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中华神经医学杂志 2010年第4期9卷 345-349,353页

作者：张发兵柯以铨姜晓丹胡昌辰孙新林卢建侃杜谋选南方医科大学珠江医院神经外科广东神经外科研究所广东省脑功能修复与再生重点实验室广州510282

目的研究NADPH氧化酶州ox）对U251胶质瘤细胞存活、增殖和凋亡的影响。方法RT—PCR检测U251胶质瘤细胞系NOX基因的表达。分别使用5、15、25umol／LNOX抑制剂DPI及10mmol／L抗氧化剂Tiron处理U251细胞，24h后alamarBlue法检测U251细胞的... 详细信息

目的研究NADPH氧化酶州ox）对U251胶质瘤细胞存活、增殖和凋亡的影响。方法RT—PCR检测U251胶质瘤细胞系NOX基因的表达。分别使用5、15、25umol／LNOX抑制剂DPI及10mmol／L抗氧化剂Tiron处理U251细胞，24h后alamarBlue法检测U251细胞的增殖，流式细胞术检测细胞内活性氧的产生和U251细胞的凋亡情况，并与正常对照组（不做任何处理的）的U251细胞进行比较。结果U251细胞系中明显表达NOX4mRNA。各浓度DPI及10mmol／LTiron均能抑制U251胶质瘤细胞的生长，诱导U251细胞凋亡。与正常对照组比较，各浓度DPI处理组的U251细胞内的活性氧簇（ROS）均明显减少，差异有统计学意义（P〈0．05）；结论Ⅳ锻4可能是胶质瘤细胞内ROS生产的主要来源。NOX4可能通过增加细胞内ROS水平并作用于其下游调节分子，对胶质瘤细胞的生长、存活和凋亡起着重要的调节作用。

关键词： NADPH氧化酶活性氧 DPI 神经胶质瘤细胞凋亡

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右位主动脉弓合并硬脑膜动静脉瘘一例

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介入放射学杂志 2014年第5期23卷 421-422页

作者：刘彦超段传志张炘李西锋何旭英李辉南方医科大学珠江医院神经外科、广东省神经外科研究所、国家临床重点专科、广东省脑功能修复与再生重点实验室广州510282

病历资料患者，男，34岁。于2013年7月1日因“突发头痛、头晕4d”人住我院。人院时患者头痛、头晕，伴视物旋转、恶心、呕吐。查体示双侧眼球震颤，余无阳性体征。行头颅CT示：小脑出血并破人脑室。考虑小脑动静脉畸形破裂出血，并于7... 详细信息

病历资料患者，男，34岁。于2013年7月1日因“突发头痛、头晕4d”人住我院。人院时患者头痛、头晕，伴视物旋转、恶心、呕吐。查体示双侧眼球震颤，余无阳性体征。行头颅CT示：小脑出血并破人脑室。考虑小脑动静脉畸形破裂出血，并于7月3日行主动脉弓联合脑血管造影术．术中示异位主动脉弓、右侧沿颈交界区动静脉瘘形成，由右侧椎动脉V4段脑膜支及右侧咽升动脉供血为主，主要向左侧横窦引流。

关键词：右位主动脉弓硬脑膜动静瘘 Onyx胶

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氩氦冷冻胶质瘤细胞致敏树突状细胞诱导肿瘤杀伤效应的实验研究

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中华神经医学杂志 2013年第12期12卷 1228-1233页

作者：殷志林卢国辉肖振勇刘天助何骁征王其福林春南张世忠南方医科大学珠江医院神经外科广东神经外科研究所广东省脑功能修复与再生重点实验室广州510282

目的探讨氩氦冷冻胶质瘤细胞冻融产物对C57BL／6小鼠骨髓源树突状细胞（DCs）成熟的影响．以及致敏DCs诱导肿瘤杀伤效应的作用机制。方法采用氩氦冷冻法冻融GL261胶质瘤细胞为实验组，只插入探针不冷冻为阴性对照组，冻融等量PBS为空白... 详细信息

目的探讨氩氦冷冻胶质瘤细胞冻融产物对C57BL／6小鼠骨髓源树突状细胞（DCs）成熟的影响．以及致敏DCs诱导肿瘤杀伤效应的作用机制。方法采用氩氦冷冻法冻融GL261胶质瘤细胞为实验组，只插入探针不冷冻为阴性对照组，冻融等量PBS为空白对照组，采用BCA法测定冻融产物蛋白浓度；体外诱导小鼠骨髓细胞为DCs，加入各组冻融产物后观察其形态学变化。流式细胞仪检测DCs表面CD80、CD86、MHC—I、MHC-Ⅱ的表达。ELISA检测其上清液中IL．12p70的含量；提取小鼠脾脏T细胞，与各组抗原致敏的DCs共培养后活化，流式细胞仪检测活化T细胞CD3、CD4、CD8的表达；以GL261细胞为靶细胞，以活化的T细胞即细胞毒性T细胞（CTLsl作为效应细胞，效靶比分别为10：1、50：1和100：1时CCK-8法检测CTLs对GL261的杀伤率。结果实验组冻融产物即肿瘤抗原浓度[（1071±240．94）μg／mE]高于阴性对照组[（91．42±55．75）μg／mL]及空白对照组（0Ixg／mL），差异有统计学意义（JD〈O．05）；实验组DCs有典型成熟DCs形态，表型CD80、CD86、MHC-I、MHC—II的表达率及IL-12p70分泌量高于阴性对照组及空白对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）；实验组CD80细胞表达率高，CD4＋T细胞表达率低，与阴性对照组及空白对照组相比差异有统计学意义（p〈0．05）；不同效靶比时实验组CTLs对GL261细胞的杀伤率显著高于阴性对照组及空白对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论氩氦冷冻胶质瘤细胞可获取大量肿瘤抗原并促进DCs成熟，冻融产物致敏DCs后可有效负载肿瘤抗原产生抗肿瘤效应，其机制与DCs表面分子CD80、CD86、MHC-I、MHC-Ⅱ的表达上调并诱导T细胞转化为CTLs有关。

关键词：氩氦冷冻神经胶质瘤树突状细胞细胞毒性T细胞

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脑出血后血红蛋白对血脑屏障内皮细胞Rho激酶Ⅱ及紧密连接蛋白claudin-5的影响

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中华神经医学杂志 2013年第6期12卷 555-560页

作者：邓心情陈祎招杨硕李兵蒋伟平付正浩姜晓丹南方医科大学珠江医院神经外科广东神经外科研究所广东省脑功能修复与再生重点实验室广州510280

目的探讨脑出血后血红蛋白对血脑屏障内皮细胞Rho激酶Ⅱ及紧密连接蛋白claudin-5的影响。方法将SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组（18只）和血红蛋白组（72只），血红蛋白组再按不同取材时间点分为24h、48h、3d、7d4个亚组（每个时间... 详细信息

目的探讨脑出血后血红蛋白对血脑屏障内皮细胞Rho激酶Ⅱ及紧密连接蛋白claudin-5的影响。方法将SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组（18只）和血红蛋白组（72只），血红蛋白组再按不同取材时间点分为24h、48h、3d、7d4个亚组（每个时间点18只）。血红蛋白组采用脑内注入血红蛋白法制作脑出血大鼠模型。免疫组化染色观察各组大鼠血脑屏障内皮细胞Rho激酶Ⅱ及磷酸化肌球蛋白轻链的蛋白表达，伊文思蓝浓度测定评估血脑屏障通透性，免疫荧光染色和实时荧光定量PCR检测claudin-5蛋白和mRNA表达。结果免疫组化染色结果显示：正常对照组血脑屏障内皮细胞Rho激酶Ⅱ及磷酸化肌球蛋白轻链表达较少，血红蛋白组血肿侧血脑屏障内皮细胞呈棕黄色及线条状表达；血红蛋白组48h、3d时血脑屏障内皮细胞Rho激酶Ⅱ及磷酸化肌球蛋白轻链平均吸光度值明显高于正常对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。血红蛋白组各时间点脑内伊文思蓝含量均明显高于正常对照组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。免疫荧光染色结果显示：与正常对照组相比，血红蛋白组24h、48h及3d时claudin-5蛋白表达断续和减少。实时荧光定量PCR结果显示：血红蛋白组24h、48h、3d及7d时claudin．5mRNA表达水平明显低于正常对照组，差异有统计学意义（氏0．05）。结论脑出血后血红蛋白可以导致血脑屏障内皮细胞Rho激酶Ⅱ的表达增高，进而致磷酸化肌球蛋白轻链表达增加、紧密连接蛋白claudin-5表达降低，其可能是导致脑出血后血脑屏障破坏及脑水肿发生的重要机制之一。

关键词：脑出血血红蛋白血脑屏障 Rho激酶Ⅱ 紧密连接蛋白claudin-5

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低频电刺激脚桥被盖核对帕金森病大鼠步态和运动能力的影响

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中华神经医学杂志 2014年第6期13卷 552-557页

作者：杨勇张旺明郑伟新罗敏捷王军周铭文朋南方医科大学珠江医院神经外科广东神经外科研究所广东省脑功能修复与再生重点实验室广州510280

目的研究低频电刺激脚桥被盖核（PPTg）对偏侧帕金森病（PD）大鼠步态及运动能力的影响。方法32只雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组（n=8）和实验组（n=24）；2组大鼠采用立体定向手术将6-羟基多巴胺注入大鼠右侧前脑内侧束（MFB）... 详细信息

目的研究低频电刺激脚桥被盖核（PPTg）对偏侧帕金森病（PD）大鼠步态及运动能力的影响。方法32只雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组（n=8）和实验组（n=24）；2组大鼠采用立体定向手术将6-羟基多巴胺注入大鼠右侧前脑内侧束（MFB），实验组大鼠在此基础上将电极植入右侧PPTg。分别于立体定向术前1周、术后3周对2组大鼠行Catwalk步态及旷场实验并采集数据；术后4周．实验组行低频电刺激PPTg后再次采集行为学数据。结果Catwalk步态实验结果显示，与术前比较，2组大鼠术后的双爪耦合值（右前→左前、右前→左后、右后→左前、右后→左后）均增加，术后速度变化百分比均增加，每秒步数均减少，差异有统计学意义（P〈0．05）。与刺激前比较，实验组大鼠低频电刺激PPTg后双爪耦合值均减少，速度变化百分比减少，每秒步数增加，差异有统计学意义（P〈0．05）。旷场实验中：实验组和对照组大鼠术后运动距离明显减少。实验组大鼠行低频电刺激PPTg后运动距离较刺激前明显增加，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论低频电刺激PPTg可改善偏侧PD大鼠步态和运动能力，Catwalk步态实验及旷场实验可有效检测该刺激作用的效果。

关键词：脚桥被盖核低频电刺激帕金森病 Catwalk步态系统旷场实验

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一种连续获取大量高纯度小胶质细胞的培养方法

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中华神经医学杂志 2011年第4期10卷 382-388页

作者：李业海秦琨杨志林秦玲莎邹雨汐姜晓丹南方医科大学珠江医院神经外科广东神经外科研究所广东省脑功能修复与再生重点实验室广州510282

目的建立一种简易、高产量高纯度的连续获得小胶质细胞的培养方法。方法原代培养新生1～3dWistar大鼠大脑皮层中混合胶质细胞，第8-9天采用振摇法和玻璃吸管吹打法分离获得Yield1小胶质细胞，按1：2传代培养剩余贴壁的混合胶质细胞，分... 详细信息

目的建立一种简易、高产量高纯度的连续获得小胶质细胞的培养方法。方法原代培养新生1～3dWistar大鼠大脑皮层中混合胶质细胞，第8-9天采用振摇法和玻璃吸管吹打法分离获得Yield1小胶质细胞，按1：2传代培养剩余贴壁的混合胶质细胞，分别继续培养10～12d、12～14d后应用同样方法获得Yield2、Yield3小胶质细胞：采用流式细胞仪分析所获小胶质细胞CD11b／c、CD45、CD80、CD86、GFAP的表达，免疫荧光染色和CCK-8法分别检测小胶质细胞CD11b／c的表达和增殖情况，应用扫描电镜观察其超微结构，应用吞噬红色乳胶微球实验评价其吞噬功能。结果本实验所用培养方法连续稳定地获得了大量高纯度的小胶质细胞：流式细胞仪检测结果显示Yield1与Yield3小胶质细胞CD11b／c、CD45、CD80、CD86表达阳性：免疫荧光染色显示Yield1、Yield2、Yield3小胶质细胞CD11b／c表达均阳性；CCK-8法结果显示3代小胶质细胞增殖活力相比较差异无统计学意义（P〉0．05）；扫描电镜显示3代小胶质细胞形态均呈胞体饱满、胞突细长等细胞形貌特点。相同条件下Yield1、Yield3小胶质细胞之间吞噬功能比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论以本实验方法可以连续获得大量高纯度的小胶质细胞，且这些不同代次小胶质细胞的抗原表型、增殖活力及吞噬功能无明显差异，可为相关的实验研究提供细胞来源。

关键词：小神经胶质细胞细胞培养技术实验室技术和方法

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微导管塑形在颅内动脉瘤栓塞治疗中的应用

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中华神经医学杂志 2015年第6期14卷 576-581页

作者：何旭英段传志李西锋张炘李铁林李辉方钦锐李维南方医科大学珠江医院神经外科、广东神经外科研究所、广东省脑功能修复与再生重点实验室广州510282

目的探讨颅内动脉瘤栓塞治疗中微导管塑形的方法. 方法南方医科大学珠江医院神经外科自2011年1月至2014年12月成功栓塞治疗923例颅内动脉瘤,回顾性分析患者的临床资料及栓塞过程中微导管塑形的应用. 结果栓塞前均根据动脉瘤的情况进... 详细信息

目的探讨颅内动脉瘤栓塞治疗中微导管塑形的方法. 方法南方医科大学珠江医院神经外科自2011年1月至2014年12月成功栓塞治疗923例颅内动脉瘤,回顾性分析患者的临床资料及栓塞过程中微导管塑形的应用. 结果栓塞前均根据动脉瘤的情况进行了微导管塑形,923例颅内动脉瘤均成功栓塞,其中应用直形58例,单弯塑形167例,双弯塑形362例,S形131例,Z形或反S形8例,螺旋形或猪尾巴形148例,其他类型49例.术后即刻造影显示654例动脉瘤达致密栓塞,269例达基本致密栓塞,栓塞过程中无并发症发生. 结论良好的微导管塑形对于颅内动脉瘤栓塞是安全及有效的.

关键词：动脉瘤,颅内栓塞微导管塑形

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Scriptaid对小鼠体细胞核移植克隆胚早期发育能力的提高作用

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中华神经医学杂志 2012年第5期11卷 433-437页

作者：李正阳邹雨汐孙海涛姜晓丹南方医科大学珠江医院神经外科广东神经外科研究所广东省脑功能修复与再生重点实验室

目的探讨抗肿瘤药物Scriptaid对小鼠体细胞核移植（SCNT）克隆胚体外发育的影响及提高移植效率的新途径。方法以C57／BL6小鼠卯母细胞为受体、卯丘细胞为供体进行SCNT，构建克隆胚，并采用数字随机表法将克隆胚分为5组，分别在含0nmol／... 详细信息

目的探讨抗肿瘤药物Scriptaid对小鼠体细胞核移植（SCNT）克隆胚体外发育的影响及提高移植效率的新途径。方法以C57／BL6小鼠卯母细胞为受体、卯丘细胞为供体进行SCNT，构建克隆胚，并采用数字随机表法将克隆胚分为5组，分别在含0nmol／L（阴性对照组1、50、100、250、500nmol／LScriptaid的无钙激活剂中激活6h．然后在含相应浓度Scriptaid的KSOM培养基中处理4h，最后转移至KSOM培养基中孵育96h。观察、记录各组克隆胚的发育情况并进行囊胚细胞计数。结果各组克隆胚激活率和***率之间差异无统计学意义（P〉O．05）；250nmol／LScript,aid组的囊胚形成率（24．2％）和囊胚细胞数（56．27±2．43）与0 nmol／L组、50nmol／L组、100nmol／L、500nmol／LScriptaid组之间f其囊胚形成率分别为5．3％、6．5％、9．4％和6．9％．囊胚细胞数分别为44.67±1.53, 50.25±1.26, 52.33± 2.50 和 50.75±1.50比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论250nmol／LScrimaid能有效提高小鼠SCNT克隆胚体外早期发育能力。

关键词：核移植克隆组蛋白去乙酰化干细胞

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超小超顺磁氧化铁颗粒标记对脂肪源间充质干细胞生物学特性的影响

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中华神经医学杂志 2012年第5期11卷 443-447页

作者：姚晨郭燕舞李明陈强卢凤飞卢国辉张世忠姜晓丹南方医科大学珠江医院神经外科广东神经外科研究所广东省脑功能修复与再生重点实验室

目的使用超小超顺磁氧化铁颗粒（uSPIO）c对大鼠脂肪源间充质干细胞（ADSCs）进行体外标记，研究不同浓度的USPIO对大鼠ADSCs生物学活性的影响，确定其标记ADSCs的适宜浓度。方法实验分为8个组，其中6组依次添加不同终浓度的USPIO（180... 详细信息

目的使用超小超顺磁氧化铁颗粒（uSPIO）c对大鼠脂肪源间充质干细胞（ADSCs）进行体外标记，研究不同浓度的USPIO对大鼠ADSCs生物学活性的影响，确定其标记ADSCs的适宜浓度。方法实验分为8个组，其中6组依次添加不同终浓度的USPIO（180μg／mL、135μg／mL、90μg／mL、45μg／mL、22．5μg／mL、11．25μg／mL）。另2组为阴性转染组和空白对照组。普鲁士蓝染色检测USPl0标记ADSCs的效率，同时采用CCK-8及Alamarblue法检测各组细胞增殖情况。结果USPIO标记浓度在45μg/mL时，普鲁士蓝染色后ADSCs胞浆内可见大量蓝色颗粒，标记效率在95％以上；USPIO标记浓度在90μg／mL及以上时，标记效率约100％。CCK．8及Alamarblue检测结果表明USPl0在11-25μg/mL范围内对细胞活力的影响较小且差异无统计学意义（P〉0．05），故可将45—90μg／mL确定为适宜浓度。结论USPIO可在体外有效标记ADSCs，并且在适宜浓度范围内对细胞生物学活性无明显影响。

关键词：脂肪源间充质干细胞超小超顺磁氧化铁颗粒细胞活力

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以红核中心为标定点的丘脑底核靶点定位研究

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中华神经医学杂志 2014年第12期13卷 1203-1206页

作者：文丽红陈静贤白一辰姚陇平张世忠南方医科大学珠江医院神经外科、广东神经外科研究所、脑功能修复与再生重点实验室广州510280

目的探讨脑深部电刺激术（STN-DBS）qh以红核中心为标定点的丘脑底核靶点定位的方法。方法选择南方医科大学珠江医院神经外科自2012年9月至2013年9月收集的16例成年人志愿者为研究对象，其中帕金森病（PD）患者8例（PD组），正常人8例... 详细信息

目的探讨脑深部电刺激术（STN-DBS）qh以红核中心为标定点的丘脑底核靶点定位的方法。方法选择南方医科大学珠江医院神经外科自2012年9月至2013年9月收集的16例成年人志愿者为研究对象，其中帕金森病（PD）患者8例（PD组），正常人8例（正常人组）。于红核直径最大的图层上，取国际公认12mm线，及其所确定的靶点与红核中点的连线．和前后联合连线所围成的三角形，测量其较大锐角（记为角度α）和边长（记为长度b）。采用SPSS13．0软件进行数据处理和分析。结果16例志愿者的红核直径a左侧为（0．93±0．05）cm，右侧为（0．92±0．03）cm；长度b左侧为（0．81±0．09）cm，右侧为（0．82±0．06）cm；角度α左侧为（56．76±2．87）°，右侧为（55．98±2．30）°。PD组左、右侧红核直径a、长度b以及角度α与正常人组之间的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论以红核中心为标定点的丘脑底核靶点定位方法具有较高的临床应用价值，可作为辅助方法提高手术靶点定位的准确度。

关键词：丘脑底核红核靶点定位帕金森病脑深部电刺激术

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