生物学研究所湖南省分子靶标新药研究协同创新中心湖南省特殊病原体重点实验室衡阳421001

目的对鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci,Cps)中预测的T3SS蛋白CPSIT_0959进行鉴定并初步探究其功能特性,为进一步探索Cps感染晚期抗凋亡机制和药物靶点提供新思路.方法 MEGA 5.0绘制CPSIT 0959进化树,分光光度计检测其半胱氨酸脱硫酶... 详细信息

目的对鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci,Cps)中预测的T3SS蛋白CPSIT_0959进行鉴定并初步探究其功能特性,为进一步探索Cps感染晚期抗凋亡机制和药物靶点提供新思路.方法 MEGA 5.0绘制CPSIT 0959进化树,分光光度计检测其半胱氨酸脱硫酶活性,磷酸吡哆醛(5'-pyridoxal phosphate,PLP)抑制剂硼氢化钠(sodium borohydride,NaBH4)和D-环丝氨酸(D-4-amino-3isoxazolidone,DCS)验证其PLP依赖性,圆二色谱(Circular dichroism,CD)进行确证.

关键词：鹦鹉热衣原体 T3SS 半胱氨酸脱硫酶亚细胞定位

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梅毒螺旋体外膜蛋白Tp92诱导人单核细胞死亡的机制研究

梅毒螺旋体外膜蛋白Tp92诱导人单核细胞死亡的机制研究

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2017年第二届全国特殊病原体学术会议

作者：罗茜张晓红赵飞骏南华大学医学院病原生物学研究所湖南省分子靶标新药研究协同创新中心湖南省特殊病原体重点实验室衡阳421001

在梅毒感染初期，患者往往无明显的临床症状，说明梅毒螺旋体(Treponema pallidum)可能存在某些免疫逃逸的机制，能避免在刚侵入宿主就被固有免疫应答系统察觉和清除。本研究发现梅毒螺旋体可能存在一种不同于传统的菌体膜表面抗原的变... 详细信息

在梅毒感染初期，患者往往无明显的临床症状，说明梅毒螺旋体(Treponema pallidum)可能存在某些免疫逃逸的机制，能避免在刚侵入宿主就被固有免疫应答系统察觉和清除。本研究发现梅毒螺旋体可能存在一种不同于传统的菌体膜表面抗原的变异的新的免疫逃逸机制。为探索外膜蛋白Tp92对人单核细胞可能的影响，使用不同浓度的Tp92刺激THP-1细胞作用不同时间，观测THP-1细胞的生长情况和细胞因子的分泌水平，发现Tp92能引起THP-1大量死亡。

关键词：梅毒螺旋体外膜蛋白 Tp92 焦亡凋亡 CD14 TLR2

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梅毒螺旋体鞭毛蛋白经TLR5/MAPK/NF-kB通路诱导HaCaT细胞表达MMP-9和MMP-13

梅毒螺旋体鞭毛蛋白经TLR5/MAPK/NF-kB通路诱导HaCaT细胞表达MMP-...

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2017年第二届全国特殊病原体学术会议

作者：蒋传好徐嫚谢亚锋旷星星谭满意吴移谋南华大学医学院病原生物学研究所湖南省分子靶标新药研究协同创新中心湖南省特殊病原体重点实验室衡阳421001 中南大学湘雅二医院长沙410011 南华大学医学院病原生物学研究所湖南省分子靶标新药研究协同创新中心湖南省特殊病原体重点实验室衡阳421001

目的角质形成细胞是皮肤屏障中重要的免疫前哨细胞,参与皮肤免疫炎症反应。细菌鞭毛蛋白作为一种经典病原相关分子模式,在促进病原体侵袭和诱导宿主炎症反应中发挥重要作用。本研究旨在探讨梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)鞭毛蛋白... 详细信息

目的角质形成细胞是皮肤屏障中重要的免疫前哨细胞,参与皮肤免疫炎症反应。细菌鞭毛蛋白作为一种经典病原相关分子模式,在促进病原体侵袭和诱导宿主炎症反应中发挥重要作用。本研究旨在探讨梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)鞭毛蛋白能否诱导HaCaT细胞表达基质金属蛋白酶,进而降解细胞外基质,引起皮肤免疫炎症反应并促进Tp侵袭,为阐明Tp分子致病机制提供新思路和依据。方法构建鞭毛蛋白原核表达载体,Ni2+-NTA亲和纯化重组鞭毛蛋白。蛋白芯片检测鞭毛蛋白作用HaCaT细胞后MMPs的表达变化;RT-PCR检测MMP-9、MMP-13的mRNA表达水平,明胶酶谱实验和Western Blot检测MMP-9的活性和表达水平,ELISA法检测MMP-13的表达水平。

关键词：梅毒螺旋体鞭毛蛋白基质金属蛋白酶角质形成细胞信号转导

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