检索结果-内蒙古大学图书馆

突变质粒CMV-3flag-hPROKR2(343YFK/AAA345,351HWR/AAA353)的构建及表达

生物技术 2018年第2期28卷 113-118,150页

作者：周晓涛周文涛彭震刘化蝶陈丹娜夏开德迪丽娜尔.波拉提赵云娟李家大新疆医科大学基础医学院免疫学教研室新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学第五附属医院新疆乌鲁木齐830011 中南大学医学遗传学国家重点实验室湖南长沙410000 贵州省妇幼保健医院贵州贵阳550000

[目的]构建CMV-3flag-h PROKR2(343YFK/AAA345,351HWR/AAA353)真核表达质粒并观察其蛋白表达。[方法]将NotⅠ的酶切位点(GCGGCCGCC)引入第一次PCR的后引物,扩增并突变h PROKR2的1-1035 bp(343YFK/AAA345),再将NotⅠ的酶切位点和3个连续甘氨酸突变碱基GCCGCCGCA引入第二次PCR的前引物扩增并突变h PROKR2的1036-1152bp(351HWR/AAA353),通过NotⅠ酶切位点连接前后两个片段,即可构建pc DNA3.1-h PROKR2-myc-his(343YFK/AAA345,351HWR/AAA353),最后通过测序鉴定突变是否成功。扩增h PROKR2(343YFK/AAA345,351HWR/AAA353),连接入CMV-3flag。Western Blot检测相应蛋白的表达。[结果]成功构建CMV-3flag-h PROKR2(343YFK/AAA345,351HWR/AAA353)质粒,并验证到相应蛋白表达。[结论]利用NotⅠ酶的碱基序列特性(GCGGCCGCC)进行3个连续氨基酸突变的方法简单有效。质粒CMV-3flag-h PROKR2(343YFK/AAA345,351HWR/AAA353)的成功构建为后期进一步实验创造条件。

关键词： hPROKR2 连续多位点碱基突变限制性内切酶NotⅠ 质粒构建

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精准医学:从基础研究走向临床应用

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遗传 2017年第3期39卷 175-176页

作者：徐湘民袁慧军杨正林南方医科大学基础医学院医学遗传学教研室广州510515 第三军医大学第一附属医院医学遗传中心重庆400038 四川省人民医院人类疾病基因研究四川省重点实验室成都610072

自＂人类基因组计划＂完成以来,人们对基因组变异信息与个体差异关系的认识在不断地加深,对疾病的发生机制、药物反应性,以及患者预后的预测等等生命健康密切相关的重要问题的研究,更是以空前的速度在不断完善和拓宽人们的认识。特别是... 详细信息

自＂人类基因组计划＂完成以来,人们对基因组变异信息与个体差异关系的认识在不断地加深,对疾病的发生机制、药物反应性,以及患者预后的预测等等生命健康密切相关的重要问题的研究,更是以空前的速度在不断完善和拓宽人们的认识。特别是高通量测序技术的广泛应用,使科研人员得以累积多种疾病的基于大量病例的基因组、转录组、代谢组等多组学海量数据.

关键词：人类基因组计划测序技术研究走向药物反应个体差异科研人员临床应用遗传性耳聋非小细胞肺癌 β-地中海贫血

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一个掌跖角化牙周破坏综合征家系CTSC基因的突变鉴定

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中华医学遗传学杂志 2016年第2期33卷 150-154页

作者：刘翠娴田智慧阳奇马倩倩徐湘民熊符南方医科大学基础医学院医学遗传学教研室广州510515 南方医院口腔科

目的对一个掌跖角化牙周破坏综合征家系进行临床表型分析和CTSC基因突变检测，揭示其分子机制，为遗传咨询提供依据。方法通过临床表型、口腔检查等进行临床诊断。用PCR扩增CTSC基因的外显子，之后采用Sanger测序法进行突变筛查，随后用... 详细信息

目的对一个掌跖角化牙周破坏综合征家系进行临床表型分析和CTSC基因突变检测，揭示其分子机制，为遗传咨询提供依据。方法通过临床表型、口腔检查等进行临床诊断。用PCR扩增CTSC基因的外显子，之后采用Sanger测序法进行突变筛查，随后用PolyPhen-2和SIFT软件进行突变有害性预测，同时用Swiss—Port软件预测CTSC蛋白的三级结构，并采用荧光定量PCR对患者及其父母的CTSC基因的mRNA进行定量分析，用Western印迹杂交检测野生型和突变型CTsc蛋白的表达差异。结果患者CTSC基因第7外显子存在c．901G〉A（p．G301S）纯合错义突变，其父母均为突变携带者。该突变位于酶的高度保守区，有害性预测结果显示为有害，导致蛋白三级结构发生改变，可能影响组织蛋白酶C的活性。CTSC基因突变型mRNA和蛋白的表达量与野生型的差异无统计学意义。结论首次在中国人群中发现CTSC基因c．901G〉A突变可导致掌跖角化牙周破坏综合征，扩展了CTSC基因的突变谱。

关键词：掌跖角化牙周破坏综合征 CTSC基因突变分析

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西双版纳地区傣族、哈尼族、基诺族ABO血型和G6PD基因频率调查

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热带医学杂志 2018年第5期18卷 578-581,633页

作者：唐佳贺铭方子水蒋成睿林晓莹王利黄尤光李树德蒋伟国杨荣高寂元段家镜韩璐好陈晓丹蒋玮莹中山大学中山医学院医学遗传学教研室广东广州510080 江门市妇幼保健院医学遗传中心广东江门529000 暨南大学附属第一医院医学影像中心广东广州510080 昆明医科大学基础医学院基础医学实验教学中心云南昆明650500 西双版纳州农垦医院云南景洪666100 昆明医科大学第三附属医院云南省肿瘤研究所云南昆明650118 昆明医科大学生物化学与分子生物学系云南昆明650500

目的调查西双版纳傣族、基诺族、哈尼族的ABO血型分布特点和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症情况。方法利用四氮唑蓝纸片法或G6PD/6PGD比值法对西双版纳傣族1 844人,哈尼族317人,基诺族880人进行G6PD缺乏症的筛查。利用ABO血型试剂盒... 详细信息

目的调查西双版纳傣族、基诺族、哈尼族的ABO血型分布特点和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症情况。方法利用四氮唑蓝纸片法或G6PD/6PGD比值法对西双版纳傣族1 844人,哈尼族317人,基诺族880人进行G6PD缺乏症的筛查。利用ABO血型试剂盒对傣族1 674人,哈尼族175人,基诺族1 060人进行ABO血型测定。结果傣族、基诺族、哈尼族ABO血型分布特征均为O>B>A>AB,基因频率为r>q>p,民族指数分别为0.74、0.76、0.49。傣族G6PD缺乏症发生率为8.79%(162/1 844),男性发生率为13.59%(95/699),女性发生率为5.85%(67/1 145),傣族的男、女性G6PD缺乏症发生率比较,差异有统计学意义(P<0.05);基诺族G6PD缺乏症发生率为4.66%(41/880),男性发生率为4.86%(18/370),女性发生率为4.51%(23/510);哈尼族G6PD缺乏症发生率为0(0/317)。G6PD基因频率傣族(0.135 9)>基诺族(0.048 6)。结论西双版纳傣族、基诺族、哈尼族的ABO血型分布一致,G6PD缺陷在傣族人群中高发,该调查研究为西双版纳州地区G6PD缺乏症遗传咨询、疟疾防治、少数民族群体遗传学研究提供了重要的基础资料。

关键词：少数民族 ABO血型 G6PD缺乏症西双版纳

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一个显性牙釉质发育不全家系的致病突变分析

一个显性牙釉质发育不全家系的致病突变分析

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第十次全国牙体牙髓病学学术大会

作者：卢婷黎美仪彭玲熊符吴补领南方医科大学南方医院·南方医科大学口腔医学院南方医科大学基础医学院医学遗传学教研室南方医科大学基础医学院医学遗传学教研室南方医科大学南方医院·南方医科大学口腔医学院

目的：调查一个中国人遗传性釉质发育不全家系,进行临床表型和致病机制研究。方法：通过先证者查证法收集一个遗传性釉质发育不全中国人家系,进行全面口腔检查,分析临床表型,micro-CT、扫描电镜分析患者脱落牙齿进行确诊,采用二代测序(N... 详细信息

目的：调查一个中国人遗传性釉质发育不全家系,进行临床表型和致病机制研究。方法：通过先证者查证法收集一个遗传性釉质发育不全中国人家系,进行全面口腔检查,分析临床表型,micro-CT、扫描电镜分析患者脱落牙齿进行确诊,采用二代测序(NGS)的方法找出该家系发生共性分离的致病基因并通过STR连锁分析、采用Sanger测序法进行突变确认,采用生物信息学预测分析,WB及细胞定位等技术对AMBN蛋白结构及定位进行研究,对致病机制进行探讨。

关键词：釉质发育不全 AMBN 基因突变全外显子测序

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刚地弓形虫DXR基因的克隆表达与生物学特性分析

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中国人兽共患病学报 2016年第12期32卷 1091-1095页

作者：章莹宗红英何立蔡国斌武汉大学基础医学院医学遗传学系武汉430071 武汉大学基础医学院人体寄生虫学教研室武汉430071

目的对刚地弓形虫1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构化酶(TgDXR)基因进行克隆、表达、纯化和生物学特性分析。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取cDNA和基因组DNA;PCR扩增TgDXR的基因片段;构建成熟TgDXR/pET-24b重组原核表达载体;经双... 详细信息

目的对刚地弓形虫1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构化酶(TgDXR)基因进行克隆、表达、纯化和生物学特性分析。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取cDNA和基因组DNA;PCR扩增TgDXR的基因片段;构建成熟TgDXR/pET-24b重组原核表达载体;经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆;在大肠杆菌BL21中用IPTG诱导表达。亲和层析纯化重组TgDXR蛋白,并对该蛋白的生物学特性和酶的动力学活性进行分析。结果从弓形虫RH株的cDNA和基因组DNA中分别扩增出长度为1 542bp和5 464bp的TgDXR片段,成功构建重组质粒;SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠杆菌中高效表达。重组蛋白的相对分子量约50kDa。酶活性实验显示,Mg2+、Mn2+是最佳金属螯合离子,反应最佳pH值为7.5,该酶活性抑制剂膦胺霉素(Fosmidomycin)对该酶蛋白的IC50为0.52μmol/L。结论 RH株刚地弓形虫TgDXR可在原核表达系统中高效表达,该重组蛋白具有生物学活性,并有望作为弓形虫特异性药物靶标。

关键词：刚地弓形虫 DXR 克隆表达膦胺霉素

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TLR4/NLRP3炎症复合体介导对比剂诱导的肾小管上皮细胞炎症和损伤

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中国病理生理杂志 2017年第12期33卷 2252-2258页

作者：林燕林佳琼谢楚莉管小凤谭学贤黄泽娜广州医科大学附属第三医院肾内科广东广州510150 广州医科大学附属第三医院病理科广东广州510150 南方医科大学基础医学院医学遗传学教研室广东广州510515 中山大学中山医学院生理学教研室广东广州510080 中山大学孙逸仙纪念医院超声科广东广州510120 广东省人民医院急危重症医学部广东省医学科学院广东广州510080

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)/Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎症复合体是否介导了对比剂(CM)引起的肾小管上皮细胞炎症和损伤。方法:本研究运用碘普罗胺作用于大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E建立损伤模型。应用CCK-8法测定细胞存活率;Western blot... 详细信息

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)/Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎症复合体是否介导了对比剂(CM)引起的肾小管上皮细胞炎症和损伤。方法:本研究运用碘普罗胺作用于大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E建立损伤模型。应用CCK-8法测定细胞存活率;Western blot测定TLR4、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、caspase-1和cleaved caspase-3的蛋白水平;ELISA法检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18的水平;Hoechst 33258核染色法检测凋亡率;JC-1染色法测定线粒体膜电位。用小干扰RNA沉默NLRP3表达。结果:CM可降低NRK-52E细胞的存活率并上调cleaved caspase-3的蛋白水平(P<0.05);此外,CM可上调细胞TLR4/NLRP3炎症复合体的表达并促进炎症因子IL-1β和IL-18的分泌(P<0.05)。沉默NLRP3可以对抗CM诱导的炎症因子分泌;TLR4抑制剂TAK-242及沉默NLRP3能减轻CM引起的细胞凋亡和线粒体功能损伤。结论:TLR4/NLRP3炎症复合体参与了CM致急性肾损伤的发病机制,并介导了CM诱导的肾小管上皮细胞损伤和炎症。

关键词：对比剂肾损伤炎症 Toll样受体4 Nod样受体蛋白3炎症复合体

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GTF2H2基因变异体与脊髓性肌萎缩症的相关性

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广东医学 2016年第10期37卷 1467-1470页

作者：方萍钟泽艳李亮南方医科大学基础医学院医学遗传学教研室广州510515

目的基于MLPA的检测结果探讨GTF2H2基因的两个变异体与脊髓性肌萎缩症(SMA)的关系。方法利用MLPA技术对317例连续样本进行SMA的决定基因SMN1、修饰基因NAIP与SMN2以及位置相邻基因RAD17、SERF1B及GTF2H2拷贝数检测。根据有无基因转换,... 详细信息

目的基于MLPA的检测结果探讨GTF2H2基因的两个变异体与脊髓性肌萎缩症(SMA)的关系。方法利用MLPA技术对317例连续样本进行SMA的决定基因SMN1、修饰基因NAIP与SMN2以及位置相邻基因RAD17、SERF1B及GTF2H2拷贝数检测。根据有无基因转换,对纳入的数据利用相关与回归分析的统计方法进行探讨分析。结果 Spearman's相关性分析显示,纳入分析的223例连续样本的T-GTF2H2与NAIP基因的相关系数为0.694;线性回归显示,GTF2H2基因对NAIP基因的决定系数(R^2)为0.554,调整R^2为0.549,T-GTF2H2变异体的标准回归系数(β)为0.768,而C-GTF2H2变异体的β为-0.052。结论 T-GTF2H2变异体与NAIP基因呈正相关,进而说明T-GTF2H2变异体在SMA致病的分子机制过程中有一定的作用。

关键词：脊髓性肌萎缩症 MLPA技术 GTF21-12基因相关与回归

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一个显性牙釉质发育不全家系的致病突变分析

一个显性牙釉质发育不全家系的致病突变分析

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第十二次全国老年口腔医学学术年会

作者：卢婷黎美仪彭玲熊符吴补领 510515 广州南方医科大学南方医院·南方医科大学口腔医学院 510515 广州南方医科大学基础医学院医学遗传学教研室 510515 广州南方医科大学基础医学院医学遗传学教研室 510515 广州南方医科大学南方医院·南方医科大学口腔医学院

目的：调查一个中国人遗传性釉质发育不全家系,进行临床表型和致病机制研究.方法：通过先证者查证法收集一个遗传性釉质发育不全中国人家系,进行全面口腔检查,分析临床表型,micro-CT、扫描电镜分析患者脱落牙齿进行确诊,采用二代测序(N... 详细信息

目的：调查一个中国人遗传性釉质发育不全家系,进行临床表型和致病机制研究.方法：通过先证者查证法收集一个遗传性釉质发育不全中国人家系,进行全面口腔检查,分析临床表型,micro-CT、扫描电镜分析患者脱落牙齿进行确诊,采用二代测序(NGS)的方法找出该家系发生共性分离的致病基因并通过STR连锁分析、采用Sanger测序法进行突变确认,采用生物信息学预测分析,WB及细胞定位等技术对AMBN蛋白结构及定位进行研究,对致病机制进行探讨.结果：该家系临床表型以全口牙全层釉质发育不全为特征,病变累及乳牙列和恒牙列,常染色体显性遗传.全外显子分析发现该家系受累个体AMBN基因第13号外显子(c.1069C＞T),该突变尚未见报道.结论：首次发现AMBN基因在蛋白编码区(P357S)发生错义突变,导致成釉蛋白功能部分丧失,为釉质发育不全致病机制提供了新的证据.

关键词：釉质发育不全 AMBN 基因突变全外显子测序

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人PROKR2蛋白274位缬氨酸突变质粒的构建及表达

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生物技术通讯 2017年第2期28卷 90-95页

作者：周晓涛陈丹娜刘化蝶周文涛彭震戴雨亭李家大新疆医科大学基础医学院免疫学教研室新疆乌鲁木齐830011 中南大学医学遗传学国家重点实验室湖南长沙410000 新疆医科大学第五附属医院新疆乌鲁木齐830011

目的:构建人前动力蛋白受体2(hPROKR2)274位缬氨酸残基突变的真核表达质粒pKR5-mGlu-FlaghPROKR2(V274D或V274R或V274T或V274A),并观察其蛋白表达。方法:将pKR5-mGlu-Flag-mPKR2质粒和PCR扩增的hPROKR2编码序列用MluⅠ、XbaⅠ酶切后连接,构建pKR5-mGlu-Flag-hPROKR2质粒;以后者为模板,利用定点突变技术分别构建pKR5-mGlu-Flag-hPROKR2(V274D)、(V274R)、(V274T)、(V274A)真核表达质粒;用Western印迹验证Flag-hPROKR2(V274D)、(V274A)、(V274T)、(V274R)在真核细胞中的表达。结果:构建了pKR5-mGlu-Flag-hPROKR2(V274D)、(V274R)、(V274T)、(V274A)真核表达质粒,并观察到相应的蛋白表达。结论:pKR5-mGlu-Flag-hPROKR2(V274D)、(V274R)、(V274T)、(V274A)真核表达质粒的构建,为后期检测第274位缬氨酸对hPROKR2蛋白分子空间结构及功能的影响创造了条件。

关键词：人前动力蛋白受体2 定点突变缬氨酸

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