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微生物学报 2025年第2期65卷 629-643页

作者：尚爽婕陈卫国张晓奎朱健鹏白松陈晓婷武有聪大理大学基础医学院病原生物学综合实验室云南大理大理大学基础医学院医学微生物学及免疫学教研室云南大理

【目的】探究VraSR通过CidA-LrgAB系统调控表皮葡萄球菌的生物学功能。【方法】构建重组质粒pKOR1-ΔlrgAB,并将其转化至表皮葡萄球菌SE1457ΔvraSR突变株中。通过同源重组技术,在ΔvraSR突变株上进一步敲除lrgAB基因。利用PCR、RT-PCR... 详细信息

【目的】探究VraSR通过CidA-LrgAB系统调控表皮葡萄球菌的生物学功能。【方法】构建重组质粒pKOR1-ΔlrgAB,并将其转化至表皮葡萄球菌SE1457ΔvraSR突变株中。通过同源重组技术,在ΔvraSR突变株上进一步敲除lrgAB基因。利用PCR、RT-PCR和测序技术鉴定表皮葡萄球菌ΔvraSR-lrgAB疑似突变株,并检测其生长特性、药物敏感性、自溶能力以及生物被膜形成能力。【结果】成功构建了表皮葡萄球菌ΔvraSR-lrgAB突变株。与表皮葡萄球菌SE1457、ΔvraSR和ΔlrgAB菌株相比,ΔvraSR-lrgAB突变株生长迟缓,特别是在25℃和40℃下尤为明显(P<0.001)。该突变株的药物敏感性增强(P<0.01),自溶能力显著增强(P<0.001),生物被膜形成能力降低(P<0.01)。【结论】VraSR可能部分通过LrgAB调控表皮葡萄球菌的生长、药物敏感性、自溶能力和生物被膜的形成。

关键词： VraSR LrgAB 同源重组表皮葡萄球菌

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细胞与分子免疫学杂志 2025年第2期41卷 97-104页

作者：杜文雅代禹美乐林芝马涛吴利先大理大学基础医学院微生物学与免疫学教研室云南大理671000

目的miR-207被发现在自然杀伤(NK)细胞外泌体中表达,参与疾病进展,但暂无与结核病(TB)有关的研究。方法生物信息学方法预测并用双荧光素酶报告实验检测溶酶体关联膜蛋白2(LAMP2)是否与miR-207有靶向关系。使用脂质体转染法将实验分为四... 详细信息

目的miR-207被发现在自然杀伤(NK)细胞外泌体中表达,参与疾病进展,但暂无与结核病(TB)有关的研究。方法生物信息学方法预测并用双荧光素酶报告实验检测溶酶体关联膜蛋白2(LAMP2)是否与miR-207有靶向关系。使用脂质体转染法将实验分为四组(OP-LAMP2组:共转染miR-207 mimics和LAMP2过表达质粒;EP组:共转染mimics NC和空载质粒;siLAMP2组:转染siLAMP2;siLAMP2-NC组:转染siLAMP2-NC)。使用H37Ra感染Ana-1细胞建立结核感染模型。结核菌落形成单位计数评估LAMP2对胞内分枝杆菌负荷的影响以及对胞外残留分枝杆菌的清除作用。流式细胞术检测细胞总凋亡率。实时荧光定量PCR检测LAMP2、细胞凋亡基因、焦亡基因及自噬基因相对表达量。Western blot法检测LAMP2蛋白、细胞凋亡、焦亡、自噬蛋白的相对表达量。结果双荧光素酶报告实验检测显示miR-207与LAMP2存在靶向关系,实时荧光定量PCR、Western blot结果统计分析和显微镜下观察证明成功建立感染模型。菌落形成单位计数发现OP-LAMP2组的菌落数低于EP组,siLAMP2组高于siLAMP2-NC组。流式细胞术检测发现OP-LAMP2组总凋亡率低于EP组,siLAMP2组高于siLAMP2-NC组。实时荧光定量PCR及Western blot法检测发现对照组凋亡、焦亡相关蛋白和基因相对表达量趋势为OP-LAMP2低于EP组,siLAMP2组高于siLAMP2-NC组。实时荧光定量PCR检测自噬正调节基因微管相关蛋白1轻链3(LC3)和重组人自噬效应蛋白(Beclin1)在OP-LAMP2组相对表达量高于EP组,siLAMP2组低于siLAMP2-NC组,负调节自噬基因相对表达量与自噬正调节基因趋势相反。自噬相关蛋白相对表达量与自噬基因趋势一致。结论miR-207通过靶向自噬相关蛋白LAMP2促进巨噬细胞凋亡、细胞焦亡、抑制自噬,促进结核分枝杆菌(Mtb)的存活,为TB提供新的治疗方向。

关键词：结核分枝杆菌(Mtb) miR-207 LAMP2 自噬凋亡焦亡

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外泌体来源microRNA在微生物感染中的作用研究进展

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中国病原生物学杂志 2024年第6期19卷 729-732页

作者：杜文雅马枫茜代禹美陈瑞枫王国富吴利先大理大学基础医学院微生物学与免疫学教研室云南大理671000

外泌体包含母细胞来源的蛋白质、脂质和核酸等多种成分,其中核酸中的miRNA起到越来越重要的作用,miRNA通过靶向mRNA 3′端非翻译区结合导致mRNA降解或翻译抑制。许多疾病的发生都伴随着miRNA表达失调,这对宿主基因调控和某些分子机制产... 详细信息

外泌体包含母细胞来源的蛋白质、脂质和核酸等多种成分,其中核酸中的miRNA起到越来越重要的作用,miRNA通过靶向mRNA 3′端非翻译区结合导致mRNA降解或翻译抑制。许多疾病的发生都伴随着miRNA表达失调,这对宿主基因调控和某些分子机制产生影响。越来越多研究证明miRNA可以作为疾病的潜在生物标志物、治疗靶点,参与炎症反应的过程等。本文就外泌体中的miRNA在病毒,细菌等微生物导致的感染性疾病,如流感病毒、肝炎病毒、HIV、结核分枝杆菌、梅毒螺旋体和支原体中的作用进行综述。

关键词：外泌体 miRNA 微生物感染性疾病综述

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miR-207调控结核分枝杆菌在巨噬细胞内存活的机制研究

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中国比较医学杂志 2024年第12期34卷 41-49页

作者：杜文雅代禹美乐林芝马涛吴利先大理大学基础医学院微生物学与免疫学教研室云南大理671000

目的miR-207在许多疾病中存在差异性表达,探究miR-207过表达对调控结核分枝杆菌(H37Ra)在巨噬细胞内存活的机制研究,为结核病的靶向治疗提供理论基础。方法将实验分为4组:空白组(Ana-1细胞)、对照组(感染H37Ra的细胞)、mi组(感染H37Ra... 详细信息

目的miR-207在许多疾病中存在差异性表达,探究miR-207过表达对调控结核分枝杆菌(H37Ra)在巨噬细胞内存活的机制研究,为结核病的靶向治疗提供理论基础。方法将实验分为4组:空白组(Ana-1细胞)、对照组(感染H37Ra的细胞)、mi组(感染H37Ra并转染miRNA-207 mimics)和mi-NC组(感染H37Ra并转染mimics NC)。使用H37Ra感染Ana-1细胞建立结核感染模型,使用脂质体转染法将miRNA-207 mimics和mimics NC转入Ana-1细胞。结核菌落形成单位计数评估miR-207对胞内分枝杆菌负荷的影响以及对胞外残留分枝杆菌的清除作用。采用流式细胞术检测细胞总凋亡率。实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测miR-207、细胞凋亡基因、焦亡基因、炎症基因及自噬基因相对表达量。Western blot检测细胞凋亡蛋白、焦亡蛋白、自噬蛋白的相对表达量。采用荧光显微镜及多功能酶标仪检测细胞内ROS的荧光强度,以及检测细胞内LDH的含量。结果显微镜下观察成功建立感染模型,qPCR检测发现对照组miR-207表达量低于空白组(P<0.01),表明miR-207在空白组和对照组中差异性表达,mi组miR-207表达量显著高于mi-NC组(P<0.0001),表明成功建立转染模型。菌落形成单位计数发现mi组的菌落数高于mi-NC组和对照组(P<0.001)。流式细胞术检测发现mi组总凋亡高于mi-NC组和对照组(P<0.05)。qPCR及Western blot检测发现对照组凋亡基因和凋亡蛋白相对表达量高于空白组(P<0.05),mi组高于mi-NC组(P<0.05)。对照组炎症基因相对表达量高于空白组(P<0.001),mi组高于mi-NC组(P<0.05),对照组焦亡基因和焦亡蛋白相对表达量高于空白组(P<0.01),mi组高于mi-NC组(P<0.05)。自噬正调节基因LC3和Beclin1在对照组的相对表达量高于空白组(P<0.0001),mi组低于mi-NC组(P<0.05)。负调节自噬基因相对表达量与自噬正调节基因趋势相反。自噬相关蛋白相对表达量与自噬基因趋势一致。ROS荧光强度检测发现对照组的荧光强度高于空白组(P<0.05),mi组高于mi-NC组(P<0.001)。LDH检测发现对照组细胞内LDH含量高于空白组(P<0.01),mi组与mi-NC组含量无统计学意义(P>0.05)。结论miR-207过表达促进细胞凋亡、细胞焦亡及炎症、抑制自噬,有利于H37Ra的存活,为结核病的治疗提供新的方向。

关键词：结核分枝杆菌 H37Ra miR-207 自噬巨噬细胞凋亡焦亡

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结核分枝杆菌分泌蛋白早期分泌性抗原6(ESAT-6)的免疫学性质及其在新型疫苗中作用的研究进展

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第1期40卷 89-94页

作者：李玉洁余海燕杨雨婷杨国平大理大学基础医学院医学微生物学及免疫学教研室云南大理671000

早期分泌性抗原6(ESAT-6)是结核分枝杆菌(MTB)关键的毒力因子,可通过抑制巨噬细胞的吞噬杀菌功能与自噬反应抵抗机体对MTB的清除,从而减弱机体对MTB感染的免疫防御功能。此外,ESAT-6诱导的巨噬细胞的凋亡与固有免疫细胞的大量坏死可促进... 详细信息

早期分泌性抗原6(ESAT-6)是结核分枝杆菌(MTB)关键的毒力因子,可通过抑制巨噬细胞的吞噬杀菌功能与自噬反应抵抗机体对MTB的清除,从而减弱机体对MTB感染的免疫防御功能。此外,ESAT-6诱导的巨噬细胞的凋亡与固有免疫细胞的大量坏死可促进MTB的扩散、定植,引发MTB的全身感染。ESAT-6还可抑制Th1细胞的保护性免疫反应从而抑制相关促炎细胞因子的分泌,引发机体免疫功能的紊乱,加速MTB感染进程。在这一感染过程中,ESAT-6所具备的高度免疫原性使其可作为优势抗原用于新型结核病(TB)疫苗的研制,具有广阔的发展前景。

关键词：结核分枝杆菌(MTB) 早期分泌性抗原6(ESAT-6) 自噬凋亡优势抗原综述

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自然杀伤(NK)细胞应对结核分枝杆菌感染的研究进展

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第7期40卷 660-665页

作者：任芹杨国平大理大学基础医学院医学微生物学及免疫学教研室云南大理671000

结核病(TB)是由结核分枝杆菌(MTB)感染引起的严重威胁人类健康的慢性传染病。自然杀伤(NK)细胞作为先天免疫的重要组成部分,在应对MTB感染时,NK细胞可分化出不同亚群,表现出受体和功能的多样性;并通过分泌细胞因子,串联其他免疫细胞发挥... 详细信息

结核病(TB)是由结核分枝杆菌(MTB)感染引起的严重威胁人类健康的慢性传染病。自然杀伤(NK)细胞作为先天免疫的重要组成部分,在应对MTB感染时,NK细胞可分化出不同亚群,表现出受体和功能的多样性;并通过分泌细胞因子,串联其他免疫细胞发挥对MTB的抗感染作用,从而增强机体的抗MTB免疫应答反应。

关键词：自然杀伤(NK)细胞感染与免疫 NK细胞表型与受体抗结核免疫综述

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结核分枝杆菌细胞外囊泡的研究进展

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中国感染控制杂志 2024年第12期23卷 1591-1596页

作者：马枫茜邱章华杜文雅代禹美吴利先王国富大理大学基础医学院微生物学与免疫学教研室云南大理671000 昆明理工大学医学院云南昆明651000

结核病仍然是一个严重威胁全球公共卫生的问题,每年造成数百万人感染。结核分枝杆菌(MTB)是引起结核病的主要病原菌。近年来,MTB细胞外囊泡(MEVs)作为MTB分泌分枝杆菌抗原的重要载体已引起研究者关注。MEVs能够使MTB以集中保护的方式分... 详细信息

结核病仍然是一个严重威胁全球公共卫生的问题,每年造成数百万人感染。结核分枝杆菌(MTB)是引起结核病的主要病原菌。近年来,MTB细胞外囊泡(MEVs)作为MTB分泌分枝杆菌抗原的重要载体已引起研究者关注。MEVs能够使MTB以集中保护的方式分泌磷脂、核酸、脂多糖和周质成分,并与宿主相互作用。对MEVs部分内容物的研究已取得了一些进展,但对其在宿主感染MTB过程中的生物发生机制、功能以及对机体免疫应答作用的认识仍处于初级阶段。本文综述目前MEVs生物发生机制的进展,在宿主感染MTB过程中,以及在调节免疫应答中的作用,并讨论其在疫苗开发和诊断技术方面的应用。

关键词：结核分枝杆菌细胞外囊泡免疫调节

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结核分枝杆菌ESX-5分泌系统的研究进展

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医学研究与战创伤救治 2023年第11期36卷 1207-1211页

作者：余海燕(综述) 杨国平(审校) 大理大学基础医学院医学微生物学及免疫学教研室大理671000

ESX-5分泌系统是结核分枝杆菌(Mtb)的ESX分泌系统中最晚进化形成的,仅存于生长缓慢的致病性分枝杆菌中,是Mtb营养吸收和维持膜渗透性所需的基本分泌系统,也是Mtb与宿主相互作用的重要调节剂,并参与PE/PPE家族蛋白的运输与分泌、对维持Mt... 详细信息

ESX-5分泌系统是结核分枝杆菌(Mtb)的ESX分泌系统中最晚进化形成的,仅存于生长缓慢的致病性分枝杆菌中,是Mtb营养吸收和维持膜渗透性所需的基本分泌系统,也是Mtb与宿主相互作用的重要调节剂,并参与PE/PPE家族蛋白的运输与分泌、对维持Mtb细胞壁的完整性和毒力的发挥具有重要作用。文章对Mtb ESX-5分泌系统的组成与结构、分泌机制及作用进行综述,以期为进一步解析Mtb的ESX-5分泌系统,研发抗结核疫苗提供新的思路。

关键词：结核分枝杆菌 ESX-5分泌系统 ESX分泌系统

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表皮葡萄球菌vraSR-srrAB突变株的构建及生物学表型

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微生物学通报 2023年第8期50卷 3562-3574页

作者：陈晓婷乾莲陈卫国孙士正白宗凯赵纯静武有聪大理大学基础医学院病原生物学综合实验室云南大理671000 大理大学基础医学院医学微生物学及免疫学教研室云南大理671000

【背景】形成生物被膜是表皮葡萄球菌的主要致病方式,双组分系统(two-component regulatory system,TCS)VraSR和SrrAB与细菌的生长、生物被膜形成等多种生物学表型密切相关。敲除表皮葡萄球菌SE1457 vraSR后细胞壁变薄,生物被膜形成量降... 详细信息

【背景】形成生物被膜是表皮葡萄球菌的主要致病方式,双组分系统(two-component regulatory system,TCS)VraSR和SrrAB与细菌的生长、生物被膜形成等多种生物学表型密切相关。敲除表皮葡萄球菌SE1457 vraSR后细胞壁变薄,生物被膜形成量降低,而敲除srrAB后生长进入稳定期的时间延长,生物被膜形成量也降低,且TCS-VraSR和SrrAB均通过ica途径调控表皮葡萄球菌生物被膜的形成。ica操作子是表皮葡萄球菌生物被膜形成的重要调节元件,由icaADBC这4个开放阅读框(openreadingframe,ORF)和1个转录方向相反的icaR组成,IcaR是icaADBC的抑制子。【目的】探索TCS-VraSR和SrrAB协同调控表皮葡萄球菌生长及生物被膜形成中的作用,为防控表皮葡萄球菌引起的持续性感染奠定基础。【方法】构建pKOR1-ΔvraSR重组质粒,经大肠杆菌DC10B修饰后转入ΔsrrAB,通过同源重组在ΔsrrAB突变株的基础上进一步敲除vraSR基因,疑似ΔvraSR-srrAB突变株经PCR、RT-PCR和测序验证。检测ΔvraSR-srrAB突变株的生长、生物被膜形成及药物敏感性。【结果】成功构建表皮葡萄球菌ΔvraSR-srrAB突变株。与表皮葡萄球菌SE1457野生株、ΔvraSR和ΔsrrAB突变株相比,ΔvraSR-srrAB突变株生长更为迟缓,药物敏感性增强,几乎不能形成生物被膜;RT-qPCR显示,ΔvraSR和ΔsrrAB突变株中icaA转录水平较SE1457下调约13%-17%,icaR转录水平上调约5-9倍,而ΔvraSR-srrAB突变株中icaA转录水平较SE1457下调约6%,icaR转录水平上调约14倍。【结论】VraSR-SrrAB可能通过ica途径协同调控表皮葡萄球菌生物被膜形成,对压力应激胁迫作用还需进一步研究。

关键词： VraSR SrrAB 双组分信号转导系统生物被膜表皮葡萄球菌

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miR-146a在黏膜免疫中的调控作用

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中国感染控制杂志 2022年第3期21卷 297-304页

作者：李艳丽申元英郭乐大理大学基础医学院医学微生物学与免疫学教研室云南大理671000

黏膜免疫是机体整个免疫网络的重要组成部分,又是具有独特结构和功能的独特免疫体系,其在抵抗感染方面起着极其重要的作用,是机体抵抗感染的第一道免疫屏障。近年来,越来越多的研究显示,微小RNA(miRNAs)具有强大的免疫调控功能,其中miR-... 详细信息

黏膜免疫是机体整个免疫网络的重要组成部分,又是具有独特结构和功能的独特免疫体系,其在抵抗感染方面起着极其重要的作用,是机体抵抗感染的第一道免疫屏障。近年来,越来越多的研究显示,微小RNA(miRNAs)具有强大的免疫调控功能,其中miR-146a作为协调免疫反应和炎症信号最重要的miRNAs之一,在包括免疫反应在内的多种生物过程和途径中发挥关键作用。本文综述了miR-146a与黏膜免疫的相关研究进展。

关键词： MicroRNAs miR-146a 黏膜免疫炎症

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