检索结果-内蒙古大学图书馆

解放军医学杂志 2023年第4期48卷 431-436页

作者：陈文达彭娜刘帅童华生唐柚青刘靖华苏磊南部战区总医院急诊科广东广州510010 广东药科大学研究生院广东广州510080 南方医科大学基础医学院病理生理学教研室/广东省蛋白质组学重点实验室广东广州510515 南部战区总医院重症医学科/全军热区创伤救治与组织修复重点实验室广东广州510010

目的探讨中性粒细胞侧向荧光(NE-SFI)强度对重症中暑(HS)合并弥散性血管内凝血(DIC)的早期诊断价值。方法选取南部战区总医院2017年1月1日-2018年12月31日收治的HS患者34例,依据国际血栓与止血学会(ISTH)发布的显性DIC评分标准,将34... 详细信息

目的探讨中性粒细胞侧向荧光(NE-SFI)强度对重症中暑(HS)合并弥散性血管内凝血(DIC)的早期诊断价值。方法选取南部战区总医院2017年1月1日-2018年12月31日收治的HS患者34例,依据国际血栓与止血学会(ISTH)发布的显性DIC评分标准,将34例患者分为HS未合并DIC组(DIC评分<5分,n=23)与HS合并DIC组(DIC评分≥5分,n=11)。比较两组患者的一般资料,NE-SFI,以及血清中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)相关标志物dsDNA、髓过氧化物酶(MPO)、瓜氨酸化组蛋白(CitH3)的水平。利用受试者工作特征(ROC)曲线分析NE-SFI对HS合并DIC的早期诊断价值。结果两组患者年龄、发病最高核心体温、白细胞计数、中性粒细胞计数比较差异均无统计学意义(P>0.05)。HS合并DIC组3 h内核心温度降至38.5℃以下患者比例、GCS评分低于HS未合并DIC组,谷丙转氨酶(ALT)、肌酐、ISTH评分、并发多器官功能障碍综合征(MODS)比例高于HS未合并DIC组,差异均有统计学意义(P<0.05)。发病第1~3天,HS合并DIC组的NE-SFI值均高于HS未合并DIC组,差异有统计学意义(P<0.001)。HS合并DIC组患者的血清dsDNA、MPO、CitH3水平[分别为(372.93±135.77) ng/ml、(108.32±38.58) pg/ml、(600.18±183.74) ng/μl]明显高于HS未合并DIC组[分别为(30.14±7.01) ng/ml、(56.39±34.64) pg/ml、(320.26±89.60) ng/μl],差异有统计学意义(P<0.001)。Spearman相关分析显示:发病第1~3天的NE-SFI值与发病第1天的dsDNA、MPO、CitH3水平均呈正相关(P<0.05或P<0.01)。ROC曲线分析显示,发病第2天的NE-SFI值对HS合并DIC的诊断效能最高,其AUC为0.921(95%CI0.820~1.000,P<0.001)。结论 NE-SFI可作为早期诊断HS并发DIC的有效指标。

关键词：重症中暑弥散性血管内凝血中性粒细胞侧向荧光多器官功能障碍综合征

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异甘草酸镁治疗慢性乙型肝炎前后血浆外泌体差异蛋白质组学筛选

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中华肝脏病杂志 2021年第3期29卷 246-252页

作者：肖二辉胡水旺宁会彬康月花殷辉毛重山康谊尚佳河南省人民医院感染科郑州大学人民医院河南大学人民医院郑州450003 南方医科大学病理生理学教研室广东省蛋白质组学重点实验室广州510515

目的筛选慢性乙型肝炎患者经异甘草酸镁(MgIG)治疗前后血浆外泌体的差异蛋白质组。方法分别采集36例MgIG治疗慢性乙型肝炎患者前后的血浆标本(2 ml/例),利用超速离心方法提取血浆外泌体,利用Nanosight NS300颗粒粒度分析仪检测外泌体颗... 详细信息

目的筛选慢性乙型肝炎患者经异甘草酸镁(MgIG)治疗前后血浆外泌体的差异蛋白质组。方法分别采集36例MgIG治疗慢性乙型肝炎患者前后的血浆标本(2 ml/例),利用超速离心方法提取血浆外泌体,利用Nanosight NS300颗粒粒度分析仪检测外泌体颗粒的浓度和内径。随机各抽取3例MgIG治疗前后组的血浆外泌体,裂解后提取蛋白,利用胰蛋白酶消化后,用液相色谱串联质谱技术进行label-free差异蛋白质组学分析,筛选出变化倍数1.5倍以上的差异蛋白。利用酶联免疫吸附测定技术对感兴趣差异蛋白的表达量进行验证(n=30)。计量资料的比较采用配对样本均数的t检验。结果提取的外泌体平均颗粒浓度为2.2×10^(9)个/ml,平均粒径为(107±52)nm,与理论血浆外泌体大小值相符,证明成功提取了血浆外泌体。蛋白质组学结果显示,MgIG治疗慢性乙型肝炎患者前后相比较,共筛选出153个差异蛋白,包括85个上调蛋白和68个下调蛋白。酶联免疫吸附实验结果显示,慢性乙型肝炎患者MgIG治疗后组和治疗前组相比较,血浆外泌体中肝细胞生长因子激活剂和肝细胞生长因子样蛋白浓度差异有统计学意义(P<0.05)。肝细胞生长因子激活剂在MgIG治疗前组血浆外泌体中浓度为(45.9±9.4)μg/ml,在MgIG治疗后组为(13.9±2.0)μg/ml。肝细胞生长因子样蛋白在MgIG治疗前组血浆外泌体中浓度为(23.4±4.9)μg/ml,在MgIG治疗后组为(13.8±2.2)μg/ml。酶联免疫吸附实验结果均与蛋白质组学结果一致。结论本研究成功筛选出MgIG治疗慢性乙型肝炎患者前后血浆外泌体差异蛋白质组,为研究MgIG治疗慢性乙型肝炎的分子机制提供实验依据。

关键词：慢性乙型肝炎血浆外泌体蛋白质组学异甘草酸镁

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SETD4敲除对小鼠巨噬细胞功能及免疫细胞分化影响的初步研究

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中国临床解剖学杂志 2020年第4期38卷 401-407页

作者：牛世贤黄穗李山蔡军伟常若水郑肇萍姜勇刘靖华南方医科大学基础医学院病理生理学教研室广东省蛋白质组学重点实验室广州510515

目的探讨SETD4(SET-domain containing protein 4)基因敲除对小鼠腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophages,pMφ)分化成熟、功能的影响以及对小鼠外周血、脾脏免疫细胞分化,胸腺和脾脏发育的影响。方法(1)利用流式细胞术检测腹腔灌洗液中p... 详细信息

目的探讨SETD4(SET-domain containing protein 4)基因敲除对小鼠腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophages,pMφ)分化成熟、功能的影响以及对小鼠外周血、脾脏免疫细胞分化,胸腺和脾脏发育的影响。方法(1)利用流式细胞术检测腹腔灌洗液中pMφ表面CD31分子的表达情况;(2)用液相芯片技术检测和比较SETD4^-/-和SETD4^+/+小鼠pMφ在受到脂多糖(LPS)刺激后对细胞因子TNF-α、IL-6释放的影响,流式细胞术检测SETD4基因敲除对巨噬细胞吞噬细菌能力及Transwell检测对巨噬细胞迁移能力的影响;(3)流式细胞术分析和比较两组小鼠外周血及脾脏主要免疫细胞的数量及比例的差异;(4)HE染色对比两组小鼠胸腺和脾脏组织结构的差异。结果(1)与SETD4^+/+小鼠相比,SETD4^-/-小鼠pMφ受到LPS刺激后TNF-α、IL-6的释放明显减少,但是两组小鼠pMφ的比例及分化成熟程度无明显差异;(2)吞噬细菌能力和迁移能力两组无明显差异;(3)两组小鼠外周血及脾脏主要免疫细胞的数量及比例无明显差异;(4)SETD4基因敲除对小鼠胸腺和脾脏的结构无明显影响。结论(1)SETD4能促进炎性细胞因子TNF-α、IL-6的产生,但对pMφ的分化成熟及细菌吞噬、迁移能力无明显影响;(2)SETD4基因敲除对小鼠外周血及脾脏免疫细胞的分化没有明显影响,对胸腺和脾脏组织的发育无明显影响。

关键词： SETD4 免疫细胞巨噬细胞细胞因子

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SETD4对脂多糖诱导的AML12细胞IL-6转录的调控作用

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中国临床解剖学杂志 2018年第3期36卷 282-287页

作者：孙江李月牛世贤黄梦怡钟玙沄赵舒祺罗海华姜勇刘靖华南方医科大学基础医学院病理生理学教研室广东省蛋白质组学重点实验室

目的探讨SETD4（SET-domain containing protein 4）对脂多糖（LPS）诱导的AML12（小鼠肝脏细胞系）细胞IL-6的转录调控作用。方法构建SETD4表达质粒和IL-6启动子荧光素酶报告基因质粒,共转染小鼠肝脏细胞系AML12,使用双荧光素酶报告基... 详细信息

目的探讨SETD4（SET-domain containing protein 4）对脂多糖（LPS）诱导的AML12（小鼠肝脏细胞系）细胞IL-6的转录调控作用。方法构建SETD4表达质粒和IL-6启动子荧光素酶报告基因质粒,共转染小鼠肝脏细胞系AML12,使用双荧光素酶报告基因技术检测LPS刺激后IL-6启动子荧光素酶活性;单独转染SETD4表达质粒上调AML12细胞SETD4表达,检测LPS刺激后IL-6 mRNA水平变化。结果双酶切鉴定及核酸测序证实重组质粒pcDNA3.0/HA-SETD4、pGL3.0/IL-6 promoter的构建成功。pcDNA3.0/HA-SETD4与pGL3.0/IL-6 promoter共转染AML12细胞,LPS刺激后SETD4对IL-6启动子荧光素酶活性没有影响;上调SETD4表达后,可以促进LPS诱导的IL-6 mRNA转录。结论成功构建SETD4真核表达质粒和IL-6启动子荧光素酶报告基因质粒;SETD4对LPS诱导的AML12细胞IL-6的转录发挥正调控作用。

关键词： SETD4 LPS AML12 IL-6转录荧光素酶报告基因

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线粒体在NLRP3炎性小体激活过程中的双向调节作用

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现代免疫学 2018年第4期38卷 333-336页

作者：吴晓升项静刘靖华南方医科大学广东省蛋白质组学重点实验室南方医科大学基础医学院病理生理学教研室广州510515

新近的研究结果表明,当机体受到病原微生物感染、应激等刺激时,细胞的线粒体会由于活性氧(ROS)的积累、钙离子的异常等发生损伤,受损的线粒体与线粒体双磷脂酰甘油、线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)等通过调控炎性小体的形成,进而影响含半... 详细信息

新近的研究结果表明,当机体受到病原微生物感染、应激等刺激时,细胞的线粒体会由于活性氧(ROS)的积累、钙离子的异常等发生损伤,受损的线粒体与线粒体双磷脂酰甘油、线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)等通过调控炎性小体的形成,进而影响含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)依赖的炎性细胞因子如白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素18(IL-18)等的分泌以及细胞焦亡(pyroptosis)的发生,在机体抵抗感染的发生发展中发挥重要作用。本文将着重探讨线粒体在炎性小体激活过程中的双向调节作用。

关键词：线粒体 NLRP3 炎性小体

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Prdx4蛋白表达水平的改变对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡和迁移的影响

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肿瘤 2017年第4期37卷 340-349页

作者：张丽袁伟燕石红琴龚小卫姜勇南方医科大学病理生理学教研室广东省蛋白质组学重点实验室广东广州510515

目的:探讨上调或沉默过氧化物还原酶4(peroxiredoxin 4,Prdx4)蛋白表达对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法:利用脂质体瞬时转染法将重组质粒pcDNA3.0-HA-Prdx4(以空载体pcDNA3.0-HA为对照组)和特异性针对人Prdx 4基因的siR... 详细信息

目的:探讨上调或沉默过氧化物还原酶4(peroxiredoxin 4,Prdx4)蛋白表达对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法:利用脂质体瞬时转染法将重组质粒pcDNA3.0-HA-Prdx4(以空载体pcDNA3.0-HA为对照组)和特异性针对人Prdx 4基因的siRNA(Prdx4-siRNA)(以阴性对照-siRNA为对照组)分别转染A549细胞;采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测Prdx4 mRNA和蛋白的表达水平;CCK-8法和免疫荧光技术分别检测A549细胞的增殖和凋亡情况;细胞划痕实验和Transwell小室法检测A549细胞迁移能力的改变。结果:转入重组质粒pcDNA3.0-HA-Prdx4的A549细胞中Prdx4 mRNA和蛋白的表达水平明显上调(P值均<0.05),转入Prdx4-siRNA的A549细胞中Prdx4 mRNA和蛋白的表达水平明显下调(P值均<0.05)。CCK-8检测结果显示,Prdx4过表达的A549细胞在24、48和72 h时的D 450 nm值均明显高于对照组(P值均<0.05),并且96 h时的D 450 nm值(2.241±0.068和1.596±0.103)差异更加明显(P<0.01);沉默Prdx4表达后A549细胞在48、72和96 h时的D 450 nm值明显低于对照组(P值均<0.01)。免疫荧光结果显示,Prdx4过表达的A549细胞在顺铂刺激24和48 h后凋亡细胞数与对照组相比明显减少,差异均具有统计学意义(P<0.05和P<0.01);沉默Prdx4表达的A549细胞在顺铂刺激24和48 h后,凋亡细胞数明显多于对照组(P<0.05和P<0.01)。划痕实验结果显示,Prdx4过表达A549细胞的愈合率明显高于对照组(P<0.01);沉默Prdx4表达的A549细胞的愈合率明显低于对照组(P<0.01)。Transwell迁移实验结果显示,Prdx4过表达的A549细胞穿过小室膜的细胞数明显多于对照组(P<0.01);沉默Prdx4表达的A549细胞穿过小室膜的细胞数明显少于对照组(P<0.01)。结论:Prdx4可促进A549细胞的增殖和迁移并抑制其凋亡,其有可能成为临床治疗肺腺癌的一个潜在靶点。

关键词：癌,非小细胞肺过氧化物还原酶4 细胞增殖细胞凋亡细胞运动

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MRP8/MRP14诱导腹腔巨噬细胞释放炎性细胞因子

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南方医科大学学报 2017年第9期37卷 1164-1170页

作者：王娟李磊罗海华姜勇南方医科大学病理生理学教研室//广东省蛋白质组学重点实验室广东广州510515

目的探讨MRP8/MRP14诱导小鼠腹腔巨噬细胞细胞因子表达效应及其作用机制。方法 Luminex x MAP液相芯片系统检测重组MRP8/MRP14蛋白诱导腹腔巨噬细胞6种细胞因子/趋化因子的水平变化;MRP14不同结构域融合蛋白刺激细胞,检测TNF-α、IP-10... 详细信息

目的探讨MRP8/MRP14诱导小鼠腹腔巨噬细胞细胞因子表达效应及其作用机制。方法 Luminex x MAP液相芯片系统检测重组MRP8/MRP14蛋白诱导腹腔巨噬细胞6种细胞因子/趋化因子的水平变化;MRP14不同结构域融合蛋白刺激细胞,检测TNF-α、IP-10和IL-6表达;Western blot检测MRP8/MRP14刺激细胞p38 MAPK、JNK和ERK激酶磷酸化变化;细胞预先用p38 MAPKs、JNK、ERK激酶抑制剂、TLR4和RAGE受体拮抗剂预处理,之后给予MRP8/MRP14蛋白刺激,检测TNF-α、IP-10和IL-6表达。结果 MRP8/MRP14能显著诱导TNF-α、IP-10和IL-6的表达,与对照组相比,蛋白表达水平分别升高约98.2、378.6和6.3倍(P<0.01),MRP8/MRP14不能诱导IL-2、IL-5和IFN-g的表达;MRP14全长及其结构域EFhand-1、EFhand-2及EFhand-1+2融合蛋白能够诱导TNF-α、IP-10和IL-6的表达(P<0.01),CT末端结构域不具有诱导活性;MRP8/MRP14刺激细胞后1 h p38 MAPK、JNK及ERK激酶发生显著磷酸化变化,持续至2 h;与单纯MRP8/MRP14组相比,p38 MAPK抑制剂SB203580显著抑制TNF-α、IP-10和IL-6的表达(P<0.05);JNK抑制剂SP600125显著抑制TNF-α和IP-10的表达(P<0.05),对IL-6的表达无影响;ERK及其上游MEK1/2的抑制剂PD98059和U0126显著抑制IL-6的表达(P<0.05);TLR4抑制剂TAK242抑制了MRP8/MRP14诱导的TNF-α、IP-10和IL-6的表达(P<0.05),而RAGE中和性抗体仅部分抑制MRP8/MRP14诱导的IL-6的表达(P<0.05)。结论 MRP8/MRP14能够诱导小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α、IP-10和IL-6的表达;MRP蛋白以包含有钙离子结合基序的结构域具有诱导细胞因子表达的活性;TNF-α和IP-10的表达与TLR4受体及其下游的p38 MAPKs、JNK通路有关,IL-6的表达则同时由TLR4和RAGE受体介导,继而激活下游的p38 MAPKs和ERK信号通路。

关键词：髓样相关蛋白8/14 p38 MAPK JNK ERK TLR4

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髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠的构建与鉴定

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中国临床解剖学杂志 2017年第2期35卷 177-182页

作者：黄梦怡钟玙沄黄穗孙江李月王娟姜勇刘靖华南方医科大学病理生理学教研室广东省蛋白质组学重点实验室广州510515

目的利用FLP/FRT、Cre/Loxp重组酶系统构建并鉴定髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠,为深入研究SETD4的生物学功能奠定基础。方法将引进的Setd4^(flox/+)小鼠自交,筛选出子代基因型为Setd4^(flox/flox)的小鼠;与FLP小鼠交配,得到Setd4^(f... 详细信息

目的利用FLP/FRT、Cre/Loxp重组酶系统构建并鉴定髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠,为深入研究SETD4的生物学功能奠定基础。方法将引进的Setd4^(flox/+)小鼠自交,筛选出子代基因型为Setd4^(flox/flox)的小鼠;与FLP小鼠交配,得到Setd4^(fl/+/flp)小鼠;然后分别与C57BL/6小鼠交配去除FLP酶,筛选出Setd4^(fl/+)小鼠;与Lyz2-Cre小鼠交配,筛选出Setd4^(fl/+)/Lyz2-Cre小鼠;将得到的Setd^(4fl/+)和Setd4^(fl/+)/Lyz2-Cre小鼠交配,筛选出Setd4^(-/-)/Lyz2-Cre小鼠,即髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠。利用PCR技术鉴定小鼠基因型;实时荧光定量PCR技术检测小鼠腹腔巨噬细胞及肝组织中SETD4的mRNA表达水平验证敲除情况。结果髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠腹腔巨噬细胞中SETD4 mRNA水平较野生型小鼠显著降低;而在肝组织中无显著差异。结论利用FLP/FRT、Cre/Loxp系统成功构建髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠,为后续的功能学研究提供了动物模型。

关键词： FLP/FRT Cre/Loxp SETD4 基因敲除

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内毒素血症Rig-Ⅰ表达调控的机制研究

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生物技术 2017年第4期27卷 349-354,377页

作者：王娟赵晓辉罗海华姜勇南方医科大学病理生理学教研室广东省蛋白质组学重点实验室广东广州510515

[目的]探讨内毒素血症Rig-Ⅰ表达调控的机制。[方法](1)DNA-pull down、2D-DIGE结合生物质谱技术筛选分离、鉴定对照和内毒素血症小鼠肝组织核蛋白与Rig-Ⅰ基因启动子结合的差异蛋白质;(2)q PCR和细胞免疫荧光检测LPS刺激RAW264.7细胞hn... 详细信息

[目的]探讨内毒素血症Rig-Ⅰ表达调控的机制。[方法](1)DNA-pull down、2D-DIGE结合生物质谱技术筛选分离、鉴定对照和内毒素血症小鼠肝组织核蛋白与Rig-Ⅰ基因启动子结合的差异蛋白质;(2)q PCR和细胞免疫荧光检测LPS刺激RAW264.7细胞hnRNP A3 mRNA表达及细胞内定位。[结果](1)筛选鉴定得到hnRNP A3等7种与内毒素血症Rig-Ⅰ基因启动子结合的蛋白质;(2)LPS刺激下hnRNP A3 mRNA显著升高(P<0.01),且具有明显的细胞核定位。[结论]共有7种蛋白质参与内毒素血症Rig-Ⅰ基因表达调控,为进一步Rig-Ⅰ表达调控的研究奠定了良好基础。

关键词：内毒素血症 Rig-Ⅰ 启动子 DNA-pull down 核不均一核糖核蛋白A3

来源：评论

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创伤弧菌致病机制研究进展

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温州医科大学学报 2018年第2期48卷 145-149页

作者：曹兵兵高昉姜勇金胜威温州医科大学附属第二医院麻醉科浙江温州325027 南方医科大学病理生理学教研室广东省功能蛋白质组学重点实验室广东广州510515

创伤弧菌是一种生活在海水或海产品中的革兰阴性弧菌,具有机会致病性。近年来随着气候转暖,创伤弧菌感染病例数逐年增加。创伤弧菌感染病程进展快,可发展为脓毒症甚至多器官功能障碍综合征,死亡率高。笔者对近年来创伤弧菌相关致病因子... 详细信息

创伤弧菌是一种生活在海水或海产品中的革兰阴性弧菌,具有机会致病性。近年来随着气候转暖,创伤弧菌感染病例数逐年增加。创伤弧菌感染病程进展快,可发展为脓毒症甚至多器官功能障碍综合征,死亡率高。笔者对近年来创伤弧菌相关致病因子及可能机制的研究作一综述,为有效防治创伤弧菌感染和寻找可能的治疗靶点提供帮助。

关键词：创伤弧菌毒力因子脓毒症致病机制

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