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高迁移率族蛋白1诱导内皮细胞释放细胞因子的作用及其与脂多糖对白细胞介素6释放的协同效应

中华医学杂志 2006年第17期86卷 1191-1195页

作者：刘靖华李志杰唐靖刘亚伟赵雷邓鹏姜勇南方医科大学省部共建"重大疾病的转录组与蛋白质组学实验室"和广东省功能蛋白质组学重点实验室广州510515

目的观察高迁移率族蛋白1（HMGB1）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）释放细胞因子的影响及其对脂多糖（LPS）诱导细胞因子白细胞介素6（IL-6）表达的作用。方法用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测重组HMGB1蛋白（15ng／ml）诱导HUVEC 11种... 详细信息

目的观察高迁移率族蛋白1（HMGB1）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）释放细胞因子的影响及其对脂多糖（LPS）诱导细胞因子白细胞介素6（IL-6）表达的作用。方法用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测重组HMGB1蛋白（15ng／ml）诱导HUVEC 11种细胞因子／趋化因子的水平变化；检测不同浓度HMGB1（0～75ng／ml）刺激后不同时间点（0、1、3、6、12和24h）HUVEC分泌IL-6的水平以及HMGB1（15ng／ml）与LPS（10ng／ml）共同刺激对HUVEC分泌IL-6的影响。结果 HMGB1刺激后HUVEC分泌粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、干扰素γ（IFN-γ）、IL-6、IL-8和单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）的水平明显升高（均P〈0．01），分别是对照（未加刺激）的5．7、4．2、27．8、12．8和5．4倍；HMGB1蛋白以时间和剂量依赖方式诱导IL-6的分泌，在刺激后3～6h，IL-6水平开始增加，在6h时IL-6由对照的32ps／ml±21pg／ml增加到75pg／ml±22pg／ml（P〈0．01），12h（453pg／ml±78pg／ml）～24h（901pg／ml±184pg／ml）持续升高（P〈0．01）；随着HMGB1浓度的增加，IL-6的水平也明显增加，当HMGB1浓度为3、15、75ng／ml时，IL-6分别是155ps／ml±33pg／ml、901pg／ml±184pg／ml、1508pg／ml±378pg／ml，与基础值32pg／ml±21pg／ml相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。分别用LPS（10ng／ml）和HMGB1（15ng／ml）单独刺激HUVEC时，IL-6的含量从基础的32pg／ml±22pg／ml分别增加至289pg／ml±42pg／ml和901pg／ml±184pg／ml（均P〈0．0l）；如果用二者共同刺激HUVEC，IL-6的生成量大大增加（2361pg／ml±299pg／ml），二者存在协同作用（F=69．405，P〈0．01）。结论 HMGB1蛋白可诱导HUVEC释放多种炎性细胞因子；HMGB1诱导IL-6的上调具有时效性和量效性关系，并可协同LPS刺激HUVEC释放IL-6，在脓毒症的发生和发展中起重要作用。

关键词：脓毒症细胞因子人高迁移率族蛋白1

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采用蛋白质组学技术筛选大肠癌转移相关蛋白

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生物化学与生物物理进展 2006年第5期33卷 485-491页

作者：赵亮刘莉王爽李祖国丁彦青南方医科大学病理学教研室教育部和广东省共建重大疾病转录组学与功能蛋白质组学重点实验室广东省分子肿瘤病理重点实验室广州510515

采用对同一亲本来源、不同转移潜能细胞株SW480和SW620的蛋白质表达谱进行双向凝胶电泳和质谱技术分析,并在蛋白质和mRNA水平进行验证,成功鉴定了10个大肠癌转移相关蛋白,其中SW620细胞株表达上调的蛋白质有磷酸甘油酸变位酶1,磷脂酰乙... 详细信息

采用对同一亲本来源、不同转移潜能细胞株SW480和SW620的蛋白质表达谱进行双向凝胶电泳和质谱技术分析,并在蛋白质和mRNA水平进行验证,成功鉴定了10个大肠癌转移相关蛋白,其中SW620细胞株表达上调的蛋白质有磷酸甘油酸变位酶1,磷脂酰乙醇胺结合蛋白和高迁移率族蛋白B-1,而热休克蛋白27,膜联蛋白Ⅰ,甲硫腺苷磷酸化酶,切丝蛋白1和表皮型脂肪酸结合蛋白在SW620中表达下调.大多数差异蛋白质功能涉及肿瘤细胞生长、运动、粘附、凋亡等过程,研究结果为阐明大肠癌转移机制及寻找预测大肠癌转移的潜在标志物提供了理论依据.

关键词：大肠癌转移蛋白质组双向凝胶电泳

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多巴胺受体在可卡因诱导的转录因子CREB活化中的作用(英文)

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南方医科大学学报 2006年第6期26卷 715-718页

作者：刘怒云张琳王小宁张璐南方医科大学生物技术学院分子免疫研究所广东广州510515 南方医科大学广东省功能蛋白质组学重点实验室重大疾病的转录组与蛋白质组学教育部重点实验室广东广州510515

目的研究多巴胺受体在可卡因诱导的转录因子CREB磷酸化活化中的调控作用。方法采用D1和D3多巴胺受体抑制剂,应用Westernblotting检测D1与D3多巴胺受体在可卡因诱导的cAMP反应元件结合蛋白(CREB)磷酸化活化中的作用及D1和D3多巴胺受体抑... 详细信息

目的研究多巴胺受体在可卡因诱导的转录因子CREB磷酸化活化中的调控作用。方法采用D1和D3多巴胺受体抑制剂,应用Westernblotting检测D1与D3多巴胺受体在可卡因诱导的cAMP反应元件结合蛋白(CREB)磷酸化活化中的作用及D1和D3多巴胺受体抑制剂本身对CREB磷酸化活化的影响,进一步应用Westernblotting检测细胞外信号调节激酶(ERK)在CREB磷酸化活化中的作用。结果D1多巴胺受体抑制剂阻止可卡因诱导的CREB磷酸化活化,而D3多巴胺受体抑制剂促进可卡因诱导的CREB磷酸化活化,D1和D3多巴胺受体抑制剂本身不能诱导CREB磷酸化活化。MEK的特异性抑制剂SL327可以抑制可卡因诱导的CREB磷酸化活化。结论D1和D3多巴胺受体对CREB的磷酸化活化起反式调控作用,并且这种反式调控作用依赖于ERK信号通路。

关键词：可卡因多巴胺受体 cAMP反应元件结合蛋白细胞外信号调节激酶基因表达

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应用改良的免疫胶体金包埋方法检测p38蛋白激酶在Raw细胞中的定位

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中国临床解剖学杂志 2007年第5期25卷 560-563页

作者：张琳张璐朴英杰南方医科大学组织学与胚胎学教研室南方医科大学广东省功能蛋白质组学重点实验室重大疾病的转录组与蛋白质组学教育部重点实验室广州510515

目的:采用两种包埋方法Lowicryl K4M低温包埋和改良Spurr包埋,观察p38在Raw264.7细胞中的免疫电镜定位,摸索出一种操作简单、适用于南方潮湿多雨天气的免疫电镜包埋方法。方法:分别采用低温包埋剂Lowicryl K4M和改良Spurr树脂包埋两种方... 详细信息

目的:采用两种包埋方法Lowicryl K4M低温包埋和改良Spurr包埋,观察p38在Raw264.7细胞中的免疫电镜定位,摸索出一种操作简单、适用于南方潮湿多雨天气的免疫电镜包埋方法。方法:分别采用低温包埋剂Lowicryl K4M和改良Spurr树脂包埋两种方法,经包埋后染色,观察p38蛋白激酶在Raw264.7中的超微结构分布。结果:改良Spurr树脂包埋后结果显示,未受刺激的及EGF刺激的Raw264.7中,p38在胞浆和胞核中金颗粒弥散在细胞的各个部分,受到LPS刺激后,细胞核区的金颗粒明显增多,而胞浆区域的金颗粒显著减少,观察到的Raw细胞超微结构清晰、免疫胶体金定位准确,与低温包埋剂Lowicryl K4M包埋结果完全一致。结论:相对于Lowicryl K4M,Spurr树脂价格低廉,粘度低、抗湿性能好、切割性能佳、操作简单,是一种适用于南方潮湿多雨天气的免疫电镜包埋剂,可以替代低温包埋剂Lowicryl K4M。

关键词：树脂免疫胶体金电镜 p38蛋白激酶转位

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小鼠原代呼吸道上皮细胞分离培养的新方法

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生理学报 2011年第6期63卷 581-585页

作者：王达李煜生南方医科大学第一临床医学院广州510515 南方医科大学基础医学院病理生理学教研室广东省蛋白质组学重点实验室和教育部重大疾病的转录组和蛋白质组学重点实验室广州510515

现有的呼吸道上皮细胞系大多来源于肿瘤组织或成系时与肿瘤细胞融合,其生物学行为与正常呼吸道上皮细胞差异较大。为更准确反映呼吸道疾病条件下该类细胞的生物学效应,本文对小鼠呼吸道上皮细胞分离的新技术和培养方法进行了探索。利用... 详细信息

现有的呼吸道上皮细胞系大多来源于肿瘤组织或成系时与肿瘤细胞融合,其生物学行为与正常呼吸道上皮细胞差异较大。为更准确反映呼吸道疾病条件下该类细胞的生物学效应,本文对小鼠呼吸道上皮细胞分离的新技术和培养方法进行了探索。利用链霉蛋白酶消化法分离获得小鼠呼吸道上皮细胞,利用特殊的完全培养基和I型胶原包被的培养皿进行原代培养。镜下可观察到呼吸道上皮细胞的纤毛节律性的定向摆动,证明本法所获得的细胞较完整地保留了其原有生理功能。本实验所建立的分离技术和培养方法简单、稳定、有效、可靠,为研究呼吸道疾病的细胞模型创造了条件。同时,此法可为其它实验动物呼吸道上皮细胞的培养提供借鉴。

关键词：呼吸道上皮细胞小鼠分离培养

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环氧化酶2基因异常表达与大肠癌转移的关系

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南方医科大学学报 2006年第10期26卷 1408-1411页

作者：李祖国刘腾飞谢卫兵周军余力丁彦青南方医科大学南方医院病理科广东省分子肿瘤病理重点实验室省部共建教育部重大疾病转录组学及功能蛋白质组学重点实验室广东广州510515

目的研究环氧化酶2在人大肠癌细胞系及大肠癌组织中的异常表达与意义。方法培养不同转移能力的人大肠癌细胞系SW480和SW620细胞,收集50例大肠癌石蜡组织,50例淋巴结转移性大肠癌石蜡组织;分别用免疫组织化学、Real-timePCR的方法研究环... 详细信息

目的研究环氧化酶2在人大肠癌细胞系及大肠癌组织中的异常表达与意义。方法培养不同转移能力的人大肠癌细胞系SW480和SW620细胞,收集50例大肠癌石蜡组织,50例淋巴结转移性大肠癌石蜡组织;分别用免疫组织化学、Real-timePCR的方法研究环氧化酶2在不同转移能力人大肠癌细胞系及原发人大肠癌组织和大肠淋巴结转移组织中的表达。结果环氧化酶2蛋白在SW480和SW620细胞株中均阳性表达;环氧化酶2mRNA在SW620比SW480细胞中表达增高,表达量的平均倍比关系为2.268。环氧化酶2蛋白在淋巴结转移癌组的异常表达高于原发大肠癌石蜡组织,相关性具有统计学意义(P<0.05)。结论环氧化酶2异常表达可能与大肠癌淋巴结转移相关。

关键词：环氧化酶2 大肠癌转移

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热休克蛋白27在大肠癌中的表达及其与淋巴结转移的关系

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南方医科大学学报 2008年第1期28卷 41-44页

作者：赵亮李祖国丁彦青南方医科大学病理学教研室教育部和广东省共建重大疾病转录组学及功能蛋白质组学重点实验室广东省分子肿瘤病理重点实验室广东广州510515

目的探讨热休克蛋白27(HSP27)表达与大肠癌淋巴结转移的关系。方法应用免疫组化方法检测68例临床大肠癌组织标本中Hsp27的表达情况。应用RT-PCR、Western blotting和免疫组化方法检测不同转移潜能大肠癌细胞株中Hsp27mRNA和蛋白的表达... 详细信息

目的探讨热休克蛋白27(HSP27)表达与大肠癌淋巴结转移的关系。方法应用免疫组化方法检测68例临床大肠癌组织标本中Hsp27的表达情况。应用RT-PCR、Western blotting和免疫组化方法检测不同转移潜能大肠癌细胞株中Hsp27mRNA和蛋白的表达情况。结果在大肠癌组织中,热休克蛋白27的表达率与年龄、性别、淋巴结转移、临床分期无相关性(χ2test,P>0.05),但其过表达和大肠癌淋巴结转移显著负相关(Fisher'sexacttest,P=0.035)。应用RT-PCR、Western blotting和免疫组化方法检测结果显示Hsp27基因和蛋白在高淋巴结转移潜能的SW620细胞中呈低表达,在低淋巴结转移潜能的SW480细胞中呈高表达。结论Hsp27和大肠癌肿瘤细胞的转移行为可能为负相关,可能在阻止其转移中发挥重要作用。

关键词：大肠癌热休克蛋白27 淋巴结转移

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结直肠癌转移动物模型血清中几种蛋白变化的观察

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中华病理学杂志 2007年第1期36卷 48-52页

作者：李祖国赵亮刘莉丁彦青南方医科大学病理学教研室教育部和广东省共建重大疾病转录组学及功能蛋白质组学重点实验室广东省分子病理重点实验室广州510515

目的建立可视化结直肠癌转移模型,并应用血清蛋白质组学技术分析可视化结直肠癌转移模型血清蛋白质的变化。方法用 pEGFP-N1绿色荧光蛋白基因转染具有转移能力的 SW480细胞株,在裸鼠皮下接种成瘤后,再原位接种于裸鼠右半结肠,利用整体... 详细信息

目的建立可视化结直肠癌转移模型,并应用血清蛋白质组学技术分析可视化结直肠癌转移模型血清蛋白质的变化。方法用 pEGFP-N1绿色荧光蛋白基因转染具有转移能力的 SW480细胞株,在裸鼠皮下接种成瘤后,再原位接种于裸鼠右半结肠,利用整体荧光成像系统观察结直肠癌原位成瘤及发生转移的情况。同时采集裸鼠原位成瘤后不同转移阶段的血清,进行双向电泳联合时间飞行质谱分析差异蛋白质,观察结直肠癌转移模型裸鼠癌转移前后血清蛋白的变化。结果获得稳定表达绿色荧光蛋白的 SW480-EGFP 细胞株,裸鼠皮下接种成瘤率为100%,原位种植成瘤率为10/10,区域淋巴结转移为10/10,肝转移率为4/10,肺转移率为3/10。通过血清蛋白质组学技术成功鉴定了5个在癌转移发生后血清内显著升高的血清蛋白:结合珠蛋白α链,载脂蛋白 A4,载脂蛋白E,免疫球蛋白κ型 V 区 L 链和转铁蛋白。结论成功建立结直肠癌可视化转移模型,利用不同转移阶段鼠血清进行双向电泳图谱差异分析筛选出5个在癌转移发生后血清中显著升高的蛋白可能是与结直肠癌转移相关的蛋白。

关键词：结直肠肿瘤肿瘤转移模型动物血蛋白质类

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两种单负链RNA呼吸道病毒——流感病毒和呼吸道合胞病毒感染对粘蛋白1表达调控差异的研究

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病毒学报 2012年第6期28卷 639-644页

作者：卢昕倪淑媛李煜生南方医科大学第一临床医学院广州510515 广州医学院第三附属医院广州510150 南方医科大学基础医学院病理生理教研室广东省蛋白质组学重点实验室和教育部重大疾病的转录组和蛋白质组学重点实验室广州510515

为进一步了解流感病毒(IFZ)是否像呼吸道合胞病毒(RSV)一样在感染过程中可以上调呼吸道上皮细胞粘蛋白1(MUC1)的表达,进而限制炎症的发展。我们利用qRT-PCR和Western Blot检测两种呼吸道单负链RNA病毒感染人呼吸道上皮细胞系——A549细... 详细信息

为进一步了解流感病毒(IFZ)是否像呼吸道合胞病毒(RSV)一样在感染过程中可以上调呼吸道上皮细胞粘蛋白1(MUC1)的表达,进而限制炎症的发展。我们利用qRT-PCR和Western Blot检测两种呼吸道单负链RNA病毒感染人呼吸道上皮细胞系——A549细胞后对MUC1的表达调控。分别利用人喉上皮细胞系——HEp-2细胞系和MDCK细胞系培养并收集RSV和IFZ。相同滴度的两种病毒分别感染A549细胞24h后,分别裂解各组细胞,收集总RNA,应用qRT-PCR检测MUC1mRNA的表达情况;或相同滴度的两种病毒分别感染A549细胞24h和48h后,裂解细胞收集总蛋白,同时收集细胞培养上清,应用Western Blot检测MUC1蛋白的表达情况,应用ELISA检测上清中TNF-α水平。结果显示,虽然两种病毒都能上调TNF-α水平,但只有RSV可以上调呼吸道上皮细胞MUC1表达,并呈剂量效应,而IFZ不能上调呼吸道上皮细胞MUC1的表达。本研究首次探讨两种常见呼吸道单负链RNA病毒感染呼吸道上皮细胞后对MUC1表达调控的差异,初步证实临床上IFZ感染后病情自限性的机制不同于RSV感染,与MUC1的表达上调无关。

关键词：流感病毒呼吸道合胞病毒呼吸道上皮细胞粘蛋白1 炎症调控

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LPS影响p38蛋白在单核细胞内定位

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中国病理生理杂志 2007年第6期23卷 1212-1215页

作者：张琳刘怒云姜勇李庆林张璐南方医科大学组织学与胚胎学教研室南方医科大学中医药学院南方医科大学广东省功能蛋白质组学重点实验室重大疾病的转录组与蛋白质组学教育部重点实验室广东广州510515

目的:探讨LPS作用下p38蛋白激酶激活的动力学特点及其在细胞内超微结构中的定位。方法:应用激酶活性测定、胶体金标记的免疫电镜技术观察LPS刺激前后p38蛋白激酶的动力学特点及在单核细胞株Raw264.7中的分布特征。结果:动力学检测结果显... 详细信息

目的:探讨LPS作用下p38蛋白激酶激活的动力学特点及其在细胞内超微结构中的定位。方法:应用激酶活性测定、胶体金标记的免疫电镜技术观察LPS刺激前后p38蛋白激酶的动力学特点及在单核细胞株Raw264.7中的分布特征。结果:动力学检测结果显示,LPS作用后15min,p38磷酸化活性明显升高,30min达到高峰,2h达基线水平;p38在LPS浓度为100μg/L时达最大激活效应。超微定位结果显示,未受刺激的及EGF刺激的细胞,p38在胞浆和胞核中金颗粒呈弥散性分布,金颗粒弥散在细胞的各个部分,如细胞质中线粒体、内质网、溶酶体;单核细胞株受到LPS刺激后,细胞核区的金颗粒明显增多,而胞浆区域的金颗粒显著减少。结论:单核细胞株Raw264.7受LPS刺激后,其p38蛋白激酶由胞浆移位到胞核。

关键词：脂多糖类 p38激酶 Raw264.7细胞

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