目的:化学遗传学方法筛选并初步鉴定获得不同造血缺陷表型的斑马鱼突变体。方法:乙基亚硝基脲(N-ethyl-N-nitrosourea,ENU)诱导雄性斑马鱼突变(founder),将其与AB野生型雌性斑马鱼交配产生F1代,源自不同founder的F1杂交产生F2家族,F2代同家族内自交所产生的F3代胚胎分别以βe7为探针的整体原位杂交实验(WISH)标记胚胎期珠蛋白基因进行红系造血缺陷突变体筛选、以中性红(neutral red,NR)活体标注巨噬细胞和苏丹黑B(Sudan black B,SB)活体标注中性粒细胞进行髓系造血缺陷突变体筛选,并根据所筛选到的突变体的不同造血过程缺陷表型分原始造血、造血干细胞和定向造血三个不同时间段进行初步分类研究。其中,22hpfβe7检测原始红系、36hpfc-myb检测造血干细胞、3.0dpf时用O-dianisidine对原始造血阶段的血红蛋白进行检测、3.5dpf时的NR和SB分别对原始造血阶段的巨噬细胞和中性粒细胞进行检测、5.0dpf rag7检测定向淋系、5.0dpfβe7验证定向红系、5.0dpf/yc检测定向造血的髓系。结果:在350个F2家系中配种筛选了1424对鱼,共获得23个突变体。经过初步鉴定,其中12个为红系特异性造血缺陷,2个为红系和淋系造血缺陷,2个为头部巨噬细胞(小胶质细胞)缺陷,1个为头部小胶质细胞和VDA区巨噬细胞同时缺陷,5个为中性粒细胞缺陷,1个为红系和髓系造血同时缺陷。
目的先天性无眼与小眼畸形(Anophthalmia and Microphthalmia,AM)为罕见的眼发育异常,可单侧或双侧发生,常合并囊肿、白内障和其他眼部异常。此外,患者常具有发育迟缓、肾脏或心脏缺陷、唇裂或腭裂等表现。本病病因复杂,可涉及染色体、...
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目的先天性无眼与小眼畸形(Anophthalmia and Microphthalmia,AM)为罕见的眼发育异常,可单侧或双侧发生,常合并囊肿、白内障和其他眼部异常。此外,患者常具有发育迟缓、肾脏或心脏缺陷、唇裂或腭裂等表现。本病病因复杂,可涉及染色体、单基因和环境因素等,确切的发病机制目前尚不清楚。近年来,PAX6、SOX2和OTX2等转录因子被确定为主要的致病基因。本研究对一先天性无眼与小眼畸形家系的上述基因进行了筛查,并探讨其在发病中的角色,为开展基因诊断奠定基础。方法采用试剂盒提取该家系中的患者外周血DNA,之后用PCR方法扩增其PAX6、SOX2和OTX2基因外显子并送测序。发现可疑变异位点后,用酶切法筛查其亲属及80例与该家系无关的正常人以验证结果,之后应用生物信息学软件预测突变蛋白结构。结果在该家系中患者的OTX2基因外显子中发现一新的杂合性突变,而先证者母亲和与该家系无关的80例正常人未发现突变。生物信息学工具预测出突变的OTX2蛋白与野生型蛋白结构差异很大,其下游DNA结构域可能被破坏,失去转录因子与DNA结合的功能。结论首次在一先天性无眼与小眼畸形家系中鉴定OTX2基因杂合性突变,并初步探讨了发病的分子机制。这将为以后的遗传咨询提供依据。
RNA editing by adenosine deamination fuels the generation of RNA and protein diversity in eukaryotes,particularly higher organisms. This includes recoding of translated exons, widespread editing of retrotransposon-der...
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RNA editing by adenosine deamination fuels the generation of RNA and protein diversity in eukaryotes,particularly higher organisms. This includes recoding of translated exons, widespread editing of retrotransposon-derived repeat elements and sequence modification of microRNA(miRNA) *** changes can bring about specific amino acid substitutions,alternative splicing and changes in gene expression *** overall
DNA sequencing technology is playing an increasingly important role in biological *** first generation of sequencing technology appeared in *** the past decade,the so-called next-generation sequencing technologies had...
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DNA sequencing technology is playing an increasingly important role in biological *** first generation of sequencing technology appeared in *** the past decade,the so-called next-generation sequencing technologies had emerged and caused a revolution in biological research.
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