检索结果-内蒙古大学图书馆

南方医科大学学报 2009年第3期29卷 433-436,445页

作者：曾曙光张积仁章锦才吴世卿刘启才艾伟健薛国初南方医科大学附属口腔医院/广东省口腔医院广东广州510280 南方医科大学珠江医院肿瘤中心广东广州510282 广州医学院实验医学研究中心广东广州510182

目的利用pIRES-EGFP载体构建含有人巨细胞病毒(cytomegaloviru,CMV)启动子调控表达的结核杆菌热休克蛋白70(mtHSP70)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因双顺反子真核表达载体pCMV-hsp70-IRES-EGFP。方法根据mtHSP70基因全长cDNA的特异引物... 详细信息

目的利用pIRES-EGFP载体构建含有人巨细胞病毒(cytomegaloviru,CMV)启动子调控表达的结核杆菌热休克蛋白70(mtHSP70)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因双顺反子真核表达载体pCMV-hsp70-IRES-EGFP。方法根据mtHSP70基因全长cDNA的特异引物PCR扩增获得mtHSP70基因序列。将PCR产物进行T载体克隆获得重组质粒PMD-18T-mtHSP70,测序分析选定序列正确的克隆提取质粒,用限制性内切酶Xho I和EcoR I酶切pMD18T-TK和pCMV-IRES-EGFP质粒。将mtHSP70基因定向亚克隆至pCMV-IRES-EGFP载体,酶切鉴定,构建获得含mtHSP70和EGFP基因的重组质粒。Lipofectamine介导下转染B16细胞,并分别在荧光显微镜下观察EGFP的表达和以Westernblot检测mtHSP70蛋白表达情况。结果酶切见特异酶切图谱,该载体在瞬时表达时获得mtHSP70/EGFP的良好表达。结论含mtHSP70和EGFP基因双顺反子真核表达载体pCMV-mtHSP70-IRES-EGFP构建成功,为研究基于以GFP为报告基因的mtHSP70的肿瘤DNA疫苗对肿瘤的治疗作用及机制奠定了实验基础。

关键词：结核杆菌热休克蛋白70 增强型绿色荧光蛋白真核表达免疫治疗,肿瘤

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姜黄素对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭的抑制作用

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中国生物制品学杂志 2013年第11期26卷 1610-1616页

作者：李静曹友德江进重庆医科大学基础医学院病理教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的研究姜黄素对侵袭相关因子中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)表达的调控,初步探讨姜黄素在防治乳腺癌侵袭转移中可能存在的新的作用机制。方法以高侵袭性乳腺癌细胞株MDA-MB-231... 详细信息

目的研究姜黄素对侵袭相关因子中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)表达的调控,初步探讨姜黄素在防治乳腺癌侵袭转移中可能存在的新的作用机制。方法以高侵袭性乳腺癌细胞株MDA-MB-231为研究对象,采用不同剂量姜黄素处理,并使用核转录因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)特异性抑制剂Bay-117082(20μmol/L)对比观察。MTT法检测5、10、15、20、25、30、35、40、50μmol/L姜黄素作用24、48、72 h对细胞的毒性作用;Transwell小室侵袭试验法检测5、10、15μmol/L姜黄素对细胞的侵袭能力,黏附试验法检测对细胞的黏附能力;Western blot法检测5、10、15μmol/L姜黄素、20μmol/L Bay-117082及15μmol/L姜黄素+20μmol/L Bay-117082对细胞中核转录因子κB抑制剂α(inhibitorαofκB,IκBα)磷酸化的IκBα(phosphorylated-IκBα,p-IκBα)及NGAL蛋白表达水平的影响,RT-PCR法检测对细胞中NGAL基因mRNA转录水平的影响。结果姜黄素浓度>15μmol/L,作用时间>24 h时,对细胞的生长抑制呈时间和剂量依赖性(P<0.001),当姜黄素浓度≤15μmol/L,作用时间为24 h时,对细胞无明显毒性作用,细胞存活率>90%;随着姜黄素浓度的增加,细胞侵袭能力和黏附能力逐渐降低,以15μmol/L姜黄素作用效果最明显(P<0.05);姜黄素对p-IκBα、NGAL蛋白表达的抑制作用与NF-κB特异性抑制剂Bay-117082相似,且呈剂量依赖性(P<0.05),而对IκBα蛋白的表达无明显影响;姜黄素可明显抑制NGAL基因mRNA转录水平,其抑制作用呈剂量依赖性(P<0.05),且Bay-117082抑制NGAL基因mRNA转录水平的作用与15μmol/L姜黄素相似。结论姜黄素可通过抑制NF-κB信号通路的活化及此信号通路靶基因NGAL的表达降低乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭性。

关键词：姜黄素脂质运载蛋白乳腺癌核转录因子-κB 侵袭

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SHIP1基因过表达非小细胞肺癌细胞系的建立及其对细胞增殖能力的影响

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中国肿瘤生物治疗杂志 2018年第7期25卷 680-686页

作者：陶星宇付桥粉王莹宋鑫南方医科大学基础医学院肿瘤研究所广东广州510515 昆明医科大学第三附属医院暨云南省肿瘤医院肿瘤生物治疗中心云南昆明650118

目的:观察SHIP1对NSCLC细胞增殖的影响。方法:由NCBI Gene数据库查询获得人SHIP1基因CDS区,插至载体p TSB-CMV-MCS-SBP-3Flag-EGFP,构建SHIP1真核过表达质粒;进一步利用其构建SHIP1过表达慢病毒。用该慢病毒感染A549、SPCA-1和PC-9细胞... 详细信息

目的:观察SHIP1对NSCLC细胞增殖的影响。方法:由NCBI Gene数据库查询获得人SHIP1基因CDS区,插至载体p TSB-CMV-MCS-SBP-3Flag-EGFP,构建SHIP1真核过表达质粒;进一步利用其构建SHIP1过表达慢病毒。用该慢病毒感染A549、SPCA-1和PC-9细胞株,获得SHIP1稳定过表达NSCLC细胞系。Western blotting和q RT-PCR分别从蛋白水平和m RNA水平检测SHIP1的表达变化。采用MTT法和克隆形成实验检测过表达SHIP1的PC-9细胞增殖活力和克隆形成能力。Western blotting检测AP-1蛋白复合体各组分的表达。结果:SHIP1真核过表达质粒经测序证实构建成功。稳定过表达SHIP1的A549、SPCA-1和PC-9细胞,在荧光显微镜下可见均一表达绿色荧光。与阴性对照组比较,细胞中SHIP1在m RNA(P<0.01)及蛋白水平均明显升高。在PC-9细胞中,过表达SHIP1使细胞增殖、克隆形成能力降低(均P<0.01),p-c-Jun、Fos B等表达降低。结论:成功构建了稳定过表达SHIP1的A549、SPCA-1和PC-9细胞模型;过表达SHIP1可通过抑制AP-1家族蛋白抑制NSCLC细胞增殖能力。

关键词：多磷酸肌醇-5-磷酸酶非小细胞肺癌基因重组稳定过表达细胞增殖

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GM130对胃癌细胞O-糖基化及细胞粘附能力的影响

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重庆医科大学学报 2016年第6期41卷 563-568页

作者：苏琳茜冯阳阳管停宏张婉玉易永芬重庆医科大学基础医学院病理学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的:初步探讨沉默高尔基体基质蛋白130(golgi matrix protein 130,GM130)基因对胃癌细胞MKN-45 O-糖基化及细胞粘附能力的影响。方法:通过si RNA干扰胃癌细胞中GM130的表达水平,用Lipofectamine 2000将GM130-si RNA转染入MKN-45细胞。... 详细信息

目的:初步探讨沉默高尔基体基质蛋白130(golgi matrix protein 130,GM130)基因对胃癌细胞MKN-45 O-糖基化及细胞粘附能力的影响。方法:通过si RNA干扰胃癌细胞中GM130的表达水平,用Lipofectamine 2000将GM130-si RNA转染入MKN-45细胞。实验分为GM130-si RNA组、阴性对照组和空白对照组。分别用q RT-PCR和Western blot检测转染后各组中GM130、N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(polypeptide N-acetylgalactosaminyl transferase 2,pp Gal NAc-T2)、核心1β3半乳糖基转移酶(core 1 synthase,glycoprotein-N-acetylgalactosamine 3-β-galactosyltransferase1,C1Gal-T1)、β-半乳糖α-2,3-唾液酸转移酶1(beta-galactoside alpha-2,3-sialyltransferase,ST3Gal-1)m RNA和蛋白表达的变化。应用凝集素流式细胞术检测3组细胞中α2,3唾液酸残基糖链结构的表达水平。肿瘤细胞与内皮细胞粘附实验及基质胶粘附实验检测细胞粘附能力。结果:q RT-PCR和Western blot结果显示GM130基因与蛋白水平明显受到抑制,表明转染成功;GM130-Si RNA组C1Gal-T1、ST3Gal-1的m RNA和蛋白表达水平均明显降低(P均<0.05),pp Gal NAc-T2在3组中无明显变化(P>0.05),α2,3唾液酸糖链结构的表达量降低(P<0.05),细胞粘附能力下降(P<0.05)。结论:在MKN-45细胞中,下调GM130后,可能通过下调C1Gal-T1、ST3Gal-1的表达影响胃癌细胞O-糖基化,降低肿瘤细胞粘附能力。

关键词：沉默高尔基体基质蛋白130 RNA干扰胃癌糖基化粘附

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Sulfiredoxin-1通过调节peroxiredoxins表达提高大鼠星形胶质细胞抗氧化作用

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基础医学与临床 2014年第9期34卷 1193-1198页

作者：周杨周云川巫静娴喻姗姗赵涌重庆医科大学基础医学院病理学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的探讨内源性抗氧化小分子蛋白Sulfiredoxin-1（Srxn1）对H2O2诱导的星形胶质细胞的抗氧化作用以及对内源性氧化应激防御系peroxiredoxins的调节作用.方法 Srxn1干扰慢病毒载体转染体外培养的大鼠原代星形胶质细胞;构建H2O2氧化应激... 详细信息

目的探讨内源性抗氧化小分子蛋白Sulfiredoxin-1（Srxn1）对H2O2诱导的星形胶质细胞的抗氧化作用以及对内源性氧化应激防御系peroxiredoxins的调节作用.方法 Srxn1干扰慢病毒载体转染体外培养的大鼠原代星形胶质细胞;构建H2O2氧化应激模型,采用LDH方法检测细胞损伤程度,用超氧化物歧化酶（SOD）分析细胞内氧化应激状态;Western blot检测Srxn1的表达与Prdx Ⅰ～Ⅳ和Prdx-SO2/3H（过氧化Prdx）活性的关系.结果 1）ShSrxn1干扰后,Srxn1蛋白水平下调59.2％（P＜0.01）,基因水平下调63.6％（P＜0.01）.2）干扰Srxn1增加H2O2后LDH漏出率（P＜0.01）并使氧化应激损伤显著加重、使Prdx Ⅰ ～Ⅳ的表达降低,Prdx-SO2/3H的表达显著增高（P＜0.01或P＜0.05）.结论 Srxn1减轻H2O2诱导的星形胶质细胞的氧化应激损伤,并可能是通过调节Prdxs的活性来完成的.

关键词： Sulfiredoxin-1 干扰星形胶质细胞 H2O2 peroxiredoxin

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靶向SATB1基因的短发夹RNA诱导肺癌A549细胞凋亡

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肿瘤 2012年第7期32卷 501-506页

作者：蒋金曹友德磨娜莫显刚重庆医科大学基础医学院病理教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 贵阳医学院附属医院综合病房贵阳550004

目的:探讨靶向SATB1(special AT-rich sequence-binding protein-1)基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对肺癌A549细胞凋亡的影响及其可能的机制。方法:构建靶向SATB1基因的shRNA重组质粒SATB1-shRNA,采用脂质体法将其转染至A549细胞;分别采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测A549细胞中SATB1、Bcl-2、BaxmRNA和SATB1、Bcl-2、Bax、caspase3蛋白的表达水平;FCM检测A549细胞的凋亡率。结果:成功构建了SATB1-shRNA重组质粒;SATB1-shRNA转染A549细胞后,SATB1、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达下调,Bax mRNA和Bax、caspase3蛋白表达上调(P<0.05)。SATB1-shRNA转染组细胞凋亡率[(14.18±1.59)%]较对照组[(1.84±0.57)%]明显增加(P<0.01)。结论:SATB1-shRNA可显著下调肺癌A549细胞中SATB1基因的表达水平并诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2基因表达所引起的级联效应有关。

关键词：肺肿瘤 RNA,小分子干扰细胞凋亡基因,SATB1

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HBx诱导小鼠肝前体细胞上皮-间质转化

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第2期29卷 146-149页

作者：芦永良申利红李红丽胡代曦张锡峰冯涛黄佳祎重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室重庆400016

目的探讨乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)能否诱导肝前体细胞(HPCs)发生上皮-间质转化(EMT)。方法将重组质粒pSEB-Flag-HBX与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装获得携带HBx基因的重组逆转录病毒,并感染小鼠肝前体细胞HP14... 详细信息

目的探讨乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)能否诱导肝前体细胞(HPCs)发生上皮-间质转化(EMT)。方法将重组质粒pSEB-Flag-HBX与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装获得携带HBx基因的重组逆转录病毒,并感染小鼠肝前体细胞HP14.5,经稻瘟菌素(blasticidin)筛选,获得稳定表达HBx的HP14.5细胞。观察其形态变化,通过实时定量PCR(real time-PCR)及Western blot法检测其间质细胞标志物和上皮标志物在mRNA和蛋白水平的表达量,并采用划痕实验检测其细胞迁移能力的变化。结果 HP14.5细胞稳定表达HBx蛋白后细胞由多角形变为长梭形;与对照组相比,神经钙黏素(N-cadherin)、Snail、vimentin的mRNA和蛋白水平表达均升高,具有统计学差异(P<0.05)而上皮性钙黏素(E-cadherin)、细胞角蛋白18(CK18)的mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.05;同时其迁移能力显著升高(P<0.05)。结论 HBx能诱导肝前体细胞发生EMT,并增强其迁移能力。

关键词：乙型肝炎病毒x蛋白肝前体细胞上皮-间质转化

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RNAi抑制PI3Kp85α蛋白活性对人乳腺癌细胞系MCF-7生长抑制的体外研究

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中国肿瘤临床 2009年第23期36卷 1360-1364页

作者：梅玫任玉周旋苏征祁艳斌张灏姚智蒋伶活天津大学药物科学与技术学院天津市300072 天津医科大学基础医学研究中心天津医科大学附属肿瘤医院颈一科天津医科大学基础医学院免疫教研室

目的:探讨敲低P13Kp85α表达对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞生长的影响和机制。方法:用靶向P13Kp85α的siRNA转染人乳腺癌细胞系MCF-7,使用Real-time PCR法鉴定转染P13Kp85α表达水平;MTT法评价P13Kp85α siRNA对乳腺癌细胞系MCF-7生长的影... 详细信息

目的:探讨敲低P13Kp85α表达对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞生长的影响和机制。方法:用靶向P13Kp85α的siRNA转染人乳腺癌细胞系MCF-7,使用Real-time PCR法鉴定转染P13Kp85α表达水平;MTT法评价P13Kp85α siRNA对乳腺癌细胞系MCF-7生长的影响;流式细胞术检测转染后细胞周期分布和凋亡;采用免疫荧光染色及western blot方法观察IA型P13K/AKT通路主要成员的表达。结果:Real-time PCR结果显示P13Kp85αsiRNA转染导致P13Kp85α表达下调;MTF结果显示P13Kp85αsiRNA转染抑制肿瘤细胞生长;流式细胞术检测可见P13Kp85α siRNA转染组细胞周期存在G_0/G_1期阻滞而且凋亡率显著高于对照组与空载体组(F=19.255,P=0.002)。结论:应用P13Kp85α siRNA转染人乳腺癌细胞系MCF-7细胞,可抑制其增殖和诱导细胞凋亡,因此P13Kp85α可以作为人乳腺癌基因治疗的候选靶点。

关键词： PI3Kp85α RNA干扰乳腺癌基因治疗

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Wnt3a过表达对小鼠胚胎肝干细胞凋亡的抑制作用

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第12期29卷 1277-1280页

作者：张锡峰胡代曦芦永良冯涛黄佳祎重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室重庆400016

目的研究Wnt3a对ELSC14.5小鼠胚胎肝干细胞凋亡及相关蛋白表达的影响。方法采用表达绿色荧光蛋白的腺病毒载体系统(Ad-GFP-Wnt3a)转入小鼠ELSC14.5细胞,以Ad-GFP组为空白对照组,Ad-wnt3a组为实验组。实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blo... 详细信息

目的研究Wnt3a对ELSC14.5小鼠胚胎肝干细胞凋亡及相关蛋白表达的影响。方法采用表达绿色荧光蛋白的腺病毒载体系统(Ad-GFP-Wnt3a)转入小鼠ELSC14.5细胞,以Ad-GFP组为空白对照组,Ad-wnt3a组为实验组。实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法检测Wnt3a及凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Mcl-1的mRNA和蛋白的表达;Hoechst33258染色法结合annexin-PE/7-ADD法检测细胞的凋亡情况。结果 qRT-PCR和Western blot结果显示,Wnt3a在ELSC14.5细胞中特异性表达,表明腺病毒系统Ad-Wnt3a能高效感染ELSC14.5细胞。与对照组相比,抗凋亡因子Bcl-2、mcl-1的mRNA和蛋白的表达显著升高(P<0.05),而促凋亡因子Bax的mRNA和蛋白的表达显著降低(P<0.05)。Hoechst33258染色结合annexin-PE/7-ADD法结果显示,Wnt3a高表达的ELSC14.5细胞核呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染的细胞数量很少,细胞凋亡率降低。结论 Wnt3a通过上调Bcl-2家族中抗凋亡因子和下调促凋亡因子来抑制小鼠胚胎肝干细胞的凋亡,延长其生存。

关键词：胚胎肝干细胞抗凋亡 Wnt3a

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阻断磷脂酶C-γ1信号通路对大肠癌细胞株LoVo细胞增殖与凋亡的影响

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癌症 2007年第9期26卷 957-962页

作者：刘俊李明程宝鸾曾位森邹志鹏罗深秋广州军区广州总医院泌尿外科广州军区泌尿外科研究所广东广州510010 南方医科大学基础医学院实验教学管理中心广东广州510515 南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室广东广州510515

背景与目的:磷脂酶C-γ1(phospholipase C gamma1,PLC-γ1)是跨膜信号转导中关键和重要的一个信号中介,是细胞增殖与细胞凋亡调控的一个重要分子,最近研究发现它在大肠癌等许多肿瘤组织中呈过表达状态,与肿瘤的发生、发展有密切关系。... 详细信息

背景与目的:磷脂酶C-γ1(phospholipase C gamma1,PLC-γ1)是跨膜信号转导中关键和重要的一个信号中介,是细胞增殖与细胞凋亡调控的一个重要分子,最近研究发现它在大肠癌等许多肿瘤组织中呈过表达状态,与肿瘤的发生、发展有密切关系。本研究主要探讨阻断PLC-γ1信号通路后对大肠癌LoVo细胞增殖、凋亡的影响,及其上述影响的信号机制。方法:以人大肠癌LoVo细胞作为研究模型,利用PLC-γ1特异的化学阻断剂U73122处理以阻断LoVo细胞中PLC-γ1信号通路,通过绘制细胞生长曲线、PI单染的流式细胞仪检测细胞周期而评估对其细胞增殖的影响,通过细胞形态观察及DNA片段琼脂糖凝胶电泳评估是否启动细胞凋亡,同时检测阻断PLC-γ1信号通路后HSP70、Caspase-3表达水平的变化来探讨可能的信号机制。结果:阻断PLC-γ1信号通路明显减缓大肠癌LoVo细胞的生长,其细胞增殖抑制率随药物作用时间和浓度的增加逐渐增高,10μmol/LU73122作用24、48h后其抑制效果可分别达到35%和45%,使LoVo细胞G1期细胞比例增加,而S期细胞比例降低,延缓细胞从G1期向S期的过渡,即抑制细胞周期的进行,阻断PLC-γ1信号通路后LoVo细胞未能出现凋亡特征性的形态学改变,DNA琼脂糖凝胶电泳未能检测到凋亡特征的梯状带的出现,不能引起Caspase-3的激活,同时PLC-γ1信号通路的阻断可上调HSP70的表达水平,HSP70的分子伴侣作用可能是其抑制大肠癌细胞周期进行的机制。结论:阻断磷脂酶C-γ1信号通路能够抑制大肠癌LoVo细胞的过度增殖、抑制其细胞周期的进行,其机制可能是通过上调热休克蛋白70的表达水平而实现,但不能启动LoVo细胞凋亡,磷脂酶C-γ1不是调控LoVo细胞凋亡的关键信号分子。

关键词：大肠肿瘤磷脂酶C-γ1 细胞增殖细胞凋亡信号转导

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