目的:通过对影响细胞ELISA的关键条件和步骤进行优化和改进,以降低实验假阳性率,提高敏感性。方法:THP-1细胞接种96孔培养板,分别用脂多糖(LPS)刺激或不刺激作为处理组和对照组,将通过噬菌体展示技术筛选获得的噬菌体分别与处理组及对照组细胞作用,洗脱未结合的噬菌体,加入HRP标记的抗M13单克隆抗体,分别用酶标仪和Kodak IS 2000R数码成像系统检测细胞与短肽的结合情况。并针对细胞的特性,在细胞的准备、固定、孵育和洗涤等关键步骤进行改进。结果:酶标仪和数码成像系统检测分别得到6个和8个可与细胞高亲和力结合的阳性噬菌体克隆,经过免疫荧光实验证实数码成像系统检测得到的8个阳性克隆均与细胞结合,并且数码成像系统多次测量值具有很好的重复性。结论:本方法为蛋白质与完整细胞的亲和活性研究提供了有效的实验方案,具有较好的应用前景。
目的:研究人晚期糖基化产物受体(receptor for advanced glycation end product,RAGE)在前列腺癌和正常前列腺组织中的表达差异,为进一步研究RAGE在前列腺癌发病机制中的作用奠定基础。方法:以同一患者的前列腺癌组织和正常前列腺组织...
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目的:研究人晚期糖基化产物受体(receptor for advanced glycation end product,RAGE)在前列腺癌和正常前列腺组织中的表达差异,为进一步研究RAGE在前列腺癌发病机制中的作用奠定基础。方法:以同一患者的前列腺癌组织和正常前列腺组织配对作比较,采用免疫组化染色法、免疫印迹法、实时荧光定量PCR等方法分别从组织水平、蛋白质水平、mRNA水平检测10例患者前列腺癌和正常前列腺组织中RAGE的表达。结果:免疫组化结果显示RAGE在前列腺癌组织中的表达水平明显高于正常前列腺组织,Western印迹检测发现前列腺癌组织RAGE的表达量是正常前列腺组织的2.13倍(Р<0.05),荧光定量PCR检测前列腺癌中RAGE的mRNA表达水平是正常前列腺组织的4.2倍(Р<0.05)。结论:RAGE在前列腺癌的发生和发展过程中可能起重要作用。
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