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中国生物化学与分子生物学报 2008年第1期24卷 6-10页

作者：谢闵潘利红杨琼刘录山王贵学南华大学心血管病研究所动脉硬化学湖南省重点实验室衡阳421001 重庆大学生物工程学院重庆400044

人类前蛋白转化酶枯草溶菌素9基因(pcsk9)编码神经细胞凋亡调节转化酶-1蛋白(NARC-1),该基因属于蛋白转化酶家族.pcsk9/NARC-1通过调节细胞表面低密度脂蛋白受体,从而在胆固醇代谢中发挥重要作用;其两种不同突变类型,可导致血液中胆固... 详细信息

人类前蛋白转化酶枯草溶菌素9基因(pcsk9)编码神经细胞凋亡调节转化酶-1蛋白(NARC-1),该基因属于蛋白转化酶家族.pcsk9/NARC-1通过调节细胞表面低密度脂蛋白受体,从而在胆固醇代谢中发挥重要作用;其两种不同突变类型,可导致血液中胆固醇水平完全相反的变化,出现低胆固醇血症或高胆固醇血症.最近发现,pcsk9/NARC-1可能还影响神经系统分化,调节神经元凋亡.pcsk9/NARC-1与动脉粥样硬化(As)和阿尔茨海默病(AD)的发生可能存在潜在联系.考虑到载脂蛋白E(ApoE)在As和AD中也都起着重要作用,探讨pcsk9/NARC-1与ApoE之间可能的相关性对阐明两者在胆固醇代谢紊乱和神经系统疾病中的作用可能具有重要意义.

关键词： pcsk9/NARC-1 胆固醇代谢动脉粥样硬化阿尔茨海默病载脂蛋白E

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脂蛋白(a)损伤小鼠骨髓源性内皮祖细胞的生物学功能

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中国动脉硬化杂志 2013年第12期21卷 1057-1063页

作者：胡毅敏张斌刘小红张凯王仁曾钧发王佐中山大学附属第五医院广东省珠海市519000 南华大学心血管病研究所动脉硬化学湖南省重点实验室湖南省衡阳市421001

目的探讨脂蛋白(a)[Lp(a)]对小鼠骨髓源性内皮祖细胞的损伤作用。方法实验分为6组:对照组加等量含200μmol/L EDTA的全培养液,其余各组分别加1、10、100、300及600 mg/L的Lp(a)处理。贴壁法分离与培养内皮祖细胞,摄取ac-LDL和结合UEA-1... 详细信息

目的探讨脂蛋白(a)[Lp(a)]对小鼠骨髓源性内皮祖细胞的损伤作用。方法实验分为6组:对照组加等量含200μmol/L EDTA的全培养液,其余各组分别加1、10、100、300及600 mg/L的Lp(a)处理。贴壁法分离与培养内皮祖细胞,摄取ac-LDL和结合UEA-1鉴定内皮祖细胞,MTT法检测细胞存活,Transwell测定细胞迁移,明胶黏附法测定内皮祖细胞的黏附,Photshop 7.0计算血管长度。结果 Lp(a)呈剂量依赖性影响内皮祖细胞存活,100 mg/L时开始产生损伤效用,300 mg/L Lp(a)对内皮祖细胞的损伤作用最为显著。1 mg/L Lp(a)即能显著抑制内皮祖细胞的迁移,300 mg/L时其迁移细胞数约为对照组的1/14。1 mg/L Lp(a)可明显减少内皮祖细胞黏附细胞数目(145.2±8.4个/视野比115.2±12.6个/视野,P<0.05,n=5),当Lp(a)的浓度达到300 mg/L时,内皮祖细胞黏附数目下降最显著,为对照组的约1/16。10 mg/L Lp(a)使血管形成能力明显受到抑制,当Lp(a)的浓度达到300 mg/L时,差不多已经见不到完整的血管样结构。经100 mg/L Lp(a)处理后,不但克隆数目明显减少(10.2±1.3比3.1±0.4,P<0.01,n=5),而且克隆生长明显受到抑制。结论 Lp(a)呈浓度依赖性地损伤内皮祖细胞存活、迁移、黏附、血管形成能力和克隆形成能力。

关键词：内皮祖细胞脂蛋白(a) 生物学功能

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血小板因子4促进人脐静脉内皮细胞Toll样受体2的表达

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中国动脉硬化杂志 2010年第6期18卷 385-389页

作者：彭茜唐雅玲许增祥何钒杨永宗顺德勒流医院广东省佛山市528322 南华大学心血管病研究所动脉硬化学湖南省重点实验室湖南省衡阳市421001

目的探讨血小板因子4对人脐静脉内皮细胞Toll样受体2表达的影响。方法采用人重组细胞因子血小板因子4刺激人脐静脉内皮细胞株ECV304,通过RT-PCR和Western Blotting分别检测ECV304中Toll样受体2mRNA和蛋白表达。细胞免疫组织化学法检测... 详细信息

目的探讨血小板因子4对人脐静脉内皮细胞Toll样受体2表达的影响。方法采用人重组细胞因子血小板因子4刺激人脐静脉内皮细胞株ECV304,通过RT-PCR和Western Blotting分别检测ECV304中Toll样受体2mRNA和蛋白表达。细胞免疫组织化学法检测血小板因子4刺激后ECV304中Toll样受体2的表达量。结果血小板因子4刺激人脐静脉内皮细胞株后能促进Toll样受体2mRNA和蛋白表达。与空白组相比,100μg/L血小板因子4处理人脐静脉内皮细胞株能在基因及蛋白水平促进其Toll样受体2表达并呈现一定的时间依赖性(n=5,P<0.05),且肝素不能抑制血小板因子4的这种作用。细胞免疫组织化学法也显示与空白组(0.001385±0.000953)相比,血小板因子4处理后人脐静脉内皮细胞Toll样受体2表达显著增多(0.060399±0.020998,P<0.05)。结论血小板因子4促进人脐静脉内皮细胞株表达Toll样受体2,此效应可能与血小板在动脉粥样硬化中的作用有关。

关键词：血小板因子4 Toll样受体2 内皮细胞

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硫化氢作用于钾通道产生的心血管效应

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中国动脉硬化杂志 2013年第2期21卷 182-186页

作者：胡恒境屈顺林谭小进姜志胜南华大学附属第一医院心内科湖南省衡阳市421001 南华大学心血管病研究所动脉硬化学湖南省重点实验室湖南省衡阳市421001

硫化氢是一种具有臭鸡蛋味道的有毒气体,但是近年来有大量文献报道硫化氢是继一氧化碳和一氧化氮之后的第三种气体信号分子。硫化氢主要在胱硫醚-γ-裂解酶、胱硫醚-β-合成酶、3-巯基丙酮酸硫转移酶作用下产生,具有舒张血管、调节血压... 详细信息

硫化氢是一种具有臭鸡蛋味道的有毒气体,但是近年来有大量文献报道硫化氢是继一氧化碳和一氧化氮之后的第三种气体信号分子。硫化氢主要在胱硫醚-γ-裂解酶、胱硫醚-β-合成酶、3-巯基丙酮酸硫转移酶作用下产生,具有舒张血管、调节血压、抑制血管平滑肌细胞增殖和低密度脂蛋白氧化修饰等功能,硫化氢对缺血的心肌细胞具有明显的保护效应,并且还能通过多种途径减轻心肌的损伤。有研究显示钾通道可能参与了多形式多器官的缺血保护。而硫化氢作为重要的气体信号分子,其舒张病变血管、提高血液灌注水平的效应可能与钾通道开放有关。本文主要就硫化氢作用于钾通道产生血管效应的机制做一简要综述。

关键词：硫化氢 ATP敏感性钾通道钙通道激活性钾通道内皮源性超极化因子

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FRG4基因全长克隆及生物信息学分析

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中国动脉硬化杂志 2009年第6期17卷 426-430页

作者：王仁姜志胜王佐赵战芝李国华杨向东南华大学病理生理学教研室湖南省衡阳市421001 南华大学心血管病研究所动脉硬化学湖南省重点实验室湖南省衡阳市421001

为了对新的人突触相关蛋白FRG4进行全长克隆及生物信息学分析,从人胎肝文库PCR扩增FRG4基因全长cDNA序列,用生物信息学方法对FRG4基因进行基因组结构分析、多序列同源性比较、跨膜区段、亲疏水性分析、功能结构域预测等。结果表明cDNA... 详细信息

为了对新的人突触相关蛋白FRG4进行全长克隆及生物信息学分析,从人胎肝文库PCR扩增FRG4基因全长cDNA序列,用生物信息学方法对FRG4基因进行基因组结构分析、多序列同源性比较、跨膜区段、亲疏水性分析、功能结构域预测等。结果表明cDNA文库基础上运用热启动PCR获得FRG4全长cDNA序列,生物信息学分析显示FRG4基因与人类的突触相关蛋白有99%同源性;定位在X染色体的短臂2区2带2亚带2次亚带;由9个外显子和8个内含子组成;无跨膜区段;有一结构域BSD;该基因编码蛋白可能为一水溶性蛋白。

关键词：生物信息学分析动脉粥样硬化突触相关蛋白跨膜区功能结构域

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NADPH氧化酶活性不影响主动脉平滑肌细胞负荷胆固醇

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生理学报 2008年第4期60卷 511-519页

作者：袁中华 Nageswara R．Madamanchi Aleksandr E．Vendrov NIU Xi-Lin NIU-Xiang Marschall S．Runge 南华大学医学院心血管病研究所动脉硬化学湖南省重点实验室衡阳421001 美国北卡罗来纳大学医学院卡罗来纳心血管生物学中心教堂山27599

NADPH氧化酶产生的活性氧促进血管平滑肌细胞的增殖和迁移,与动脉粥样硬化的发生密切相关。为了观察NADPH氧化酶的亚基p47phox对血管平滑肌细胞胆固醇代谢的影响,把p47phox基因敲除小鼠的主动脉血管平滑肌细胞与10mg/L水溶性胆固醇共孵... 详细信息

NADPH氧化酶产生的活性氧促进血管平滑肌细胞的增殖和迁移,与动脉粥样硬化的发生密切相关。为了观察NADPH氧化酶的亚基p47phox对血管平滑肌细胞胆固醇代谢的影响,把p47phox基因敲除小鼠的主动脉血管平滑肌细胞与10mg/L水溶性胆固醇共孵育72h,然后用0.3mg/L凝血酶处理10min,采用免疫组织化学和油红O染色、实时定量逆转录PCR、免疫蛋白印迹、细胞内胆固醇测定等方法,观察细胞内胆固醇的改变,与平滑肌细胞、巨噬细胞、炎症反应细胞内胆固醇代谢相关蛋白的表达。结果显示,与未孵育的对照组相比,水溶性胆固醇孵育过的主动脉血管平滑肌细胞内胆固醇明显增加,差别有显著性意义;细胞内中性脂滴明显增加;α-肌动蛋白的表达下降,半乳糖凝集素3表达升高,单核细胞趋化蛋白1及血管细胞黏附分子1的表达不变;ATP结合盒转运体A1、酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1及脂肪分化相关蛋白的表达增加。但是,与野生型血管平滑肌细胞相比,敲除p47phox基因并不能使所测定的指标发生变化。结果提示,负荷胆固醇后,p47phox依赖的NADPH氧化酶并不能改变血管平滑肌细胞向泡沫细胞的转变。单纯敲除p47phox基因不能改变细胞内胆固醇代谢的状态。

关键词： NADPH氧化酶胆固醇基因敲除平滑肌细胞动脉粥样硬化

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MG132对兔颈总动脉球囊损伤后狭窄部位泛素和Caspase-3表达的影响

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中国动脉硬化杂志 2009年第7期17卷 528-530页

作者：郭芳孙文清屈顺林杨向东南华大学病理生理学教研室湖南省衡阳市421001 南华大学心血管病研究所动脉硬化学湖南省重点实验室湖南省衡阳市421001

目的采用球囊拉伤新西兰白兔颈总动脉,复制出血管损伤后狭窄模型;在损伤血管局部应用蛋白酶体抑制剂MG132,观察蛋白酶体抑制剂MG132对球囊损伤后血管狭窄部位泛素和Caspase-3表达的影响。方法将新西兰白兔30只随机分成对照组、球囊损伤... 详细信息

目的采用球囊拉伤新西兰白兔颈总动脉,复制出血管损伤后狭窄模型;在损伤血管局部应用蛋白酶体抑制剂MG132,观察蛋白酶体抑制剂MG132对球囊损伤后血管狭窄部位泛素和Caspase-3表达的影响。方法将新西兰白兔30只随机分成对照组、球囊损伤组和MG132组,喂养8周后取颈总动脉损伤段血管制成病理切片,采用免疫组织化学法观察泛素蛋白和Caspase-3蛋白的变化。结果免疫组织化学法检测到球囊损伤组颈总动脉管壁泛素蛋白表达加强;而MG132组与球囊损伤组比泛素蛋白表达明显减少(P<0.01),Caspase-3蛋白表达显著增加(P<0.01)。结论局部应用蛋白酶体抑制剂MG132能抑制颈总动脉管壁泛素蛋白表达,并增强Caspase-3蛋白表达。

关键词：泛素-蛋白酶体途径蛋白酶体抑制剂再狭窄 Caspase-3

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Adipophilin真核表达载体的构建与表达分析

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中国现代医学杂志 2009年第10期19卷 1487-1490页

作者：贾薇何玲田荣波袁中华吉首大学医学院基础医学部湖南吉首416000 南华大学心血管病研究所动脉硬化学湖南省重点实验室湖南衡阳421001

目的构建能在真核细胞中表达的adipophilin表达质粒pcDNA3.1-HA-adi。方法从培养的C57BL/6J小鼠血管平滑肌细胞提取总RNA,在PCR引物中加入HA序列,用RT-PCR及TOPO克隆技术得到HA-adi克隆载体,测序后,把HA-adi定向插入pcDNATM3.1/myc-His(-)-C的多克隆位点。阳离子聚合物介导转染人THP-1巨噬细胞,用RT-PCR及Western blot的方法检测目的蛋白在细胞中的表达。结果限制性内切酶酶切和DNA测序分析证实成功获得HA-adi基因片段,HA-adi准确克隆入pcDNATM3.1/myc-His(-)-C的多克隆位点。转染THP-1巨噬细胞后,检测到目的蛋白的表达。结论成功构建pcDNA3.1-HA-adi,并在THP-1巨噬细胞中得到表达。

关键词： adipophilin 基因重组脂滴动脉粥样硬化

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沙利度胺抑制异常剪切应力诱导的动脉粥样硬化形成

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中国动脉硬化杂志 2009年第7期17卷 515-518页

作者：符晖杨琼阳辉汤石林刘录山南华大学附属第一医院重症医学科湖南省衡阳市421001 南华大学心血管病研究所动脉硬化学湖南省重点实验室湖南省衡阳市421001

目的研究沙利度胺对异常剪切应力诱导的兔颈总动脉粥样硬化病变形成的作用。方法新西兰兔分为3组,每组13只:正常饮食组、高脂组(给予2%高胆固醇饮食)和高脂加药组(2%高胆固醇饮食+20mg/kg沙利度胺)。39只新西兰兔均予以右颈总动脉硅胶... 详细信息

目的研究沙利度胺对异常剪切应力诱导的兔颈总动脉粥样硬化病变形成的作用。方法新西兰兔分为3组,每组13只:正常饮食组、高脂组(给予2%高胆固醇饮食)和高脂加药组(2%高胆固醇饮食+20mg/kg沙利度胺)。39只新西兰兔均予以右颈总动脉硅胶管套环,套环长度为8mm,内径为1.4mm。9周后处死动物,0周和第9周收集血清测量总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白及甘油三酯等血脂指标水平。2个月后宰杀动物,取整条颈总主动脉行苏丹Ⅳ染色检测病变面积,HE染色检测病变的病变程度。结果0周和9周时三组动物体重差异没有显著性,一般体征无明显变化,表明动物对沙利度胺有很好耐受性。高脂组和高脂加药组总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白及甘油三酯血清水平较对照组明显升高,高脂组和高脂加药组血脂指标间差异无显著性。颈总动脉苏丹Ⅳ染色结果发现,高脂组远心段和近心段有明显的红染区域示动脉粥样硬化病变形成,且近心段动脉粥样硬化病变更加明显,狭窄段基本上没有动脉粥样硬化病变形成;高脂加药组主要在近心段有少量动脉粥样硬化病变存在;正常饮食组整条颈总动脉都无可见动脉粥样硬化病变。HE染色发现,高脂组近心段有明显的动脉粥样硬化病变存在,管腔明显狭窄,动脉粥样硬化病变中有大量的脂质蓄积和细胞浸润;高脂组套环段管壁明显变薄,无明显动脉粥样硬化病变存在;高脂组远心段动脉粥样硬化病变程度较近心段轻。高脂加药组仅在近心段有内膜增生病变存在。正常饮食组内膜无明显改变。结论剪切应力改变可以导致不同程度动脉粥样硬化病变的形成;沙利度胺对异常剪切应力诱导的兔颈总动脉粥样硬化病变的形成有抑制作用。

关键词：剪切应力动脉粥样硬化新西兰兔颈总动脉沙利度胺

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PAT家族蛋白研究进展

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中南医学科学杂志 2012年第2期40卷 199-204页

作者：刘志强刘清南陶媛郭东铭袁中华南华大学心血管病研究所动脉硬化学湖南省重点实验室湖南衡阳421001

PAT家族蛋白(PAT)是脂质代谢中的一类小蛋白分子,它们定位于细胞质脂滴的表面,介导着脂质代谢。PAT家族蛋白并不直接参与脂质的合成和分解,它们通过与其它分子的相互作用而介导脂质代谢。本文将阐述PAT家族蛋白的发现、命名和成员组成,... 详细信息

PAT家族蛋白(PAT)是脂质代谢中的一类小蛋白分子,它们定位于细胞质脂滴的表面,介导着脂质代谢。PAT家族蛋白并不直接参与脂质的合成和分解,它们通过与其它分子的相互作用而介导脂质代谢。本文将阐述PAT家族蛋白的发现、命名和成员组成,并重点介绍成员围脂滴蛋白(perilipin)和脂肪分化相关蛋白(adi-pophilin,ADRP)的代谢调控和与其它分子的相互作用。

关键词： PAT家族蛋白 perilipin adipophilin

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