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中国生理学会张锡钧基金会第十三届全国青年优秀生理学学术论文交流及评奖会议、中国生理学会第十一届全国青年生理学工作者学术会议

作者：李鹏云宋瑞曾振华徐思齐赵克森四川医科大学心血管医学研究所医学电生理四川省重点实验室广东省南方医科大学病理生理学实验室广东省休克微循环重点实验室

目的:研究虎杖苷改善重症失血性休克大鼠血管低反应性的机制。方法:Wistar大鼠随机分成6组,假手术组(sham),重症休克组(hemorrhagic shock,HS),休克+虎杖苷(polydatin,PD),休克+去乙酰化酶1(sirtuin1,SIRT1)激动剂白藜芦醇(resveratrol,RSV)组,休克+SIRT1抑制剂Ex527+PD组,休克+Ex527+RSV组。复制重症失血性休克模型,同步检测大鼠平均动脉压和微循环小动脉血管反应性的变化,并观察不同组大鼠的生存时间。进

关键词：低反应性 SIRT1

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LPS通过调节Cdc2蛋白表达诱导HeLa细胞凋亡的研究

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重庆医学 2014年第16期43卷 2012-2015页

作者：赵丽君周辉赵明南方医科大学病理生理教研室/广东省休克微循环重点实验室广州510515

目的构建细胞分裂周期蛋白2(Cdc2)真核表达载体,并在P16基因缺失的肿瘤细胞HeLa细胞中表达,利用LPS诱导细胞凋亡,并探讨LPS诱导HeLa细胞凋亡的机制。方法从人U2OS细胞中提取RNA,反转录克隆Cdc2cDNA片段,利用Gateway技术构建pDEST27-Cdc... 详细信息

目的构建细胞分裂周期蛋白2(Cdc2)真核表达载体,并在P16基因缺失的肿瘤细胞HeLa细胞中表达,利用LPS诱导细胞凋亡,并探讨LPS诱导HeLa细胞凋亡的机制。方法从人U2OS细胞中提取RNA,反转录克隆Cdc2cDNA片段,利用Gateway技术构建pDEST27-Cdc2质粒。将pDEST27-Cdc2质粒瞬时转染人宫颈癌HeLa细胞,免疫印迹分析Cdc2的表达情况,并用LPS刺激,观察其对LPS引起的细胞凋亡和细胞周期的影响。结果成功构建pDEST27-Cdc2质粒,质粒酶切及测序结果完全正确。LPS刺激HeLa细胞24h后,流式细胞仪检测发现大量细胞凋亡,而转染pDEST27-Cdc2质粒的细胞凋亡率明显降低,提示Cdc2的重要作用。免疫印迹分析研究发现,LPS诱导HeLa细胞Cdc2蛋白水平下降,进一步研究发现LPS诱导HeLa细胞G2/M期阻滞,过表达Cdc2可以降低G2期细胞阻滞的发生。结论 LPS诱导HeLa细胞凋亡是由于其导致Cdc2表达下降,细胞分裂停止在G2/M期,过表达Cdc2可以阻止死亡信号诱导的细胞凋亡。

关键词：细胞周期蛋白质类周期素依赖性激酶1 细胞凋亡细胞周期

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人真核表达质粒载体pcDNA3/HA-moesin的构建及其在内皮细胞中的表达

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海南医学院学报 2014年第1期20卷 1-4,7页

作者：刘红霞罗卓章杜静郭晓华黄巧冰佛山市南海区第二人民医院内分泌科广东佛山528251 南方医科大学病理生理学教研室广东省医学休克微循环重点实验室广东广州510515

目的:构建人膜突蛋白(moesin)的真核表达质粒pcDNA3/HA-moesin,并检测其在内皮细胞中的表达。方法:采用RT-PCR法从人脐静脉内皮细胞株(HUVECs)中克隆得到moesin cDNA全长序列,经双酶切后连接到真核表达载体pcDNA/HA中,挑选出的阳性克隆... 详细信息

目的:构建人膜突蛋白(moesin)的真核表达质粒pcDNA3/HA-moesin,并检测其在内皮细胞中的表达。方法:采用RT-PCR法从人脐静脉内皮细胞株(HUVECs)中克隆得到moesin cDNA全长序列,经双酶切后连接到真核表达载体pcDNA/HA中,挑选出的阳性克隆经双酶切和测序鉴定后,经脂质体转染法转入HUVECs中,采用Realtime PCR及Western blot等方法检测目的基因mRNA及蛋白的表达。结果:pcDNA3/HA-moesin质粒经双酶切鉴定和DNA测序证实,目的基因moesin的序列完全正确,真核表达质粒构建成功。Realtime PCR检测显示,转染pcDNA3/HA-moesin组的moesin mRNA表达水平明显高于未转染组和转染pcDNA3/HA空载体组,后2组间无明显差异。Western blot结果显示转染pcDNA3/HA-moesin组有HA-moesin蛋白表达,而未转染组和转染pcDNA3/HA空载体组未检测到HA-moesin表达。结论:成功构建pcDNA3/HA-moesin真核表达载体,在体外转染HUVECs后可使moesin mRNA表达增加,并成功表达HA-moesin,为进一步鉴定内皮细胞中晚期糖基化终产物(AGEs)引起的moesin的磷酸化位点奠定了实验基础。

关键词：人膜突蛋白真核表达质粒人脐静脉内皮细胞株

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三维重建技术观察1-磷酸鞘氨醇刺激其受体2在内皮细胞的表达

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热带医学杂志 2014年第4期14卷 430-433,F0004页

作者：萧艳王立群黄巧冰南方医科大学基础医学院病理生理学教研室广东省医学休克微循环重点实验室广东广州510515 泸州医学院药物与功能性食品研究中心四川泸州646000

目的应用激光扫描共聚焦显微镜三维重建技术观察1-磷酸鞘氨醇(S1P)刺激下S1P受体2(S1PR2)的表达变化,并探讨共聚焦三维重建技术与普通单层扫描技术在生物组织功能和形态学研究中的应用价值。方法 S1P(10μmol/L)刺激脐静脉内皮细胞(HUVE... 详细信息

目的应用激光扫描共聚焦显微镜三维重建技术观察1-磷酸鞘氨醇(S1P)刺激下S1P受体2(S1PR2)的表达变化,并探讨共聚焦三维重建技术与普通单层扫描技术在生物组织功能和形态学研究中的应用价值。方法 S1P(10μmol/L)刺激脐静脉内皮细胞(HUVECs)6 h,Western blot检测S1PR2的表达变化;对细胞进行免疫荧光染色后,采用激光扫描共聚焦显微镜分别进行多层层切扫描和单层扫描,层切扫描之后对图像进行三维重建,比较两种技术的优劣。结果 Western blot结果显示S1P刺激6 h后S1PR2表达显著性增高(P<0.05)。荧光图像显示,单层扫描时S1P 6 h组荧光强度与对照组比较差异无统计学意义;而层切之后三维重建图像中,S1P刺激后S1PR2荧光强度显著高于正常对照组和单层扫描所得图像,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论激光扫描共聚焦显微镜三维重建技术,可以获得三维重构图像,并且具有三维立体及图像信息量更全的特点,更能客观的表现出整个细胞特定分子荧光强度的变化。

关键词：内皮细胞激光扫描共聚焦显微镜三维重建 1-磷酸鞘氨醇受体2

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重症失血性休克大鼠血小板线粒体变化及虎杖苷的干预作用

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中华创伤杂志 2013年第9期29卷 882-888页

作者：陈云燕王兴民宋瑞赵克森南方医科大学病理生理学教研室、广东省休克微循环重点实验室广州510515

目的探讨重症失血性休克大鼠血小板线粒体变化程度与休克轻重程度的关系.方法选择36只Wistar大鼠并按随机数字表法分为假手术组、休克30,60,120 min组、休克120 min＋等渗盐水＋输血组（NS组）及休克120 min＋虎杖苷＋输血组（PD组）... 详细信息

目的探讨重症失血性休克大鼠血小板线粒体变化程度与休克轻重程度的关系.方法选择36只Wistar大鼠并按随机数字表法分为假手术组、休克30,60,120 min组、休克120 min＋等渗盐水＋输血组（NS组）及休克120 min＋虎杖苷＋输血组（PD组）,每组6只.荧光素-荧光素酶试剂盒测定血小板三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）含量；电镜观察血小板线粒体形态；Calcein-AM和CoCl2测定线粒体通透性转变孔状态；JC-1线粒体膜电位试剂盒探测线粒体膜电位（△Ψm）变化；过氧化脂质（lipid hydroperoxide,LPO）试剂盒检测血小板中LPO；吖啶橙（acridine orange,AO）检测血小板溶酶体稳定性. 结果休克60 min组血小板ATP合成显著减少（P＜0.01）,ATP含量随休克时间增加而减少,在NS组中减少最为明显[为正常值的（50.75±9.15）％].休克30 min组出现线粒体肿胀,嵴结构模糊消失,线粒体膜电位（△Ψm）下降及溶酶体稳定性下降（苍白细胞增多）；休克60 min组钙黄绿素荧光减弱（P＜0.01）.PD组上述各指标都有所改善,特别是血小板ATP水平恢复到正常值的（79.57±8.48）％. 结论重症休克30～60 min时发生血小板线粒体功能不全,血小板线粒体功能检测可作为重症休克诊断和治疗的一项非损伤性指标.

关键词：休克,出血性血小板线粒体

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芥菜籽提取物抗氧化及下调巨噬细胞清道夫受体CD36表达和预防动脉粥样硬化的作用

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中国动脉硬化杂志 2013年第2期21卷 109-114页

作者：肖铭甲陈卫红郭景新赵明南方医科大学病理生理学教研室广东省休克微循环重点实验室广东省广州市510515

目的探讨芥菜籽提取物抗氧化、调节CD36的表达及预防动脉粥样硬化的作用。方法将C57/BL6小鼠随机分为对照组和芥菜籽组,分别经腹腔给予1.5%的生理盐水、1.5%芥菜籽提取物溶液,连续3天,第4天停止注射,第5天经眼眶取血并处死老鼠,取腹腔... 详细信息

目的探讨芥菜籽提取物抗氧化、调节CD36的表达及预防动脉粥样硬化的作用。方法将C57/BL6小鼠随机分为对照组和芥菜籽组,分别经腹腔给予1.5%的生理盐水、1.5%芥菜籽提取物溶液,连续3天,第4天停止注射,第5天经眼眶取血并处死老鼠,取腹腔巨噬细胞培养。将培养的巨噬细胞给予氧化型低密度脂蛋白刺激,观察腹腔巨噬细胞氧化型低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞呼吸爆发和脂质过氧化物含量,清道夫受体CD36表达水平以及中性脂肪蓄积情况,并观察血浆超氧化物歧化酶活性和脂质过氧化物含量。雄性载脂蛋白E-/-小鼠30例,随机分为对照组、高脂组和高脂+7.5%芥菜籽组进行饲养,25周后处死,分离并观察主动脉脂质斑块面积。结果芥菜籽提取物明显增加机体血浆超氧化物歧化酶水平和降低脂质过氧化物水平;降低氧化型低密度脂蛋白诱导的呼吸爆发;降低氧化型低密度脂蛋白诱导的脂质过氧化物升高及CD36的表达水平,减少细胞中性脂肪蓄积泡沫细胞形成;降低高脂引起的脂质斑块面积。结论芥菜籽提取物可有效地提高机体的抗氧化能力,提高巨噬细胞的抗氧化性,减少脂质的摄取,预防动脉粥样硬化早期病变。

关键词：芥菜籽提取物动脉粥样硬化 CD36 呼吸爆发脂质过氧化物

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形态学观察晚期糖基化终末产物诱导微血管内皮细胞核因子κB入核及其机制

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中国动脉硬化杂志 2013年第3期21卷 198-202页

作者：吴丽丽王立群王达黄巧冰南方医科大学基础医学院病理生理学教研室广东省医学休克微循环重点实验室广东省广州市510515

目的观察晚期糖基化终末产物(AGE)诱导的微血管内皮细胞核因子κB核转位,探讨氧化应激和内质网应激在核因子κB核转位中可能发挥的作用。方法用AGE修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)与人皮肤微血管内皮细胞(HDMEC)在体外共同培养1 h,设立对... 详细信息

目的观察晚期糖基化终末产物(AGE)诱导的微血管内皮细胞核因子κB核转位,探讨氧化应激和内质网应激在核因子κB核转位中可能发挥的作用。方法用AGE修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)与人皮肤微血管内皮细胞(HDMEC)在体外共同培养1 h,设立对照组进行比较,用免疫荧光化学染色示核因子κB的核转位情况;应用活性氧的抑制剂谷胱甘肽(GSH)、NADPH氧化酶(NOX)抑制剂Apocynin、内皮细胞高表达的NOX亚型NOX4的siRNA和内质网应激的标志性蛋白内质网转膜蛋白激酶1α(IRE1α)的siRNA分别预处理细胞后再给予AGE-BSA刺激,观察核因子κB的核转位情况。结果与对照组相比,AGE-BSA可诱导人皮肤微血管内皮细胞核因子κB入核;应用GSH、Apocynin、NOX4 siRNA和IRE1αsiRNA预处理细胞均可抑制核因子κB的入核。结论AGE对核因子κB的移位激活可能通过细胞内的氧化应激和内质网应激途径所介导。

关键词：晚期糖基化终末产物人皮肤微血管内皮细胞核因子κB 氧化应激内质网应激

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噬菌体随机肽库筛选动脉粥样硬化相关多肽

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第5期29卷 485-487页

作者：肖智赵序雯赵明杨高红南方医科大学病理生理学教研室广东省休克微循环重点实验室广东省功能蛋白质组学重点实验室广东广州510515 广州市天河区林和街社区卫生服务中心广东广州510620

目的利用噬菌体展示技术筛选动脉粥样硬化疾病相关多肽,并验证所筛选的阳性噬菌体以及合成蛋白片段结合活性。方法以动脉粥样硬化患者血清为靶分子,噬菌体12肽库亲和筛选与之结合的阳性噬菌体。经过3轮筛选,从滴度测定平板上随机挑取10... 详细信息

目的利用噬菌体展示技术筛选动脉粥样硬化疾病相关多肽,并验证所筛选的阳性噬菌体以及合成蛋白片段结合活性。方法以动脉粥样硬化患者血清为靶分子,噬菌体12肽库亲和筛选与之结合的阳性噬菌体。经过3轮筛选,从滴度测定平板上随机挑取10个阳性克隆,ELISA鉴定其亲和性。提取阳性噬菌体单链DNA并测序得到12肽序列,通过生物信息学查找相似天然蛋白,合成24肽,最后鉴定其结合活性。结果 ELISA显示阳性噬菌体均与患者血清有较强的结合力,序列为GPRPPSAPNMPL,合成24肽也呈现出较高的结合活性。结论噬菌体展示可以获得动脉粥样硬化相关多肽序列,为该病的免疫研究奠定了基础。

关键词：噬菌体肽库动脉粥样硬化多肽合成

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虎杖苷对严重烫伤大鼠心肌细胞钙信号调控的作用

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心脏杂志 2013年第6期25卷 639-643页

作者：邓建新蓝莉芹张翠翠丁文文薛翔刘文娟南方医科大学病理生理学教研室广东省医学休克微循环重点实验室广东广州510515 深圳大学医学院病理生理学教研室广东深圳518060

目的:观察虎杖苷(polydatin,PD)对烫伤大鼠心功能损害的钙信号调控,并探讨其对烫伤大鼠心肌细胞保护作用的机制。方法:28只成年SD大鼠随机分为4组,即假手术组、烫伤组、PD组及烫伤+PD组,每组7只大鼠(n=7)。各实验组使用Power lab系统进... 详细信息

目的:观察虎杖苷(polydatin,PD)对烫伤大鼠心功能损害的钙信号调控,并探讨其对烫伤大鼠心肌细胞保护作用的机制。方法:28只成年SD大鼠随机分为4组,即假手术组、烫伤组、PD组及烫伤+PD组,每组7只大鼠(n=7)。各实验组使用Power lab系统进行实时心功能监测。手术后5 min通过静脉给予PD(10 mg/kg),12 h后分离心室肌细胞,通过激光共聚焦显微镜观测PD对烫伤大鼠心室肌细胞钙火花发放频率、钙库水平、钙瞬变的作用。结果:与烫伤组比较,烫伤+PD组大鼠左室收缩压、左心室内压力上升的最大速率(±dP/dt max)均显著增加、钙瞬变和心肌收缩力明显增强、使烫伤引起的钙库容量下降基本恢复到正常水平,烫伤引起的高频钙火花发放显著抑制(均P<0.01),钙火花时程的增加也明显抑制(P<0.05)。结论:PD可以显著抑制烫伤引起的心肌细胞肌浆网钙漏流,恢复肌浆网钙库容量水平,增强收缩期钙瞬变和心肌收缩力,从而改善烫伤引起的心功能障碍。

关键词：虎杖苷烫伤心肌细胞钙信号大鼠

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虎杖苷对严重烫伤大鼠心肌细胞钙信号调控的作用

虎杖苷对严重烫伤大鼠心肌细胞钙信号调控的作用

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全国第十三届心脏学会、第十六届心功能专业委员会和《心脏杂志》编委会联合学术大会

作者：邓建新蓝莉芹张翠翠丁文文薛翔刘文娟南方医科大学病理生理学教研室、广东省医学休克微循环重点实验室深圳大学医学院病理生理学教研室

目的:观察虎杖苷（polydatin,PD）对烫伤大鼠心功能损害的钙信号调控,并探讨其对烫伤大鼠心肌细胞保护作用的机制。方法:28只成年SD大鼠随机分为4组,即假手术组、烫伤组、PD组及烫伤+PD组,每组7只大鼠（n=7）。各实验组使用Powerlab系... 详细信息

目的:观察虎杖苷（polydatin,PD）对烫伤大鼠心功能损害的钙信号调控,并探讨其对烫伤大鼠心肌细胞保护作用的机制。方法:28只成年SD大鼠随机分为4组,即假手术组、烫伤组、PD组及烫伤+PD组,每组7只大鼠（n=7）。各实验组使用Powerlab系统进行实时心功能监测。手术后5 min通过静脉给予PD（10 mg/kg）,12 h后分离心室肌细胞,通过激光共聚焦显微镜观测PD对烫伤大鼠心室肌细胞钙火花发放频率、钙库水平、钙瞬变的作用。结果:与烫伤组比较,烫伤+PD组大鼠左室收缩压、左心室内压力上升的最大速率(±dP/dt)均显著增加、钙瞬变和心肌收缩力明显增强、使烫伤引起的钙库容量下降基本恢复到正常水平,烫伤引起的高频钙火花发放显著抑制（均.P<0.01）,钙火花时程的增加也明显抑制（P<0.05）。结论:PD可以显著抑制烫伤引起的心肌细胞肌浆网钙漏流,恢复肌浆网钙库容量水平,增强收缩期钙瞬变和心肌收缩力,从而改善烫伤引起的心功能障碍。

关键词：虎杖苷烫伤心肌细胞钙信号大鼠

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