目的MYCT1（myc target 1）基因是我室克隆的喉癌候选肿瘤抑制基因,GenBank登录号NM25107,曾用名MTLC（myc target from laryngeal cancer cells）。本研究旨在克隆该基因新转录本全长,确定其转录起始点,并探讨该基因启动子的结构与功...
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目的MYCT1（myc target 1）基因是我室克隆的喉癌候选肿瘤抑制基因,GenBank登录号NM25107,曾用名MTLC（myc target from laryngeal cancer cells）。本研究旨在克隆该基因新转录本全长,确定其转录起始点,并探讨该基因启动子的结构与功能。方法利用已知MYCT1的保守序列,以正常人血液RNA为模板,应用RACE（rapid-amplification ofcDNA ends）技术克隆得到该基因精确全长,确定转录起始点位置并提交GenBank;然后利用生物信息学软件对所得cDNA序列及其启动子区进行预测分析,以人类基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到P852（-852～+12bp）、P799（-799～+12bp）、P667（-667～+12bp）三段不同长度的启动子片段,将其定向克隆入pGL3Basic载体,将构建好的荧光素酶报告基因表达载体瞬时转染喉癌Hep2细胞系和人胚肾HEK293细胞系,并采用凝胶电泳迁移实验结合染色质免疫共沉淀实验分别从体外和体内验证MYCT1基因启动子活性。结果克隆得到长1106bp的MYCT1基因新转录本（MYCT1transcript variant 1）,GenBank登录号GU97693,转录起始点位于ATG上游140bp处,这一新的转录本的氨基酸序列与小鼠mt-mc1基因同源性达85%;启动子区研究结果发现在两个细胞系中P667几乎没有荧光素酶活性,而P853、P799存在明显的荧光素酶活性,表明启动子区位于ATG上游852～799bp区域,凝胶电泳迁移实验和染色质免疫共沉淀实验表明该区域与转录因子C-MYC特异性结合。结论成功克隆了MYCT1基因新的转录本和具有活性的该基因启动子,精确定位转录起始点,C-MYC为该基因启动子区重要的转录因子,为进一步研究MYCT1基因的转录调控机制及基因功能奠定了实验基础。
目的探讨TBX20基因T566C多态与先天性心脏病的关系。方法从HapMap中选择TBX20基因内标签SNP(tagSNP)T566C(NCBI SNP ID:rs336383),应用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性(PCRRFLP)在204个先天性心脏病核心家系中进行TBX20基因T566C多...
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目的探讨TBX20基因T566C多态与先天性心脏病的关系。方法从HapMap中选择TBX20基因内标签SNP(tagSNP)T566C(NCBI SNP ID:rs336383),应用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性(PCRRFLP)在204个先天性心脏病核心家系中进行TBX20基因T566C多态性检测,应用在线Hardy-Weinberg检测程序分所基因型的Hardy-Weinberg平衡吻合度,应用ETDT软件进行单位点关联分析。结果 204个先天性心脏病核心家系TBX20基因T566C多态位点基因型分布Hardy-Weinberg平衡。单位点关联分析显示,在204个先天性心脏病核心家系中,传递的T等位基因为84个,未传递的T等位基因为57个,传递的C等位基因为57个,未传递的C等位基因为84个,c2=5.1702(P=0.02298),具有统计学意义。结论 TBX20基因内T566C多态性与先天性心脏病具有明显的相关性,TBX20基因可能是先天性心脏病的遗传易感基因。
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