检索结果-内蒙古大学图书馆

沙眼衣原体主要外膜蛋白核酸疫苗诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫应答(英文)

免疫学杂志 2005年第6期21卷 457-459页

作者：李忠玉吴移谋余敏君陈超群湖南南华大学医学院微生物学教研室湖南衡阳421001

目的构建沙眼衣原体主要外膜蛋白核酸疫苗,并观察其诱导小鼠产生的体液免疫和细胞免疫。方法将核酸疫苗(pcDNA3.1MOMP)或对照空质粒(pcDNA3.1)注射于4～6周龄小鼠后腿股四头肌,每次剂量为100mg。间隔2周加强免疫2次。末次免疫后,ELISA... 详细信息

目的构建沙眼衣原体主要外膜蛋白核酸疫苗,并观察其诱导小鼠产生的体液免疫和细胞免疫。方法将核酸疫苗(pcDNA3.1MOMP)或对照空质粒(pcDNA3.1)注射于4～6周龄小鼠后腿股四头肌,每次剂量为100mg。间隔2周加强免疫2次。末次免疫后,ELISA法测定脾淋巴细胞培养上清液中IFNγ及小鼠血清中抗MOMP水平;MTT法测定脾淋巴细胞特异性增殖反应。结果小鼠接种核酸疫苗后,能产生特异性抗体,第3次免疫后抗体最高滴度达1∶1024,培养上清液中IFNγ达(532.0±45.4)pg/mL;实验组小鼠脾淋巴细胞刺激指数为3.94±0.25,其抗原特异性反应明显高于对照组。结论沙眼衣原体主要外膜蛋白核酸疫苗能刺激机体产生特异的细胞免疫和体液免疫。

关键词：沙眼衣原体 DNA疫苗体液免疫应答细胞免疫应答

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穿透支原体主要外膜蛋白pET20b(+)/p35重组载体的构建、表达及鉴定

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实用预防医学 2005年第2期12卷 263-265页

作者：左建宏谭立志朱翠明陈超群南华大学医学院微生物学教研室湖南衡阳421001

目的　构建高表达且稳定的pET2 0b(+ ) /p3 5重载体,能在其中进行诱导高表达并得到纯化的p3 5蛋白。　方法　运用Blast、Pfam等生物信息学手段对穿透支原体(Mpe) p3 5基因序列结构与功能预测,将p3 5基因全长插入原核表达载体pET2 0b(+ )... 详细信息

目的　构建高表达且稳定的pET2 0b(+ ) /p3 5重载体,能在其中进行诱导高表达并得到纯化的p3 5蛋白。　方法　运用Blast、Pfam等生物信息学手段对穿透支原体(Mpe) p3 5基因序列结构与功能预测,将p3 5基因全长插入原核表达载体pET2 0b(+ )中,在BL2 1StarTM(DE3 )进行诱导表达、用Ni柱纯化,在GSH -GSSH体系中逐渐降低其变性剂的方法复性蛋白,Western -blot进行鉴定。　结果　成功的构建了pET2 0b(+ ) /p3 5重组载体,并能在宿主菌中较高表达;此蛋白以包涵体的形式进行表达。　结论　得到了纯化的p3 5蛋白。

关键词：穿透支原体主要外膜蛋白 p35基因原核表达

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高等学校异步教学方式在卫生微生物学中的应用效果评价

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山西医科大学学报（基础医学教育版） 2005年第3期7卷 228-230页

作者：陈丽丽陈胜华刘碧源杨赟邓仲良封少龙南华大学公共卫生学院卫生微生物学教研室衡阳421001 南华大学医学院解剖学教研室

在高校卫生检验与医学检验专业卫生微生物学的教学过程中,尝试高等学校异步教学方式的问题化教学.通过问卷调查,结果表明:异步教学方式的问题化教学能激发学生的学习兴趣,培养学生分析问题、解决问题的能力,提高学生的创新意识,并能有... 详细信息

在高校卫生检验与医学检验专业卫生微生物学的教学过程中,尝试高等学校异步教学方式的问题化教学.通过问卷调查,结果表明:异步教学方式的问题化教学能激发学生的学习兴趣,培养学生分析问题、解决问题的能力,提高学生的创新意识,并能有效地促进教师不断地充实与更新自己的知识.

关键词：卫生微生物学教学方式高等学校医学检验专业教学过程卫生检验问卷调查学习兴趣分析问题培养学生解决问题创新意识

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湘南地区梅毒螺旋体基因分型的初步研究

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实用预防医学 2005年第3期12卷 486-488页

作者：詹利生曾铁兵严加林唐双阳吴仕艳吴移谋南华大学医学院微生物学教研室湖南衡阳421001 南华大学第二附属医院皮肤科

目的了解湘南梅毒螺旋体(Treponemapallidum,TP)的分子亚型的分布,为梅毒分子流行病学研究提供依据。方法收集湘南地区疑似硬下疳的标本52例,经TPpolAPCR筛选后,阳性者用PCR扩增各标本中TP的arp和tpr基因,酶切tpr基因扩增产物,分析各TP... 详细信息

目的了解湘南梅毒螺旋体(Treponemapallidum,TP)的分子亚型的分布,为梅毒分子流行病学研究提供依据。方法收集湘南地区疑似硬下疳的标本52例,经TPpolAPCR筛选后,阳性者用PCR扩增各标本中TP的arp和tpr基因,酶切tpr基因扩增产物,分析各TP菌株arp基因长度和tpr基因的限制性片段长度多态性(RFLP),进行分型。结果TPpolAPCR阳性者43例,可用于分型者38例,分为10个亚型,其中14d亚型为16例,其它亚型包括10d(2),12a(2),12g(1),13d(4),14a(3),14b(2),14f(2),15d(5),16d(1)。结论湘南地区存在TP的多亚型,以14d亚型为主(占42.1%)。

关键词：梅毒螺旋体聚合酶链反应限制性片段长度多态性分子亚型基因分型湘南步研究分子流行病学研究 PCR扩增基因扩增产物

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第10期24卷 807-811页

作者：曾焱华吴移谋余敏君朱翠明曾铁兵刘安元南华大学医学院微生物学与免疫学教研室衡阳421001

目的　了解穿透支原体潜在的致病性和穿透支原体脂质相关膜蛋白诱导小鼠巨噬细胞表达诱导性一氧化氮合酶 (iNOS)的分子机制。方法　用从穿透支原体提取的脂质相关膜蛋白刺激小鼠巨噬细胞 ,以RT PCR和Westernblot等方法分析诱导性一氧化... 详细信息

目的　了解穿透支原体潜在的致病性和穿透支原体脂质相关膜蛋白诱导小鼠巨噬细胞表达诱导性一氧化氮合酶 (iNOS)的分子机制。方法　用从穿透支原体提取的脂质相关膜蛋白刺激小鼠巨噬细胞 ,以RT PCR和Westernblot等方法分析诱导性一氧化氮合酶的表达和NO的产生。用间接免疫荧光和Westernblot检测经穿透支原体脂质相关膜蛋白处理的小鼠巨噬细胞中NF κB的激活和NF κB抑制剂PDTC(吡咯啉烷二甲基硫脲 )对iNOS的表达和NO产生的影响。结果　穿透支原体脂质相关膜蛋白以时间和剂量依赖方式刺激小鼠巨噬细胞产生NO ,且能激活NF κB诱导巨噬细胞表达i NOS的mRNA和蛋白 ,其mRNA和蛋白的表达水平能被PDTC所抑制。结论　由于穿透支原体脂质相关膜蛋白能通过激活NF κB诱导巨噬细胞表达诱导性一氧化氮合酶 ,因而可能是一个重要的致病因素。

关键词：巨噬细胞支原体脂质表达小鼠一氧化氮合酶膜蛋白 RNA 体脂 NF-κB

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沙眼衣原体主要外膜蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定

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中华皮肤科杂志 2004年第12期37卷 709-711页

作者：李忠玉吴移谋陈超群余敏君南华大学医学院微生物学教研室湖南省衡阳市421001

目的克隆沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)基因,构建原核表达重组载体,并通过***21实现MOMP的融合表达。方法用PCR法扩增MOMP基因,克隆插入到pUCm-T载体中,序列测定正确后,将其亚克隆到原核表达载体pET-22b(+)中,采用Ni-NTA亲和层析法纯化... 详细信息

目的克隆沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)基因,构建原核表达重组载体,并通过***21实现MOMP的融合表达。方法用PCR法扩增MOMP基因,克隆插入到pUCm-T载体中,序列测定正确后,将其亚克隆到原核表达载体pET-22b(+)中,采用Ni-NTA亲和层析法纯化表达产物,对表达产物进行SDS-PAGE和蛋白质印迹鉴定。结果PCR扩增出约1200bpDNA片段,序列测定证实与基因库登陆的D型沙眼衣原体一致;表达产物的相对分子质量为47000,与预期分子质量相符,蛋白印迹证实表达产物为特异性蛋白。结论沙眼衣原体MOMP基因可以在大肠杆菌中得到表达,其表达产物能与相应的抗体结合,为沙眼衣原体核酸疫苗的研究奠定了基础。

关键词：沙眼衣原体主要外膜蛋白表达产物大肠杆菌基因序列测定特异性蛋白 T载体亚克隆蛋白质印迹

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衡阳和江门地区梅毒螺旋体基因分型的初步研究

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中华皮肤科杂志 2004年第12期37卷 692-694页

作者：曾铁兵吴移谋黄澍杰吴志周南华大学医学院微生物学教研室衡阳421001 广东江门市皮肤病医院

目的了解湖南衡阳和广东江门地区梅毒螺旋体(TP)基因亚型的分布。方法收集衡阳和江门地区疑似硬下疳病例的标本85份,经TPpolAPCR筛选后,阳性者用PCR扩增各标本中TP的arp和tpr基因,酶切tpr基因扩增产物,分析各TP菌株arp基因长度和tpr基... 详细信息

目的了解湖南衡阳和广东江门地区梅毒螺旋体(TP)基因亚型的分布。方法收集衡阳和江门地区疑似硬下疳病例的标本85份,经TPpolAPCR筛选后,阳性者用PCR扩增各标本中TP的arp和tpr基因,酶切tpr基因扩增产物,分析各TP菌株arp基因长度和tpr基因的限制性片段长度多态性(RFLP),进行分型。结果TPpolAPCR阳性者69例,可用于分型者57例,分为10个亚型,其中14d亚型为26例,其他亚型包括10d(1),12a(3),12g(2),13d(6),14a(5),14b(2),14f(6),15d(5),16d(1);衡阳和江门地区TP基因亚型分布大致相同。结论衡阳和江门地区存在TP的多亚型,都以14d亚型为主(占45.6%),无明显地区性差异。

关键词： TP 江门地区 pr基因梅毒螺旋体 d亚型基因亚型阳性酶切标本 PCR

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巢式PCR扩增梅毒螺旋体polA及其临床应用的研究

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中国皮肤性病学杂志 2004年第2期18卷 74-76页

作者：曾铁兵吴移谋黄澍杰吴志周南华大学医学院微生物学教研室湖南衡阳421001 广东江门市皮肤医院广东江门529000

目的　建立一种检测临床标本中微量梅毒螺旋体 (Tp)的敏感、特异的方法。方法　运用常规及巢式PCR扩增了Tp的DNA多聚酶I基因 (polA)的特异性片段 ,检测了两方法的特异性和敏感性 ;与血清学方法比较 ,评价了两方法在诊断梅毒中的意义。... 详细信息

目的　建立一种检测临床标本中微量梅毒螺旋体 (Tp)的敏感、特异的方法。方法　运用常规及巢式PCR扩增了Tp的DNA多聚酶I基因 (polA)的特异性片段 ,检测了两方法的特异性和敏感性 ;与血清学方法比较 ,评价了两方法在诊断梅毒中的意义。结果　常规及巢式 polAPCR只在扩增Tp时有特异性产物 ,灵敏度分别约为 40个 /10 0 μl及 1个 /10 0 μl。检测 13 1份拟诊为梅毒的血清标本 ,血清学方法与巢式 polAPCR结果无显著性差异 ;巢式和常规 polAPCR结果有显著性差异 ,巢式PCR敏感性高于常规PCR。结论　巢式 polAPCR具有高度敏感、特异、标本处理简便等优点 ,适用于检测血清等标本中微量Tp ,可作为血清学方法的补充用于梅毒诊断。

关键词：梅毒螺旋体 polA 巢式聚合酶链反应 DNA多聚酶I基因梅毒诊断

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解脲脲原体临床株对氟喹诺酮类药物的敏感性研究

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实用预防医学 2004年第6期11卷 1124-1126页

作者：詹利生唐双阳张文波南华大学医学院微生物学教研室湖南衡阳421001

目的　检测自衡阳地区分离的解脲脲原体 (Uu)临床株对氟喹诺酮类药物的敏感性 ,为临床治疗提供参考依据。　方法　应用微量肉汤稀释法检测了 86株Uu对临床应用的六种氟喹诺酮类药物的敏感性。　结果　在六种药物中司帕沙星和加替沙星抗U... 详细信息

目的　检测自衡阳地区分离的解脲脲原体 (Uu)临床株对氟喹诺酮类药物的敏感性 ,为临床治疗提供参考依据。　方法　应用微量肉汤稀释法检测了 86株Uu对临床应用的六种氟喹诺酮类药物的敏感性。　结果　在六种药物中司帕沙星和加替沙星抗Uu活性最强 ,MIC50 分别为 0 .2 5 μg/mL和 0 .5 μg/mL ,MIC 90 均为 4μg/mL。其次为左氧氟沙星和氧氟沙星 ,MIC50 分别为 1μg/mL和 2 μg/mL ,MIC90 分别为 4μg/mL和 8μg/mL。诺氟沙星和环丙沙星的抗Uu活性较差。　结论　氟喹诺酮类药物司帕沙星、左氧氟沙星和加替沙星的抗Uu活性较老一代药物更强 ,而Uu对老一代氟喹诺酮类药物存在不同程度的耐药现象。

关键词：解脲脲原体氟喹诺酮类药物药物敏感性试验最低抑菌浓度

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沙眼衣原体60 kDa外膜蛋白基因的克隆与表达

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实用预防医学 2004年第1期11卷 7-10页

作者：陈超群吴移谋李忠玉朱翠明余敏君南华大学医学院微生物学教研室中国湖南衡阳421001

目的　克隆和表达沙眼衣原体 60kDa外膜蛋白 (Omp2 )基因。　方法　D型沙眼衣原体感染McCoy细胞后 ,抽提基因组DNA ,经PCR扩增出omp2基因片段 ,与 pUCm -T克隆载体连接 ,酶切纯化后克隆到原核表达载体pQE3 0 ,构建重组表达载体 pQE3 0 ... 详细信息

目的　克隆和表达沙眼衣原体 60kDa外膜蛋白 (Omp2 )基因。　方法　D型沙眼衣原体感染McCoy细胞后 ,抽提基因组DNA ,经PCR扩增出omp2基因片段 ,与 pUCm -T克隆载体连接 ,酶切纯化后克隆到原核表达载体pQE3 0 ,构建重组表达载体 pQE3 0 omp2 ,PCR、酶切及测序鉴定。IPTG诱导表达 ,SDS -PAGE检测有无蛋白的表达。　结果　 (1)获得长约 165 0bp的PCR产物 ,酶切结果显示所构建的重组质粒已成功地克隆了omp2基因 ,序列分析结果与已知omp2序列相同 ;(2 )SDS -PAGE检测表达产物 ,在相对分子量 60kDa处有表达条带 ;(3 )诱导表达之菌体超声破碎后 ,目的蛋白主要以包涵体形式存在。　结论　获得了Ctomp2基因片段 ,并在E .coliM

关键词：沙眼衣原体 omp2基因基因克隆表达

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