检索结果-内蒙古大学图书馆

结核分枝杆菌c-di-AMP磷酸二酯酶重组腺病毒的构建及其诱导的体液免疫应答

中国人兽共患病学报 2025年第4期41卷 364-369页

作者：胡家豪宁唤唤董梦娟路延之代婷张从玥徐子晴王姝予周正言柏银兰空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室西安710032 空军军医大学基础医学院学员队西安710032 空军军医大学军事医学创新中心西安710032 宁夏医科大学基础医学院生理学和神经生物学系银川750001 延安大学生命科学学院延安716000

目的构建表达结核分枝杆菌(***)c-di-AMP磷酸二酯酶CnpB的重组腺病毒(rAd)并检测其诱导的体液免疫应答。方法经密码子优化的*** CnpB编码基因克隆入质粒pcADV,获得的重组质粒pcADV-CnpB转染HEK293T细胞,并用Western blot鉴定表达。重组p... 详细信息

目的构建表达结核分枝杆菌(***)c-di-AMP磷酸二酯酶CnpB的重组腺病毒(rAd)并检测其诱导的体液免疫应答。方法经密码子优化的*** CnpB编码基因克隆入质粒pcADV,获得的重组质粒pcADV-CnpB转染HEK293T细胞,并用Western blot鉴定表达。重组pcADV-CnpB与骨架质粒共转染HEK293T细胞包装获得重组腺病毒rAd-CnpB,以HEK293T细胞扩增rAd-CnpB,Western blot和免疫荧光检测rAd-CnpB表达目的蛋白。以rAd-CnpB滴鼻免疫小鼠,收集小鼠血清与肺泡灌洗液(BALF),ELISA检测抗原特异性抗体水平。结果酶切和测序鉴定表明重组质粒pcADV-CnpB构建成功,该质粒能够在真核细胞中表达。在HEK293T细胞内包装并获得rAd-CnpB,大量扩增并纯化获得滴度为5.53×10^(10) PFU/mL的rAd-CnpB。rAd-CnpB可在HEK293T细胞中表达目的蛋白CnpB。rAd-CnpB滴鼻免疫小鼠,可诱导BALF中CnpB特异性IgG与分泌型IgA水平的增加,同时诱导血清中产生高水平的CnpB特异性IgG。结论成功构建表达*** c-di-AMP磷酸二酯酶CnpB的重组腺病毒rAd-CnpB,并且rAd-CnpB经黏膜免疫可诱导抗原特异性体液免疫与黏膜免疫应答,可用于结核病新疫苗的研究。

关键词：结核分枝杆菌重组腺病毒 c-di-AMP 磷酸二酯酶黏膜免疫

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改革课程设计及教学方法以提升学生综合能力的实践与思考:以“厌氧芽胞梭菌”教学为例

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微生物学通报 2022年第4期49卷 1483-1490页

作者：黎志东空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室陕西西安710032

“医学微生物学”教学过程中,通过教材与教辅用书的合理选择和使用、理论课与实验课的优化配置提高学生对基本知识和技能的理解掌握能力。通过教学方法改革,运用类比比较法、归纳总结法、案例分析法提高学生分析思辨、融会贯通及学以致... 详细信息

“医学微生物学”教学过程中,通过教材与教辅用书的合理选择和使用、理论课与实验课的优化配置提高学生对基本知识和技能的理解掌握能力。通过教学方法改革,运用类比比较法、归纳总结法、案例分析法提高学生分析思辨、融会贯通及学以致用的能力,并引导学生通过自主学习法逐渐树立生物安全意识。本文以“厌氧芽胞梭菌”的教学为例进行阐述。

关键词：课程设计教学教法能力提升厌氧芽胞梭菌

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胆管梗阻合并华支睾吸虫感染患者临床特征分析

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中国血吸虫病防治杂志 2022年第3期34卷 311-314页

作者：方文娟李响姜旭段珊珊丁健左丽娇张雪丽张晓丽韩甦上海健康医学院微生物与免疫教研室上海201318 哈尔滨医科大学基础医学院寄生虫学教研室黑龙江哈尔滨150081

目的分析胆管梗阻合并华支睾吸虫感染患者临床特征,为该病临床诊疗提供参考。方法收集2012年10月—2019年9月在哈尔滨医科大学附属第二医院就诊的45例胆管梗阻合并华支睾吸虫感染患者,并随机选取同期就诊的45例单纯胆管梗阻患者作为对... 详细信息

目的分析胆管梗阻合并华支睾吸虫感染患者临床特征,为该病临床诊疗提供参考。方法收集2012年10月—2019年9月在哈尔滨医科大学附属第二医院就诊的45例胆管梗阻合并华支睾吸虫感染患者,并随机选取同期就诊的45例单纯胆管梗阻患者作为对照。采用单因素分析华支睾吸虫感染相关流行病学特征、临床表现、实验室检查结果及影像学表现,并将有统计学意义的单因素作为自变量进行多因素logistic回归分析。结果与单纯胆管梗阻患者相比,胆管梗阻合并华支睾吸虫感染患者中男性占比更高(91.11%vs.46.67%;χ^(2)=20.737,P<0.01)、农村病例占比更高(62.22%vs.22.22%;χ^(2)=14.757,P<0.01),主要临床症状为黄疸(45例,占100%)和腹痛(40例,占88.89%)。多因素logistic回归分析显示,男性[比值比(OR)=10.717,95%可信区间(CI):(2.571,44.662)]和有饮酒史[OR=4.474,95%CI:(1.019,19.642)]是胆管梗阻合并华支睾吸虫感染危险因素;居住地为城市[OR=0.128,95%CI:(0.038,0.435)]为保护因素。实验室检查发现,胆管梗阻合并华支睾吸虫感染患者较单纯胆管梗阻患者总胆红素和直接胆红素水平降低,而间接胆红素水平升高,差异均有统计学意义(Z=-2.566、-3.454和-3.821,P均<0.05)。影像学检查发现,胆管梗阻合并华支睾吸虫感染患者胆管管壁增厚、肝内胆管扩张。结论胆管梗阻合并华支睾吸虫感染患者临床表现具有特征性,在临床工作中可结合患者流行病学特征、临床症状、实验室及影像学检查结果等进行综合鉴别诊断。

关键词：华支睾吸虫胆管梗阻合并感染临床特征

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WalK(S221P)突变促进金黄色葡萄球菌荚膜产生的作用研究

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陆军军医大学学报 2023年第23期45卷 2460-2466页

作者：郭祖文饶一凡彭华刚饶贤才陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院微生物学教研室重庆400038 重庆大学生物工程学院重庆400030

目的探究WalK(S221P)突变促进金葡菌荚膜产生的作用及可能机制。方法采用转录组测序(RNA-seq)分析WalK(S221P)突变对金葡菌基因表达的影响,采用RT-qPCR检测荚膜合成基因的表达变化。利用荚膜染色和透射电镜观察确认WalK(S221P)突变促进... 详细信息

目的探究WalK(S221P)突变促进金葡菌荚膜产生的作用及可能机制。方法采用转录组测序(RNA-seq)分析WalK(S221P)突变对金葡菌基因表达的影响,采用RT-qPCR检测荚膜合成基因的表达变化。利用荚膜染色和透射电镜观察确认WalK(S221P)突变促进金葡菌荚膜产生的作用,再用RT-qPCR筛选参与介导WalK(S221P)促进荚膜合成的调控分子,通过结合位点分析和凝胶迁移阻滞实验(EMSA)证实WalKR对目标分子的调控作用。结果RNA-seq分析显示WalK(S221P)突变对196个金葡菌基因的表达水平影响显著,其中16个荚膜合成操纵子基因在XN108中的表达均显著上调。RT-qPCR检测显示荚膜合成相关capA,capH和capK在含有WalK(S221P)突变的XN108及K-Newman菌株中分别较回复株XN108-R和野生型Newman菌株显著上调。荚膜染色和透射电镜观察显示XN108的荚膜合成相比于回复株XN108-R明显增多,增厚。RT-qPCR筛选提示WalK(S221P)促进金葡菌荚膜合成可能是通过上调MgrA表达水平实现的,结合位点检索分析及EMSA实验证实WalK激活的WalR具有直接结合mgrA基因调控区的功能。结论金葡菌WalK(S221P)突变具有促进金葡菌荚膜产生的作用,该作用的发挥可能通过上调MgrA的表达而实现。

关键词：金黄色葡萄球菌荚膜二元调控系统WalKR WalK(S221P) MgrA

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鸟分枝杆菌MAV_2043基因编码蛋白的生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2022年第8期17卷 907-911页

作者：陈瑞枫马枫茜李祥芳丁寿鹏高婧华吴利先大理大学基础医学院微生物学与免疫学教研室云南大理671000

目的预测鸟分枝杆菌MAV_2043基因编码蛋白的结构和功能。方法利用UniproKB数据库、PredictProtein服务、SWISS-MODEL服务、ProtParam蛋白分析工具、Protcale、TMHMM-2.0服务和SignalP-5.0服务、ProtCompB方法和IEDB数据库等生物信息学预测软件对MAV_2043编码蛋白的二级和三级结构、理化性质、疏水性分析、信号肽、跨膜区、亚细胞定位及免疫表位进行分析预测;运用UniprotKB数据库的Blast工具对氨基酸序列进行比对,采用MEGA11软件构建进化树,进行系统进化分析。结果MAV_2043基因全长618 bp,共编码205个氨基酸。MAV_2043基因编码蛋白与鸟分枝杆菌亚种起源相同,该蛋白与结核分枝杆菌的[Cu-Zn]超氧化物歧化酶同源性较高。该蛋白为稳定的亲水性蛋白,无跨膜区、有信号肽;预测该蛋白亚细胞定位在细胞膜上,二级结构以β折叠为主;三级结构模型显示该蛋白可形成同源二聚体,有两个Cu~+配体的结合空间位置。结论生物信息学预测鸟分枝杆菌MAV_2043基因编码蛋白可能为[Cu-Zn]超氧化物歧化酶,是鸟分枝杆菌中的重要毒力因子,可为鸟分枝杆菌靶向治疗提供新思路。

关键词：鸟分枝杆菌 MAV_2043 [Cu-Zn]超氧化物歧化酶生物信息学

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巨噬细胞来源外泌体抗肿瘤作用的研究进展

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中国生物制品学杂志 2025年第4期38卷 496-501,507页

作者：杜文雅代禹美(综述) 吴利先(审校) 大理大学基础医学院微生物学与免疫学教研室云南大理671000

肿瘤是一种高度异质性的疾病,肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophage,TAM)是肿瘤微环境中重要的免疫细胞,具有高度异质性及可塑性,肿瘤复发转移是导致癌症患者发病和死亡的重要原因。巨噬细胞来源的外泌体(macrophage-derived e... 详细信息

肿瘤是一种高度异质性的疾病,肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophage,TAM)是肿瘤微环境中重要的免疫细胞,具有高度异质性及可塑性,肿瘤复发转移是导致癌症患者发病和死亡的重要原因。巨噬细胞来源的外泌体(macrophage-derived exosome,MDE)作为细胞间信号传递的信使,携带有母细胞的多种成分。大量研究表明,巨噬细胞的极化状态对肿瘤的进展转归发挥着调控作用,MDE与肿瘤的进展和巨噬细胞极化密切相关。MDE作为一种新的抗肿瘤策略,为肿瘤治疗提供了新的思路。本文对近年来工程化MDE在抗肿瘤方面的研究,以及M1和M2 MDE如何介导肿瘤的发生发展作一综述,以期为肿瘤治疗提供参考。

关键词：肿瘤巨噬细胞外泌体微小RNA

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结核分枝杆菌Rv3203蛋白的生物信息学及免疫信息学分析

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医学信息 2024年第21期37卷 23-29页

作者：余海燕任芹孟余李光华杨国平大理大学基础医学院医学微生物学及免疫学教研室

目的运用生物信息学及免疫信息学方法分析结核分枝杆菌（Mtb）Rv3203蛋白的结构特征，为研究Rv3203蛋白在Mtb感染中的功能提供基础。方法利用信息学软件分别预测Rv3203蛋白的理化性质、溶解度、跨膜区、信号肽、亚细胞定位、糖基化位... 详细信息

目的运用生物信息学及免疫信息学方法分析结核分枝杆菌（Mtb）Rv3203蛋白的结构特征，为研究Rv3203蛋白在Mtb感染中的功能提供基础。方法利用信息学软件分别预测Rv3203蛋白的理化性质、溶解度、跨膜区、信号肽、亚细胞定位、糖基化位点、磷酸化位点、相互作用蛋白、免疫原性、抗原性、毒性、致敏性，以及T、B细胞抗原表位和二级结构，并对蛋白的三级结构进行建模，最后对Rv3203蛋白进行密码子优化、计算机克隆和构建进化树。结果 Rv3203蛋白由224个氨基酸组成，理论等电点为4.68，为结构稳定的弱疏水性蛋白；无跨膜区和信号肽，定位于细胞质，具有1个糖基化位点和11个磷酸化位点；与lipD、lipE、lipP、lipZ、amiB2、amiC、bpoC、Rv0183、Rv1367c和Rv3204发生相互作用，参与Mtb的多种生物学过程；免疫原性为3.4211，抗原性为0.6533，无毒性，无致敏性；含5个CTL表位、1个Th表位和4个B细胞表位；二级结构和三级模型含大量的α-螺旋和无规则卷曲；经密码子优化后可在大肠杆菌中克隆并高效表达；此外，Mtb的Rv3203蛋白还与Mycobacterium canettii CIPT 140010059具有高度同源性。结论 Rv3203蛋白是一个结构稳定且具有热稳定性的酸性蛋白，具有免疫原性和抗原性，无毒性和致敏性，含多个T/B细胞表位，可在体外克隆并高效表达，参与Mtb的多种生物学过程及调控宿主的免疫应答反应。

关键词：结核分枝杆菌 Rv3203 生物信息学免疫信息学

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刚地弓形虫致密颗粒蛋白24多克隆抗体的制备与初步应用

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中国血吸虫病防治杂志 2024年第3期36卷 279-285页

作者：付胜男杨云王聪罗庆礼余莉安徽医科大学基础医学院微生物学教研室、动物源性传染病安徽省重点实验室、人畜共患病安徽高校省级重点实验室安徽合肥230032

目的制备并鉴定鼠抗刚地弓形虫致密颗粒蛋白24(dense granule protein 24,GRA24)多克隆抗体,并探索其初步应用。方法利用MEGA-X软件比对弓形虫不同虫株GRA24编码区序列,使用Protean软件分析GRA24蛋白优势肽段,通过PCR反应扩增编码该肽... 详细信息

目的制备并鉴定鼠抗刚地弓形虫致密颗粒蛋白24(dense granule protein 24,GRA24)多克隆抗体,并探索其初步应用。方法利用MEGA-X软件比对弓形虫不同虫株GRA24编码区序列,使用Protean软件分析GRA24蛋白优势肽段,通过PCR反应扩增编码该肽段的碱基序列,并连接至p ET-28a载体中。将获得的GRA24截短蛋白原核表达质粒转化于大肠埃希菌BL21感受态细胞中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导后采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测蛋白表达与纯化。使用纯化的GRA24截短蛋白皮下注射免疫BALB/c小鼠获得GRA24截短蛋白多克隆抗体,采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测抗体效价,采用Western blotting检测抗体特异性,并将该抗体应用于免疫荧光试验(immunofluorescence assay,IFA)。结果SDS-PAGE结果表明成功构建重组质粒,考马斯亮蓝染色结果显示获得高纯度重组GRA24截短蛋白。ELISA结果显示,GRA24截短蛋白多克隆抗体效价在1∶208400以上;Western blotting检测发现,该抗体可识别弓形虫不同虫株内源性GRA24蛋白,特异性识别重组GRA24截短蛋白;间接IFA检测发现,弓形虫入侵宿主细胞16 h后分泌的GRA24蛋白定位于宿主细胞核中。结论成功制备广适性、高效价、强特异性的抗弓形虫GRA24多克隆抗体,可应用于Western blotting与IFA,为进一步研究GRA24功能奠定了基础。

关键词：刚地弓形虫致密颗粒蛋白24 多克隆抗体免疫荧光

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结核分枝杆菌ESX-1分泌系统与宿主巨噬细胞相互作用的研究进展

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中国人兽共患病学报 2023年第12期39卷 1218-1225页

作者：余海燕杨国平大理大学基础医学院医学微生物学及免疫学教研室大理671000 大理大学云南省昆虫生物医药研发重点实验室大理671000

结核分枝杆菌(Mtb)侵入宿主细胞并在宿主细胞中持续存在是Mtb感染引起致病的重要原因。当Mtb感染宿主时,可与宿主巨噬细胞(M?)相互作用并调节M?的功能,影响机体的固有免疫和适应性免疫应答反应。ESX-1分泌系统作为Mtb的主要分泌系统,能... 详细信息

结核分枝杆菌(Mtb)侵入宿主细胞并在宿主细胞中持续存在是Mtb感染引起致病的重要原因。当Mtb感染宿主时,可与宿主巨噬细胞(M?)相互作用并调节M?的功能,影响机体的固有免疫和适应性免疫应答反应。ESX-1分泌系统作为Mtb的主要分泌系统,能将Mtb分泌的蛋白质转运到宿主细胞中,发挥毒力及免疫调节作用;某些分泌蛋白具有高度免疫原性,并是强有效的T细胞抗原,可作为结核疫苗设计及结核病诊断的重要抗原。对ESX-1分泌系统与M?相互作用过程的机制研究是分析Mtb毒力因子的致病机理及疫苗研发的途径之一。因此,本文对Mtb的ESX-1分泌系统组成以及分泌蛋白对M?调控作用进行综述,分析ESX-1分泌系统因子在Mtb与宿主相互作用中发挥的作用,对于开发新的结核疫苗和药物控制结核病至关重要。

关键词： ESX-1分泌系统巨噬细胞结核分枝杆菌

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结核分枝杆菌PE22/PPE36融合蛋白对耻垢分枝杆菌表型及巨噬细胞功能影响的研究

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中国人兽共患病学报 2023年第6期39卷 523-532页

作者：杨雨婷李玉洁余海燕杨国平大理大学基础医学院医学微生物学与免疫学教研室大理671000 大理大学云南省昆虫生物医药研发重点实验室大理671000

目的将结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)PE/PPE家族重组融合蛋白PE22/PPE36异源表达于耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms)后,探讨其对Ms表型及巨噬细胞功能的影响,分析其在Mtb感染过程中发挥的作用。方法原核表达... 详细信息

目的将结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)PE/PPE家族重组融合蛋白PE22/PPE36异源表达于耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms)后,探讨其对Ms表型及巨噬细胞功能的影响,分析其在Mtb感染过程中发挥的作用。方法原核表达获取融合蛋白PE22/PPE36,纯化后免疫6~8周龄小鼠制备多克隆抗体;电击法构建重组菌Ms_PE22/PPE36及Ms_vec,并用所制备的多克隆抗体验证重组融合蛋白在Ms中的表达。将重组菌接种于2×YT培养基中观察其菌落形态及生长曲线;点板法及菌落计数法检测重组菌在H_(2)O_(2)、SDS、溶菌酶、NaNO_(2)、低pH、饥饿等压力条件下的存活情况,以分析PE22/PPE36融合蛋白对Ms表型的影响;重组菌侵染巨噬细胞ANA-1及RAW 264.7后,流式细胞术检测ANA-1细胞凋亡率,ELISA法检测ANA-1细胞TNF-α及IL-6分泌量,Griess法检测ANA-1及RAW 264.7细胞NO分泌量并用通道抑制剂检测所涉及的通路,菌落计数法检测重组菌在ANA-1及RAW 264.7细胞内的存活情况。结果与Ms_vec组相比,Ms_PE22/PPE36的菌落形态、生物膜形成及在溶菌酶、NaNO_(2)、低pH等压力条件下的存活率差异无统计学意义(溶菌酶:t 3 h=0.082,t 6 h=0.174,t 9 h=0.355;NaNO_(2):t 3 h=0.950,t 6 h=1.274;低pH:t 3 h=1.869,t 6 h=1.119,t 9 h=0.091;均P>0.05);在H_(2)O_(2)、SDS压力条件下存活率明显降低(H_(2)O_(2):t 6 h=4.35,t 8 h=4.80;SDS:t 4 h=10.43,t 6 h=2.793;均P<0.05);而稳定期生长速率及在饥饿压力条件下的存活率明显增高(生长速率:t 30 h=5.39,t 36 h=2.55,t 42 h=3.48;饥饿:t=3.323;均P<0.05);与Ms_vec感染组相比,Ms_PE22/PPE36组ANA-1细胞的早期凋亡率及TNF-α分泌量明显增加(早期凋亡:F=4.765;TNF-α:t 24 h=26.642,t_(48)h=7.634;均P<0.05),IL-6分泌量明显减少(t 24 h=5.888,t_(48)h=3.001;均P<0.05),ANA-1及RAW264.7细胞NO分泌量明显增加(ANA-1:F_(12)h=163.267,F_(24)h=111.530,F 48 h=500.328;RAW 264.7:F_(12)h=133.202,F_(24)h=718.436,F 48 h=1434.9;均P<0.05),且可被通道抑制剂Bay 11-7082、U0126及SB203580明显抑制(ANA-1:t NF-κB=32.074;t ERK=11.679;t p38=16.840;RAW 264.7:t NF-κB=119.112;均P<0.001);与Ms_vec相比,Ms_PE22/PPE36在ANA-1细胞内的存活率无明显变化(t_(48)h=0.327,t_(72)h=1.933,均P>0.05),在RAW 264.7细胞内的存活率明显降低(t_(48)h=5.509,t_(72)h=5.417;均P<0.05)。结论重组融合蛋白PE22/PPE36可改变Ms的表型并调控巨噬细胞的免疫应答。

关键词：结核分枝杆菌耻垢分枝杆菌 PE22/PPE36融合蛋白巨噬细胞

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