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中国药理学与毒理学杂志 2021年第10期35卷 757-758页

作者：周春红许霓珊曹惠慧余林中区锦莹刘俊珊南方医科大学中医药学院中药药理教研室广东广州510515

目的通过斑马鱼异体肝癌细胞移植模型和Hep3B细胞体外实验研究白花蛇舌草不同极性部位的抗肝癌作用。方法采用浸泡给药的方式确定白花蛇舌草的水、正丁醇、乙酸乙酯和石油醚提取部位对斑马鱼的体内毒性;建立斑马鱼异体荧光标记肝癌细胞... 详细信息

目的通过斑马鱼异体肝癌细胞移植模型和Hep3B细胞体外实验研究白花蛇舌草不同极性部位的抗肝癌作用。方法采用浸泡给药的方式确定白花蛇舌草的水、正丁醇、乙酸乙酯和石油醚提取部位对斑马鱼的体内毒性;建立斑马鱼异体荧光标记肝癌细胞移植模型,拍照记录斑马鱼卵黄囊内细胞荧光强度的变化,HE染色观察肝癌细胞的数目,评价白花蛇舌草不同极性部位提取物的体内抗肝癌作用;通过Hoechst染色观察斑马鱼卵黄囊内肝癌细胞的凋亡;通过MTT、Annexin V-FITC/PI双染实验和细胞周期分析检测白花蛇舌草乙酸乙酯部位对Hep3B细胞的细胞毒性、凋亡以及周期的影响;通过Western印迹法检测Hep3B细胞给药后PARP,Nur77,p-Nur77,JNK和p-JNK的表达。结果白花蛇舌草乙酸乙酯部位能显著抑制斑马鱼异体移植肝癌细胞的生长,时间、剂量依赖性地抑制Hep3B细胞增殖,促进其凋亡,并阻滞其细胞周期于G2/M期。此外,该提取物能降低Hep3B细胞中Nur77,p-Nur77,JNK和p-JNK的表达。结论白花蛇舌草乙酸乙酯部位可能通过抑制Nur77/JNK信号通路发挥抗肝癌作用。

关键词：白花蛇舌草抗肝癌斑马鱼

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感冒清热颗粒对风寒表证小鼠的保护作用

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中国药理学与毒理学杂志 2021年第10期35卷 790-791页

作者：刘珊宏夏玉英卢子滨曹惠慧刘俊珊余林中南方医科大学中医药学院中药药理教研室广东广州510515

目的感冒清热颗粒具有疏风散热、清热解表的功效,临床上常用于治疗风寒感冒。本研究观察感冒清热颗粒对风寒表证小鼠模型的影响,阐明其抗风寒感冒的作用机制,为临床应用提供实验依据。方法BALB/c小鼠70只,随机分为正常对照组、风寒模型... 详细信息

目的感冒清热颗粒具有疏风散热、清热解表的功效,临床上常用于治疗风寒感冒。本研究观察感冒清热颗粒对风寒表证小鼠模型的影响,阐明其抗风寒感冒的作用机制,为临床应用提供实验依据。方法BALB/c小鼠70只,随机分为正常对照组、风寒模型组、感冒清热颗粒3.6,7.2和14.4 g·kg^(-1)·d^(-1)组和阳性药物组(风寒感冒颗粒3.6 g·kg^(-1)·d^(-1)组和感康0.15片·kg^(-1)·d^(-1)组),每组10只。除正常对照组,其余组根据《中医实验动物学》采用风扇加寒冷体表降温吹风方法造模7 d,复制风寒犯表的太阳病动物模型。正常组不做任何处理饲养7 d。从开始造模第4天,药物组ig给药3 d,正常组和模型组ig给予等量生理盐水。期间记录各组动物的体重,第8天各组小鼠取血,处死后取肺、脾和胸腺,称重,计算肺、脾和胸腺的脏器系数,小鼠左肺固定后用于做病理切片HE染色,右侧肺组织匀浆检测其中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL^(-1)β的水平,抗凝血用于血常规检测。结果经风寒刺激7 d,模型组小鼠体重下降(P<0.01),感冒清热颗粒14.4 g·kg^(-1)·d^(-1)使其增加(P<0.05)。模型组小鼠肺指数升高(P<0.01),脾指数下降(P<0.01),胸腺指数无差异,感冒清热颗粒各剂量均抑制肺指数升高(P<0.01),对脾指数无影响。病理组织学检查显示,模型组肺间质增生,血管壁增厚,局部有出血,中性粒细胞浸润,部分区域出现代偿性空泡,感冒清热颗粒不同剂量组药物干预后缓解。模型组小鼠肺组织炎症因子TNF-α,IL^(-1)β和IL-6表达增多(P<0.05,P<0.01,P<0.01),感冒清热颗粒7.2和14.4 g·kg^(-1)·d^(-1)干预后炎症因子表达降低(P<0.01)。模型组小鼠外周血中红细胞、血小板与血红蛋白数量无显著性变化,白细胞水平下降(P<0.01),感冒清热颗粒干预后白细胞水平有所回升,但无显著性差异。在白细胞各个细胞群比例中,模型组淋巴细胞比例下降(P<0.01),单核细胞与中性粒细胞比例升高(P<0.01,P<0.05),高剂量感冒清热颗粒给药后淋巴细胞、单核细胞比例向正常组回归(P<0.05,P<0.01)。结论感冒清热颗粒对风寒表证小鼠有保护作用,表现为增加风寒表证小鼠的体重,抑制肺指数升高,减轻肺部炎症细胞浸润与出血,其机制与降低肺组织TNF-α,IL-6和IL^(-1)β有关。

关键词：感冒清热颗粒风寒感冒风寒表证模型抗炎

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紫花杜鹃30-38馏分抗登革2型病毒的机制

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中国药理学与毒理学杂志 2021年第10期35卷 799-800页

作者：晏丽君刘俊珊曹慧慧区锦莹余林中南方医科大学中医药学院中药药理教研室广东广州510515

目的体外实验评价紫花杜鹃30-38馏分(DJ 30-38)抗登革2型病毒(DENV-2)效果,并利用ICR乳小鼠模型进行抗病毒感染的验证。方法MTT法测药物对细胞毒性;CCK-8法检测药物对细胞的保护作用;结晶紫染色观察DJ 30-38不同浓度对DENV-2子代病毒释... 详细信息

目的体外实验评价紫花杜鹃30-38馏分(DJ 30-38)抗登革2型病毒(DENV-2)效果,并利用ICR乳小鼠模型进行抗病毒感染的验证。方法MTT法测药物对细胞毒性;CCK-8法检测药物对细胞的保护作用;结晶紫染色观察DJ 30-38不同浓度对DENV-2子代病毒释放的影响;实时荧光定量PCR检测不同浓度的DJ 30-38对DENV-2病毒复制中E和NS1蛋白基因表达的抑制率;Western印迹法检测不同浓度的DJ 30-38对DENV-2病毒中E和NS1蛋白表达的抑制。ICR乳小鼠分为空白、模型和DJ 30-38(5和10 mg·kg^(-1))4组,除空白组外的其余各组ICR乳小鼠颅内注射(400 PFU·mL^(-1))及ip给予(4×10^(5) PFU·mL^(-1))DENV-2病毒液20μL,空白对照组注射等量RPMI-1640培养基,造模当天,DJ 30-38组乳小鼠提前2 h ig给药,以后每隔24 h给药1次,每天观察并记录各组乳小鼠的体重及发病情况,计算各组症状评分和生存率,取乳小鼠脑做病理切片的HE染色,用实时荧光定量PCR检测其他各脏器病毒E和NS1蛋白基因表达水平。结果DJ 30-38能显著改善DENV-2感染BHK-21细胞引起的细胞病变效应,抑制病毒子代的释放,抑制DENV-2感染后E和NS1基因表达水平,能显著降低病毒感染后E和NS1蛋白的表达。在DENV-2感染的ICR乳小鼠模型中,DJ 30-38改善了病毒感染乳小鼠的症状评分,延长了生存时间,给药各组乳小鼠脑、心、肝、脾、肺、肾等脏器的病毒拷贝数与模型组相比均降低,且呈剂量依赖性。结论DJ 30-38具有抗DENV-2的作用。

关键词：登革热紫花杜鹃提取物抗病毒紫花杜鹃30-38馏分

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三七皂苷-3体外抗登革2型病毒作用

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中国药理学与毒理学杂志 2021年第10期35卷 742-742页

作者：何雪梅刘俊珊曹惠慧卢子滨余林中南方医科大学中医药学院中药药理教研室广东广州510515

目的研究三七皂苷-3(简称三七-3)体外抗登革2型病毒(DENV-2)的作用。方法采用DENV-2新几内亚株感染BHK-21细胞,通过CCK-8法评价三七-3对DENV-2感染细胞的保护作用;噬斑法检测DENV-2感染细胞后子代病毒的合成;实时荧光定量PCR法和Wester... 详细信息

目的研究三七皂苷-3(简称三七-3)体外抗登革2型病毒(DENV-2)的作用。方法采用DENV-2新几内亚株感染BHK-21细胞,通过CCK-8法评价三七-3对DENV-2感染细胞的保护作用;噬斑法检测DENV-2感染细胞后子代病毒的合成;实时荧光定量PCR法和Western印迹法检测病毒结构蛋白E和非结构蛋白NS1的mRNA和蛋白表达水平;免疫荧光法检测病毒复制中间体dsRNA以及E和NS1蛋白的合成,并通过时间点处理实验判断抗DENV-2的作用阶段。结果三七-3能保护DENV-2诱导的细胞死亡,其半数有效浓度为6.314μmol·L^(-1),抑制DENV-2诱导的子代病毒颗粒的释放,降低E和NS1的mRNA和蛋白表达水平,并抑制病毒dsRNA的合成,其抑制作用主要发生在病毒复制的早期阶段。结论三七-3具有显著的体外抗DENV-2的作用,有望成为抗登革病毒的候选药物。

关键词：三七皂苷-3 登革病毒抗病毒作用病毒复制

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甘草正丁醇提取物抑制登革2型病毒的作用

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中国药理学与毒理学杂志 2021年第10期35卷 748-748页

作者：石玲珠刘俊珊曹惠慧卢子滨余林中南方医科大学中医药学院中药药理教研室广东广州510515

目的对甘草正丁醇提取物抑制登革病毒(DENV-2)的活性进行了评价,并对其作用机制进行初步探讨。方法体外实验采用BHK-21细胞测定甘草正丁醇提取物对细胞的半数有毒浓度(CC50)以及对DENV-2的半数抑制浓度(IC50);通过CCK-8法在DENV-2感染... 详细信息

目的对甘草正丁醇提取物抑制登革病毒(DENV-2)的活性进行了评价,并对其作用机制进行初步探讨。方法体外实验采用BHK-21细胞测定甘草正丁醇提取物对细胞的半数有毒浓度(CC50)以及对DENV-2的半数抑制浓度(IC50);通过CCK-8法在DENV-2感染后不同时间点以及不同的感染阶段加入药物检测细胞存活率;通过噬斑实验检测子代病毒释放水平;通过qRT-PCR、Western印迹法和免疫荧光实验检测病毒E和NS1的表达。体内实验采用7日龄ICR乳小鼠,颅内加ip给予DENV-2建立全身性感染乳小鼠模型,分别于造模后的第1,3和5天ig给药进行治疗,每天观察并记录乳小鼠临床评分及生存率;采用qRT-PCR、Western印迹法和免疫荧光实验检测各组织病毒载量;通过ELISA检测脑、肝、脾炎症因子的表达;通过HE染色观察各组织病变。结果体外研究表明,甘草正丁醇提取物的CC50为(202.61±2.31)mg·L^(-1),IC50为(6.24±1.16)mg·L^(-1);细胞感染DENV-2的同时给予甘草正丁醇提取物可显著改善细胞死亡,减少子代病毒释放量并抑制病毒E和NS1蛋白表达。体内研究表明,甘草正丁醇提取物对感染DENV-2的ICR乳小鼠具有治疗作用,具体表现为临床评分改善,生存时间延长;同时乳小鼠组织病毒载量明显降低,有效调节病毒感染导致的炎症细胞因子白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α和IL^(-1)β的变化,进而减轻组织病变。结论甘草正丁醇提取物在体内体外均能显著抑制DENV-2感染,其通过靶向DENV-2上的包膜蛋白抑制病毒复制周期的吸附过程进而发挥抗病毒作用。提示甘草正丁醇提取物可能是一种有前景的治疗登革病毒的候选药物。

关键词：甘草正丁醇提取物登革病毒抗病毒作用吸附

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穿心莲内酯磺化物的抗炎活性评价

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中国药理学与毒理学杂志 2021年第10期35卷 801-801页

作者：杨汤佳刘俊珊曹惠慧区锦莹余林中南方医科大学中医药学院中药药理教研室广东广州510515

目的利用斑马鱼炎症模型评价穿心莲内脂磺化物的抗炎活性。方法采用斑马鱼硫酸铜急性炎症模型,尾鳍横切局部炎症模型,LPS卵黄囊显微注射全身炎症模型评价穿心莲内酯磺化物的抗炎效果。结果FL-2,FL-3,FL-5,FL^(-1)0,FL-24和FL-33可显著... 详细信息

目的利用斑马鱼炎症模型评价穿心莲内脂磺化物的抗炎活性。方法采用斑马鱼硫酸铜急性炎症模型,尾鳍横切局部炎症模型,LPS卵黄囊显微注射全身炎症模型评价穿心莲内酯磺化物的抗炎效果。结果FL-2,FL-3,FL-5,FL^(-1)0,FL-24和FL-33可显著抑制硫酸铜、尾鳍横切和内毒素诱导的斑马鱼中性粒细胞的迁移。结论FL-2,FL-3,FL-5,FL^(-1)0,FL-24和FL-33具有抗炎作用,提示其可以作为抗炎药物的候选药物。

关键词：炎症斑马鱼模型抗炎穿心莲内脂磺化物

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基于斑马鱼模型的康复新液药效学评价

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中国药理学与毒理学杂志 2021年第10期35卷 808-808页

作者：邹丽芳曹惠慧余林中区锦莹刘俊珊南方医科大学中医药学院中药药理教研室广东广州510515

目的利用斑马鱼人类疾病模型评价康复新液的促进血管新生、修复组织及抗炎作用。方法采用索拉菲尼诱导的节间血管缺陷模型评价康复新液促进斑马鱼血管生成的作用;通过斑马鱼的尾鳍横切模型评价康复新液促进尾鳍再生的作用;通过斑马鱼硫... 详细信息

目的利用斑马鱼人类疾病模型评价康复新液的促进血管新生、修复组织及抗炎作用。方法采用索拉菲尼诱导的节间血管缺陷模型评价康复新液促进斑马鱼血管生成的作用;通过斑马鱼的尾鳍横切模型评价康复新液促进尾鳍再生的作用;通过斑马鱼硫酸铜、尾鳍横切及卵黄囊显微注射内毒素的炎症模型评价康复新液的抗炎作用,并采用实时荧光定量PCR法检测康复新液对炎症因子白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达水平的影响。结果康复新液能提高斑马鱼的节间血管指数;增加斑马鱼横切尾鳍的再生长度;抑制硫酸铜、鱼尾鳍横切和内毒素诱导的斑马鱼中性粒细胞的迁移,降低内毒素刺激的斑马鱼IL-6和TNF-αmRNA的表达水平。结论康复新液具有促进斑马鱼血管新生、促进组织修复和抗炎的作用。

关键词：康复新液斑马鱼炎症血管新生组织修复

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凉膈散抗登革2型病毒的作用

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中国药理学与毒理学杂志 2021年第10期35卷 782-782页

作者：陈曦刘俊珊卢子滨曹惠慧余林中南方医科大学中医药学院中药药理教研室广东广州510515

目的通过体外实验和动物实验探讨凉膈散(LGS)抗登革2型病毒(DENV-2)的作用。方法体外实验以肝素为阳性药,通过预给药、与病毒联合给药和病毒感染后在给药的方式处理BHK-21细胞,以CCK-8检测细胞活性,Q-PCR和Western印迹法检测E和NS1基因... 详细信息

目的通过体外实验和动物实验探讨凉膈散(LGS)抗登革2型病毒(DENV-2)的作用。方法体外实验以肝素为阳性药,通过预给药、与病毒联合给药和病毒感染后在给药的方式处理BHK-21细胞,以CCK-8检测细胞活性,Q-PCR和Western印迹法检测E和NS1基因和蛋白的表达,噬斑检测子代病毒释放量评价凉膈散体外抗DENV-2的作用;动物实验以颅内注射加腹腔注射病毒的方法,于ICR乳小鼠上造模,HE染色评价脑和各脏器的病理变化,Q-PCR检测脑、血清、各脏器中E和NS1基因的变化,Western印迹法检测脑E和NS1蛋白的变化。结果体外实验显示,与病毒联合给药时凉膈散具有抗DENV2作用,且高剂量优于阳性药;凉膈散可抑制体内DENV-2,且可以延长感染病毒小鼠的生存时间以及改善临床症状。结论凉膈散具有抗DENV-2作用。

关键词：凉膈散登革病毒抗病毒 E NS1

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苦豆碱激活胆碱能通路发挥抗结肠炎作用

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中国药理学与毒理学杂志 2021年第10期35卷 752-752页

作者：许霓珊曹惠慧卢子滨余林中刘俊珊南方医科大学中医药学院中药药理教研室广东广州510515

目的利用小鼠结肠炎模型与Caco-2细胞屏障损伤模型评价苦豆碱的抗结肠炎作用及其机制。方法采用3%葡聚糖硫酸诱导小鼠结肠炎模型,采用脂多糖诱导Caco-2细胞屏障损伤模型;记录小鼠症状并进行疾病活动度指数(DAI)评分;通过HE染色检测结肠... 详细信息

目的利用小鼠结肠炎模型与Caco-2细胞屏障损伤模型评价苦豆碱的抗结肠炎作用及其机制。方法采用3%葡聚糖硫酸诱导小鼠结肠炎模型,采用脂多糖诱导Caco-2细胞屏障损伤模型;记录小鼠症状并进行疾病活动度指数(DAI)评分;通过HE染色检测结肠组织形态学变化并进行组织病理学评分;通过免疫组化,免疫荧光及Western印迹法检测结肠组织与Caco-2细胞occludin,ZO-1,claudin-1和E-cadherin的表达和分布;通过ELISA检测结肠组织与Caco-2细胞炎症因子白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达;通过Western印迹法检测结肠组织与Caco-2细胞中α烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)的表达。结果苦豆碱能减缓结肠炎小鼠的体重下降,改善其腹泻、便血、结肠缩短和上皮损伤等症状,提高DAI和组织病理学评分;恢复结肠组织及Caco-2细胞中连接蛋白occludin,ZO-1,claudin-1和E-cadherin的表达及分布;同时降低结肠组织及Caco-2细胞TNF-α和IL-6的表达水平;此外,苦豆碱剂量依赖性促进结肠组织与Caco-2细胞中α7nAChR的活化。结论苦豆碱可能通过激活胆碱能通路发挥抗结肠炎作用。

关键词：苦豆碱结肠炎 Caco-2

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痰热清注射液抗登革2型病毒的作用机制研究

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中国药理学与毒理学杂志 2021年第10期35卷 800-800页

作者：杨家彬刘俊珊曹惠慧余林中南方医科大学中医药学院中药药理教研室广东广州510515

目的探讨痰热清注射液抗登革2型病毒(DENV-2)的作用。方法不同稀释浓度的痰热清注射液作用感染DENV-2的huh-7,HepG2和MHCC97H肝癌细胞,实时荧光定量QPCR法检测huh-7细胞内病毒拷贝数;Western印迹实验检测huh-7细胞内病毒相关蛋白的表达... 详细信息

目的探讨痰热清注射液抗登革2型病毒(DENV-2)的作用。方法不同稀释浓度的痰热清注射液作用感染DENV-2的huh-7,HepG2和MHCC97H肝癌细胞,实时荧光定量QPCR法检测huh-7细胞内病毒拷贝数;Western印迹实验检测huh-7细胞内病毒相关蛋白的表达量;病毒蚀斑实验检测子代病毒的释放量,RNA-seq比较宿主细胞内先天免疫通路相关基因的表达变化。结果不同稀释浓度的痰热清注射液均能抑制细胞内DENV-2的RNA和蛋白的复制,并减能少子代病毒的释放;RNA-seq结果显示细胞内多个先天免疫信号通路受DENV-2影响,且痰热清注射液能调控相关基因的表达。结论痰热清注射液具有抗DENV-2的作用。

关键词：痰热清注射液登革病毒 RNA-seq

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