检索结果-内蒙古大学图书馆

中华传染病杂志 2017年第3期35卷 129-133页

作者：胡飞环张国侠田艳君张立杰刘佰玲王文敬黎诚耀南方医科大学检验与生物技术学院输血医学系广州510515 黑龙江省农垦总医院感染科

目的调查布鲁杆菌感染后宿主的体液和细胞免疫应答情况，Foxp3^＋在布鲁菌病患者治疗过程中的变化，阐明宿主产生免疫抑制对布鲁菌病治疗效果的影响。方法2015年7月至2015年11月，黑龙江农垦总局总医院感染三科住院的急性期布鲁菌病患... 详细信息

目的调查布鲁杆菌感染后宿主的体液和细胞免疫应答情况，Foxp3^＋在布鲁菌病患者治疗过程中的变化，阐明宿主产生免疫抑制对布鲁菌病治疗效果的影响。方法2015年7月至2015年11月，黑龙江农垦总局总医院感染三科住院的急性期布鲁菌病患者65例。标准治疗组28例，根据患者情况选择抗菌药物进行3个疗程的标准治疗，每个疗程20d，疗程间隔10d；免疫增强剂组37例，在标准治疗的基础上增加免疫增强药物。另选取健康体检者30名为健康对照组。在治疗前和每个疗程结束时，采用流式细胞术检测患者外周血中CD3^＋CD4^＋Foxp3^＋Treg含量变化。符合正态分布的数据以孑±S表示。两组间比较采用t检验，多组问的比较采用方差分析，组间两两比较采用SNK法。不符合正态分布的数据进行多个独立样本的非参数检验。结果65例急性期布鲁菌病患者第1疗程结束时外周血中Foxp3^＋ Treg含量为2．83％，第2疗程结束时为3．77％，第3疗程结束时为4．03％，均高于健康对照组的1．69％（￡值分别为5．97、9．05和5．66，均P〈0．01）。第1疗程结结束时，标准治疗组和免疫增强剂组间外周血Foxp3^＋Treg含量差异无统计学意义（t=0．33，P〉0．05），但均高于健康对照组（￡值分别为7．09和4．94，均P〈0．01）。第2疗程结束时，免疫增强剂组患者外周血Foxp3^＋Treg含量高于标准治疗组，差异有统计学意义（t=2．22，P〈0．01），且两组均高于健康对照组（f值分别为10．79和7．25，均P〈0．01）。第3疗程结束时，免疫增强剂组患者外周血Foxp3^＋ Treg含量高于标准治疗组和健康对照组，差异均有统计学意义（t值分别为6．02和6．45，P〈0．01）。结论急性期布鲁菌病患者经过添加免疫增强剂的治疗，外周血Foxp3^＋Treg含量呈现持续上升的趋势，并一直维持在一定高位水平。推测，过早的使用免疫增强剂可能不利于急性期布鲁菌病的治疗。

关键词：布鲁菌属布鲁菌病治疗流式检测 T淋巴细胞调节性 Foxp3

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重组人干扰素γ慢病毒的构建及鉴定

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白求恩医学杂志 2018年第1期16卷 10-12页

作者：贡树基周伟张云张玲解放军白求恩医务士官学校石家庄050081 山东省潍坊市临朐县骨外科 262600 南方医科大学检验与生物技术学院输血医学系广州510515

目的构建含干扰素(IFN)γ基因的转移质粒,包装含IFNγ基因的重组慢病毒(LV),测定重组LV是否包装成功,重组LV的定量及鉴定IFNγ基因的表达。方法采用分子克隆方法,构建含IFNγ基因的转移质粒,采用脂质体法将LV三质粒系统(包括鉴定正确的... 详细信息

目的构建含干扰素(IFN)γ基因的转移质粒,包装含IFNγ基因的重组慢病毒(LV),测定重组LV是否包装成功,重组LV的定量及鉴定IFNγ基因的表达。方法采用分子克隆方法,构建含IFNγ基因的转移质粒,采用脂质体法将LV三质粒系统(包括鉴定正确的转移质粒p TY-CMV-IFNγ、包装质粒p SPAX2、包膜蛋白质粒p MD2.G)共转染293T细胞,包装由CMV启动子驱动的重组人LV-IFNγ。采用ELISA法对重组LV-IFNγ进行鉴定。结果成功构建了含CMV启动子的p TYCMV-IFNγ转移质粒。高效包装出重组LV-CMV-IFNγ,病毒RNA载量1.20×109copies/ml。ELISA检测LV包装病毒液中IFNγ量为:11.88μg/ml。LV原液转导293A和CEM细胞12 h后,IFNγ量分别为11.45μg/ml和10.44μg/ml。LV原液转导293A和CEM细胞72 h后,IFNγ量分别为11.28μg/ml和11.01μg/ml。结论成功包装生产出高滴度重组LV-CMV-IFNγ,转染293A和CEM后,能检测到IFNγ高水平表达,为下一步工作提供研究基础。

关键词：重组慢病毒干扰素γ 病毒载量

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中国HCV 2a的分子流行病学研究

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广东医学 2018年第12期39卷 1789-1794页

作者：王敏许茹戎霞廖峭黄杰庭宋丹丹单振刚范小苗尤庆柱黄珂付涌水广州血液中心广州市医学重点实验室(血液安全重点实验室)临床输血研究所广东广州510095 南方医科大学检验与生物技术学院广东广州510515

目的对我国HCV 2a亚型的分子流行病学进行研究。方法收集全国18个省、直辖市HCV感染患者标本776份,逆转录巢式PCR扩增E1基因,通过比对得出HCV基因分型。从NCBI数据库中下载HCV 2a序列作参考序列,与此次的HCV 2a序列进行分析。在Exponent... 详细信息

目的对我国HCV 2a亚型的分子流行病学进行研究。方法收集全国18个省、直辖市HCV感染患者标本776份,逆转录巢式PCR扩增E1基因,通过比对得出HCV基因分型。从NCBI数据库中下载HCV 2a序列作参考序列,与此次的HCV 2a序列进行分析。在Exponential模型下进行进化树构建以及BSP曲线绘制。结果扩增E1基因664份,有8种亚型及HCV 6新亚型:1a、1b、1c、2a、3a、3b、6a、6n、6new的例数分别为10、392、3、127、28、48、44、6、6份。进化树分析显示HCV 2a于20世纪60年代早期分成了两簇,clusterⅠ全是来自中国的序列,主要是来自西北的序列,clusterⅡ包括了来自全球的序列,clusterⅤ、Ⅵ和Ⅶ显示日本与中国形成各自的传播网络,而clusterⅧ和Ⅸ均可以看出是由日本传到中国。BSP曲线显示1992—1996年增长速率明显较快。结论全国范围内,HCV 1b为最主要亚型,2a次之,HCV 2a尤其在我国北方、东北、西北等省、直辖市分布比较高,还是应该引起足够的重视。进化分析显示HCV 2a一部分序列是由日本传到中国。

关键词： HCV基因分型 HCV 2a 进化分析

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非抗体结合蛋白-抗体组合的GPC3双夹心化学发光法在临床的初步应用

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2017年第4期38卷 293-300页

作者：谢春梅张轩煜王从容徐伟文南方医科大学检验与生物技术学院抗体工程研究所器官衰竭国家重点实验室广东广州510515 浙江大学附属第一医院肝胆外科浙江杭州310003 南方医科大学南方医院临床检验医学部广东广州510515

目的:探讨非抗体结合蛋白-抗体双夹心化学发光免疫诊断试剂检测磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)在肝细胞癌(HCC)血清学的临床诊断价值和鉴别诊断价值.方法:应用本课题前期研制的非抗体结合蛋白-抗体GPC3夹心化学发光法诊断试剂检测HCC、肝... 详细信息

目的:探讨非抗体结合蛋白-抗体双夹心化学发光免疫诊断试剂检测磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)在肝细胞癌(HCC)血清学的临床诊断价值和鉴别诊断价值.方法:应用本课题前期研制的非抗体结合蛋白-抗体GPC3夹心化学发光法诊断试剂检测HCC、肝内胆管癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、正常人群等患者血清GPC3水平,同时用GPC3免疫组织化学(IHC)检测上述疾病患者的肿瘤组织,同时分析甲胎蛋白(AFP)和本实验方法对HCC的诊断效能,进一步分析GPC3表达于不同细胞结构部位与血清水平关系.结果:非抗体结合蛋白-抗体GPC3双夹心化学发光试剂盒检测HCC组GPC3血清水平明显高于其他组(>21倍,P值均小于0.01),与GPC3 IHC结果相一致.联合GPC3和AFP的曲线下面积(AUC)为0.922,明显高于单一标志物(GPC3和AFP的AUC分别为0.899和0.821,P值均小于0.05)的诊断价值.GPC3主要表达于胞膜和混合表达(胞膜和胞质),且所有胞膜和混合表达阳性患者血清样本的GPC3均高水平表达.结论:非抗体结合蛋白-抗体GPC3双夹心化学发光试剂盒具有良好的诊断特异性及准确性,有可能用于HCC的鉴别诊断,且对分析GPC3胞膜型HCC的诊断、疗效评价及预后提供更多诊断价值信息.

关键词：磷脂酰肌醇蛋白聚糖肝细胞癌化学发光法诊断鉴别诊断

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可诱导表达RN181逆转录病毒载体的构建及其在肝癌细胞中的表达

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中华肝胆外科杂志 2017年第12期23卷 841-844页

作者：李坤平王穗海罗小仔梁志坚陈武业方永平广东省惠州市第一人民医院广东医科大学附属惠州第一临床医学院肝胆外科 516000 南方医科大学检验与生物技术学院抗体工程研究所

目的构建可诱导表达RNl81的逆转录病毒载体，探讨其在肝癌细胞中的表达，为进一步研究RNl81基因的生物学功能奠定基础。方法基于基因克隆技术，构建pRetrox—TRE3G／RNl81重组载体。常规鉴定后，反应质粒pRetroX—TRE3G／RNl81和调控质... 详细信息

目的构建可诱导表达RNl81的逆转录病毒载体，探讨其在肝癌细胞中的表达，为进一步研究RNl81基因的生物学功能奠定基础。方法基于基因克隆技术，构建pRetrox—TRE3G／RNl81重组载体。常规鉴定后，反应质粒pRetroX—TRE3G／RNl81和调控质粒***3G分别与EnvelopeVector共转染GP2-293细胞包装逆转录病毒。两种病毒共同感染目的细胞SMCC7721，经G418筛选得到稳定细胞株。加强力霉素（Dox）诱导表达RNl81，经实时荧光PCR（***）、蛋白印迹检测（Westernblotting）鉴定后，CCK-8实验和Transwell检测细胞增殖和侵袭情况。结果重组载体经测序证实构建成功。筛选出的阳性克隆在Dox诱导下，经***、Westernblotting鉴定证实重组细胞中RNl81的mRNA及其蛋白表达水平在诱导与未诱导的细胞系问的差异具有统计学意义（P〈0．05）。增殖实验显示Dox诱导后的7721RNl81细胞生长减慢。细胞侵袭实验显示RNl81上调后细胞侵袭力减弱。结论我们成功构建的可诱导表达RNl81的SMCC7721-RNl81重组细胞系为研究RNl81的生物学功能提供了有效的细胞模型。研究初步证实了RNl81在体外对SMCC7721细胞增殖和侵袭的抑制作用。

关键词：肝癌锌指蛋白 RN181 蛋白表达

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分泌表达牛病毒性腹泻病毒E0蛋白MDBK细胞的稳定性分析

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生物技术通讯 2017年第6期28卷 762-767页

作者：刘军仇珍珍王玉珏田雨光岳敏南方医科大学实验动物中心暨比较医学研究所广东广州510515 南方医科大学检验与生物技术学院广东广州510515

目的:构建分泌表达牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E0蛋白的MDBK细胞系,并探究其传代和冻存稳定性。方法:用实验室制备的BVDV E0基因重组慢病毒感染MDBK细胞,荧光观察并收集MDBK细胞培养上清进行Western印迹分析,通过qPCR方法检测重组细胞系中... 详细信息

目的:构建分泌表达牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E0蛋白的MDBK细胞系,并探究其传代和冻存稳定性。方法:用实验室制备的BVDV E0基因重组慢病毒感染MDBK细胞,荧光观察并收集MDBK细胞培养上清进行Western印迹分析,通过qPCR方法检测重组细胞系中重组基因拷贝数变化。结果:IgK信号肽组和预测信号肽组均分泌表达E0蛋白;通过Oligo6.0软件设计BVDV E0基因SYBR GreenⅠ染料法荧光定量PCR检测引物,经过条件优化,未出现非特异性扩增,检测下线为20拷贝/μL;通过建立的荧光定量PCR和流式分析对2组细胞系进行传代稳定性分析,结果2组细胞系在第12代之后荧光率显著下降,15代之后E0基因拷贝数显著下降,2组细胞冻存前后荧光率未发现显著变化。结论:构建了稳定分泌表达BVDV E0蛋白的MDBK细胞系,建立了BVDV E0基因定量检测方法,为研究E0蛋白的生物学功能、探索BVDV的防控措施以及开发基因工程诊断抗原和基因工程亚单位疫苗奠定了基础。

关键词：牛病毒性腹泻病毒 E0蛋白慢病毒载体 MDBK细胞分泌表达

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PTPN6重组蛋白的真核表达纯化及功能鉴定

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生物技术 2017年第5期27卷 428-433页

作者：熊玉锋陈洁盈钱雯郝文波南方医科大学检验与生物技术学院抗体工程研究所广东广州510515 中山大学中山医学院干细胞与组织工程研究中心广东广州510515

[目的]构建真核表达载体pENTER-PTPN6,在HEK293T细胞中表达并纯化,并初步探讨PTPN6对肺癌细胞系A549细胞增殖能力的影响。[方法]构建真核表达载体pENTER-PTPN6,利用jetPRIME分别转染HEK293T和A549细胞,用Western Blot检测PTPN6在细胞中... 详细信息

[目的]构建真核表达载体pENTER-PTPN6,在HEK293T细胞中表达并纯化,并初步探讨PTPN6对肺癌细胞系A549细胞增殖能力的影响。[方法]构建真核表达载体pENTER-PTPN6,利用jetPRIME分别转染HEK293T和A549细胞,用Western Blot检测PTPN6在细胞中的表达情况,并通过磁珠纯化PTPN6蛋白,最后利用CCK-8法检测PTPN6对A549的增殖影响并绘制细胞生长曲线。[结果]Western Blot结果显示转染细胞内有PTPN6的高表达,磁珠纯化得到高纯度的目标蛋白,而且转染后的肺癌细胞A549增殖能力较对照组显著下降。[结论]成功构建了真核表达质粒pENTER-PTPN6并在真核表达系统中表达和纯化,重组PTPN6具有抑制A549细胞的增殖的作用,为进一步探讨PTPN6基因的功能及寻找治疗肺癌新方向奠定了基础。

关键词： PTPN6 A549 真核表达增殖

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基于孕妇外周血浆游离DNA高通量测序无创产前筛查胎儿基因组病技术标准

基于孕妇外周血浆游离DNA高通量测序无创产前筛查胎儿基因组病技...

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本标准适用于具备临床产前遗传学诊断资质的医院、与产前诊断机构签署合作协议的具资质的第三方医学检验实验室等使用高通量测序技术开展基于孕妇外周血浆游离DNA高通量测序无创产前筛查胎儿基因组病项目的全流程规范化临床应用。

标准号: T/GDPMAA 0004-2020

关键词：

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逆转录病毒介导的稳定表达E4orf1和绿色荧光蛋白的胎肝窦内皮细胞株的建立

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生物技术通讯 2018年第4期29卷 451-458页

作者：李慧琳谢小燕王思涵韩毅范增白云何丽娟南雪裴海云岳文裴雪涛南方医科大学检验与生物技术学院广东广州510515 军事科学院军事医学研究院卫生勤务与血液研究所军事再生医学研究室北京100850 华南生物医药研究院华南干细胞与再生医学研究中心广东广州510005 军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所实验血液学与生物化学研究室北京100850

目的:为构建优化的内皮细胞用于造血干细胞(HSCs)的支持培养,通过逆转录病毒载体系统建立稳定表达腺病毒E4区开放读框1(E4orf1)和绿色荧光蛋白(GFP)的人胎肝窦内皮细胞(HFLSECs)株。方法:利用Plat-A细胞将质粒MSCV-N E4orf1和p MX-GFP... 详细信息

目的:为构建优化的内皮细胞用于造血干细胞(HSCs)的支持培养,通过逆转录病毒载体系统建立稳定表达腺病毒E4区开放读框1(E4orf1)和绿色荧光蛋白(GFP)的人胎肝窦内皮细胞(HFLSECs)株。方法:利用Plat-A细胞将质粒MSCV-N E4orf1和p MX-GFP分别包装为逆转录病毒,共同感染HFLSECs,将原代培养的HFLSECs和转基因的HFLSECs分别在含有0.5、1、2、4μg/m L嘌呤霉素的EGM-2培养基中培养,以测试最适药物筛选浓度,药筛1周后通过流式细胞分选获得稳定转染E4orf1的GFP^+HFLSECs(E4orf1-GFP/HFLSECs)。通过密度梯度离心法从脐带血中分离单个核细胞,利用免疫磁柱分选获得CD34^+造血干/祖细胞(HSPCs),以E4orf1-GFP/HFLSECs作为饲养层联合SCF、TPO、Flt-3L等3种基础造血相关因子进行体外扩增和半固体造血细胞集落培养。结果:0.5μg/m L嘌呤霉素在5 d内即能完全杀死HFLSECs,而转基因的HFLSECs可以正常存活,以此药物浓度加压筛选1周,后续通过流式分选GFP阳性细胞,阳性率为90.5%,在E4orf1-GFP/HFLSECs饲养层支持下,人脐带血来源的CD34^+细胞15 d扩增了360倍,是单纯细胞因子悬浮培养组的2.2倍,且扩增后的HSPCs在体外仍具有多种造血集落形成能力。结论:该细胞株的建立将为构建造血干细胞体外培养体系及研究造血细胞的发育分化提供适宜的微环境。

关键词：肝窦内皮细胞逆转录病毒腺病毒E4区开放读框1(E4orf1) 造血干细胞

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基于三引物荧光PCR-毛细管电泳法的FMR1基因突变检测技术建立及其在自闭症辅助诊断中的应用

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分子诊断与治疗杂志 2017年第5期9卷 319-324页

作者：孙莉杨琳艳叶倩平杨旭杨学习华北石油管理局总医院检验科河北任丘062552 广州市达瑞生物技术股份有限公司广东广州510665 南方医科大学基础医学院广东深圳518110 南方医科大学检验与生物技术学院广东广州510515

目的对自闭症患者FMR1基因5′非编码区CGG重复序列及重复数进行检测,探索检测脆性X综合征的新方法。方法应用三引物荧光PCR-毛细管电泳法(Qseq100TM全自动核酸分析系统检测)对111例自闭症患者进行筛查,检测其FMR1基因5′非编码区CGG序列... 详细信息

目的对自闭症患者FMR1基因5′非编码区CGG重复序列及重复数进行检测,探索检测脆性X综合征的新方法。方法应用三引物荧光PCR-毛细管电泳法(Qseq100TM全自动核酸分析系统检测)对111例自闭症患者进行筛查,检测其FMR1基因5′非编码区CGG序列,计算CGG重复数,并与ABI 3500Dx基因分析仪毛细管电泳测序法进行结果比较验证。结果 111例临床检测为自闭症的样本中,有2例为FMR1前突变携带者,一例为中间型。与3500Dx毛细管电泳测序结果一致。结论三引物荧光PCR-毛细管电泳法能够用来检测FMR1基因5′非编码区CGG重复序列,在脆性X综合征发病机制及大规模携带者筛查方面都具有一定的应用价值。

关键词：自闭症 FMR1基因脆性X综合征三引物荧光PCR-毛细管电泳

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