检索结果-内蒙古大学图书馆

南方医科大学学报 2020年第2期40卷 219-224页

作者：古文清潘文斌朱茜肖潇赵岩岩刘雅琴刘俊李明基础医学院细胞生物学教研室广东广州510515 中山大学孙逸仙纪念医院生物样本库广东广州510120 南方医科大学药学院广东广州510515 南方医科大学珠江医院泌尿外科广东广州510028

目的通过研究KIF3A在单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠和TGF-β1诱导的NRK-52E细胞中的表达情况,探讨KIF3A在肾间质纤维化中的作用。方法将36只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组(Sham,n=18)和单侧输尿管梗阻组(UUO,n=18),分别于术后7、14、21 d处... 详细信息

目的通过研究KIF3A在单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠和TGF-β1诱导的NRK-52E细胞中的表达情况,探讨KIF3A在肾间质纤维化中的作用。方法将36只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组(Sham,n=18)和单侧输尿管梗阻组(UUO,n=18),分别于术后7、14、21 d处死小鼠。苏木素-伊红(HE)染色、马松(Masson)三色法染色和天狼星红(Sirius Red)染色观察小鼠肾间质纤维化程度,RT-PCR、免疫组织化学(IHC)和免疫印迹(Western blot)检测小鼠肾组织KIF3A的表达和分布。免疫印迹检测小鼠肾组织KIF3A、E-cadherin和α-SMA蛋白的表达。TGF-β1诱导NRK-52E细胞转分化后,免疫印迹检测KIF3A、E-cadherin、α-SMA、Wnt4和β-catenin蛋白的表达。结果与Sham组相比,UUO小鼠肾间质纤维化程度随着梗阻时间延长而增加,表明造模成功。同时,KIF3A mRNA和蛋白表达均增高,于21 d达到高峰,α-SMA蛋白表达显著上调,E-cadherin蛋白表达明显降低。NRK-52E细胞发生转分化时,KIF3A蛋白的表达增多(P<0.001),同时wnt/β-catenin信号通路中Wnt4和β-catenin蛋白表达增加(P<0.05,P<0.0001)。结论KIF3A可能通过wnt/β-catenin信号通路介导的上皮细胞-间充质转化参与肾纤维化的发生发展过程。

关键词： KIF3A 肾间质纤维化 wnt/β-catenin信号通路 EMT

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长链非编码RNA——HPV致癌的重要“帮手”

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生命科学 2020年第11期32卷 1230-1236页

作者：吴潇婷刘洁周珏宇南方医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室广州510515 南方医科大学第二临床医学院广州510515 南方医科大学南方医院妇产科广州510515

高危人乳头瘤病毒(HPV) E6和E7在细胞恶性转化中极为关键。近年来,长链非编码RNA (long non-codingRNA,lncRNA)在HPV相关肿瘤中的作用逐渐为人们所关注,但lncRNA与E6和E7的关系却鲜有报道。鉴于HPV相关肿瘤中E6和E7与miRNA (microRNA)... 详细信息

高危人乳头瘤病毒(HPV) E6和E7在细胞恶性转化中极为关键。近年来,长链非编码RNA (long non-codingRNA,lncRNA)在HPV相关肿瘤中的作用逐渐为人们所关注,但lncRNA与E6和E7的关系却鲜有报道。鉴于HPV相关肿瘤中E6和E7与miRNA (microRNA)的相互作用已广为人知,相信HPV感染也能通过E6和E7调控lncRNA的表达,影响恶性肿瘤的进展。越来越多的研究提示,部分lncRNA在HPV感染后表达异常,其在病毒致癌过程中的作用及机制被逐步阐明。该文就lncRNA参与HPV致癌进程的最新进展作一综述。

关键词：长链非编码RNA(lncRNA) 人类乳头瘤病毒(HPV) 肿瘤

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基于CRISPR/Cas9-SAM系统CHD5基因过表达慢病毒载体的构建及对膀胱癌T24细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

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中国生物工程杂志 2020年第3期40卷 1-8页

作者：黄胜严启滔熊仕琳彭弈骐赵蕊南方医科大学珠江医院广州510282 南部战区总医院老年感染与器官功能支持重点实验室广州510010 南方医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室广州510515

目的:利用CRISPR/Cas9-SAM系统构建CHD5基因过表达慢病毒载体,并分析其对膀胱癌细胞T24增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:针对CHD5基因设计3个sgRNA(sgRNA-1、sgRNA-2、sgRNA-3),将sgRNA连入LV-sgRNA-MS2-P65-HSF1-Neo载体,经293T细胞包装后获得高滴度慢病毒颗粒。病毒以MOI=10感染膀胱癌细胞T24。RT-qPCR和Western blot分别检测感染病毒后T24细胞CHD5 mRNA和蛋白表达水平,CCK8实验、流式分析、划痕实验和Transwell实验检测CHD5过表达对T24细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。结果:成功构建CHD5过表达慢病毒载体。慢病毒感染T24细胞后,RT-qPCR和Western blot证实,T24细胞CHD5的mRNA和蛋白表达水平显著高于空白组和阴性对照组(P<0.05),并且sgRNA-3-MS2-P65-HSF1序列的作用最为显著。CCK8及流式分析结果显示,过表达CHD5抑制T24细胞增殖,促进凋亡,与对照组相比,均有统计学意义(P<0.001)。划痕和Transwell实验结果表明,过表达CHD5可抑制T24细胞迁移和侵袭能力(P<0.01)。结论:成功构建CHD5过表达慢病毒。过表达CHD5能促进膀胱癌细胞T24凋亡,抑制其增殖、迁移和侵袭能力。

关键词： CHD5 CRISPR/Cas9-SAM系统膀胱癌慢病毒

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X线对秀丽隐杆线虫DNA损伤修复基因表达的影响

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基础医学与临床 2021年第4期41卷 479-483页

作者：陈利娜刘志张超南方医科大学基础医学院生化与分子生物学教研室广东广州510515 南方医院超声科广东广州510000 湘南学院基础医学院湖南郴州423000

目的研究不同高剂量X线对秀丽隐杆线虫DNA损伤修复相关基因的表达和死亡率、发育力的影响。方法分别用200、400Gy X线照射秀丽隐杆线虫后,RT-qPCR检测14个DNA损伤修复相关基因的表达及各基因间相互作用。在线虫辐射后继续培养2 d,计算... 详细信息

目的研究不同高剂量X线对秀丽隐杆线虫DNA损伤修复相关基因的表达和死亡率、发育力的影响。方法分别用200、400Gy X线照射秀丽隐杆线虫后,RT-qPCR检测14个DNA损伤修复相关基因的表达及各基因间相互作用。在线虫辐射后继续培养2 d,计算秀丽隐杆线虫的存活率,以评估X线对线虫死亡率和生育力的影响。结果与对照组相比,X线使秀丽隐杆线虫多个DNA损伤修复相关基因表达异常,线虫死亡率增加(P<0.05),繁殖力下降(P<0.05)。结论X线可能是通过改变秀丽隐杆线虫多个DNA损伤修复相关基因的表达,促进细胞凋亡,抑制其繁殖能力。age-1、cep-1、ced-4、rad-51和daf-2等基因对辐射敏感,是潜在的放疗靶点。

关键词：电离辐射秀丽隐杆线虫基因表达凋亡生育力

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巨噬细胞mTOR活化促进小鼠机体有氧糖酵解

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赣南医学院学报 2020年第3期40卷 274-278页

作者：刘小琳柯志勇宋千成梁康檐南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室广东广州510515

目的:探讨巨噬细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)活性在有氧糖酵解中的调节作用。方法:对巨噬细胞特异性敲除TSC1小鼠(Lysm-Cre TSC1 flox/flox)和对照小鼠(TSC1 flox/flox)进行高脂饮食造模,通过葡萄糖糖耐量实验(IPGTT)和胰岛素耐受实... 详细信息

目的:探讨巨噬细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)活性在有氧糖酵解中的调节作用。方法:对巨噬细胞特异性敲除TSC1小鼠(Lysm-Cre TSC1 flox/flox)和对照小鼠(TSC1 flox/flox)进行高脂饮食造模,通过葡萄糖糖耐量实验(IPGTT)和胰岛素耐受实验(ITT)分析巨噬细胞mTOR活化对小鼠机体血糖的调节作用。雷帕霉素处理KO小鼠和WT小鼠的原代巨噬细胞,利用生化分析仪检测葡萄糖消耗和乳酸生成。用雷帕霉素(2 mg·g^-1)对两组小鼠灌胃处理,2周后行IPGTT实验。利用免疫荧光染色实验观察小鼠肝组织中6-磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-磷酸酶-3(PFKFB3)的分布。结果:通过高脂饮食造模后,小鼠体重明显增加,并出现了胰岛素抵抗。与WT小鼠比较,KO小鼠出现更加严重的胰岛素抵抗,胰岛素分泌的量也增多。雷帕霉素处理后,与WT小鼠相比,KO小鼠的原代腹腔巨噬细胞葡萄糖消耗量和乳酸生成均明显降低(P<0.05);小鼠进行雷帕霉素灌胃后,相比于WT小鼠,KO小鼠血糖值明显升高(P<0.05)。葡萄糖负荷30 min时血糖值达到最高,为21.85 mmol·L^-1。免疫荧光染色显示KO小鼠的肝组织有大量的PFKFB3蛋白表达。结论:巨噬细胞mTOR活化通过调节PFKFB3促进有氧糖酵解。

关键词：巨噬细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 6-磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-磷酸酶-3 有氧糖酵解

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巨噬细胞特异性敲除TSC1小鼠的构建

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宁夏医学杂志 2020年第5期42卷 385-387,I0001页

作者：刘小琳梁康檐南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室广东广州510515

目的为研究TSC1在巨噬细胞极化中的作用,拟建立巨噬细胞特异性敲除TSC1小鼠,提供稳定的动物模型。方法利用Cre-loxP系统构建巨噬细胞特异性敲除TSC1小鼠(LysM-Cre TSC1flox/flox),并通过PCR和Western-Blot鉴定模型建立是否成功。结果通... 详细信息

目的为研究TSC1在巨噬细胞极化中的作用,拟建立巨噬细胞特异性敲除TSC1小鼠,提供稳定的动物模型。方法利用Cre-loxP系统构建巨噬细胞特异性敲除TSC1小鼠(LysM-Cre TSC1flox/flox),并通过PCR和Western-Blot鉴定模型建立是否成功。结果通过PCR和Western-Blot鉴定LysM-Cre TSC1flox/flox模型建立成功,mTOR活性明显升高。结论成功构建巨噬细胞特异性敲除TSC1小鼠,为TSC1在巨噬细胞极化中的作用研究提供实验基础。

关键词：结节性硬化复合物1 巨噬细胞 mTOR 基因敲除

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鼹科长吻鼩鼹和库氏长吻鼹的首次转录组分析

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兽类学报 2020年第6期40卷 615-622页

作者：王琳琳丘银彬万韬王霞周鸿艳蒋学龙潘星华何锴南方医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室广东省单细胞技术与应用重点实验室陕西师范大学生命科学学院

现生的鼹科动物分布于欧亚大陆和北美大陆,包括54种已知物种。鼹科动物有丰富的生态类型,是研究适应性进化的较好模型。本研究通过二代测序的方法分别获得了长吻鼩鼹和库氏长吻鼹两个物种心脏和肺脏以及脾脏和肺脏的转录组数据。这两个... 详细信息

现生的鼹科动物分布于欧亚大陆和北美大陆,包括54种已知物种。鼹科动物有丰富的生态类型,是研究适应性进化的较好模型。本研究通过二代测序的方法分别获得了长吻鼩鼹和库氏长吻鼹两个物种心脏和肺脏以及脾脏和肺脏的转录组数据。这两个物种分别代表了分布于中国西南部、缅甸北部的没有特化的原始类群鼩鼹亚科以及高度适应地下生活的鼹亚科鼹族。我们首次报道了库氏长吻鼹在中国的分布。通过从头拼接,分别获得长吻鼩鼹和库氏长吻鼹197 092个和225 956个转录本,以及125 427个和94 023个unigene。通过与GenBank中的基因组注释文件比对,得到鼹科物种同源基因家族8 376个,及鼹科鼩鼱科同源基因家族8 114个。差异表达基因的各组织高表达基因中均找到10个以上组织特异性基因。然而BUSCO分析确定完整单拷贝基因在两个物种中分别为43.0%和56.6%,提示死亡后mRNA迅速降解并影响转录组拼接。比较两个物种肺部基因的表达差异发现库氏长吻鼹335个相对高表达的基因,其中包括HMGB1、HSPD1、SF3B1、COL3A1、SUMO1和JUNB等,已有报道表明上述基因可能与低氧或高海拔适应有关。

关键词：长吻鼩鼹库氏长吻鼹转录组测序从头组装

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长期ART中HIV-1抗体的水平变化特点及其与HIV-1储存库相关关系的研究

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传染病信息 2022年第1期35卷 46-50页

作者：张晴高林郭晓燕孜来古丽·米吉提郭云天 CHEN Wei-wei 焦艳梅王福生蚌埠医学院研究生院 233000 解放军总医院第五医学中心感染病医学部北京100039 北京大学基础医学院病原生物学系暨感染病研究中心 100191 首都医科大学附属北京地坛医院感染科 100015 新疆医科大学基础医学院微生物学教研室乌鲁木齐830017 南方医科大学临床医学院广州510515 Republic of Sierra Leone Armed Forces 34 Military HospitalTropic Infectious Diseases Provention and Control Center999127 Freetown

目的分析HIV-1感染者在长期抗反转录病毒治疗(antiretroviral therapy,ART)前后血浆中p24抗体和总HIV-1特异性抗体水平变化特点及其与HIV-1储存库关系。方法选取2009年11月—2013年7月于我中心接受ART满5年的27例HIV-1感染者作为研究对... 详细信息

目的分析HIV-1感染者在长期抗反转录病毒治疗(antiretroviral therapy,ART)前后血浆中p24抗体和总HIV-1特异性抗体水平变化特点及其与HIV-1储存库关系。方法选取2009年11月—2013年7月于我中心接受ART满5年的27例HIV-1感染者作为研究对象,采用荧光素酶免疫吸附试验和酶联免疫吸附试验,分别检测患者接受ART 0、1、3、5年时间点的p24抗体和总HIV-1特异性抗体的水平,同时对其与总HIV-1 DNA和细胞相关RNA(cell-associated RNA,CA-RNA)的水平进行相关性分析。结果在ART 0、1、3、5年时,p24抗体水平分别为2.450(1.910~5.460)、1.460(1.080~2.160)、1.280(1.120~1.800)、1.570(1.090~2.180)LU;总HIV-1特异性抗体水平分别为3.378(3.157~3.710)、3.489(3.237~3.622)、3.446(2.742~3.573)、3.336(2.860~3.566)。p24抗体与总HIV-1 DNA和CA-RNA的水平均呈正相关(r分别为0.407、0.305,P均<0.05);总HIV特异性抗体水平与总HIV-1 DNA和CA-RNA水平没有相关性(r分别为0.155、0.165,P均>0.05)。结论总HIV-1特异性抗体水平在ART期间没有明显变化,且与HIV-1储存库大小没有相关性,p24抗体水平随着ART时间增加呈逐渐降低的趋势,与HIV-1储存库的大小呈正相关,可为HIV-1特异性抗体和HIV-1储存库大小关系的研究提供依据。

关键词： HIV-1 HIV-1特异性抗体 p24抗体 HIV-1储存库总HIV-1 DNA 细胞相关RNA 抗反转录病毒治疗相关性

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精原干细胞的自我更新及分化调控的研究现状与展望

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发育医学电子杂志 2020年第4期8卷 378-384页

作者：罗芳李朝晖赵小阳南方医科大学基础医学院发育生物学教研室广东广州510515 南方医科大学顺德医院博士后工作站广东顺德528000

精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)是一种可维持雄性生育力的成体干细胞,与其周围的生殖系统体细胞之间形成复杂的相互作用,在睾丸中共同构成了可产生精子的微环境。为了生育能力的长期维持,SSCs需要在维持自我更新和分化之... 详细信息

精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)是一种可维持雄性生育力的成体干细胞,与其周围的生殖系统体细胞之间形成复杂的相互作用,在睾丸中共同构成了可产生精子的微环境。为了生育能力的长期维持,SSCs需要在维持自我更新和分化之间进行转换,而这种命运转换与其周围的体细胞形成的微环境密切相关。

关键词：精原干细胞分化调控生殖系统成体干细胞自我更新研究现状与展望生育能力体细胞

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基于四环素调控系统构建白蛋白启动子调控大鼠uPA转基因表达的慢病毒载体

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动物医学进展 2019年第8期40卷 29-33页

作者：张晟黎海燕廉梅刘宇肖东林晓琳南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室广东广州510515 南方医科大学基础医学院肿瘤研究所广东广州510515 南方医科大学实验动物中心广东广州510515

基于四环素调控系统构建白蛋白(albumin,Alb)启动子调控大鼠uPA(urokinase-type plasminogen activator,ruPA)转基因肝特异性过表达的慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-ruPA-T2A-CopGFP(pLATTRUTG)。以CTG0875-2-11质粒为模板,PCR扩增大鼠的uPA(ruPA)基因,3’端添加Flag标签,In-Fusion克隆至pLVX-Alb-TetOne-TRE-T2A-CopGFP(pLATTTG)质粒中,得到慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-ruPA-T2A-CopGFP(pLATTRUTG),所构建质粒经测序和酶切鉴定。将pLATTRUTG瞬时转染293T细胞,转染后24 h倒置荧光显微镜检测CopGFP表达;接着向6孔细胞培养板内加入强力霉素(Doxycycline,Dox),48 h后在倒置荧光显微镜下观察CopGFP表达(包括未加Dox的孔),随后收集细胞以提取总RNA和总蛋白,用于RT-qPCR检测ruPA及报告基因表达和Western blot检测标签蛋白Flag表达。酶切和测序确证我们成功构建了慢病毒载体pLATTRUTG;瞬转293T细胞后,24 h倒置荧光显微镜下可见零星细胞(约占0.1%)发弱的绿色荧光,加Dox 48 h后所有细胞展现强的绿色荧光,而不加Dox的孔内仍然只见到零星细胞(约占0.1%)发弱的绿色荧光。RT-qPCR和Western blot检测结果显示,与不加Dox的细胞相比,加Dox的细胞中ruPA、报告基因CopGFP和Flag表达水平显著升高。结果提示,成功基于四环素调控系统构建Alb启动子调控大鼠uPA转基因表达的慢病毒载体pLATTRUTG,为相关后续实验奠定了基础。

关键词：白蛋白启动子大鼠尿激酶桡足类绿色荧光蛋白四环素调控系统慢病毒载体

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