检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：刘铮徐佳伍丽琼王娟邓鹏姜勇南方医科大学病理生理学教研室和广东省蛋白质组学重点实验室

目的:初步探讨人髓样相关蛋白14（Myeloid-related protein-14:MRP14）在Hela细胞内化的分子机制。方法:将MRP14与增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）融合表达,通过荧光定位观察方法检测MRP14是否具有内化... 详细信息

目的:初步探讨人髓样相关蛋白14（Myeloid-related protein-14:MRP14）在Hela细胞内化的分子机制。方法:将MRP14与增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）融合表达,通过荧光定位观察方法检测MRP14是否具有内化活性;接着利用一系列与内化通路相关的抑制剂和荧光染料与带有绿色荧光的MRP14蛋白共同孵育细胞,通过荧光观察及荧光共定位方法阐明MRP14通过何种内化通路进行内化;之后在生物信息学基础上通过构建MRP14上不同结构域片断与EGFP的融合表达载体,利用荧光显微镜研究各功能域在介导MRP14内化过程中所起的作用;最后,利用溶酶体特异性染料和蛋白酶体抑制剂,证实了MRP14蛋白代谢与溶酶体代谢途径和泛素化代谢途径的相关性。结果:第一、MRP14以时间和能量依赖性方式通过内吞作用被哺乳动物细胞内化,内吞过程在15 min时已经开始,1h左右达到平衡,内吞的MRP14颗粒散在分布于细胞质内;第二、MRP14可能通过与细胞膜表面HSPG的HS链相互作用,并在其特异性受体协助下,通过依赖胞膜窖的内吞途径进入细胞,之后内吞小泡在细胞骨架协助下在细胞内运动,融合蛋白最终被蛋白酶体降解掉:第三、MRP14的内化是在Ca作用下.由两个钙离子结合基序协同作用,再由羧基末端的某个基序介导,进入细胞。结论:通过初步研究,我们提出一个新的MRP14作用于细胞的信号模型:在细胞外Ca存在的情况下,在细胞膜表面HSPG的HS的静电引力作用下,细胞外的MRP14首先被限制在靠近细胞膜的部位,接着在HS的协助下,与其特异性的受体相互作用,通过依赖胞膜窖的内吞途径进入细胞,入胞后的内吞小泡在细胞骨架协助下在细胞内运动,参与后续的信号反应,最终经泛素标记后,被蛋白酶体降解掉。

关键词：髓样相关蛋白内化依赖包涵素的内吞途径胞膜窖硫酸乙酰肝素蛋白多糖

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细胞信号转导的组学研究策略

细胞信号转导的组学研究策略

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中国病理生理学会受体和信号转导专业委员会暨消化专业委员会联合学术会议

作者：姜勇南方医科大学病理生理学教研室和广东省功能蛋白质组学重点实验室，广州 510515

细胞信号系统(cell signaling system)控制着细胞的代谢、增生、分化、迁移、细胞凋亡、炎症反应和应激适应等功能活动。在真核细胞，各种细胞过程往往并非单个信号转导分子或单一信号通路就能完成的，而是受到多个信号元件组成的信号... 详细信息

细胞信号系统(cell signaling system)控制着细胞的代谢、增生、分化、迁移、细胞凋亡、炎症反应和应激适应等功能活动。在真核细胞，各种细胞过程往往并非单个信号转导分子或单一信号通路就能完成的，而是受到多个信号元件组成的信号网络的精密调控。细胞的生命过程并不仅是许多独立反应的简单总和，而是由多种信号调节形式的复杂组合。经典的针对单一信号分子的研究模式，可能无法适应后基因组时代(post genome era)的综合集成式揭示生命活动机制的要求，因此，发展以系统生物学为指导思想的各种“组学(Omics)”技术和研究策略已经成为生命科学研究的必然趋势。本文集中介绍如何应用基因组学、蛋白质组学、噬菌体展示、酵母双杂交、生物信息学、生物质谱分析等技术来大规模、高通量、集成式研究蛋白信号分子的相互作用、调节机制及其生物学功能。

关键词：蛋白质组学信号分子复合物信号转导网络质谱分析

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绿色荧光标记C-反应蛋白的原核表达和毛细管电泳检测

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贵阳医学院学报 2008年第5期33卷 441-445页

作者：陈腾祥夏高晓陈丽刘亚伟刘靖华姜勇贵阳医学院生理学教研室贵州贵阳550004 南方医科大学病理生理学教研室和广东省蛋白质组学重点实验室广东广州510515

目的:表达纯化重组的His-EGFP-CRP蛋白,通过毛细管电泳技术对该重组蛋白的生物活性进行评价。方法:用pET14b/EGFP-hCRP原核表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达的重组蛋白通过亲和色谱纯化、梯度透析,获得复性的His-EGFP-CR... 详细信息

目的:表达纯化重组的His-EGFP-CRP蛋白,通过毛细管电泳技术对该重组蛋白的生物活性进行评价。方法:用pET14b/EGFP-hCRP原核表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达的重组蛋白通过亲和色谱纯化、梯度透析,获得复性的His-EGFP-CRP蛋白;并用高效毛细管电泳(HPCE)技术对复性的蛋白进行检测,了解蛋白质的等电点及活性。结果:转化实验发现,该质粒pET14b/EGFP-hCRP在BL21(DE3)中能够被诱导表达;通过包涵体变性溶解、亲和色谱纯化可获得纯度较高的His-EGFP-CRP蛋白;HPCE分离发现复性后的His-EGFP-CRP蛋白峰为多个,其在电泳液pH值低于6时易检出,His-EGFP-CRP与THP-1细胞裂解物孵育后的检测峰增多。结论:成功地在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达重组蛋白His-EGFP-CRP,通过包涵体变性溶解及亲和色谱纯化获得该重组蛋白,复性后的His-EGFP-CRP等电点接近于6,以单体或多聚体等结构形式存在,具有结合活性,能与细胞内相关分子结合成复合物,可应用于CRP功能和内化机制的研究。

关键词： C反应蛋白基因表达蛋白质复性电泳,毛细管

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人AWP1-RFP融合基因重组腺病毒的快速构建及其鉴定

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中华神经医学杂志 2005年第5期4卷 434-438页

作者：曹永宽莫永炎田伏洲邓鹏秦清和邢飞跃李红乐姜勇 510515 广州南方医科大学病理生理学教研室广东省功能蛋白质组学重点实验室 610083 成都军区总医院全军普外中心 510515 广州南方医科大学病理生理学教研室广东省功能蛋白质组学重点实验室 610083 成都军区总医院全军普外中心

目的构建人的AWP1与红色荧光蛋白(RFP)融合基因的重组腺病毒载体,为研究AWP1的生物功能提供工具. 方法将克隆的AWP1 cDNA插入高效表达RFP的载体pDsRed1N1的多克隆位点,与RFP序列形成AWP1-RFP融合基因,将该融合基因亚克隆到穿梭载体pAdTr... 详细信息

目的构建人的AWP1与红色荧光蛋白(RFP)融合基因的重组腺病毒载体,为研究AWP1的生物功能提供工具. 方法将克隆的AWP1 cDNA插入高效表达RFP的载体pDsRed1N1的多克隆位点,与RFP序列形成AWP1-RFP融合基因,将该融合基因亚克隆到穿梭载体pAdTrack-CMV和pAdShuttle-CMV中;经酶切鉴定正确后Pme Ⅰ线形化,与骨架质粒pAdEasy-1共转染大肠杆菌BJ5183以同源重组;用lipofectAMINE将Pac Ⅰ线形化的同源重组腺病毒载体转染293细胞以包装腺病毒;通过同源重组病毒载体和病毒颗粒基因组的DNA测序及PCR扩增和在293细胞中的表达鉴定重组腺病毒.结果同源重组载体和病毒颗粒的DNA测序和PCR分析显示AWP1cDNA序列正确,感染293细胞获得了AWP1-RFP融合蛋白的高效表达.结论成功构建和包装了人AWP1-RFP融合基因重组腺病毒.

关键词： AWP1 红色荧光蛋白重组腺病毒绿色荧光蛋白

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Rab7蛋白参与了BLP耐受巨噬细胞对细菌清除能力增强的过程

Rab7蛋白参与了BLP耐受巨噬细胞对细菌清除能力增强的过程

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2016中国病理生理学会受体与信号转导专业委员会第十三届学术会议

作者：赵舒祺姜勇刘靖华南方医科大学基础医学院病理生理学教研室广东省蛋白质组学重点实验室广东广州510515

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GnRHa治疗子宫内膜异位症患者在位内膜的差异蛋白质组学研究

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中华临床医师杂志（电子版） 2016年第11期10卷 287-288页

作者：翁慧男刘风华王沂峰胡水旺广东省妇幼保健院广东广州511442 南方医科大学附属珠江医院广东广州510515 南方医科大学病理生理学教研室/广东省蛋白质组学重点实验室广东广州510515

目的研究促性腺激素释放激素（GnRHa）治疗子宫内膜异位症（内异症）后,患者在位内膜的蛋白质组学变化,从侧面探讨内异症发病机制提供生物学依据.方法收集2012年3月至2013年1月经腹腔镜手术及病理检查确诊的内异症患者的在位内膜共24例... 详细信息

目的研究促性腺激素释放激素（GnRHa）治疗子宫内膜异位症（内异症）后,患者在位内膜的蛋白质组学变化,从侧面探讨内异症发病机制提供生物学依据.方法收集2012年3月至2013年1月经腹腔镜手术及病理检查确诊的内异症患者的在位内膜共24例作对照组,术后患者均予GnRHa肌注治疗.在肌注第一针后28天患者行宫腔镜检查,取子宫内膜活检组织作实验组.2-DIGE及MALDITOF/TOF质谱仪检测其中6例患者治疗前后的差异表达蛋白,通过数据库在线查找差异蛋白的功能.Western-blot（WB）检测另18例患者在位内膜的过氧化物酶4（Prdx4）.结果发现55个差异表达的蛋白,其中26个蛋白经过质谱仪鉴定,包括12个上调蛋白和14个下调蛋白.按功能可分为：6个分泌蛋白、4个细胞骨架蛋白、4个分子伴侣、4个具有催化活性蛋白、2个参与氧化还原反应蛋白、2个细胞膜蛋白和其他.WB示GnRHa治疗后内异症患者在位内膜Prdx4表达上调.结论差异蛋白在内异症的进展过程中有非常重要的作用.Prdx4可能参与内异症的消退.

关键词：子宫内膜异位症在位内膜促性腺激素释放激素蛋白质组学

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创伤弧菌致病机制研究进展

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温州医科大学学报 2018年第2期48卷 145-149页

作者：曹兵兵高昉姜勇金胜威温州医科大学附属第二医院麻醉科浙江温州325027 南方医科大学病理生理学教研室广东省功能蛋白质组学重点实验室广东广州510515

创伤弧菌是一种生活在海水或海产品中的革兰阴性弧菌,具有机会致病性。近年来随着气候转暖,创伤弧菌感染病例数逐年增加。创伤弧菌感染病程进展快,可发展为脓毒症甚至多器官功能障碍综合征,死亡率高。笔者对近年来创伤弧菌相关致病因子... 详细信息

创伤弧菌是一种生活在海水或海产品中的革兰阴性弧菌,具有机会致病性。近年来随着气候转暖,创伤弧菌感染病例数逐年增加。创伤弧菌感染病程进展快,可发展为脓毒症甚至多器官功能障碍综合征,死亡率高。笔者对近年来创伤弧菌相关致病因子及可能机制的研究作一综述,为有效防治创伤弧菌感染和寻找可能的治疗靶点提供帮助。

关键词：创伤弧菌毒力因子脓毒症致病机制

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人宫颈癌Hela细胞穿透肽的噬菌体展示技术筛选

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微循环学杂志 2009年第4期 99-100页

作者：刘芸刘爱华吴向玲江力玮姚琦邓鹏姜勇南方医科大学基础医学院病理生理学教研室和省部共建重大疾病转录组与蛋白质组学教育部重点实验室南方医院呼吸内科

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医学生物化学内毒素诱导性基因启动子结合蛋白的筛选新方法及其应用

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中国学术期刊文摘 2008年第9期14卷 130页

作者：王娟刘志锋徐佳杨莉李志杰邓鹏姜勇南方医科大学病理生理学教研室广东省蛋白质组学重点实验室广州510515广州510515

建立研究DNA-蛋白质相互作用的新方法.选择6只SPF级BALB/c小鼠,模型组经尾静脉注射脂多糖(LPS)25mg/kg,使平均动脉压(MAP)降至40mmHg(1mmHg=0.133kPa)造成内毒素休克,然后迅速处死,正常对照组同期处死,取肝脏组织.利用生物素.链亲和素... 详细信息

建立研究DNA-蛋白质相互作用的新方法.选择6只SPF级BALB/c小鼠,模型组经尾静脉注射脂多糖(LPS)25mg/kg,使平均动脉压(MAP)降至40mmHg(1mmHg=0.133kPa)造成内毒素休克,然后迅速处死,正常对照组同期处死,取肝脏组织.利用生物素.链亲和素系统结合磁珠分离技术筛选内毒素诱导基因(LIG)启动子的结合蛋白.

关键词： DNA-蛋白质相互作用启动子生物素-链亲和素基因表达调控

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GnRHa治疗子宫内膜异位症患者在位内膜的差异蛋白质组学研究

GnRHa治疗子宫内膜异位症患者在位内膜的差异蛋白质组学研究

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2016全国慢性病诊疗论坛

作者：翁慧男刘风华王沂峰胡水旺广东省妇幼保健院广东广州 511442 南方医科大学附属珠江医院广东广州 510515 南方医科大学病理生理学教研室/广东省蛋白质组学重点实验室广东广州 510515

目的：研究促性腺激素释放激素(GnRHa)治疗子宫内膜异位症(内异症)后,患者在位内膜的蛋白质组学变化,从侧面探讨内异症发病机制提供生物学依据. 方法：收集2012年3月至2013年1月经腹腔镜手术及病理检查确诊的内异症患者的在位内膜共2... 详细信息

目的：研究促性腺激素释放激素(GnRHa)治疗子宫内膜异位症(内异症)后,患者在位内膜的蛋白质组学变化,从侧面探讨内异症发病机制提供生物学依据. 方法：收集2012年3月至2013年1月经腹腔镜手术及病理检查确诊的内异症患者的在位内膜共24例作对照组,术后患者均予GnRHa肌注治疗.在肌注第一针后28天患者行宫腔镜检查,取子宫内膜活检组织作实验组.2-DIGE及MALDI TOF/TOF质谱仪检测其中6例患者治疗前后的差异表达蛋白,通过数据库在线查找差异蛋白的功能.Western-blot(WB)检测另18例患者在位内膜的过氧化物酶4(Prdx4). 结果：发现55个差异表达的蛋白,其中26个蛋白经过质谱仪鉴定,包括12个上调蛋白和14个下调蛋白.按功能可分为：6个分泌蛋白、4个细胞骨架蛋白、4个分子伴侣、4个具有催化活性蛋白、2个参与氧化还原反应蛋白、2个细胞膜蛋白和其他.WB示GnRHa治疗后内异症患者在位内膜Prdx4表达上调. 结论：差异蛋白在内异症的进展过程中有非常重要的作用.Prdx4可能参与内异症的消退.

关键词：子宫内膜异位症在位内膜促性腺激素释放激素差异蛋白质组学发病机制

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