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南方医科大学学报 2011年第7期31卷 1179-1182页

作者：田杰徐川杨敏慧李祖国南方医科大学南方医院病理科南方医科大学基础医学院病理学教研室广东广州510515

目的通过基因重组技术构建pcDNA3.0-RGC32重组质粒,并检测其对细胞骨架的影响。方法扩增RGC32的全长并定向克隆到真核表达载体pcDNA3.0,获得重组质粒pcDNA3.0-RGC32,转染SW480细胞,采用G418筛选单克隆,Westernblot检测转染前后SW480细胞... 详细信息

目的通过基因重组技术构建pcDNA3.0-RGC32重组质粒,并检测其对细胞骨架的影响。方法扩增RGC32的全长并定向克隆到真核表达载体pcDNA3.0,获得重组质粒pcDNA3.0-RGC32,转染SW480细胞,采用G418筛选单克隆,Westernblot检测转染前后SW480细胞中RGC32的表达水平,并制作转染前后SW480细胞骨架标本,并采用划痕实验观察细胞的迁移能力。结果 pcDNA3.0-RGC32真核表达载体构建成功,转染重组载体后细胞中RGC32的表达量明显增多。转染重组质粒前,SW480细胞骨架中微丝纤维束少而短、极性不明显;转染重组载体后的细胞微丝纤维束数量增多,变长,有了明显的极性,并且可见细胞膜向前伸出丝状结构的伪足或者是片状结构的伪足,细胞骨架发生了重组,并且过表达后细胞的迁移能力增强。结论通过过表达RGC32,促进细胞骨架重组,有利于细胞运动,推测细胞骨架重组是RGC32促进肿瘤转移的重要机制。

关键词：补体应答基因-32 细胞骨架转移结直肠癌迁移能力

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稳定表达新抑癌基因WTX的胃癌BGC-823/WTX-EGFP细胞株的建立

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南方医科大学学报 2011年第3期31卷 392-396页

作者：陈可绪王啓名黄怡哲吴焕张庆玲南方医科大学南方医院病理科南方医科大学基础医学院病理学教研室广东广州510515

目的构建含有全长WTX(Wilms tumor gene on the X chromosome)目的基因的表达载体,建立稳定表达WTX基因的胃癌BGC-823/WTX-EGFP细胞系,为WTX基因功能研究提供保障。方法以人胚肾293FT细胞为模板,经PCR扩增获得全长WTX cDNA序列,将全长WT... 详细信息

目的构建含有全长WTX(Wilms tumor gene on the X chromosome)目的基因的表达载体,建立稳定表达WTX基因的胃癌BGC-823/WTX-EGFP细胞系,为WTX基因功能研究提供保障。方法以人胚肾293FT细胞为模板,经PCR扩增获得全长WTX cDNA序列,将全长WTX目的基因序列克隆入带有绿色荧光蛋白报告基因的pEGFP-N1表达载体,建立pEGFP-WTX表达载体。经限制性内切酶酶切鉴定、测序并转染293FT细胞观察报告基因表达情况,判断pEGFP-WTX表达载体构建是否成功。构建成功的pEGFP-WTX表达载体转染人胃癌BGC-823细胞,建立稳定表达WTX的BGC-823/WTX-EGFP细胞。qRT-PCR及免疫组化检测转染细胞WTX表达。结果 PCR方法从人胚肾293FT细胞扩增获得全长WTX cDNA,经测序鉴定序列完全正确;pEGFP-WTX质粒DNA经酶切鉴定片段大小正确、转染294FT细胞可见清晰的绿色荧光表达。BGC-823/WTX-EGFP细胞能够稳定表达WTX。结论本研究成功构建了含有全长WTX cDNA的表达载体系统,建立了稳定表达WTX的BGC-823/WTX-EGFP细胞,为WTX基因功能研究奠定了良好基础。

关键词： WTX 293FT细胞载体构建

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长非编码MALAT1基因在人鼻咽癌细胞株的表达及生物学意义

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南方医科大学学报 2013年第5期33卷 692-697页

作者：谢林英胡志燕王晓燕李祖国南方医科大学南方医院病理科广东广州510515 南方医科大学基础医学院病理学教研室广东广州510515

目的探讨MALAT1在鼻咽癌细胞细胞株中的表达及生物学功能。方法通过Real-time PCR检测MALAT1基因在鼻炎癌细胞株5-8F、C666-1、CNE-1、CNE-2、HONE-1、6-10B及永生化鼻咽上皮细胞NP69株中的表达;采用RNAi技术和RNA激活技术,构建MALAT1... 详细信息

目的探讨MALAT1在鼻咽癌细胞细胞株中的表达及生物学功能。方法通过Real-time PCR检测MALAT1基因在鼻炎癌细胞株5-8F、C666-1、CNE-1、CNE-2、HONE-1、6-10B及永生化鼻咽上皮细胞NP69株中的表达;采用RNAi技术和RNA激活技术,构建MALAT1慢病毒干扰载体和激活载体载体并稳定转染鼻咽癌细胞株CNE-1,采用CCK8、平板克隆、划痕等试验分析MALAT1基因对CNE-1细胞生物学行为的影响。结果 MALAT1在高转移的鼻咽癌细胞株中高表达,在正常鼻咽上皮细胞低表达;经激活过表达MALAT1后,CNE-1细胞的上皮性标志物E-Cadherin的表达显著下调,间质细胞标志物Vimentin表达上调,侵袭转移能力明显增强(P<0.05)。结论 MALAT1基因上调能够促进鼻咽癌CNE-1细胞的增殖、侵袭和转移能力。

关键词： MALAT1 鼻咽癌基因表达生物学功能

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一种特异性识别小细胞肺癌细胞的小分子肽

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生物化学与生物物理进展 2006年第6期33卷 562-566页

作者：郭琳琅郭颖 DERICK LAU 肖莎许寅超申洪南方医科大学珠江医院广州510282 University of California at Davis Cancer Center USA 南方医科大学基础医学院病理学教研室广州510515

应用“一个珠子一个化合物”的组合化学肽库技术,筛选得到特异性识别小细胞肺癌细胞(DMS53)的小分子肽.初次筛选共得到32个与DMS53阳性结合的珠子,经氨基酸序列分析后发现,含有cNGRXXXc或cXNGRXXc肽链结构的序列共有10个.再次合成三种... 详细信息

应用“一个珠子一个化合物”的组合化学肽库技术,筛选得到特异性识别小细胞肺癌细胞(DMS53)的小分子肽.初次筛选共得到32个与DMS53阳性结合的珠子,经氨基酸序列分析后发现,含有cNGRXXXc或cXNGRXXc肽链结构的序列共有10个.再次合成三种有代表性的小分子肽,发现cFNGRQQc与DMS53的结合率明显高于其他小分子肽.选择cFNGRQQc作进一步的细胞特异性研究,发现cFNGRQQc与DMS53的粘附特异性明显高于其他细胞系,对cFNGRQQc的结构分析显示,-NGR-及六肽长度对小分子肽与DMS53细胞的粘附非常重要.用抗整合素、E-cadherin、NCAM及ICAM的抗体或多肽阻断小分子肽与DMS53细胞表面的相应受体结合,未见明显的阻断效应.小分子肽与DMS53细胞表面的结合位点有待于进一步证实.

关键词：小分子肽组合化学小细胞肺癌

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婴幼儿DiGeorge综合征五例尸体解剖病理分析

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中华病理学杂志 2012年第11期41卷 742-746页

作者：邓永键唐娜赵亮陈娟芝丁彦青乔东访南方医科大学南方医院病理科广州510515 南方医科大学基础医学院法医学教研室广州510515

目的分析免疫缺陷性疾病DiGeorge综合征（DGS）的病理表现。方法对5例DGS病死患儿进行尸体解剖并进行组织形态观察，收集临床资料进行分析。结果5例患儿均为男性，年龄分别为生后4d、1个月、7个月、10个月和13个月，均并发严重的病毒感... 详细信息

目的分析免疫缺陷性疾病DiGeorge综合征（DGS）的病理表现。方法对5例DGS病死患儿进行尸体解剖并进行组织形态观察，收集临床资料进行分析。结果5例患儿均为男性，年龄分别为生后4d、1个月、7个月、10个月和13个月，均并发严重的病毒感染而死亡。尸检发现胸腺皮质淋巴细胞缺乏／消失，髓质淋巴细胞稀少，上皮细胞突出，胸腺小体钙化。扁桃体、淋巴结、脾脏和回肠淋巴组织内T细胞缺乏。其中3例患者同时伴甲状旁腺发育不全，先天性室间隔肥厚等。结论在遇到婴幼儿严重感染时应注重免疫功能检测，应针对淋巴造血系统的异常表现综合分析，确定DGS的诊断。

关键词： DiGeorge综合征尸体解剖 T淋巴细胞

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NK细胞与K562细胞之间相互免疫编辑作用及其对NK细胞杀伤活性的影响

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吉林大学学报（医学版） 2007年第4期33卷 630-633页

作者：郭坤元梅家转姜振宇姚开泰南方医科大学珠江医院血液科南方医科大学基础医学院病理学教研室广东广州510515 吉林大学第一医院血液肿瘤科南方医科大学基础医学院病理学教研室

目的:探讨NK细胞与K562细胞混合培养前、后其杀伤活性的变化及分子机制。方法:流式细胞仪检测NK细胞与K562细胞混合培养前、后细胞表面相应分子的变化,LDH释放法测定效靶比20∶1时NK细胞对K562细胞的杀伤活性。结果:相互编辑前,K562细... 详细信息

目的:探讨NK细胞与K562细胞混合培养前、后其杀伤活性的变化及分子机制。方法:流式细胞仪检测NK细胞与K562细胞混合培养前、后细胞表面相应分子的变化,LDH释放法测定效靶比20∶1时NK细胞对K562细胞的杀伤活性。结果:相互编辑前,K562细胞表面MICA/MICB的表达率为(79.90±0.87)%,NK细胞表面NKG2D、KIR2DL1和KIR3DL1的表达率分别为(98.27±0.67)%、(45.70±1.22)%和(35.60±1.35)%。相互编辑后,K562细胞表面MICA/MICB和NK细胞表面NKG2D的表达率分别为(35.56±1.01)和(34.67±3.88)%,均明显低于编辑前(P=0.000);NK细胞表面KIR2DL1和KIR3DL1的表达率分别为(47.20±1.08)%和(34.03±1.20)%,与编辑前比较差异均无显著性(P>0.05)。效靶比20∶1时,NK细胞对编辑后的K562细胞的杀伤活性为(24.07±0.58)%,编辑后的NK细胞对K562细胞的杀伤活性为(16.95±2.00)%,均明显低于编辑前NK细胞对K562细胞的杀伤活性[(54.03±3.46)%](P=0.000)。结论:NK细胞与K562细胞持续性接触后,双方发生了相互免疫编辑作用;NK细胞的杀伤活性下降,其分子机制是细胞表面相应的配受体发生了变化。

关键词： K562细胞杀伤细胞,天然 NKG2D MHCI类链相关分子免疫编辑

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人结肠癌细胞Dickkopf-1的表达水平及意义

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南方医科大学学报 2013年第6期33卷 923-925,933页

作者：于倩杨磊丁彦青赵震刘会平南方医科大学南方医院病理科南方医科大学基础医学院病理学系//广东省分子肿瘤病理学重点实验室广东广州510515

目的检测六株结肠癌细胞中Dickkopf-1(DKK1)的表达并探讨其意义。方法在6株结肠癌细胞(SW480、SW620、HT29、LS174T、LOVO、HCT116)分别应用qPCR方法检测DKK1的mRNA表达水平。用Western blot方法和细胞免疫组化方法检测DKK1的蛋白表达... 详细信息

目的检测六株结肠癌细胞中Dickkopf-1(DKK1)的表达并探讨其意义。方法在6株结肠癌细胞(SW480、SW620、HT29、LS174T、LOVO、HCT116)分别应用qPCR方法检测DKK1的mRNA表达水平。用Western blot方法和细胞免疫组化方法检测DKK1的蛋白表达情况。结果荧光定量分析显示,DKK1在HT29、HCT116中的表达高于其他四株细胞(P<0.05);Western blot显示,DKK1在HCT116、HT29中的表达同样高于其他四株细胞;细胞免疫组化染色显示,DKK1在六株结肠癌细胞株中呈阳性表达。结论 DKK1在6株人结肠癌细胞系中的表达具有差异性。

关键词：人结肠癌细胞株 Dickkopf-1 时实定量PCR Western blotting 细胞免疫组织化学

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散发性乳腺浸润性导管癌中BRCA1表达及临床意义

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中国肿瘤临床 2009年第2期36卷 83-86页

作者：王辛熊静波黎相照褚红娟张弓杨建芳赵彤南方医科大学附属南方医院病理科广州市510515 南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室

目的：研究散发性乳腺浸润性导管癌（invasive ductal carcinoma，IDC）（breast cancer 1 BRCA1）基因的表达及其与其临床病理特征之间的关系。方法：采用免疫组化sP三步法检泖167例乳腺浸润性导管癌，53例乳腺腺病患者的石蜡标本BRCA... 详细信息

目的：研究散发性乳腺浸润性导管癌（invasive ductal carcinoma，IDC）（breast cancer 1 BRCA1）基因的表达及其与其临床病理特征之间的关系。方法：采用免疫组化sP三步法检泖167例乳腺浸润性导管癌，53例乳腺腺病患者的石蜡标本BRCA1的表达。从病理科的档案提取患者的年龄，肿物大小，淋巴结转移情况，ER，PR，Her-2表达结果，分析BRCA1的表达和患者的年龄，肿物大小，淋巴结转移情况及ER，PR，Her－2表达的关系。结果：BRCA1蛋白在IDC组织表达率56．7％（38／67），癌旁组织表达率80．0％（36／45），乳腺腺病组织表达率92．5％（49，53）。阳性细胞定位除细胞核外，也见于胞浆。IDC癌组织与癌旁组织、乳腺腺病组织比较，BRCA1阳性表达率均下降，均有显著性差异（P〈0．05）。BRCAI的表达与淋巴结转移呈负相关（r=-0．137，P〈0．05），与ER、PR、Her－2的表达均呈负相关（r值分别为－0．439，－0．250，－0．363，P〈0．05），与年龄、肿物大小无明显相关性（P〉0，05）。结论：BRCA1蛋白可作为估计乳腺癌生物学行为和预后的潜在指标。

关键词：散发性乳腺浸润性导管癌 BRCAl蛋白免疫组织化学

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人鼻咽癌细胞株CNE2对NK细胞KIR/NKG2D受体的免疫编辑作用及其对NK细胞杀伤功能的影响

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南方医科大学学报 2007年第3期27卷 247-249页

作者：郭坤元梅家转姚开泰南方医科大学基础医学院病理学教研室广东广州510515 南方医科大学珠江医院血液科广东广州510282

目的探讨NK细胞与表达NKG2D配体的人鼻咽癌细胞株CNE2混合培养后4、24、48h时KIR、NKG2D的变化及其对NK细胞杀伤CNE2细胞活性的影响。方法PCR-SSP法检测CNE2细胞HLA-A、B、Cw表型、NK细胞KIR表型(选择3例健康者为试验对象),流式细胞仪... 详细信息

目的探讨NK细胞与表达NKG2D配体的人鼻咽癌细胞株CNE2混合培养后4、24、48h时KIR、NKG2D的变化及其对NK细胞杀伤CNE2细胞活性的影响。方法PCR-SSP法检测CNE2细胞HLA-A、B、Cw表型、NK细胞KIR表型(选择3例健康者为试验对象),流式细胞仪检测对照组(新鲜分离的NK细胞)KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1、NKG2D的表达情况。IL2组(IL2培养的NK细胞)、CNE2组(CNE2、IL2、NK细胞混合培养)培养后4、24、48h时KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1、NKG2D的表达情况,LDH释放法测定IL2组及CNE2组培养24h后的NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性。结果CNE2细胞表面HLA-A、B、Cw表型为A2,24;B18,35;Cw4,7。3例健康者均表达KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1。CNE2组4、24、48h时KIR2DL1、KIR2DL3表达较对照组、IL2组明显升高(P<0.01),NKG2D表达较对照组、IL2组明显降低(P<0.01),KIR3DL1表达与对照组、IL2组相比无明显变化(P>0.05)。IL2组4、24、48h时KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1及NKG2D表达与对照组相比无明显变化(P>0.05)。IL2组、CNE2组培养24h后的NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性在效靶比10∶1时分别为(26.96±1.47)%和(2.74±1.64)%,两者相比差异有统计学意义(P<0.01);效靶比20∶1时分别为(35.74±3.59)%和(4.57±2.41)%,两者相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论NK细胞与NKG2D配体阳性的肿瘤细胞持续性接触,下调NK细胞表面NKG2D表达,上调NK细胞表面与HLAI类分子相结合的KIR表达,导致NK细胞对靶细胞杀伤活性减低。本研究阐明了编辑后的NK细胞杀伤活性减低的分子基础,同时提示阻断HLAI类分子与KIR的结合或者增强NK细胞表面NKG2D的表达将有利于提高NK细胞杀伤肿瘤细胞的活性。

关键词：鼻咽肿瘤自然杀伤细胞 NKG2D 杀伤细胞免疫球蛋白样受体免疫编辑

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MiR-124通过靶向PRRX1调节结直肠癌细胞的辐射敏感性

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南方医科大学学报 2016年第8期36卷 1110-1116页

作者：林水苗夏琼张余琴孙爱民石玉生郑林陈龙华南方医科大学南方医院放疗科广东广州510515 南方医科大学影像系广东广州510515 暨南大学附属第一医院肿瘤科广东广州510632 南方医科大学基础医学院病理教研室广东广州510515 南方医科大学南方医院病理科广东广州510515

目的检测结直肠癌细胞及组织标本中miR-124的表达,探讨其与辐射敏感性的关系。方法 q RT-PCR检测结直肠癌细胞株和组织标本中miR-124的表达,建立过表达和干扰miR-124细胞株,功能实验探讨其对结直肠癌细胞辐射敏感性的影响;生物信息学预... 详细信息

目的检测结直肠癌细胞及组织标本中miR-124的表达,探讨其与辐射敏感性的关系。方法 q RT-PCR检测结直肠癌细胞株和组织标本中miR-124的表达,建立过表达和干扰miR-124细胞株,功能实验探讨其对结直肠癌细胞辐射敏感性的影响;生物信息学预测miR-124下游调控的靶基因,双荧光素酶报告系统进一步验证。结果 miR-124在结直肠癌细胞株和组织标本中表达下调;过表达miR-124增强结直肠细胞辐射敏感性,反之,抑制miR-124后细胞辐射敏感性降低;miR-124通过直接抑制PRRX1调节结直肠细胞辐射敏感性。结论 miR-124可以通过直接靶向PRRX1增加结直肠癌细胞的辐射敏感性,为提高临床结肠癌辐射敏感性提供一个靶点。

关键词：结直肠癌 miR-124 放射敏感性 PRRX1

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