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四川大学学报（医学版） 2016年第4期47卷 451-457页

作者：刘明佳陈利弘胡开锋杨晓龙董婧颖刘戟四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室成都610041

目的研究miR-18a通过靶基因共济失调-毛细血管扩张突变基因(ataxia telangiectasia mutated gene,ATM)调控结肠癌细胞的生物学特性。方法通过软件预测miR-18a其中一个靶基因。设计合成miR-18a的模拟剂(mimics)和抑制剂(inhibitor),通过... 详细信息

目的研究miR-18a通过靶基因共济失调-毛细血管扩张突变基因(ataxia telangiectasia mutated gene,ATM)调控结肠癌细胞的生物学特性。方法通过软件预测miR-18a其中一个靶基因。设计合成miR-18a的模拟剂(mimics)和抑制剂(inhibitor),通过转染不同组分上调或下调内源性miR-18a在结肠癌细胞株HCT116中的表达。采用实时荧光定量(qRT)-PCR、Western blot、MTT法、克隆形成实验、Transwell等方法,检测过表达miR-18a调控ATM基因的表达对体外结肠癌细胞增殖及迁移能力的影响。结果软件预测发现miR-18a的其中一个靶基因是ATM。通过瞬时转染,过表达内源性miR-18a,可降低HCT116细胞内靶基因ATM蛋白的表达水平。转染miR-18amimics后能够下调HCT116细胞的增殖活力,同时显著降低HCT116细胞的克隆形成能力、横向迁移能力及纵向侵袭能力,以上各项改变均与miR-18a过表达有关。结论证实了miR-18a通过负向调控ATM的表达,抑制结肠癌细胞HCT116的增殖和迁移能力。

关键词： miR-18a ATM 增殖迁移结肠癌细胞 HCT116

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P3肽抑制RAW264.7巨噬细胞泡沫化的分子机制

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中国药理学通报 2023年第9期39卷 1711-1717页

作者：李佳慧蒋宇恒王承瑾江林邓艳张礼林许庆忠李红梅贵州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室贵州贵阳550025

目的观察P3肽对RAW264.7巨噬细胞脂质沉积的影响,并探讨其作用机制。方法采用MTT法筛选P3肽及氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)的作用浓度,并用80 mg·L^(-1)的ox-LDL诱导RAW264.7细胞形成泡沫细胞;分别... 详细信息

目的观察P3肽对RAW264.7巨噬细胞脂质沉积的影响,并探讨其作用机制。方法采用MTT法筛选P3肽及氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)的作用浓度,并用80 mg·L^(-1)的ox-LDL诱导RAW264.7细胞形成泡沫细胞;分别采用油红O染色和总胆固醇含量测定试剂盒,检测细胞内脂质沉积及总胆固醇含量;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)及Western blot检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)、三磷酸腺苷结合盒转运体G1(ATP-binding cassette transporter G1,ABCG1)的mRNA和蛋白表达变化;分别应用肝X受体(liver X receptor,LXR)的激动剂T0901317、GW3965,以及LXR抑制剂GSK2033进一步验证P3肽调控ABCA1、ABCG1表达的作用机制。结果P3肽明显减少RAW264.7细胞内脂质沉积,降低细胞内总胆固醇含量,上调ABCA1、ABCG1mRNA和蛋白表达;P3肽上调ABCA1、ABCG1的作用与LXR激动剂T0901317、GW3965相似;加入抑制LXR基因转录的抑制剂GSK2033后,P3肽对ABCA1、ABCG1的基因表达无上调作用。结论P3肽可减少RAW264.7巨噬细胞内脂质积聚,抑制泡沫细胞的形成,其作用机制可能与激活LXR-ABCA1/ABCG1通路有关。

关键词： P3肽 RAW264.7细胞脂质沉积泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1 三磷酸腺苷结合盒转运体G1 肝X受体

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microRNA启动子区甲基化调控对人肺癌细胞A549增殖、迁移、侵袭的影响

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四川大学学报（医学版） 2019年第2期50卷 182-187页

作者：彭恒董婧颖赵亚楠吴文兵杨晓龙陈丹胡开锋陈利弘刘戟四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室成都610041

目的研究microRNA启动子区甲基化水平的变化对几种microRNAs(miRNA34a、miRNA34b、miRNA148a、miRNA203a)表达的影响,并进一步研究该甲基化调控对人肺癌细胞A549增殖、迁移以及侵袭能力的影响。方法不同浓度的去甲基化药物5-氮杂-2′-... 详细信息

目的研究microRNA启动子区甲基化水平的变化对几种microRNAs(miRNA34a、miRNA34b、miRNA148a、miRNA203a)表达的影响,并进一步研究该甲基化调控对人肺癌细胞A549增殖、迁移以及侵袭能力的影响。方法不同浓度的去甲基化药物5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理人肺癌细胞A549,分别作用24 h、48 h、72 h,采用CCK8法检测细胞增殖情况,计算增殖抑制率。20μmol/L 5-Aza-CdR处理A549细胞72 h,通过甲基化特异性PCR(MSP)检测A549细胞相关miRNAs启动子甲基化水平的变化;实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测A549细胞相关miRNAs表达水平的变化。20μmol/L 5-Aza-CdR处理A549细胞0 h、24 h、48 h,采用划痕实验检测细胞迁移能力(计算细胞在24 h和48 h的划痕愈合率);作用48 h,采用Transwell检测细胞侵袭能力。结果 CCK8结果显示,随着5-Aza-CdR的处理浓度升高、时间延长,A549细胞的增殖抑制率逐渐增加。经5-Aza-CdR去甲基化处理后,MSP结果表明,实验组相对于对照组甲基化引物扩增条带减弱,而非甲基化引物扩增条带增强;Real-time PCR结果显示,相关miRNAs表达水平升高(P<0.05)。由划痕实验和Transwell检测结果揭示,经5-Aza-CdR处理后,A549细胞的生长愈合能力降低(P<0.05),并且侵袭到Transwell小室滤膜下表面的细胞数亦减少(P<0.05)。结论人肺癌细胞A549经5-Aza-CdR去甲基化处理后,miRNAs表达水平升高,进一步抑制肺癌细胞的增殖、迁移以及侵袭能力。

关键词：肺癌A549细胞株 microRNA 甲基化增殖迁移侵袭

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海洛因对C6细胞增殖细胞核抗原基因表达的影响

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吉林大学学报（医学版） 2008年第6期34卷 949-951页

作者：迟秀梅张纪周阚慕洁洪敏吉林大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室吉林长春130021

目的:检测海洛因对大鼠神经胶质瘤C6细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)基因表达的影响,为探索海洛因成瘾的分子生物学机制提供依据。方法:大鼠神经胶质瘤C6细胞加入浓度为0～100mg·L-1的海洛因进行细胞培养,24h后用MTT法检测海洛因对C6... 详细信息

目的:检测海洛因对大鼠神经胶质瘤C6细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)基因表达的影响,为探索海洛因成瘾的分子生物学机制提供依据。方法:大鼠神经胶质瘤C6细胞加入浓度为0～100mg·L-1的海洛因进行细胞培养,24h后用MTT法检测海洛因对C6细胞存活率的影响。RT-PCR法检测海洛因作用下C6细胞PCNA mRNA的表达。结果:MTT结果显示海洛因浓度为10、20和100mg·L-1时C6细胞存活率分别为90.62%、80.97%和62.73%,与对照组比较明显下降(P<0.05)。在转录物水平,浓度为20mg·L-1的海洛因作用于C6细胞48h时,PCNA基因的转录产物PCNA mRNA明显减少,与对照组比值为0.297(P<0.01)。结论:海洛因浓度为20mg·L-1时对C6细胞的增殖抑制作用接近30%,可能与海洛因成瘾形成有关。

关键词：海洛因神经胶质瘤细胞增殖细胞核抗原基因表达

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肌肽对糖尿病肾病大鼠肾组织AKT/mTOR通路及自噬的影响

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南方医科大学学报 2023年第11期43卷 1965-1970页

作者：任毅卢金莹于露李宗泽王高杨菁锦州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室辽宁锦州121001

目的探究肌肽对糖尿病肾脏病变的保护作用及机制。方法将70只大鼠随机分成对照组(CON组,n=14)和高糖高脂组(n=56)。CON组普通饲料喂养,高糖高脂组采用高糖高脂喂养,并结合腹腔注射链脲佐菌素建立损伤模型,将制备损伤模型成功的大鼠随机... 详细信息

目的探究肌肽对糖尿病肾脏病变的保护作用及机制。方法将70只大鼠随机分成对照组(CON组,n=14)和高糖高脂组(n=56)。CON组普通饲料喂养,高糖高脂组采用高糖高脂喂养,并结合腹腔注射链脲佐菌素建立损伤模型,将制备损伤模型成功的大鼠随机分为糖尿病组(DM组,n=12)及肌肽低(Car-L,n=13)、中(Car-M,n=13)、高剂量组(Car-H,n=13),分别按照0、100、300和900 mg/(kg·d)肌肽灌胃。测量大鼠体质量及血糖,实验结束时收集大鼠24 h尿液、血清及肾脏,分别测量尿量、尿蛋白含量、血肌酐(Scr)、肾脏质量及HE染色,TBA法检测肾脏组织丙二醛(MDA)含量、NBT法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、Western blot法检测肾脏组织中蛋白激酶B(AKT)、p-AKT、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p-mTOR、微管相关轻链蛋白1轻链3(LC3)、选择性自噬接头蛋白(p62)的表达。结果与CON组相比,DM组大鼠出现毛色暗淡、毛发潮湿等现象;体质量下降,血糖、尿蛋白含量、24h尿量、Scr、肾脏质量均上升;肾小球肿胀变形,肾小管狭窄;SOD活性下降、MDA含量上升;肾脏组织中p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR比值降低,LC3II/I比值和p62蛋白表达增高(P<0.01)。与DM组相比,肌肽各组的大鼠毛发恢复光泽、体质量回升,血糖、尿蛋白含量、24 h尿量、Scr、肾脏质量有所下降;肾小球肿胀变形、肾小管狭窄程度有所缓解;SOD活性上升、MDA含量下降(P<0.01);肾脏组织中p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR比值升高、LC3 II/I比值降低、p62蛋白表达降低(P<0.01)。结论肌肽对糖尿病大鼠肾脏病变具有保护作用,其保护作用与肌肽抑制氧化应激,激活AKT/mTOR通路,进而恢复自噬功能有关。

关键词：肌肽糖尿病肾病自噬蛋白激酶B mTOR

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柚皮素促进Nrf2/Ⅱ相解毒酶活性并降低血管炎症反应

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中国药理学通报 2021年第7期37卷 1002-1007页

作者：董豆豆张芸何慧雷霆雯欧海龙贵州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室贵州贵阳550025

目的柚皮素对核因子红细胞2相关因子2(Nrf2)/Ⅱ相解毒酶活性的作用及其对血管炎症反应影响的研究。方法Western blot、免疫荧光、逆转录-qPCR检测蛋白的表达。Ⅱ相酶活性检测通过相关试剂盒进行。利用免疫共沉淀技术分析Nrf2与Kelch样... 详细信息

目的柚皮素对核因子红细胞2相关因子2(Nrf2)/Ⅱ相解毒酶活性的作用及其对血管炎症反应影响的研究。方法Western blot、免疫荧光、逆转录-qPCR检测蛋白的表达。Ⅱ相酶活性检测通过相关试剂盒进行。利用免疫共沉淀技术分析Nrf2与Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap-1)的相互作用。结果柚皮素促进RAW264.7细胞中Nrf2与Keap-1的解离和核内的聚集,并提高Ⅱ相解毒酶的表达,包括NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO-1)、谷胱苷肽S-转移酶(GST)和谷胺酸半胱氨酸连接酶(GCL)。同时,柚皮素抑制细胞炎症因子的产生;而Nrf2抑制剂ML385使NQO-1、GST和GCL表达降低、炎症因子的含量提高。另外,检测还发现柚皮素同样通过Nrf2的作用,提高动脉粥样硬化模型小鼠肝脏NQO-1、GST和GCL的表达以及酶的活性,降低主动脉血管的炎症反应。结论柚皮素激活Nrf2,促进相关的Ⅱ相解毒酶活性,从而抑制血管炎症。

关键词：柚皮素 Ⅱ相解毒酶 Nrf2 血管炎症 NAD(P)H醌氧化还原酶动脉粥样硬化

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黄蘑多糖Fb对小鼠免疫功能的调节作用

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吉林大学学报（医学版） 2005年第5期31卷 692-695页

作者：马岩马颖哲张家颖李晓梅吉林大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室吉林长春130021 吉林大学基础医学院生物化学与分子生物学实验中心吉林长春130021

目的:研究黄蘑多糖Fb(polysaccharid Fb from Huangmo)对小鼠免疫功能的调节作用。方法:健康成年小鼠40只,随机分为对照组、环磷酰胺(CTX)免疫抑制组、黄蘑碱溶性多糖活性组分(Fb)正常小鼠给药组和Fb环磷酰胺伍用(M)给药组,采用NK细胞... 详细信息

目的:研究黄蘑多糖Fb(polysaccharid Fb from Huangmo)对小鼠免疫功能的调节作用。方法:健康成年小鼠40只,随机分为对照组、环磷酰胺(CTX)免疫抑制组、黄蘑碱溶性多糖活性组分(Fb)正常小鼠给药组和Fb环磷酰胺伍用(M)给药组,采用NK细胞介导的细胞毒试验测定自然杀伤细胞(NK)的活性,淋巴细胞转化试验测定T淋巴细胞增殖功能,鼠脾T淋巴母细胞增殖分析法测定白细胞介素2(IL-2)的活性,观察Fb对各组小鼠免疫指标的影响。同时通过明胶酶谱分析检测脾脏基质金属蛋白酶(MMPs)的表达。结果:黄蘑多糖Fb能提高免疫抑制小鼠的NK细胞活性,T淋巴细胞转化率(LTT)和IL-2的活性(P<0.05),对正常小鼠LTT有显著促进作用(P<0.01)。正常给药组和伍用组主要免疫器官脾脏和胸腺重量高于免疫抑制组,且小鼠体重增长也明显高于免疫抑制组(P<0.01);免疫抑制组小鼠脾脏MMP-2活性下降(P<0.05),MMP-9亦呈降低趋势(P>0.05),Fb组和M组MMP-9活性明显升高(P<0.01)。结论:黄蘑多糖Fb能提高免疫抑制小鼠免疫系统的活性并有可能保护和促进其免疫系统的修复和增生,显著提高正常小鼠T淋巴细胞转化率,其他免疫指标亦显示轻度上调作用。

关键词：担子菌纲多糖类/药理学环磷酰胺免疫天然明胶酶A 明胶酶B

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基于双相动力学分析靶向药物联合应用对肝癌细胞SNU-387增殖的影响及其作用机制

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中国生物制品学杂志 2021年第10期34卷 1184-1190页

作者：刘畅裴晋红穆秀丽于保锋长治医学院基础部生物化学与分子生物学教研室山西长治046000 山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室山西太原030001

目的基于双相动力学分析靶向药物联合应用对肝癌细胞SNU-387增殖的影响,并探讨其作用机制。方法 MTT法检测肝癌细胞SNU-387对11种酪氨酸激酶抑制剂(AZD6244、AZD6482、BGJ-398、BMS-754807、bosutinib、crizotinib、dasatinib、gefitinib、imatinib、sunitinib、HG6-64-1)的敏感性;分别采用单靶点动力学公式和双相动力学公式分析肝癌细胞SNU-387与BMS-754807、dasatinib和HG6-64-1的相互作用,计算拟合曲线的残差平方和(the sums of squared residues,SSR);Western blot法检测BMS-754807、dasatinib和HG6-64-1对SNU-387细胞关键信号通路的影响;MTT法检测BMS-754807、dasatinib和HG6-64-1联合应用对SNU-387细胞增殖的影响,计算减量指数(dose reduction index,DRI)。结果 SNU-387细胞对BMS-754807、HG6-64-1及1 μmol/L的dasatinib比较敏感。与单靶点动力学公式比较,双相动力学公式可更好地分析肝癌细胞SNU-387与酪氨酸激酶抑制剂的相互作用。BMS-754807、dasatinib和HG6-64-1联合应用时F1相靶点不重合,对SNU-387细胞增殖具有显著协同抑制作用。结论 BMS-754807、dasatinib和HG6-64-1通过同时抑制不同靶点协同抑制肝癌细胞SNU-387的增殖,三者联合应用有望成为一种治疗肝癌的潜在药物组合。

关键词：双相动力学分析肝癌细胞蛋白激酶抑制剂联合靶向治疗减量指数

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腺病毒穿梭载体介导RNA干扰对激素诱导兔骨髓间充质干细胞成脂分化的作用

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中华实验外科杂志 2013年第7期30卷 1343-1346页

作者：李月白刘鸣李劲峰李洁宋石赵国强王义生郑州大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室 450001

目的观察腺病毒穿梭载体介导RNA干扰对激素诱导骨髓间充质干细胞（BMSCs）成脂分化的影响。方法选取新西兰兔制备BMSCs并随机分为6组，RNA干扰1组、2组和3组（s1、s2和s3）；无关序列组（Con）；模型组（M）；正常对照组（N）。加入激... 详细信息

目的观察腺病毒穿梭载体介导RNA干扰对激素诱导骨髓间充质干细胞（BMSCs）成脂分化的影响。方法选取新西兰兔制备BMSCs并随机分为6组，RNA干扰1组、2组和3组（s1、s2和s3）；无关序列组（Con）；模型组（M）；正常对照组（N）。加入激素终质量浓度为1×10-7mol／L地塞米松。将重组腺病毒穿梭载体转染细胞，采用TaqMan逆转录一聚合酶链反应（***）和Westernblot方法分别检测各组BMSCs内过氧化物酶体增殖子活化受体γ（PPARγ）mRNA及其蛋白表达，测定细胞甘油三酯含量，用苏丹Ⅲ染色细胞并计数脂肪细胞。结果处理细胞7d时，s1、s2、s3、Con、M、N组中，PPARs,mRNA相对表达值分别为0．406±0．012、0．401±0．009、0．410±0．042、0．621±0．045、0．628±0．008、0．399±0．014，PPAR＇yWesternblot灰度扫描值分别为0．246±0．027、0．235±0．015、0．257±0．025、0．800±0．017、0．793±0．019、0．244±0．010。S1、S2、S3、N组中PPARγ mRNA及其蛋白表达均明显低于M、Con组，差异均有统计学意义（P〈0．05），S1、s2、s3组和N组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。s1、s2、s3、N组中脂肪细胞计数、甘油三酯含量均明显低于M、Con组，差异均有统计学意义（P〈0．05），s1、s2、S3组和N组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论靶向PPARγ基因的腺病毒穿梭载体介导RNA干扰能够有效地抑制激素诱导的BMSCs成脂分化。

关键词： RNA干扰腺病毒穿梭载体激素过氧化物酶体增殖子活化受体-γ 成脂分化

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淫羊藿苷促进MC3T3-E1成骨分化通过Hedgehog信号通路

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中国药理学通报 2020年第5期36卷 616-620页

作者：辛红美许洁汪长东重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016

目的研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对MC3T3-E1前成骨细胞系增殖和分化的影响。方法CCK-8检测MC3T3-E1细胞增殖活性;茜素红染色(AR-S)检测成骨分化和钙结节的形成;Western blot检测osteocalcin、ALP、Shh蛋白表达;测定ALP活性。结果CCK-8结... 详细信息

目的研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对MC3T3-E1前成骨细胞系增殖和分化的影响。方法CCK-8检测MC3T3-E1细胞增殖活性;茜素红染色(AR-S)检测成骨分化和钙结节的形成;Western blot检测osteocalcin、ALP、Shh蛋白表达;测定ALP活性。结果CCK-8结果显示,ICA(5~40μmol·L^-1)组与对照组相比,显著促进MC3T3-E1细胞增殖;ICA组与对照组相比,ALP活性和蛋白表达量明显升高,且矿化沉积增多;ICA+CYC组与ICA组相比,ALP活性和Shh蛋白表达量明显下降,且茜素红染色定量明显降低。结论ICA能够通过Hedgehog信号通路促进成骨细胞增殖和分化。

关键词：淫羊藿苷成骨 Hedgehog信号通路骨钙素碱性磷酸酶细胞增殖细胞分化

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