检索结果-内蒙古大学图书馆

中国实验血液学杂志 2023年第5期31卷 1543-1549页

作者：黎裕元张玲蔡葵吴敏华朱琳睿黎诚耀南方医科大学检验与生物技术学院输血医学系广东广州510000 佛山市第一人民医院输血科广东佛山528000

目的:改良美国输血协会《AABB技术手册》中经典的二硫苏糖醇(DTT)处理红细胞法,探讨其在使用达雷妥尤单抗(daratumumab)治疗的患者输血前检查中的应用价值。方法:从PBS、DTT浓度、供者红细胞浓度(悬浮/压积)及样本处理时间方面,对经典的... 详细信息

目的:改良美国输血协会《AABB技术手册》中经典的二硫苏糖醇(DTT)处理红细胞法,探讨其在使用达雷妥尤单抗(daratumumab)治疗的患者输血前检查中的应用价值。方法:从PBS、DTT浓度、供者红细胞浓度(悬浮/压积)及样本处理时间方面,对经典的0.2 mol/L AABB DTT法进行改良,将改良DTT法和AABB经典DTT方法应用于12例达雷妥尤单抗治疗的多发性骨髓瘤患者的配血试验,并用已知抗体性质的抗血清和抗体试剂评估改良DTT法处理谱红细胞后对其他不规则抗体检出的影响。结果:建立了2种改良DTT法(方法一:将DTT浓度改为0.01 mol/L;方法二:将DTT浓度改为0.02 mol/L,并将压积红细胞改为3%悬浮红细胞)。改良DTT法处理红细胞最佳处理时间为35 min,不仅能够消除达雷妥尤单抗造成的全凝集现象,且不影响抗-E、抗-Jk^(a)、抗-M等抗体的检出,对抗-K抗体的测定效价仅有略微下降。结论:改良DTT法安全有效,能够在消除达雷妥尤单抗干扰的同时保留Kell血型系统活性,可以替代目前AABB经典的DTT配血方法。

关键词：二硫苏糖醇达雷妥尤单抗多发性骨髓瘤 CD38 Kell血型系统

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布鲁氏菌外膜蛋白L16、L19对THP-1细胞免疫调控因子表达的影响

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中华地方病学杂志 2023年第5期42卷 345-350页

作者：杨恒谢红珍易嘉敏胡飞环任慧王文敬南方医科大学珠江医院输血科广州510280 南方医科大学检验与生物技术学院输血医学系广州510515 广州中医药大学第一临床医学院广州510400 广东省人民医院输血科广州510080 广州血液中心输血研究所广州510095

目的初步探究布鲁氏菌外膜蛋白16、19脂化型重组蛋白(L16、L19)对人单核细胞白血病细胞系(THP-1细胞)免疫调控因子表达的影响。方法以佛波酯(PMA)活化的THP-1细胞为体外实验细胞模型,采用成组设计,分别将L16、L19与THP-1细胞共培养(L16... 详细信息

目的初步探究布鲁氏菌外膜蛋白16、19脂化型重组蛋白(L16、L19)对人单核细胞白血病细胞系(THP-1细胞)免疫调控因子表达的影响。方法以佛波酯(PMA)活化的THP-1细胞为体外实验细胞模型,采用成组设计,分别将L16、L19与THP-1细胞共培养(L16刺激组、L19刺激组),并以PMA活化的THP-1细胞为对照组。共培养4 h时,分别采用免疫荧光染色(IFS)法和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测L16、L19是否进入细胞。共培养12、24 h时,实时荧光定量PCR法测定干扰素调节因子1(IRF-1)、Ⅱ类主要组织相容性复合物反式激活蛋白(CⅡTA)mRNA表达水平;Western blot法检测T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(Tim-3)和γ干扰素受体1(IFNGR1)蛋白表达水平。结果共培养4 h时,可见L16、L19分别进入L16、L19刺激组THP-1细胞内。共培养12 h时,L16刺激组IRF-1 mRNA表达水平(0.16±0.15)明显低于对照组(1.00±0.00,P<0.05);共培养24 h时,L16刺激组CⅡTA mRNA表达水平(0.17±0.10)明显低于对照组(1.00±0.00,P<0.05);共培养12、24 h时,L19刺激组IRF-1、CⅡTA mRNA表达水平与对照组比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。Western blot结果显示,共培养12、24 h时,对照组、L16刺激组、L19刺激组INFGR1、Tim-3蛋白表达水平比较,差异均有统计学意义(F=50.92、6.80、148.73、156.57,均P<0.05)。其中,共培养12 h时,L16、L19刺激组INFGR1蛋白表达水平均明显低于对照组,且L19刺激组高于L16刺激组(均P<0.05);而L19刺激组Tim-3蛋白表达水平高于对照组(P<0.05)。共培养24 h时,L16、L19刺激组INFGR1蛋白表达水平均低于对照组,且L19刺激组高于L16刺激组(均P<0.05);而L16刺激组Tim-3蛋白表达水平高于对照组和L19刺激组(均P<0.05)。结论布鲁氏菌L16可以下调THP-1细胞IRF-1、CⅡTA mRNA表达水平;L16、L19均能够下调IFNGR1、上调Tim-3蛋白表达水平。

关键词：布鲁杆菌属外膜蛋白免疫调控因子

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基于二代测序的RhD阳性个体RHD基因mRNA选择性剪接分析

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中山大学学报（医学科学版） 2021年第1期42卷 51-56页

作者：罗亚林魏玲姬艳丽罗广平付涌水温机智黎诚耀南方医科大学检验与生物技术学院输血医学系广东广州510515 广州血液中心临床输血研究所广东广州510095

【目的】本研究旨在对RhD阳性个体中红细胞特异性表达的RHD基因不同转录本进行分析,并对选择性剪接发生的机制进行初步探讨。【方法】利用体外有核红细胞培养体系分离并培养RhD阳性个体的有核红细胞,使用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术... 详细信息

【目的】本研究旨在对RhD阳性个体中红细胞特异性表达的RHD基因不同转录本进行分析,并对选择性剪接发生的机制进行初步探讨。【方法】利用体外有核红细胞培养体系分离并培养RhD阳性个体的有核红细胞,使用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对RhD阳性个体RHD基因外显子6至3’非编码区扩增后进行二代测序,分析mRNA转录本,并采用生物信息学方法分析RHD基因所有外显子5’及3’剪接位点的最大熵值。【结果】RHD基因的转录本以正常全长mRNA为主,除此之外还存在其他8种异常转录本。按照表达量从多到少,分别为外显子7缺失、外显子9缺失、外显子8和9缺失、外显子7、8和9缺失、外显子7和9缺失、外显子8和9缺失合并外显子7与10间插入一段170 bp的内含子7片段、全长mRNA但插入170 bp的内含子7片段和外显子9缺失但插入一170 bp的内含子7片段,其中最后3种为新转录本。生物信息学分析提示外显子7和外显子9异常剪接可能与其5’-剪接位点(5’-splice site,5’ss)或3’ss和剪接体结合能力下降有关,而内含子7片段异常表达于转录本中可能与其两端存在类似5’ss和3’ss剪接保守序列有关。【结论】RHD基因存在十分复杂的选择性剪接模式,使RhD阳性个体的RHD基因在mRNA水平上存在多种不同的剪接转录本。

关键词： RhD阳性二代测序转录本剪接

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布鲁菌外膜蛋白16对成骨细胞的毒力作用

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中华地方病学杂志 2021年第6期40卷 448-453页

作者：任慧杨恒胡飞环易嘉敏黎诚耀王文敬南方医科大学检验与生物技术学院输血医学系广东广州510515 南方医科大学珠江医院输血科广东广州510280 广东省人民医院输血科广州510080 广州中医药大学 510400

目的观察布鲁菌外膜蛋白(OMP)16脂化型(L16)和非脂化型(U16)对成骨细胞的毒力效应。方法利用大肠埃希菌BL21(DE3)原核表达系统制备L16和U16重组蛋白,并使用镍柱纯化。采用成组设计,利用小鼠成骨细胞系(MC3T3细胞)分别与L16和U16重组蛋... 详细信息

目的观察布鲁菌外膜蛋白(OMP)16脂化型(L16)和非脂化型(U16)对成骨细胞的毒力效应。方法利用大肠埃希菌BL21(DE3)原核表达系统制备L16和U16重组蛋白,并使用镍柱纯化。采用成组设计,利用小鼠成骨细胞系(MC3T3细胞)分别与L16和U16重组蛋白共孵育(L16、U16刺激组),以布鲁菌脂多糖(LPS)刺激物为阳性对照(LPS对照组),未加任何刺激的细胞作为阴性对照,孵育时间为24 h。CCK-8法检测MC3T3细胞的活力;离心收集培养细胞上清,生物发光法测定上清中乳酸脱氢酶(LDH)的释放率,评价L16和U16对MC3T3细胞的毒力作用;进一步使用AnnexinⅤ-PE/7-AAD双染流式细胞术检测MC3T3细胞的凋亡率,以及通过免疫印迹法(WB)检测凋亡执行蛋白Caspase-3的活化水平。结果L16刺激组细胞活力[(56.16±1.63)%]显著低于U16刺激组和LPS对照组[(97.02±1.44)%、(98.64±0.90)%,P均<0.01],LDH释放率[(84.64±0.96)%]显著高于U16刺激组和LPS对照组[(34.82±3.41)%、(26.75±1.95)%,P均<0.01]。AnnexinⅤ-PE/7-AAD染色结果显示,L16刺激组细胞凋亡率为(46.45±2.19)%,而其余组均<1%。WB结果显示,L16刺激组细胞内存在活化的Caspase-3,而U16刺激组和LPS对照组未检测到此活化片段。结论L16能诱导成骨细胞的凋亡,使成骨细胞的增殖受到抑制,而U16的作用不明显,具备完整脂化结构的布鲁菌L16是毒力效应所必需的。

关键词：布鲁杆菌属外膜蛋白成骨细胞系细胞活力乳酸脱氢酶细胞凋亡

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细胞外囊泡分离与检测技术专家共识

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中华检验医学杂志 2024年第8期47卷 852-863页

作者：中国研究型医院学会细胞外囊泡研究与应用专业委员会中华医学会检验医学分会分子诊断学组李博张晔王通吕林莉颜晓梅汪决蔡志坚陈刚陈熹付清玲刘飞刘婷姣钱晖徐文华杨露尹航张鹏赵可伟邹和群黄依瑶潘炜伦刘春辰欧子豪郑磊王前不详南方医科大学南方医院检验医学科暨南大学生命科学技术学院/暨南大学附属第一医院检验科东南大学附属中大医院肾脏科/肾脏病研究所厦门大学化学化工学院化学生物学系上海交通大学医学院附属第六人民医院骨科研究所浙江大学基础医学院口颌系统重建与再生全国重点实验室/武汉大学口腔医院口腔颌面外科南京大学生命科学学院中山大学附属第一医院耳鼻咽喉科哈佛医学院布莱根妇女医院医学系医学工程科上海市口腔医院/复旦大学附属口腔医院病理科江苏大学医学院医学检验系青岛大学再生医学与检验创新研究院/青岛大学医学部检验系电子科技大学医学院基础医学系清华大学药学院上海交通大学医学院分子医学研究院广州中医药大学第三附属医院/中草药囊泡广东省工程研究中心香港中文大学(深圳)医学院南方医科大学珠江医院检验医学部与转化医学中心

细胞外囊泡是细胞间传递信息的重要载体,在人体病理生理过程中发挥着重要作用,在液体活检领域也有巨大潜力。然而,目前细胞外囊泡分离与检测技术多样,各有优缺点。因此,建立细胞外囊泡分离与检测技术专家共识,对于推动EV的研究转化与临... 详细信息

细胞外囊泡是细胞间传递信息的重要载体,在人体病理生理过程中发挥着重要作用,在液体活检领域也有巨大潜力。然而,目前细胞外囊泡分离与检测技术多样,各有优缺点。因此,建立细胞外囊泡分离与检测技术专家共识,对于推动EV的研究转化与临床应用具有重要价值。本共识由中国研究型医院学会细胞外囊泡研究与应用专业委员会和中华医学会检验医学分会分子诊断学组共同编写,汇聚了来自检验医学、基础医学、临床医学、分析化学、生物学和材料科学等多个相关领域专家的观点和经验,详细阐述了常用细胞外囊泡分离与检测技术及其不同应用场景,并进一步指明了细胞外囊泡临床应用转化的关键技术要点。

关键词：细胞外囊泡分离技术检测技术专家共识

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流式细胞术检测NK细胞的细胞毒作用的两种方法比较

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中国免疫学杂志 2019年第3期35卷 325-330页

作者：蔡思齐邓志辉南方医科大学检验与生物技术学院输血医学系广州510515

目的:比较并优化流式细胞术检测人NK细胞体外细胞毒功能的方法。方法:采用Calcein-AM释放法或CFSE/7-AAD法分别对靶细胞进行标记,按10∶1和20∶1效靶比与7例NK细胞在37℃5%CO2培养箱共培养4 h,流式细胞术测定两种不同标记方法的靶细胞... 详细信息

目的:比较并优化流式细胞术检测人NK细胞体外细胞毒功能的方法。方法:采用Calcein-AM释放法或CFSE/7-AAD法分别对靶细胞进行标记,按10∶1和20∶1效靶比与7例NK细胞在37℃5%CO2培养箱共培养4 h,流式细胞术测定两种不同标记方法的靶细胞死亡率。结果:各实验组中CFSE/7-AAD法检出的靶细胞死亡率均高于Calcein-AM释放法,在低效靶比、弱细胞毒作用条件下,差异具有统计学意义。细胞毒作用较弱时,Calcein-AM释放法平均荧强度变化不显著、结果误差较大;而CFSE/7-AAD法则能更加敏感地检出靶细胞的死亡率。结论:CFSE/7-AAD法能够特异、灵敏地检出NK细胞的细胞毒活性,所获得的结果更为可靠。

关键词：流式细胞术细胞毒作用 NK细胞钙黄绿素乙酰甲酯羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯 7-氨基-放线菌素D

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广州地区丙型肝炎病毒主要基因型E1蛋白胞外域序列分析

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中国病原生物学杂志 2020年第11期15卷 1241-1245,1256页

作者：杜荣松许茹黄杰庭王敏廖峭单振刚戎霞王淏郑优荣付涌水南方医科大学检验与生物技术学院输血医学系广东广州510515 广州血液中心广州市医学重点实验室(血液安全重点实验室)

目的了解广州地区丙型肝炎病毒(HCV)主要流行基因型E1蛋白胞外域氨基酸序列突变特征。方法采集2012-2018年380例广州地区HCV感染者血液标本,使用试剂盒提取HCV RNA,进行Core/E1区序列巢式PCR扩增和测序,采用Mega 7.0构建系统进化树进行... 详细信息

目的了解广州地区丙型肝炎病毒(HCV)主要流行基因型E1蛋白胞外域氨基酸序列突变特征。方法采集2012-2018年380例广州地区HCV感染者血液标本,使用试剂盒提取HCV RNA,进行Core/E1区序列巢式PCR扩增和测序,采用Mega 7.0构建系统进化树进行基因分型,对广州地区流行的HCV主要基因型的E1胞外域部分序列进行氨基酸翻译和构建共有序列,利用生物信息软件、统计软件分析HCV E1胞外域氨基酸位点突变的分布特征、替换模式及与宿主免疫的关系。结果广州地区HCV主要流行基因型为1b和6a,分别占38.68%和41.84%;1b和6a基因型E1蛋白胞外域(aa 192-320)发生突变的氨基酸位点分别有62个(48.1%)和60个(46.5%),差异无统计学意义(χ^2=2.04,P>0.05);突变主要发生在aa 192-260区段,1b型的高度突变位点(突变率≥20%)比较分散,6a型则集中在aa231-243区段;高度突变位点均处于免疫表位区,BLOSUM评分显示大部分突变位点氨基酸替换模式为保守性替换。结论HCV基因型1b和6a蛋白E1胞外域的高度突变位点主要位于免疫表位区,大部分突变为保守性替换而且种类多样,可能与免疫压力有关。

关键词：丙型肝炎病毒基因型突变疫苗

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广州地区无偿献血者戊型肝炎病毒感染流行病学调查

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中国人兽共患病学报 2019年第4期35卷 363-368页

作者：尤庆柱黄杰庭许茹王敏廖峭单振刚戎霞付涌水南方医科大学检验与生物技术学院输血医学系广州510515 广州血液中心广州510095

目的调查广州地区无偿献血者的戊型肝炎病毒(hepatitis E virus, HEV)感染情况。方法 2017年4月-2018年4月间收集了5 552名广州血液中心无偿献血者的血液样本,采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测抗-HEV ... 详细信息

目的调查广州地区无偿献血者的戊型肝炎病毒(hepatitis E virus, HEV)感染情况。方法 2017年4月-2018年4月间收集了5 552名广州血液中心无偿献血者的血液样本,采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测抗-HEV IgG抗体(HEV IgG)、抗-HEV IgM抗体(HEV IgM)和HEV抗原(HEV Ag),采用χ~2检验分析年龄、性别、民族、职业和ALT等因素分别与HEV IgG和IgM抗体阳性的相关性,采用多因素Logistic回归分析判辨HEV感染的独立风险因素。结果 HEV IgG、IgM和HEV Ag的阳性率分别为20.05%(1 113/5 552)、0.76%(42/5 552)和0.04%(2/5 552)。年龄和民族是HEV IgG和HEV IgM阳性率的独立风险因素:HEV阳性率随着年龄增长而增大(IgG OR=1.089, 95%CI:1.080-1.098,P<0.001; IgM OR=1.055,95%CI:1.028-1.084,P<0.001);壮族的HEV IgG和IgM阳性率(32.69%, 7.69%)高于汉族(19.89%, 0.70%),差异有统计学意义(IgG OR=2.052, 95%CI:1.103-3.819,P=0.023; IgM OR=12.029, 95%CI:4.067-35.580,P<0.001)。此外,我们还发现职业是HEV IgG阳性率的独立风险因素,学生是阳性率最低的人群。结论广州地区无偿献血者中HEV抗体阳性率较高,且在不同人群中感染情况不同,为输血传播HEV的风险评估提供基础数据。

关键词：戊型肝炎病毒无偿献血者风险因素

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布鲁菌Omp31的单克隆抗体在流式细胞术中的初步应用

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中华地方病学杂志 2020年第9期39卷 647-653页

作者：杨鑫田艳君任慧胡飞环张国侠张辉王文敬黎诚耀南方医科大学检验与生物技术学院输血医学系广州510515 黑龙江省农垦总局总医院感染科哈尔滨150088 广东省人民医院输血科广州510120 新疆石河子大学动物科学院 832003

目的利用布鲁菌Omp31的单克隆抗体,初步建立布鲁菌抗原流式细胞术(FCM)检测方法,分析该方法在人布鲁菌病(简称布病)临床样本检测中的价值。方法牛种布鲁菌2308、104M、S19,羊种布鲁菌M5-90和猪种布鲁菌S2共5个菌株,经超声破碎,获得其菌... 详细信息

目的利用布鲁菌Omp31的单克隆抗体,初步建立布鲁菌抗原流式细胞术(FCM)检测方法,分析该方法在人布鲁菌病(简称布病)临床样本检测中的价值。方法牛种布鲁菌2308、104M、S19,羊种布鲁菌M5-90和猪种布鲁菌S2共5个菌株,经超声破碎,获得其菌液上清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法和蛋白免疫印迹法(Western blot),检测已制备的抗布鲁菌Omp31单克隆抗体5H3对上述5个菌株的识别能力。构建Omp31重组真核表达载体(pcDNA3.1-Omp31)并转染人胚肾细胞(293FT细胞),Western blot检测Omp31蛋白的表达。羊种布鲁菌弱毒疫苗株M5-90侵染人急性单核细胞白血病细胞系(THP-1细胞),构建含菌单核吞噬细胞。将5H3抗体用异硫氰酸荧光素(FITC)或藻红蛋白(PE)标记,采用FCM,利用FITC-5H3抗体检测pcDNA3.1-Omp31转染293FT细胞和含菌单核吞噬细胞,鉴定该抗体对细胞内布鲁菌抗原的识别能力,初步建立FCM的检测方法,并测定FITC-5H3抗体在FCM中的灵敏度。利用双抗体(PE-5H3和FITC-CD14)的流式细胞染色测定人外周血单个核细胞(PBMCs),分析该方法应用于人布病临床检测的可行性。结果抗布鲁菌Omp31单克隆抗体5H3不仅能识别羊种布鲁菌M5-90菌株和猪种布鲁菌S2菌株,还能识别缺失Omp31基因的牛种布鲁菌2308、104M、S19菌株。FITC-5H3抗体可用于流式细胞染色识别细胞内的布鲁菌抗原,表达Omp31的293FT阳性细胞比例约为59.3%,疫苗株M5-90侵染的THP-1阳性细胞比例约为6.2%,检测293FT阳性转染细胞的灵敏度为4%。初步建立了基于PE-5H3和FITC-CD14的双抗体染色的FCM检测方法,该方法检测布病患者PBMCs中的双抗体阳性细胞比例(1.93%)高于健康人群(<0.30%,阴性)。结论利用FCM,初步建立了荧光素标记抗布鲁菌Omp31单克隆抗体5H3检测细胞内布鲁菌抗原的方法,并发现5H3抗体能识别牛种布鲁菌,弥补了布鲁菌抗原检测中Omp31的应用缺陷。此方法的建立为布病病原学检测方法的研究提供了新策略,为检测试剂的开发提供了新材料。

关键词：布鲁杆菌属 Omp31 单克隆抗体流式细胞术病原学检测

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HCV 3b亚型全长序列测定及基线耐药相关置换的分析

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临床肝胆病杂志 2020年第1期36卷 94-97页

作者：黄杰庭许茹廖峭王敏单振刚尤庆柱戎霞付涌水广州血液中心广州510095 广州市医学重点实验室(血液安全重点实验室) 广州510095 韶关市第一人民医院耳鼻喉科广东韶关512000 南方医科大学检验与生物技术学院输血医学系广州510515

目的探讨二代测序法(NGS)在HCV 3b全长序列及基线耐药相关置换(RAS)检测中的应用。方法从1例2016年7月在广州血液中心献血的献血者(HCV RNA阳性)血浆中提取核酸,经序列非依赖性扩增后,构建测序文库并采用illumina Hiseq进行深度测序,然... 详细信息

目的探讨二代测序法(NGS)在HCV 3b全长序列及基线耐药相关置换(RAS)检测中的应用。方法从1例2016年7月在广州血液中心献血的献血者(HCV RNA阳性)血浆中提取核酸,经序列非依赖性扩增后,构建测序文库并采用illumina Hiseq进行深度测序,然后通过生物信息学方法分析HCV全长序列、病毒基因分型以及针对直接抗病毒药物(DAA)的基线RAS。结果NGS获得8.4 Gb原始测序数据,序列数(reads)超过56 M。经生物信息学分析获得HCV全长序列,平均测序深度为488007,基因分型结果为3b亚型。病毒氨基酸序列里含有12个RAS,分别是NS3区域的Y56H、Q80K、Q80R、A156G,NS5A区域的M28G、Q/A30G、Q/A30K、L31F、L31M、Y93H,以及NS5B区域的S282T和V321A,其中位于NS5A区域的Q/A30K和L31M属于高丰度RAS(99.16%和98.37%),其余10个RAS丰度较低(<0.5%)。结论NGS用于HCV 3b亚型的全长序列检测和基因分型,最终鉴定出基线RAS,对于HCV 3b的流行病学研究和DAA治疗方案的制订有重要意义。

关键词：肝炎病毒属高通量核苷酸序列分析基因型

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