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中国热带医学 2008年第7期8卷 1112-1114页

作者：周军李建明杨发达柳玉红丁彦青南方医科大学南方医院病理科南方医科大学基础医学院病理学教研室教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室广东省分子肿瘤病理重点实验室广东广州510515

目的克隆人CDH22基因并构建其真核表达载体。方法设计CDH22特异性引物,提取人大肠癌细胞系SW480总RNA,用RT-PCR方法获取人CDH22cDNA,经T-A克隆,通过双酶切及测序鉴定,将CDH22克隆至pCDNA3/HA,构建人CDH22基因的真核表达载体pCDNA3/HA-CD... 详细信息

目的克隆人CDH22基因并构建其真核表达载体。方法设计CDH22特异性引物,提取人大肠癌细胞系SW480总RNA,用RT-PCR方法获取人CDH22cDNA,经T-A克隆,通过双酶切及测序鉴定,将CDH22克隆至pCDNA3/HA,构建人CDH22基因的真核表达载体pCDNA3/HA-CDH22,转染HEK293A细胞,用WesternBlot及免疫荧光细胞化学技术检测目的蛋白的表达。结果成功扩增出人CDH22全长cDNA,双酶切鉴定证实成功构建pCDNA3/HA-CDH22真核表达载体,测序结果表明CDH22全长cDNA与GeneBank中CDH22序列完全一致,转染HEK293A细胞后,可检测出Mr约为86KD的目的蛋白,而免疫荧光细胞化学技术也检测到蛋白表达。结论获得人CDH22基因全长cDNA并成功构建了CDH22真核表达载体,证实pCDNA3/HA-CDH22转染HEK293A细胞后可表达HA-CDH22蛋白,为深入研究CDH22基因在肿瘤发生发展中的作用奠定了基础。

关键词： CDH22 基因克隆真核表达

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同源性不同转移特性大肠癌细胞表面超微结构的原子力显微镜观察

同源性不同转移特性大肠癌细胞表面超微结构的原子力显微镜观察

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中华医学会病理学分会2007年学术年会暨第九届全国病理大会

目的探讨大肠癌细胞的表面形貌差异与其转移特性的相关性。方法应用光镜和原子力显微镜观察3种遗传背景一致,具有不同转移特性的大肠癌细胞株 SW620(选择淋巴道转移)、SW480 (血道和淋巴道转移)SW480/M(选择肝转移)的表面形貌结构。结果... 详细信息

目的探讨大肠癌细胞的表面形貌差异与其转移特性的相关性。方法应用光镜和原子力显微镜观察3种遗传背景一致,具有不同转移特性的大肠癌细胞株 SW620(选择淋巴道转移)、SW480 (血道和淋巴道转移)SW480/M(选择肝转移)的表面形貌结构。结果3个细胞系主要由4种形态细胞构成,包括类圆形细胞、单极细胞、纤维母细胞样细胞及瘤巨细胞。SW620瘤细变形明显纤维母细胞样细胞较多,表面有较多的微细绒毛和胞突,瘤细胞间黏附不紧。SW480/M4细胞具有上皮细胞分化的特点,主要由类圆形和单极细胞构成,细胞与细胞连接紧密,胞质融合,细胞膜表面特化结构不明显。SW480细胞形态介于 SW620和 SW480/M4 之间。结论常规培养下3种瘤细胞的固有的表面形貌存在差异,与其相对应转移特性具有相关性。

关键词：原子力显微镜结直肠癌超微结构转移

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人大肠癌细胞PRL-3基因启动子Snail结合位点的初步研究

人大肠癌细胞PRL-3基因启动子Snail结合位点的初步研究

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中华医学会病理学分会2007年学术年会暨第九届全国病理大会

作者：杨发达李建明周军柳玉红丁彦青南方医科大学南方医院病理科南方医科大学基础医学院病理学教研室广东省分子肿瘤病理重点实验室教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室南方医科大学南方医院病理科南方医科大学基础医学院病理学教研室广东省分子肿瘤病理重点实验室教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室南方医科大学南方医院病理科南方医科大学基础医学院病理学教研室广东省分子肿瘤病理重点实验室教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室南方医科大学南方医院病理科南方医科大学基础医学院病理学教研室广东省分子肿瘤病理重点实验室教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室南方医科大学南方医院病理科南方医科大学基础医学院病理学教研室广东省分子肿瘤病理重点实验室教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室

目的确定转录因子 Snail 可与 PRL-3 基因启动子区结合。方法应用生物信息学方法获得 PRL-3基因启动子区域,并对其潜在的 Snail 结合位点进行预测,进一步应用 Snail 抗体染色质免疫共沉淀技术结合 PCR 技术检测 PRL-3基因启动子序列,以... 详细信息

目的确定转录因子 Snail 可与 PRL-3 基因启动子区结合。方法应用生物信息学方法获得 PRL-3基因启动子区域,并对其潜在的 Snail 结合位点进行预测,进一步应用 Snail 抗体染色质免疫共沉淀技术结合 PCR 技术检测 PRL-3基因启动子序列,以确定转录因子 Snail 可与 PRL-3基因启动子区结合。结果应用 TRED 在线分析系统确定 PRL-3 基因的启动子区域位于 PRL-3基因上游-651bp 至 299bp 之间,在该启动子区域存在多个转录因子如 Snail,n-MYC,ARNT、E74A,NF-kappaa,NRF-2 及 AML-1等的结合位点;在启动子区域的—500bp 至—495bp 之间存在 Snail 结合的核心寡核苷酸序列 CACCTG,在其它多个区域存在多个类似这一核心序列的 DNA 序列;应用核染色质免疫共沉淀技术 (CHIP)结合 PCR 扩增的方法对人大肠癌细胞株 SW480细胞进行分析,发现 Snail 可与人大肠癌细胞株 SW480 PRL-3基因的启动子区域的 DNA 片断结合。结论转录因子 Snail 可与人大肠癌细胞 SW480 PRL-3基因启动子结合参与 PRL-3基因的调控。

关键词：染色质免疫共沉淀技术 Snail PRL-3 启动子

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122例胃癌患者预后影响因素分析

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中国热带医学 2009年第3期9卷 496-498页

作者：林婷丁彦青李建明南方医科大学南方医院病理科南方医科大学基础医学院病理学系广东省分子肿瘤病理重点实验室教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室广东广州510515

目的本研究旨在探讨胃癌患者临床病理特征及其与预后的关系。方法对2005年3月～2008年3月在南方医科大学南方医院普通外科进行胃癌切除手术患者进行随访并进行回顾性分析。采用Kaplan-Meier生存率分析和Cox比例风险模型进行单因素和多... 详细信息

目的本研究旨在探讨胃癌患者临床病理特征及其与预后的关系。方法对2005年3月～2008年3月在南方医科大学南方医院普通外科进行胃癌切除手术患者进行随访并进行回顾性分析。采用Kaplan-Meier生存率分析和Cox比例风险模型进行单因素和多因素分析。结果单因素分析显示TNM分期,组织学分型、肿瘤浸润深度、淋巴结转移与术后患者的生存率显著相关(P<0.05);性别、年龄、肿瘤部位及肿瘤分化程度不是影响患者预后的相关因素(P>0.05);Cox分析显示TNM分期是影响胃癌预后的独立因素(P<0.05)。结论TNM分期是影响胃癌患者预后的最重要因素;肿瘤类型、肿瘤浸润深度及淋巴结转移是判断胃癌预后的重要指标。

关键词：胃癌预后 Kaplan—Meier Cox多因素分析

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243例结直肠癌患者预后因素分析

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中国热带医学 2010年第1期10卷 102-103,106页

作者：张洋丁彦青李建明南方医科大学南方医院病理科南方医科大学基础医学院病理学系广东省分子肿瘤病理重点实验室教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室广东广州510515

目的目前结直肠癌发病率逐年上升,已经成为危害我国人民健康的常见原因之一。本研究旨在探讨结直肠癌患者临床病理特征及其与预后的关系。方法收集南方医科大学南方医院普通外科2005年1月～2008年9月期间结直肠癌患者情况,进行随访。选... 详细信息

目的目前结直肠癌发病率逐年上升,已经成为危害我国人民健康的常见原因之一。本研究旨在探讨结直肠癌患者临床病理特征及其与预后的关系。方法收集南方医科大学南方医院普通外科2005年1月～2008年9月期间结直肠癌患者情况,进行随访。选择年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤大体类型、组织类型、肠壁浸润深度、Dukes分期、是否存在淋巴结转移等8项临床病理指标,用单因素和多因素分析的方法研究其对243例结直肠癌患者预后的影响。结果单因素分析结果显示,年龄、Dukes’分期、是否存在淋巴结转移为影响结直肠癌患者预后的因素。COX比例危险回归模型多因素分析显示,仅年龄及是否存在淋巴结转移结直肠癌患者预后的独立影响因素。结论年龄和是否存在淋巴结转移是结直肠癌患者预后的重要指标。

关键词：结直肠肿瘤预后多因素分析

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构建荧光转基因小鼠模型整体水平观察B-LMP1基因功能的相关研究

构建荧光转基因小鼠模型整体水平观察B-LMP1基因功能的相关研究

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中华医学会病理学分会2007年学术年会暨第九届全国病理大会

作者：张庆玲杨玉芳丁彦青南方医科大学基础医学院病理学教研室南方医科大学南方医院病理科广东省分子肿瘤病理重点实验室教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室南方医科大学基础医学院病理学教研室南方医科大学南方医院病理科广东省分子肿瘤病理重点实验室教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室南方医科大学基础医学院病理学教研室南方医科大学南方医院病理科广东省分子肿瘤病理重点实验室教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室

目的建立 LMP1转基因小鼠整体水平探讨 LMP1基因对机体的影响及在鼻咽癌的发生发展中的作用。方法 1．采用目的 DNA 显微注射技术,建立 ED-L2-B-LMP1-EGFP 转基因小鼠。 2．应用 PCR、Southern Blot 和免疫组化技术对转基因小鼠进行鉴... 详细信息

目的建立 LMP1转基因小鼠整体水平探讨 LMP1基因对机体的影响及在鼻咽癌的发生发展中的作用。方法 1．采用目的 DNA 显微注射技术,建立 ED-L2-B-LMP1-EGFP 转基因小鼠。 2．应用 PCR、Southern Blot 和免疫组化技术对转基因小鼠进行鉴定;3．观察转基因小鼠的病理形态学改变。结果：***-L2-B-LMP1-EGFP 目的片段注射入874枚受精卵的精原核,545枚分别移植入 41只假孕鼠,9只回种假孕鼠产仔,共产仔35个, 受体鼠产仔率为22%,受精卵回种产仔率为6%;***、Southern Blot 和免疫组化技术鉴定证明 DNA 显微注射技术建立4只转基因首建鼠(阳性率为11%),其 F1代转基因小鼠有2只 LMP1基因阳性,而且 Southern Blot 阳性小鼠 LMP1基因表达也为阳性,主要呈上皮定位,表达部位包括鼻咽部上皮、皮肤表皮、胃肠道柱状上皮、肾脏小管上皮、腮腺上皮细胞和神经节内神经细胞细胞,肝脏则以少量枯否氏细胞和少量肝细胞散在阳性。 3．B-LMP1转基因小鼠鼻咽部观察到鳞状上皮轻度异型。结论 1．成功构建 ED-L2-B-LMP1-EGFP 转基因小鼠;2．B-LMP1基因可能是导致转基因小鼠鼻咽部轻度异型的路径之一。

关键词：鼻咽癌 EB 病毒 ED-L2 启动子潜伏膜蛋白1 慢病毒载体转基因小鼠

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CD73、CD24、Hsp27在大肠癌组织的表达及临床病理意义

CD73、CD24、Hsp27在大肠癌组织的表达及临床病理意义

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中华医学会病理学分会2007年学术年会暨第九届全国病理大会

作者：余力刘莉丁彦青南方医科大学基础医学院病理学教研室南方医科大学南方医院病理科广东省分子肿瘤病理重点实验室教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室南方医科大学基础医学院病理学教研室南方医科大学南方医院病理科广东省分子肿瘤病理重点实验室教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室南方医科大学基础医学院病理学教研室南方医科大学南方医院病理科广东省分子肿瘤病理重点实验室教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室

目的观察 CD73、CD24和 Hsp27基因蛋白在大肠癌组织的表达,探讨与大肠癌亲器官转移的相关性和临床意义。方法应用免疫组化技术检测了20例临床未转移性大肠癌和19例同时伴有淋巴结和肝脏转移大肠癌3个部位癌组织的表达。结果 CD24未转移... 详细信息

目的观察 CD73、CD24和 Hsp27基因蛋白在大肠癌组织的表达,探讨与大肠癌亲器官转移的相关性和临床意义。方法应用免疫组化技术检测了20例临床未转移性大肠癌和19例同时伴有淋巴结和肝脏转移大肠癌3个部位癌组织的表达。结果 CD24未转移大肠癌表达阳性率为65%,转移性大肠癌原发灶表达阳性率为100%,转移性大肠癌原发灶 CD24的表达强度与未转移大肠癌的表达差异不显著(U=144．000,P=0．126);在大肠癌原发灶、淋巴结转移灶和肝转移灶的表达阳性率分别为100%、100%和63%,转移性大肠癌原发灶表达阳性率为100%,淋巴转移灶癌组织 CD24的表达与肝转移灶和原发灶比较差异显著(U=51．500,P =0．000;U=81．000,P=0．001);原发灶和肝转移灶比较,CD24的表达差异不显著。(U=141．500, P=0．190)。CD73在未转移大肠癌表达阳性率为 50%,转移性大肠癌原发灶 CD73表达阳性率为 100%,转移性大肠癌原发灶 CD73的表达强度与未转移大肠癌的表达差异显著(U=108．500,P= 0．009);在转移性大肠癌原发灶、淋巴结转移灶和肝转移灶的表达阳性率均为100%;在肝转移灶表达较强,表达值++的例数达78．95%。肝转移灶癌组织 CD73的表达与淋巴转移灶和原发灶比较,差异显著(U=89．000,P=0．003：U=62．500,P= 0．000);原发灶和淋巴结转移灶 CD73的表达无明显差异(U=163．000,P=0．551)。Hsp27在未转移大肠癌表达阳性率为60%,转移性大肠癌原发灶表达阳性率为100%,转移性大肠癌原发灶 Hsp27的表达强度与未转移大肠癌的表达强度比较无明显差异(U=132．000,P=0．063);在转移性大肠癌原发灶和肝转移灶表达阳性率100%,淋巴结转移灶 68．42%,在肝转移灶表达较强,表达值++的例数达47．37%。肝转移灶癌组织 Hsp27的表达与淋巴转移灶比较,差异显著(U=77．500,P=0．001);Hsp27 的表达,原发灶与淋巴结转移灶比较差异显著(U =111．000,P=0．021),肝转移灶癌组织 Hsp27表达与原发灶比较无明显差异(U=119．500,P= 0．056)。结论与大肠癌淋巴结转移相关,可能是大肠癌淋巴转移的预测因子之一;CD73、Hsp27 的高表达与大肠癌肝转移有关。

关键词：大肠癌组织原发灶淋巴结转移灶 Hsp27 临床病理意义

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结直肠癌转移相关基因Tiam1功能的初步研究

结直肠癌转移相关基因Tiam1功能的初步研究

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中华医学会病理学分会2007年学术年会暨第九届全国病理大会

作者：刘莉丁彦青南方医科大学基础医学院病理学教研室南方医科大学南方医院病理科广东省分子肿瘤病理重点实验室教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室南方医科大学基础医学院病理学教研室南方医科大学南方医院病理科广东省分子肿瘤病理重点实验室教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室

目的探讨结直肠癌转移相关基因 Tiaml 功能及其在肿瘤转移中的作用机制。方法应用免疫组化 S-P 法,检测 Tiaml 在结直肠癌、正常结直肠黏膜、淋巴结转移癌及结直肠腺瘤组织中蛋白的表达;利用基因转染技术将 Tiaml/C1199HA cDNA 导入内... 详细信息

目的探讨结直肠癌转移相关基因 Tiaml 功能及其在肿瘤转移中的作用机制。方法应用免疫组化 S-P 法,检测 Tiaml 在结直肠癌、正常结直肠黏膜、淋巴结转移癌及结直肠腺瘤组织中蛋白的表达;利用基因转染技术将 Tiaml/C1199HA cDNA 导入内源性不表达 Tiaml 基因的人结直肠癌 HT29细胞株中,观察 Tiaml 基因转染前后,细胞增殖、体外侵袭、成瘤能力及体内转移能力的变化;利用阳离子脂质体 LipofectamineTM2000将 pEGFP-N1质粒转染人大肠癌 SW480细胞,获得稳定表达绿色荧光蛋白的结肠癌细胞株 SW480/EGFP+：通过结肠癌原位手术移植的方法建立结肠癌原位及转移模型;利用 iRNA 技术动物体内动态观察 Tiaml 表达沉默对结直肠癌细胞生物学特性的影响;利用基因芯片和比较蛋白质组学技术分析 Tiaml 在结直肠癌增殖、侵袭和转移中的作用。结果免疫组化结果显示 Tiaml 在正常结直肠黏膜、腺瘤、癌和淋巴结转移癌四种类型的组织中表达明显不同,差异具有显著性;建立了 Tiaml 质粒的转染和稳定表达 Tiaml 的结直肠癌细胞株及整体可视化结肠癌原位及转移动物模型;采用手术原位移植的方法建立结肠癌可视化原位动物模型,移植6周后,75%发生了腹腔转移,50% 发生了肝转移：通过结直肠癌可视化动物模型,我们观察了 Tiaml 基因表达沉默后对结直肠癌增殖和转移能力的影响。将结直肠癌细胞接种于裸鼠的皮下,通过30天连续的观察,发现 Tiaml 基因表达沉默后,显著性地抑制了结直肠癌细胞的体内增殖能力,增殖差异从第15天开始,到第30天,差异达到1．3倍。将 Tiaml 表达沉默的细胞接种于裸鼠结肠原位后,细胞的转移能力受到了限制。在 SW480/EGFP+/mock 组,75%(6/8)裸鼠发生了腹腔转移,37．5%(3/8)裸鼠出现肝转移,12．5% (1/8)形成肺转移,而在 SW480/EGFP+/Tiaml- 组只有37．5%(3/8)形成腹腔转移,未发现裸鼠形成远处转移。利用 Affymetrix 公司的 HG-U133 plus 寡核苷酸芯片对 SW480/EGFP+/mock 和 SW480/EGFP+细胞的基因表达谱进行分析,获得 Tiaml 相关基因1026个,包括与 Tiaml 作用协同的基因647个,作用拮抗的基因379个;利用蛋白质组学技术共鉴定了20个差异表达的蛋白质点, 这些差异蛋白质中有一些同肿瘤的增殖、转移密切相关;利用基因芯片和比较蛋白质组学技术筛选与 Tiaml 作用的基因和/或蛋白质,转录组和蛋白质组对接的基因/蛋白质有3个,2个是与 Tiaml 基因功能协同的高迁移率族蛋白(high motility group box 1,HMGB1)和磷酸甘油酸变位酶 (phosphoglycerate mutase,PGAM1),他们随着 Tiaml 基因的表达上调而上调,表达沉默而下调;另一个是与 Tiaml 基因功能拮抗的膜联蛋白4 (annexinA4,ANXA4),它随着 Tiaml 基因的表达上调而下调,表达沉默而上调。结论 Tiaml 基因是结直肠癌增殖、侵袭、转移的促进基因：Tiaml 可能参与多条信号通路来介导它在结直肠癌中的作用,在相互作用的基因中 HMGB1、PGAM1和 ANXA4与 Tiaml 关系密切,他们可能是 Tiaml 信号通路中的新基因。

关键词：结直肠癌 Tiam1 基因增殖侵袭转移

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结直肠癌CK7阳性表达的的临床病理学意义

结直肠癌CK7阳性表达的的临床病理学意义

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中华医学会病理学分会2007年学术年会暨第九届全国病理大会

作者：余力丁彦青肖莎赖飞菊卢贤南方医科大学基础医学院病理学教研室南方医科大学南方医院病理科广东省分子肿瘤病理重点实验室教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室南方医科大学基础医学院病理学教研室南方医科大学南方医院病理科广东省分子肿瘤病理重点实验室教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室南方医科大学珠江医院病理科南方医科大学珠江医院病理科南方医科大学珠江医院病理科

目的探讨 CK7阳性表达在结直肠癌的临床病理学意义。方法应用免疫组织化学 S-P 法检测 CK7、CK20在68例结直肠癌、20 例管状腺瘤、5例锯齿状腺瘤和20例增生性息肉的表达。结果 68例直结肠癌 CK20表达阳性率89．7%;CK7表达阳性率39．7%,... 详细信息

目的探讨 CK7阳性表达在结直肠癌的临床病理学意义。方法应用免疫组织化学 S-P 法检测 CK7、CK20在68例结直肠癌、20 例管状腺瘤、5例锯齿状腺瘤和20例增生性息肉的表达。结果 68例直结肠癌 CK20表达阳性率89．7%;CK7表达阳性率39．7%,其中结肠癌阳性率35．7%(15/42),直肠癌42．3%(11/26)：管状腺瘤 CK20表达阳性率100%,CK7表达阴性：锯齿状腺瘤和腺瘤增生性息肉 CK20表达阳性率100%,CK7表达阳性率分别为40%和30%。在结肠癌,CK7阳性表达与 Dukes’分期、腺癌分化程度及发生部位无明显相关性。结论 CK7 很可能是增生性息肉-锯齿状腺瘤-癌变途径发生的结直肠癌标志物之一,检测结直肠粘膜息肉样变 CK7的表达,可能对判断结肠息肉癌变具有重要意义。 CK7和 CK20已广泛联合用于检测各种原发或转移性腺癌,以帮助确定转移性腺癌的原发部位。结肠黏膜可恒定表达细胞角蛋白(CK)20, 但不表达 CK7,最近有文献报告及我们在工作中发现部分结直肠癌表达于 CK7,其临床病理意义尚不明确。为此本文采用免疫组织化学方法检测了 CK7在结直肠癌的表达情况并对其临床病理学意义进行了初步探讨。

关键词：结直肠癌增生性息肉 CK7 阳性表达锯齿状腺瘤临床病理学

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