检索结果-内蒙古大学图书馆

重庆医学 2010年第16期39卷 2100-2102页

作者：邹志鹏冯丽许万福邓凡南方医科大学细胞生物学教研室

目的研究蛋白激酶D3（PKD3）对人胚肾上皮细胞系HEK293细胞中尿激酶型纤溶酶原激活物受体（uPAR）表达水平的影响及其机制,以阐明PKD3调控uPAR表达的重要作用。方法首先在HEK293细胞中过表达PKD3,并以佛波酯（PMA）刺激24h,而后采用实... 详细信息

目的研究蛋白激酶D3（PKD3）对人胚肾上皮细胞系HEK293细胞中尿激酶型纤溶酶原激活物受体（uPAR）表达水平的影响及其机制,以阐明PKD3调控uPAR表达的重要作用。方法首先在HEK293细胞中过表达PKD3,并以佛波酯（PMA）刺激24h,而后采用实时定量PCR扩增PKD3、uPARcDNA,并使用2^-△△Ct方法比较其相对表达量的变化。然后在HEK293细胞中转染β-连环蛋白野生型质粒,并以PMA刺激1h,用免疫沉淀法检测PKD3与β-连环蛋白之间的相互作用。结果在转染的HEK293细胞中PKD3过表达,而且过表达PKD3可明显上调PMA诱导的uPARmRNA表达水平。同时在PMA刺激作用下,可明显增强HEK293细胞中PKD3与β-连环蛋白之间的相互作用。结论 PKD3可能通过与β-连环蛋白的相互作用上调uPAR表达。

关键词：蛋白激酶D3 尿激酶型纤溶酶原激活物受体 β-连环蛋白

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转录因子X-box结合蛋白1相互作用蛋白的筛选和鉴定(英文)

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生物化学与生物物理进展 2006年第8期33卷 745-753页

作者：郭风劲宋方洲易发平成海恩重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆400016

X-box 结合蛋白 1 是一种重要的转录因子,参与体内多项信号转导过程. 为进一步研究 XBP1 的生物学功能,运用酵母双杂交技术在肝细胞文库中筛选 XBP1 的结合蛋白. 首先运用 PCR 技术扩增获得 XBP1 的编码序列,克隆至 pGEM-T 载体,经测序... 详细信息

X-box 结合蛋白 1 是一种重要的转录因子,参与体内多项信号转导过程. 为进一步研究 XBP1 的生物学功能,运用酵母双杂交技术在肝细胞文库中筛选 XBP1 的结合蛋白. 首先运用 PCR 技术扩增获得 XBP1 的编码序列,克隆至 pGEM-T 载体,经测序鉴定后,亚克隆至诱饵载体 pGBKT7 中,转化酵母 AH109(a type). 免疫印迹检测诱饵质粒 pGBKT7-XBP1 在AH109 酵母中的表达之后,含有诱饵质粒的酵母 AH109 与含有肝细胞 cDNA 文库质粒 pACT2 的酵母 Y187(αtype)配合,配合后的二倍体酵母生长在含有 X-α-gal 的营养缺陷型培养基上 (SD/-Trp-Leu-His-Ade) 进行选择和筛选,经测序和序列比对确定阳性克隆的开放读码框 ORF,得到 7 种不同的蛋白质. 为了进一步验证这些筛选蛋白质与 XBP1 的相互作用,克隆其中一种蛋白质 MT1E,并运用 GST pulldown 和免疫共沉淀技术成功检测了 MT1E 和 XBP1 的相互作用(体外 / 体内),结果提示,MT1E 可能是 XBP1 的一个新的调节蛋白. 通过酵母双杂交技术筛选得到的 7 种蛋白质分别与肝细胞基础代谢、蛋白质的合成与运输、细胞的增殖与凋亡密切相关. 上述结果有助于揭示 XBP1 的生物学功能,为进一步探讨 XBP1 的表达和调控机制提供新线索.

关键词： X-box结合蛋白1 酵母双杂交转录因子诱饵

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阻断磷脂酶C-γ1信号通路对大肠癌细胞凋亡的影响

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第一军医大学学报 2005年第2期25卷 177-180页

作者：刘俊李明曾位森白晓春罗深秋南方医科大学细胞生物学教研室广东广州510515

目的探讨磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)信号通路被阻断对大肠癌细胞凋亡状态的影响。方法利用U73122(1、5、10μmol/L)处理细胞以阻断PLC-γ1信号通路,光镜、电镜观察细胞形态改变,MTT法评估细胞杀伤效应,流式细胞仪分析凋亡细胞比例。结果PLC-... 详细信息

目的探讨磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)信号通路被阻断对大肠癌细胞凋亡状态的影响。方法利用U73122(1、5、10μmol/L)处理细胞以阻断PLC-γ1信号通路,光镜、电镜观察细胞形态改变,MTT法评估细胞杀伤效应,流式细胞仪分析凋亡细胞比例。结果PLC-γ1信号通路阻断后,大肠癌细胞出现了典型的凋亡形态学改变,存活细胞明显减少,流式细胞仪检测出现典型的凋亡亚二倍体峰,凋亡细胞所占比例达到半数以上。结论阻断PLC-γ1信号通路能够启动大肠癌细胞凋亡。

关键词：磷脂酶C-γ1 信号通路大肠肿瘤凋亡

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BRCA1调节乳腺癌细胞黄体酮受体A和B蛋白的表达

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南方医科大学学报 2008年第7期28卷 1157-1160,1164页

作者：郭银霞曾位森刘亚伟李煜生林俊熊静波罗深秋南方医科大学细胞生物学教研室广东广州510515 南方医科大学病理生理学教研室广东广州510515

目的研究BRCA1能否在乳腺癌细胞中调节黄体酮受体A和B的表达。方法在乳腺癌细胞MCF-7中,用lipofectamine 2000转染含有野生型BRCA1 cDNA的pFlag-CMV2-BRCA1 wt质粒或BRCA1特异性的小干扰RNA,过表达BRCA1或敲低BRCA1的表达。转染24h以后... 详细信息

目的研究BRCA1能否在乳腺癌细胞中调节黄体酮受体A和B的表达。方法在乳腺癌细胞MCF-7中,用lipofectamine 2000转染含有野生型BRCA1 cDNA的pFlag-CMV2-BRCA1 wt质粒或BRCA1特异性的小干扰RNA,过表达BRCA1或敲低BRCA1的表达。转染24h以后,加入含有100 nmol/L黄体酮完全培养基刺激24h。提取全细胞蛋白或总RNA,进行Western blotting和RT-PCR检测BRCA1、黄体酮受体A(PRA)和黄体酮受体B(PRB)在蛋白质水平和mRNA水平的表达。结果在MCF-7细胞中过表达BRCA1,PRA和PRB蛋白的表达下降,而PRA和PRB在mRNA水平无变化;BRCA1的表达被敲低后,PRA和PRB的表达升高。结论在乳腺癌细胞中,外源性和内源性BRCA1都可以下调PRA和PRB蛋白的表达。

关键词： BRCA1 黄体酮受体乳腺癌

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H~＋-ATP酶定位的电镜细胞化学观察

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南方医科大学学报 2011年第8期31卷 1431-1433页

作者：罗深秋柯志勇路艳蒙南方医科大学细胞生物学教研室广东省骨与软骨再生医学重点实验室广东广州510515 南方医科大学细胞生物学教研室电镜室广东广州510515

目的用电子显微镜细胞化学方法观察H+-ATP酶在细胞器中的位置。H+-ATP酶不仅定位在溶酶体膜,而且定位在Wistar大鼠近曲小管上皮细胞的细胞膜、核膜上。上述结果表明用电镜细胞化学方法以形态学表现形式证实H+-ATP酶定位在细胞内膜相结... 详细信息

目的用电子显微镜细胞化学方法观察H+-ATP酶在细胞器中的位置。H+-ATP酶不仅定位在溶酶体膜,而且定位在Wistar大鼠近曲小管上皮细胞的细胞膜、核膜上。上述结果表明用电镜细胞化学方法以形态学表现形式证实H+-ATP酶定位在细胞内膜相结构的学说。

关键词： H+-ATP酶电子显微镜细胞化学

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整合素α6β1增强人肝癌细胞侵袭性机制的探讨

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中华肿瘤杂志 2000年第4期22卷 287-289页

作者：路艳艳周柔丽北京医科大学细胞生物学教研室 100083

目的　研究层粘连蛋白受体α6 β1整合素在人肝癌细胞侵袭行为中的作用。方法　采用dominantnegative策略 ,以无功能的α6 β4 TR代替细胞表面α6 β1受体 ,从而消除了人肝癌细胞Bel740 2α6 β1受体的功能。用划痕法和Boyden小室法分... 详细信息

目的　研究层粘连蛋白受体α6 β1整合素在人肝癌细胞侵袭行为中的作用。方法　采用dominantnegative策略 ,以无功能的α6 β4 TR代替细胞表面α6 β1受体 ,从而消除了人肝癌细胞Bel740 2α6 β1受体的功能。用划痕法和Boyden小室法分别检测细胞的迁移和侵袭 ,明胶酶谱分析法检测细胞基质金属蛋白酶 (matrixmetalloproteinases,MMPs)的分泌。结果　消除α6 β1功能的人肝癌细胞迁移能力明显降低 ;侵袭并穿透人工基膜的细胞数降低 46 .7% ;MMP 9的分泌几乎被完全抑制 ,活化型的MMP 2降低 43.9%。结论　人肝癌细胞在层粘连蛋白基质上的迁移、侵袭及MMPs的分泌和活化主要由α6 β1受体介导。肝癌组织中层粘连蛋白和整合素α6 β1的高表达。

关键词：肝肿瘤肿瘤侵袭肿瘤转移层粘连蛋白整合素

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大肠杆菌血脑屏障侵袭基因ibeB的稳定转染能够促进HeLa细胞片状伪足的形成

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生物化学与生物物理进展 2005年第2期32卷 116-121页

作者：赵伟东陈誉华中国医科大学发育生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

为进一步探讨大肠杆菌血脑屏障侵袭基因ibeB的生物学特性,将ibeB基因克隆至真核表达载体,采用稳定转染的方法,对ibeB基因在HeLa细胞中的表达所产生的影响进行了研究. 结果发现:经ibeB基因稳定转染的HeLa细胞向外周伸展,细胞骨架的组分... 详细信息

为进一步探讨大肠杆菌血脑屏障侵袭基因ibeB的生物学特性,将ibeB基因克隆至真核表达载体,采用稳定转染的方法,对ibeB基因在HeLa细胞中的表达所产生的影响进行了研究. 结果发现:经ibeB基因稳定转染的HeLa细胞向外周伸展,细胞骨架的组分——微丝发生了重新排布,形成了明显的片状伪足,细胞周边形成较多的膜皱褶结构;细胞对底物的粘附能力和伸展能力显著增强;细胞的粘着斑标志性蛋白Vinculin表达增强. 这些结果为研究片状伪足的形成机制提供了模型.

关键词： ibeB基因大肠杆菌 HeLa细胞细胞骨架片状伪足

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荒川库蠓内部结构组织学研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2021年第5期39卷 696-702,709页

作者：甯媛曾雯雯汪琳徐媛媛刘江欣代青浪勾康晋源卢雪侯晓晖遵义医科大学细胞生物学教研室遵义563099

目的利用石蜡切片技术对荒川库蠓成虫内部结构组织学进行研究。方法采集荒川库蠓成虫,制作永久玻片后进行形态鉴定,将标本的翅和足解下后,其余部分在Duboscq-Brasil固定液中固定,逐级脱水、二甲苯透明、石蜡包埋、连续切片以及苏木素-... 详细信息

目的利用石蜡切片技术对荒川库蠓成虫内部结构组织学进行研究。方法采集荒川库蠓成虫,制作永久玻片后进行形态鉴定,将标本的翅和足解下后,其余部分在Duboscq-Brasil固定液中固定,逐级脱水、二甲苯透明、石蜡包埋、连续切片以及苏木素-伊红染色后,对切片进行脱水、透明、中性树胶封片处理,光学显微镜下观察荒川库蠓组织结构。结果对荒川库蠓成虫消化系统、神经系统、呼吸系统和生殖系统等内部组织结构的观察结果显示,消化系统由消化道和消化腺2部分组成,消化道又可分为前肠、中肠及后肠,中肠是消化道最发达的部分;消化腺分为左右2个腺体,均包括主腺和附腺,主腺具有分泌作用,附腺是分泌物的蓄积场所。中枢神经系统由脑和腹神经索2部分组成。脑分为前脑、中脑和后脑,其中前脑发出视神经与复眼相连;中脑发出神经至触角;后脑发出围食道神经与咽下神经节相连。腹神经索包含1个咽下神经节、 3个胸神经节和5个腹神经节。呼吸系统主要包括气门、气囊等。气门2对,分别位于中胸和后胸。气囊主要包括背支囊和腹支囊,呈管状或泡状,着色不明显。生殖系统主要包括雌性和雄性内生殖器官。雌性内生殖器官包括1对卵巢、 1对输卵管、 1个受精囊和1对生殖附腺,雄性内生殖器官包括1对精巢、 1对输精管、 1根射精管以及1对生殖附腺。结论荒川库蠓的内部结构组成与其他双翅目昆虫相似,但各系统器官的数量、大小和形态等存在明显差异。

关键词：荒川库蠓成虫内部结构组织学

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慢病毒导入的PLC-γ1 siRNA对人大肠癌细胞运动的影响

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中华肿瘤防治杂志 2007年第10期14卷 724-727页

作者：谭丽邹志鹏林骏罗深秋南方医科大学细胞生物学教研室广东广州510515

目的:通过RNA干扰技术客观地研究PLC-γ1与大肠癌细胞多种生物学行为的关系。制备在人大肠癌系Lo-Vo中稳定抑制PLC-γ1的重组病毒,以建立PLC-γ1表达降低的细胞系,以便客观研究该基因的作用。方法:制备产生PLC-γ1si RNA分子的重组慢病... 详细信息

目的:通过RNA干扰技术客观地研究PLC-γ1与大肠癌细胞多种生物学行为的关系。制备在人大肠癌系Lo-Vo中稳定抑制PLC-γ1的重组病毒,以建立PLC-γ1表达降低的细胞系,以便客观研究该基因的作用。方法:制备产生PLC-γ1si RNA分子的重组慢病毒,在慢病毒感染LoVo细胞后以杀稻瘟菌素筛选稳定表达细胞。应用Western-blot和RT-PCR对细胞中PLC-γ1的蛋白和mR-NA表达水平进行分析。黏附能力实验和迁移能力实验分别检测细胞运动状态的影响。结果:成功构建了含PLC-γ1shRNA基因的重组慢病毒,PLC-γ1si RNA可显著下调LoVo细胞中PLC-γ1的表达。重组慢病毒导入的si RNA有较高的沉默效率,显著降低了细胞的黏附能力和迁移能力。结论:PLC-γ1可能与大肠癌的转移性能密切相关。

关键词：结直肠肿瘤/病理学抗体单克隆/免疫学 RNA 小分子干扰/遗传学细胞粘附磷脂酶类

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适配子介导的siRNA转运

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生物化学与生物物理进展 2012年第5期39卷 410-415页

作者：谭燕张兴梅南方医科大学基础医学院神经生物学教研室广州510515

小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)因能快速抑制哺乳动物特定基因的表达而用于各种疾病的治疗,然而选择合适的载体将siRNA安全有效地转运进入靶细胞仍是制约siRNA应用于临床治疗的重要因素.越来越多的转运载体被开发出来,其... 详细信息

小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)因能快速抑制哺乳动物特定基因的表达而用于各种疾病的治疗,然而选择合适的载体将siRNA安全有效地转运进入靶细胞仍是制约siRNA应用于临床治疗的重要因素.越来越多的转运载体被开发出来,其中包括针对细胞表面蛋白的适配子(aptamer).Aptamer是一种能与靶分子高特异性和高亲和结合的寡核苷酸,已经越来越多地用于疾病的诊断和治疗.Aptamer作为载体介导siRNA转运可提高治疗的靶向性并减少副作用,这将为siRNA应用于临床靶向治疗提供一种特异有效的途径.目前,已经发现几种aptamers可以介导siRNA的转运,如anti-PSMA aptamer,anti-HIV gp120 aptamer,anti-CD4 aptamer等.本文将综述aptamer介导siRNA转运的最新研究进展.

关键词： SELEX 适配子 siRNA 转运

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