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限制性内切酶酶切后去磷酸化联合蓝白斑筛选检测KRAS基因第12位稀有突变

中南医学科学杂志 2024年第1期52卷 26-30页

作者：周翠兰陈婕许云思付乙人彭翠英南华大学衡阳医学院基础医学院应用解剖学与生殖医学研究所湖南衡阳421001 南华大学衡阳医学院生态健康与人类重要疾病防控湖南省高校重点实验室湖南衡阳421001 南华大学衡阳医学院生物毒理与生态修复衡阳市重点实验室湖南衡阳421001 南华大学衡阳医学院有色金属矿区耕地重金属污染生态阻抗技术研究所衡阳市重点实验室湖南衡阳421001

目的研究限制性内切酶酶切后去磷酸化联合蓝白斑筛选检测KRAS基因第12位密码子稀有突变的可行性。方法将采用限制性内切酶酶切后去磷酸化联合蓝白斑筛选检测方法作为实验组,限制性内切酶酶切联合蓝白斑筛选检测方法作为对照组。对照组将... 详细信息

目的研究限制性内切酶酶切后去磷酸化联合蓝白斑筛选检测KRAS基因第12位密码子稀有突变的可行性。方法将采用限制性内切酶酶切后去磷酸化联合蓝白斑筛选检测方法作为实验组,限制性内切酶酶切联合蓝白斑筛选检测方法作为对照组。对照组将KRAS基因第12位密码子突变型(MUT)/野生型(WT)(MUT/WT 12)质粒按0∶1、1∶300、1∶1000、1∶3000的比例混合,限制性内切酶酶切PCR产物,酶切后产物进行蓝白斑筛选。实验组将MUT/WT 12质粒按0∶1、1∶3000、1∶10000、1∶30000的比例混合,在对照组方法的基础上酶切产物去磷酸化后再蓝白斑筛选。比较两组蓝白斑克隆数。限制性内切酶酶切鉴定实验组MUT/WT 12为1∶30000的阳性克隆,一代测序阳性克隆验证插入片段的序列。采用限制性内切酶酶切后去磷酸化联合蓝白斑筛选验证26例肺癌病例游离DNA的KRAS基因第12位稀有突变。结果对照组1∶3000的培养皿上白色克隆17个,蓝色克隆2329个,白色/蓝色克隆为1/137;而实验组1∶30000的培养皿上白色克隆23个,蓝色克隆394个,白色/蓝色克隆为1/17,1∶30000实验组白色/蓝色克隆比例明显高于1∶3000对照组。实验组1∶30000培养血上5个阳性克隆酶切鉴定出3个阳性,其插入片段为KRAS第12位突变片段。限制性内切酶酶切后去磷酸化联合蓝白斑筛选26例肺癌病例可检测出2例为KRAS基因第12位密码子突变。结论采用限制性内切酶酶切后去磷酸化联合蓝白斑筛选可检测出1∶30000 KRAS基因稀有突变。

关键词：限制性内切酶酶切KRAS基因蓝白斑技术去磷酸化稀有突变

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HNO_(3)改性荔枝木生物炭对大豆累积Cu、Ca、As、Cd的影响

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生态毒理学报 2022年第3期17卷 501-512页

作者：唐惠娟江红樱李霞向绍锦曾庆宇刘俊杨飞吴顺南华大学衡阳医学院基础医学院细胞生物学与遗传学教研室衡阳421001 南华大学衡阳医学院基础医学院生态健康与人类重要疾病防控湖南省高校重点实验室衡阳421001 南华大学衡阳医学院基础医学院有色金属矿区耕地重金属污染生态阻抗技术研究衡阳市重点实验室衡阳421001 南华大学衡阳医学院基础医学院生物毒理与生态修复衡阳市重点实验室衡阳421001 南华大学衡阳医学院公共卫生学院典型环境污染与健康危害湖南省重点实验室衡阳421001 中南林业科技大学生命科学与技术学院长沙410018

采用盆栽实验,在土壤中施用不同用量的HNO_(3)改性荔枝木生物炭(质量比分别为0.125%、0.250%、0.500%和1.000%)对重金属污染土壤进行改良;研究了HNO_(3)改性荔枝木生物炭对大豆植株累积与分配Cu、Ca、As和Cd的影响。结果表明:(1)低浓度... 详细信息

采用盆栽实验,在土壤中施用不同用量的HNO_(3)改性荔枝木生物炭(质量比分别为0.125%、0.250%、0.500%和1.000%)对重金属污染土壤进行改良;研究了HNO_(3)改性荔枝木生物炭对大豆植株累积与分配Cu、Ca、As和Cd的影响。结果表明:(1)低浓度的HNO_(3)改性荔枝木生物炭抑制了大豆植株的生长,较高浓度的HNO_(3)改性荔枝木生物炭刺激了大豆植株的生长。(2)HNO_(3)改性荔枝木生物炭提高了大豆籽粒的生物量。HNO_(3)改性荔枝木生物炭施用量为1.000%时,大豆籽粒生物量达到最大值,比对照组增加了25.000%。(3)HNO_(3)改性荔枝木生物炭提高了大豆植株修复重金属污染土壤的能力;HNO_(3)改性荔枝木生物炭施用量为0.125%时,大豆植株As总量达到最大值,比对照组增加了47.059%;HNO_(3)改性荔枝木生物炭施用量为0.250%时,大豆植株Cu和Cd总量达到最大值,分别比对照组增加了25.506%、44.048%;HNO_(3)改性荔枝木生物炭施用量为1%时,大豆植株Ca总量达到最大值,比对照组增加了65.778%。(4)施加HNO_(3)改性荔枝木生物炭后,大豆籽粒中As的含量增加,但未超出《食品安全国家标准食品中污染物限量》(GB 2762—2017)标准中规定的食品限量值。(5)施加HNO_(3)改性荔枝木生物炭后,大豆籽粒中Cd的含量降低;HNO_(3)改性荔枝木生物炭施用量为1.000%时,大豆籽粒中Cd含量达到最小值,比对照组降低了69.620%,未超出《食品安全国家标准食品中污染物限量》(GB 2762—2017)食品安全限量值。这表明,HNO_(3)改性生物炭可以用作改良剂修复重金属复合污染土壤,降低食物链中重金属的暴露水平。

关键词：重金属大豆累积改性生物炭

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松木生物炭联合油菜修复铅污染农田的效应

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南华大学学报（自然科学版） 2023年第1期37卷 8-15,58页

作者：倪娟莫爱丽樊鑫婷蒋圆圆杨飞彭堂见刘俊南华大学基础医学院湖南衡阳421001 南华大学公共卫生学院湖南衡阳421001 南华大学典型环境污染与健康危害湖南省重点实验室湖南衡阳421001 中南大学临床流行病学湖南省重点实验室湖南长沙410000 南华大学有色金属矿区耕地重金属污染生态阻抗技术研究衡阳市重点实验室湖南衡阳421001 南华大学生态健康与人类重要疾病防控湖南省高校重点实验室湖南衡阳421001 南华大学生物毒理与生态修复衡阳市重点实验室湖南衡阳421001

本研究旨在探究松木生物炭联合油菜修复Pb污染农田土壤的效应。在湖南省湘潭县某地的Pb污染农田中施用不同量(0、200、400、600 g/m 2)的松木生物炭改良土壤,研究了松木生物炭对油菜生物量、根际土壤中Pb质量比与形态分布及油菜各器官... 详细信息

本研究旨在探究松木生物炭联合油菜修复Pb污染农田土壤的效应。在湖南省湘潭县某地的Pb污染农田中施用不同量(0、200、400、600 g/m 2)的松木生物炭改良土壤,研究了松木生物炭对油菜生物量、根际土壤中Pb质量比与形态分布及油菜各器官中Pb的累积和转运的影响。结果表明:施用400和600 g/m 2松木生物炭显著降低了油菜根际土壤中Pb的质量比,且Pb的质量比低于《土壤环境质量农用地土壤污染风险管控标准(试行)》(GB 15618—2018)中规定的Pb的风险筛选值。松木生物炭增加了油菜根际土壤中Pb的可还原态比例,降低了其残渣态比例,促进了油菜植株对Pb的吸收和累积;400和600 g/m 2生物炭处理的植株中Pb总量较对照组显著增加,植株的生长受到抑制。生物炭改变了Pb在油菜器官中的累积与分配格局;油菜根、茎部位中Pb的质量比增加,而籽粒中Pb的质量比显著降低;400 g/m 2生物炭处理的籽粒中Pb的质量比达到最小值。这些结果综合表明,施用≥400 g/m 2的松木生物炭联合油菜可以修复Pb污染农田,且显著降低油菜籽粒中Pb的质量比。

关键词：松木生物炭铅污染油菜植物修复

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水培试验下水稻Pb吸收累积关键生育期

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环境科学 2020年第9期41卷 4218-4225页

作者：胡雨丹周航辜娇峰霍洋邓鹏辉魏宾纭刘俊廖柏寒中南林业科技大学环境科学与工程学院长沙410004 稻米品质安全控制湖南省工程实验室长沙410004 有色金属矿区耕地重金属污染生态阻抗技术研究衡阳市重点实验室衡阳421001

水稻不同生育期对Pb的吸收累积差异明显.本研究通过水培试验,分别在水稻不同生育期(分蘖期、拔节期、孕穗期、灌浆期、蜡熟期和成熟期)和全生育期添加0.5 mg·L^-1的外源Pb,以全生育期不添加外源Pb作为对照,研究水稻不同生育期Pb吸... 详细信息

水稻不同生育期对Pb的吸收累积差异明显.本研究通过水培试验,分别在水稻不同生育期(分蘖期、拔节期、孕穗期、灌浆期、蜡熟期和成熟期)和全生育期添加0.5 mg·L^-1的外源Pb,以全生育期不添加外源Pb作为对照,研究水稻不同生育期Pb吸收累积的影响,明确水稻吸收累积Pb的关键生育时期及对水稻植株和糙米Pb累积的贡献.结果表明:①单一生育期Pb胁迫处理时,水稻株高和分蘖数差异不明显,而全生育期Pb胁迫处理下水稻株高和生物量均受到明显抑制;②水稻成熟后不同部位的Pb含量差异表现为:根系>茎节1>其他茎节>根基茎>茎>叶>穗轴>谷壳>糙米;不同生育期处理下糙米Pb含量范围为0.1~1.2 mg·kg^-1,其顺序为:孕穗期Pb胁迫>拔节期Pb胁迫>分蘖期Pb胁迫>灌浆期Pb胁迫>成熟期Pb胁迫>蜡熟期Pb胁迫;③水稻植株Pb累积量相对贡献率在水稻生殖生长时期(灌浆期、蜡熟期和成熟期)较大,而水稻地上部位Pb累积量相对贡献率在水稻营养生长时期(分蘖期、拔节期和孕穗期)较大;④孕穗期是糙米Pb积累的关键生育期,对糙米Pb累积的相对贡献率为43.3%,其次是拔节期和分蘖期处理,相对贡献率分别为24.4%和21.3%;⑤建议在水稻孕穗期适度采用淹水灌溉、施加改良剂或叶面阻控等技术措施,以降低糙米Pb累积,实现Pb污染稻田安全利用.

关键词：生育期糙米 Pb胁迫累积相对贡献率茎节

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组配改良剂联合硅肥对Cd污染稻田的修复效果

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中国环境科学 2020年第8期40卷 3512-3519页

作者：刘佳炜周航魏宾纭崔同科张竞颐黄芳辜娇峰刘俊廖柏寒中南林业科技大学环境科学与工程学院湖南长沙410004 稻米品质安全控制湖南省工程实验室湖南长沙410004 有色金属矿区耕地重金属污染生态阻抗技术研究衡阳市重点实验室湖南衡阳421001

选取湖南省浏阳市某Cd污染稻田进行田间试验,研究组配改良剂石灰石+海泡石(LS)、基施硅肥及叶面喷施硅肥对Cd污染稻田修复效果,结果表明:(1)基施硅肥90kg/hm^2和叶面喷施硅肥(0.2,0.4g/L)对土壤pH值无明显影响,添加LS(2250,4500kg/hm^2... 详细信息

选取湖南省浏阳市某Cd污染稻田进行田间试验,研究组配改良剂石灰石+海泡石(LS)、基施硅肥及叶面喷施硅肥对Cd污染稻田修复效果,结果表明:(1)基施硅肥90kg/hm^2和叶面喷施硅肥(0.2,0.4g/L)对土壤pH值无明显影响,添加LS(2250,4500kg/hm^2)的各处理均显著提高土壤pH值(P<0.05).(2)基施硅肥90kg/hm^2分别降低土壤交换态、毒性特征浸出(TCLP)提取态Cd含量20.0%和18.5%,叶面喷施硅肥对土壤Cd两种提取态含量无明显影响,添加LS的各处理(2250,4500kg/hm^2)分别使土壤交换态、TCLP提取态Cd含量降低25.8%~49.9%、26.4%~44.5%.(3)3种单一技术措施均能明显降低水稻各部位Cd含量,但降低糙米中Cd含量的效果低于3种技术措施的组合处理;“组配改良剂LS+基施硅肥+叶面喷施硅肥”各处理(JL1F1、JL1F2、JL2F1、JL2F2)使水稻糙米中Cd含量降低25.6%~70.5%.(4)“组配改良剂LS+基施硅肥+叶面喷施硅肥”的组合技术处理能显著降低土壤中Cd的有效性,显著降低水稻各部位中Cd含量,其中JL2F2处理效果最佳,能使对照糙米Cd含量从0.66mg/kg降低到0.19mg/kg,实现中重度Cd污染稻田的水稻安全生产.

关键词：组配改良剂硅肥 Cd污染土壤水稻有效性

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不同水分管理模式联合叶面喷施硅肥对水稻Cd累积的影响

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环境科学 2020年第8期41卷 3855-3861页

作者：魏宾纭周航刘佳炜张竞颐黄芳霍洋胡雨丹辜娇峰刘俊廖柏寒中南林业科技大学环境科学与工程学院长沙410004 稻米品质安全控制湖南省工程实验室长沙410004 有色金属矿区耕地重金属污染生态阻抗技术研究衡阳市重点实验室衡阳421001

在某重度Cd污染稻田(Cd含量2.83 mg·kg-1)开展8种水分管理措施联合叶面喷施硅肥的大田试验,研究不同处理对水稻生长及各部位Cd累积的影响.结果表明:①8种水分管理措施联合叶面喷施硅肥处理对水稻株高和分蘖数没有明显影响,但各处... 详细信息

在某重度Cd污染稻田(Cd含量2.83 mg·kg-1)开展8种水分管理措施联合叶面喷施硅肥的大田试验,研究不同处理对水稻生长及各部位Cd累积的影响.结果表明:①8种水分管理措施联合叶面喷施硅肥处理对水稻株高和分蘖数没有明显影响,但各处理均增加了水稻糙米生物量,增幅为1.7%~25.0%,其中成熟期淹水+叶面喷施硅肥处理(CY)下糙米生物量达到最高.②常规水分管理+叶面喷施硅肥处理(Si)对土壤Cd两种提取态含量无明显影响,而其他处理降低土壤交换态Cd含量7.8%~42.6%,降低土壤TCLP提取态Cd含量20.0%~40.8%.③常规水分管理+叶面喷施硅肥处理(Si)能降低水稻各部位Cd含量,糙米Cd含量下降了19.0%;其他处理显著降低了水稻各部位中Cd含量,其中仅成熟期湿润+叶面喷施硅肥处理(CS)降低糙米Cd含量降幅最大,降低了44.0%,其次为间歇淹水湿润+叶面喷施硅肥处理(JX)和仅灌浆期湿润+叶面喷施硅肥处理(GS),分别降低36.4%和31.8%.④在中重度Cd污染稻田建议采用仅成熟期湿润+叶面喷施硅肥处理(CS)和间歇淹水湿润+叶面喷施硅肥处理(JX),在不影响水稻产量的同时又显著降低糙米Cd含量.

关键词：水稻水分管理 Cd污染土壤硅肥组合技术措施

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外源磷对镉胁迫下水稻生长及镉累积转运的影响

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环境科学 2020年第10期41卷 4719-4725页

作者：霍洋仇银燕周航胡雨丹邓鹏辉魏宾纭辜娇峰刘俊廖柏寒中南林业科技大学环境科学与工程学院长沙410004 稻米品质安全控制湖南省工程实验室长沙410004 有色金属矿区耕地重金属污染生态阻抗技术研究衡阳市重点实验室衡阳421001

本研究通过水稻(黄华占)水培试验,在不同镉(Cd)浓度胁迫条件下,施加10.0~45.0 mg·L^-1外源磷(NaH2PO4),研究磷(P)对水稻植株Cd累积与转运的影响.结果表明:(1)随外源P浓度增加,水稻各部位生物量及光合色素(叶绿素a、叶绿素b和类胡... 详细信息

本研究通过水稻(黄华占)水培试验,在不同镉(Cd)浓度胁迫条件下,施加10.0~45.0 mg·L^-1外源磷(NaH2PO4),研究磷(P)对水稻植株Cd累积与转运的影响.结果表明:(1)随外源P浓度增加,水稻各部位生物量及光合色素(叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素)浓度均逐渐升高;(2)施加外源P使水稻的茎、叶、谷壳和糙米中Cd含量逐渐增加,水培溶液中Cd浓度为0.1 mg·L^-1和0.2 mg·L^-1胁迫下,糙米Cd含量分别增加了2.8%~22.8%和40.9%~61.8%;(3)施加外源P使水稻植株Cd累积量增加,水培溶液中Cd浓度为0.1 mg·L^-1和0.2 mg·L^-1胁迫下,Cd累积量范围分别从395.1μg·株-1和639.6μg·株-1增加到542.6μg·株-1和1082.0μg·株-1;(4)水稻根系P/Cd质量比随外源P施加量增加而增大,茎、叶、谷壳和糙米P/Cd质量比则呈下降趋势;增加外源P浓度使水稻根到茎(TF根-茎)和茎到叶(TF茎-叶)的Cd转运系数增加.水稻各部位中P和Cd表现出一定的协同作用,外源P促进了根系中Cd向地上部位转运,增加了糙米Cd含量.

关键词：磷镉水稻转运系数光合色素

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生物炭-植物修复重金属污染土壤的研究进展

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湖南生态科学学报 2023年第1期10卷 104-112页

作者：莫爱丽唐惠娟刘俊杨飞南华大学衡阳医学院基础医学院细胞生物学与遗传学教研室湖南衡阳421001 南华大学衡阳医学院基础医学院生态健康与人类重要疾病防控湖南省高校重点实验室湖南衡阳421001 南华大学衡阳医学院基础医学院有色金属矿区耕地重金属污染生态阻抗技术研究衡阳市重点实验室湖南衡阳421001 南华大学衡阳医学院基础医学院生物毒理与生态修复衡阳市重点实验室湖南衡阳421001 南华大学衡阳医学院公共卫生学院典型环境污染与健康危害湖南省重点实验室湖南衡阳421001

土壤中累积的过量重金属不仅对作物产生毒害作用,还可经由作物进入食物链损害动物和人类的健康。因此,土壤重金属污染是亟待解决的生态与农业问题。植物修复技术主要是利用植物对重金属的吸收、累积和转移从而实现对重金属污染土壤的修... 详细信息

土壤中累积的过量重金属不仅对作物产生毒害作用,还可经由作物进入食物链损害动物和人类的健康。因此,土壤重金属污染是亟待解决的生态与农业问题。植物修复技术主要是利用植物对重金属的吸收、累积和转移从而实现对重金属污染土壤的修复,成本低且绿色环保。生物炭具有比表面积大、表面官能团丰富等优良理化性质,可降低重金属的有效性和改善土壤理化性质,且促进植物生长、改变重金属在植株体内的累积分配格局。利用生物炭和植物联合修复重金属复合污染土壤,可以兼顾生态与经济效应。本文总结了生物炭修复、植物修复和生物炭-植物联合修复的研究进展,并探讨了三者的修复效应、机理及应用局限性,以期为相关研究提供借鉴。

关键词：重金属污染土壤生物炭植物修复

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美人蕉不同生长期生物量分配格局与重金属累积、分配特征

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环境化学 2020年第4期39卷 1031-1038页

作者：王涛段积德王锦霞刘俊胡劲松南华大学衡阳医学院衡阳421001 有色金属矿区耕地重金属污染生态阻抗技术研究衡阳市重点实验室衡阳421001 生物毒理与生态修复衡阳市重点实验室衡阳421001 生态健康与人类重要疾病防控湖南省高校重点实验室衡阳421001

为了探讨美人蕉不同生长期对土壤重金属的生态适应,通过盆栽试验探究了幼苗期、花蕾期、盛花期美人蕉植株的根系和地上部分的生物量及其累积重金属含量的特征与差异.结果表明,随美人蕉龄的增长,美人蕉整株生物量增长速度先快后慢,地上... 详细信息

为了探讨美人蕉不同生长期对土壤重金属的生态适应,通过盆栽试验探究了幼苗期、花蕾期、盛花期美人蕉植株的根系和地上部分的生物量及其累积重金属含量的特征与差异.结果表明,随美人蕉龄的增长,美人蕉整株生物量增长速度先快后慢,地上部分生长速度远高于根系,植株生物量分配格局逐渐向地上转移;美人蕉各生长期对As、Pb、Zn、Mg、Cd和Mn等重金属的富集能力各异,在幼苗期、花蕾期和盛花期对As、Pb、Zn、Mg的蓄积均为典型的根部积累型;对Cd和Mn的蓄积在幼苗期为根部积累型,在花蕾期和盛花期为地上积累型;美人蕉地上部分和根系累积的Cd、Pb、As含量分别高达11.096—25.692 mg·kg-1和13.503—20.923、9.206—24.57 mg·kg-1和51.126—161.783、0.914—1.447 mg·kg-1和1.228—7.254 mg·kg-1.美人蕉能修复复合重金属污染土壤.

关键词：美人蕉不同生长期生物量分配重金属累积与分配

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重金属污染土壤中施加荔枝木生物炭对向日葵植株吸收累积铅镉砷的影响

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生态与农村环境学报 2019年第12期35卷 1610-1616页

作者：刘俊朱宇李志良曾宪琳管庆莲胡劲松朱允华谢红艳李银银蔡元松王锦霞彭翠英南华大学衡阳医学院湖南衡阳421001 有色金属矿区耕地重金属污染生态阻抗技术研究衡阳市重点实验室湖南衡阳421001 生物毒理与生态修复衡阳市重点实验室湖南衡阳421001

在重金属复合污染的矿区菜地中,通过施用不同水平(w分别为2.5%、5%和10%)的荔枝木生物炭对土壤进行改良,研究向日葵(Helianthus annuus)植株的生物量,向日葵植株累积Pb、Cd和As的总量及其在各器官的分布。结果表明:随着生物炭施用量的增... 详细信息

在重金属复合污染的矿区菜地中,通过施用不同水平(w分别为2.5%、5%和10%)的荔枝木生物炭对土壤进行改良,研究向日葵(Helianthus annuus)植株的生物量,向日葵植株累积Pb、Cd和As的总量及其在各器官的分布。结果表明:随着生物炭施用量的增加,向日葵植株生物量显著增加,在生物炭用量为5%时,向日葵植株生物量达到最大值,但过量的生物炭抑制了向日葵的生长。生物炭增强了向日葵对重金属复合污染土壤的修复能力,向日葵植株累积的重金属总量比对照组显著增加,Pb、Cd和As的增长幅度分别为22.90%~58.92%、15.76%~42.25%和67.92%~109.78%。在重金属污染土壤施用生物炭,向日葵叶与花托中Pb、Cd和As的累积含量显著增加,根、茎和籽粒中的累积含量随生物炭用量的增加显著下降。向日葵籽粒中的Pb、Cd和As含量比对照组分别下降78.13%、46.18%和50.23%,但仍无法达到GB 2762—2017《国家食品安全标准食品中污染物限量》中坚果及籽类的限量标准〔w(Pb)≤0.2 mg·kg^-1,w(Cd)≤0.5 mg·kg^-1〕,仅可作为生物能源材料进行开发利用。

关键词：荔枝木生物炭向日葵铅镉砷吸收与累积

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