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华东六省一市生物化学与分子生物学会2010年学术交流会

作者：龚慧万福生许宝华谢宪兵郑双艳南昌大学医学院生化与分子生物学教研室南昌大学实验动物科学部

目的探讨牛磺酸(Tau)对大鼠急性肾缺血再灌注损伤(RIRI)的保护作用及其具体作用机制。方法以SD大鼠为研究对象,动物随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注(I/R)组和I/R+Tau组。夹闭双侧肾蒂45min再灌注24h制备急性RIRI动物模型。I/R+Tau...

目的探讨牛磺酸(Tau)对大鼠急性肾缺血再灌注损伤(RIRI)的保护作用及其具体作用机制。方法以SD大鼠为研究对象,动物随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注(I/R)组和I/R+Tau组。夹闭双侧肾蒂45min再灌注24h制备急性RIRI动物模型。I/R+Tau组:在手术前3h按400mg/kg腹腔注射Tau液,余操作同I/R组。检测血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr);电镜观察肾小管上皮细胞超微结构改变;HE染色观察肾小管组织学变化;RT-PCR检测GRP78、

关键词：

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川芎嗪对烧伤大鼠心肌线粒体成份和酶活性保护作用研究

川芎嗪对烧伤大鼠心肌线粒体成份和酶活性保护作用研究

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华东六省一市生物化学与分子生物学会2010年学术交流会

作者：涂硕万慧芳余乐涵李华李国辉万福生南昌大学医学院生化与分子生物学教研室南昌大学医学院实验教学部南昌大学第一附属医院烧伤科南昌大学实验动物科学部

目的观察川芎嗪（TMP）对大鼠烧伤后心肌线粒体成份和酶活性变化的影响。方法实验分对照组、30%Ⅲ度烫伤组（烧伤组）和川芎嗪治疗组（伤后即刻腹腔注射川芎嗪注射液,20mg/kg体重）。后两组均于伤后1、3、6、12、24和48h检测心肌线粒体... 详细信息

目的观察川芎嗪（TMP）对大鼠烧伤后心肌线粒体成份和酶活性变化的影响。方法实验分对照组、30%Ⅲ度烫伤组（烧伤组）和川芎嗪治疗组（伤后即刻腹腔注射川芎嗪注射液,20mg/kg体重）。后两组均于伤后1、3、6、12、24和48h检测心肌线粒体琥珀酸脱氢酶（SDH）、细胞色素氧化酶（CCO）、SOD、Ca-ATP酶活性,细胞色素C（Cytc）、细胞色素aa3（cytaa3）、MDA的含量及胞浆和线粒体中Ca浓度。对照组为37℃假烫伤,1h后检测上述各项指标。

关键词：心肌线粒体大鼠心肌川芎嗪酶活性

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金边瑞香浸膏体内外抗肿瘤作用

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中国新药杂志 2008年第23期17卷 2019-2021+2026页

作者：徐静傅颖媛黄彬红曾小平况南珍周智兴南昌大学医学院免疫学教研室赣南医学院生化与分子生物学教研室

目的:探讨金边瑞香浸膏的体内外抗肿瘤作用。方法:采用流式细胞术观察不同浓度金边瑞香浸膏对SMMC7721细胞周期的影响。采用MTT法检测不同浓度金边瑞香浸膏对SMMC7721,NKM45,A549和S180肿瘤细胞增殖的影响。利用小鼠皮下移植性肿瘤模型... 详细信息

目的:探讨金边瑞香浸膏的体内外抗肿瘤作用。方法:采用流式细胞术观察不同浓度金边瑞香浸膏对SMMC7721细胞周期的影响。采用MTT法检测不同浓度金边瑞香浸膏对SMMC7721,NKM45,A549和S180肿瘤细胞增殖的影响。利用小鼠皮下移植性肿瘤模型观察不同浓度金边瑞香浸膏的体内抗肿瘤作用。结果:金边瑞香浸膏可使SMMC7721 G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,以0.5 ***-1剂量作用最明显,G0/G1期细胞达80.64%。金边瑞香浸膏浓度在0.031 25~1.0 ***-1范围内对体外培养的SMMC7721,NKM45,A549和S180肿瘤细胞增殖均有一定程度的抑制作用,0.5 ***-1浓度时对此4种肿瘤细胞的增殖抑制率分别为65.82%,60.38%,42.36%和49.94%。金边瑞香浸膏对荷S180小鼠的肿瘤生长有抑制作用,20和40 ***-1.d-1金边瑞香剂量组抑瘤率分别为43.57%和28.13%。结论:金边瑞香浸膏在体内外具有抗肿瘤作用。

关键词：金边瑞香抗肿瘤作用细胞周期 MTT法

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牛磺酸对烧伤大鼠心肌线粒体成份和酶活性的保护作用

牛磺酸对烧伤大鼠心肌线粒体成份和酶活性的保护作用

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华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会

作者：万福生章洁李国辉余乐涵杨晓红南昌大学医学院生化与分子生物学教研室南昌大学第一附属医院烧伤中心

目的了解牛磺酸对大鼠烧伤后心肌线粒体成分和酶活性变化的影响。方法将130只大鼠分为对照组（10只）、烧伤组（60只）及牛磺酸治疗组（60只）。烧伤组和牛磺酸治疗组大鼠背部脱毛后造成30%TBSA的Ⅲ°烫伤。烧伤组伤后腹腔注射等渗... 详细信息

目的了解牛磺酸对大鼠烧伤后心肌线粒体成分和酶活性变化的影响。方法将130只大鼠分为对照组（10只）、烧伤组（60只）及牛磺酸治疗组（60只）。烧伤组和牛磺酸治疗组大鼠背部脱毛后造成30%TBSA的Ⅲ°烫伤。烧伤组伤后腹腔注射等渗盐水(4 ***.1%TBSA);牛磺酸治疗组伤后腹腔注射体积分数2%牛磺酸液（200mg/kg体质量）。两组均在伤后1、3、6、12、24、48 h处死大鼠取心肌组织检测心肌线粒体琥珀酸脱氢酶（SDH）、细胞色素氧化酶（CCO）、超氧化物歧化酶（SOD）、Ca-腺苷三磷酸酶（ATPase）活性和细胞色素C、细胞色素aa、丙二醛（MDA）、细胞质及线粒体内Ca含量。对照组仅模拟烫伤后不补液,1h后处死大鼠取心肌组织检测以上指标。结果烧伤组,伤后1 h CCO活性即开始下降,伤后6、12 h下降最明显,而SDH活性在伤后6 h下降最明显,且各时相点均低于对照组;牛磺酸治疗组CCO和SDH下降不明显,伤后3、6、12 h CCO活性与烧伤组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。伤后3、6、12、及24 h烧伤组心肌线粒体细胞色素C和细胞色素aa均显著降低,而牛磺酸组虽然有所下降,但该4个时相点的值均高于烧伤组（P<0.05）。烧伤组SOD活性在伤后3、6、12 h均显著性下降,Ca-ATPase活性在伤后3、6、12及24 h均有不同程度下降;而牛磺酸治疗组虽然有所下降,但其值均高于烧伤组（P<0.05）。伤后3～48 h烧伤组、牛磺酸治疗组MDA值均高于对照组（P<0.05）,但牛磺酸治疗组低于烧伤组（P<0.05）。伤后1 h烧伤组大鼠心肌线粒体中Ca即开始升高为（13.7±1.5）,伤后3、6、12、24h分别为（24.8±2.6）、（29.7±3.1）、（16.3±1.9）及（13.5±1.7）,均高于对照组[（10.7±1.6）,P<0.05]:心肌细胞质中Ca在伤后3、6、12、24 h也明显高于对照组（P<0.05）。伤后3、6、12及24 h牛磺酸治疗组大鼠心肌线粒体中Ca浓度分别为（16.8±2.8）、（18.7±1.9）、（10.5±1.8）及（13.3±1.7）,均低于烧伤组（P<0.05）。结论牛磺酸对烧伤大鼠心肌线粒体成分和酶活性破坏具有保护作用,其机制与提高线粒体清除氧自由基的能力和减轻Ca超载有关。

关键词：烧伤心肌线粒体,心脏牛磺酸

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人骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞的诱导条件

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第20期11卷 3920-3923页

作者：万福生周红辉刘卓琦张少容南昌大学医学院生化与分子生物学教研室南昌大学第二附属医院耳鼻喉科江西省南昌市330006

目的:分析人骨髓间充质干细胞分离、纯化、体外扩增及其向软骨细胞分化的条件,为人骨髓间充质干细胞用于修复损伤的软骨组织提供依据。方法:实验于2005-03/2006-04在南昌大学医学院生化与分子生物学教研室完成。实验材料:无菌条件下采... 详细信息

目的:分析人骨髓间充质干细胞分离、纯化、体外扩增及其向软骨细胞分化的条件,为人骨髓间充质干细胞用于修复损伤的软骨组织提供依据。方法:实验于2005-03/2006-04在南昌大学医学院生化与分子生物学教研室完成。实验材料:无菌条件下采集无血液系统疾病和家族遗传史的28～65岁成人骨髓8份,进行骨髓间充质干细胞分离与培养,骨髓采集经患者及医院同意,并签署知情同意书。实验方法:取第3代对数生长期骨髓间充质干细胞,实验组使用特定的、内含2mg/L胰岛素、3mg/L转铁蛋白、1mmol/L丙酮酸、100nmol/L地塞米松和10μg/L转化生长因子β1的低糖DMEM培养基诱导人骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化,对照组细胞以低糖DMEM基础培养液培养。倒置显微镜下观察细胞形态,诱导7,14d采用半定量RT-PCR方法检测细胞软骨特异性Ⅱ型胶原表达,蕃红花O-亮绿染色分析蛋白多糖粘多糖含量,观察细胞分化情况。结果:①光镜观察成人骨髓间充质干细胞的形态变化:培养7d细胞集落明显,集落中央为数个至数十个圆形细胞,周围变形细胞围绕中央细胞呈放射状生长。培养14d细胞呈平行状或旋涡状排布,细胞排列紧密。②骨髓间充质干细胞向软骨细胞的诱导分化:实验组细胞生长较对照组慢,培养7d后细胞大多呈椭圆形或三角形,部分细胞伸出似触角突起,培养14d细胞变形较明显,排列较为紧密,细胞突起多见,突起间相连,呈较明显软骨细胞形态特征。③骨髓间充质干细胞的番红花-O染色:实验组骨髓间充质干细胞蕃红花O-亮绿呈深染色,对照组人骨髓间充质干细胞呈阴性染色。④RT-PCR检测软骨特异性的Ⅱ型胶原COL2A1 mRNA表达:实验组诱导培养7,14d人骨髓间充质干细胞有Ⅱ型胶原COL2A1 mRNA表达,400～500bp条带间可见明显的荧光条带,诱导培养14d时表达更明显。对照组未见Ⅱ型胶原COL2A1 mRNA表达。结论:采用直接贴壁培养法成功分离和培养出人骨髓间充质干细胞,并将人骨髓间充质干细胞诱导分化成软骨细胞,该软骨细胞具有软骨细胞的形态、生化特征。

关键词：人骨髓细胞间充质干细胞软骨细胞诱导分化

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川芎嗪对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

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江西医学院学报 2007年第6期47卷 20-22页

作者：章洁刘丽乔余乐涵赵小曼李华万福生南昌大学医学院生化与分子生物学教研室南昌330006 南昌大学实验动物科学部南昌330006

目的观察川芎嗪对缺血再灌注损伤时心肌细胞凋亡的保护及初步机制。方法采用在体结扎大鼠冠状动脉左前降支建立心肌缺血再灌注模型。以TUNEL法检测心肌凋亡细胞,免疫组化法分析心肌细胞Fas/FasL、Caspase-8及Caspase-3蛋白表达变化。荧... 详细信息

目的观察川芎嗪对缺血再灌注损伤时心肌细胞凋亡的保护及初步机制。方法采用在体结扎大鼠冠状动脉左前降支建立心肌缺血再灌注模型。以TUNEL法检测心肌凋亡细胞,免疫组化法分析心肌细胞Fas/FasL、Caspase-8及Caspase-3蛋白表达变化。荧光分析法测定Caspase-3活性。结果凋亡组(心肌缺血1h,再灌注24h)心肌细胞凋亡指数为16.3±4.52,较对照组(0.43±0.04)有显著性升高,Fas/FasL及Caspase-3蛋白水平也均显著高于正常对照组(P<0.05)。川芎嗪保护组的心肌细胞凋亡指数、Fas/FasL、Caspase-3蛋白水平及Caspase-3活性均显著性低于凋亡组。结论川芎嗪对缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡有较好的保护作用,其机制可能与降低Fas死亡受体通路中相关蛋白酶水平及其活性有关。

关键词：川芎嗪细胞凋亡基因表达信号转导心肌

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金边瑞香的抗肿瘤作用研究

金边瑞香的抗肿瘤作用研究

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第三届全国中医药免疫学术研讨会

作者：徐静傅颖媛黄彬红赣南医学院生化与分子生物学教研室南昌大学医学院免疫学教研室赣南医学院生化与分子生物学教研室

目的:研究金边瑞香浸膏在体内外的抗肿瘤作用。方法:1、金边瑞香浸膏体外抑瘤实验:(1)采用MTT法检测不同浓度金边瑞香浸膏对SMMC7721、 NKM45、A549、S180肿瘤细胞株增殖作用的影响;(2)光镜下观察不同浓度金边瑞香浸膏对SMMC7721 细胞... 详细信息

目的:研究金边瑞香浸膏在体内外的抗肿瘤作用。方法:1、金边瑞香浸膏体外抑瘤实验:(1)采用MTT法检测不同浓度金边瑞香浸膏对SMMC7721、 NKM45、A549、S180肿瘤细胞株增殖作用的影响;(2)光镜下观察不同浓度金边瑞香浸膏对SMMC7721 细胞形态的影响;(3)采用流式细胞术观察不同浓度金边瑞香浸膏对SMMC7721细胞增殖周期的影响。2、金边瑞香浸膏对S180荷瘤小鼠体内抑瘤实验及免疫功能影响:小鼠右腋部皮下接种S180 肿瘤,单纯荷瘤模型组给予生理盐水,实验组给予不同浓度金边瑞香浸膏,每天灌胃给药1次,连续给药10天,并设环磷酰胺阳性对照组,未荷瘤小鼠为正常对照组,测定以下指标:(1)解剖分离皮下瘤块,计算各组平均瘤重和抑瘤率;(2)MTT法检测ConA诱导的小鼠T淋巴细胞增殖的功能;(3)鸡红细胞吞噬试验检测巨噬细胞吞噬功能。结果:1、金边瑞香浸膏浓度为0．03125g／ml～lg／ml范围内对体外培养的SMMC7721、NKM45、 A549、S180肿瘤细胞生长有抑制作用,并在0．03125g／ml～0．5g／ml范围内成量效关系,0．5g／ml 金边瑞香浸膏对SMMC7721、NKM45、A549、S180肿瘤细胞生长抑制率分别达到65．82％、60．38％、 42．36％、49．94％。2、金边瑞香浸膏能使SMMC-7721细胞增殖周期G0-G1细胞增多,S期细胞减少, 0．5g／ml剂量组G0-G1期达到80．64％。3、金边瑞香浸膏各剂最组S180荷瘤小鼠的肿瘤重量与生理盐水对照组相比均有降低趋势,其中8g／Kg／d、40g／kg／d金边瑞香组与生理盐水组相比差异有显著性 (P<0．01、P<0．05),抑瘤率为43．57％、28．13％。4、金边瑞香各剂量组与生理盐水组S180荷瘤小鼠相比,ConA对小鼠脾脏淋巴细胞的刺激指数均有增高,其中40g／Kg·d和8g／Kg·d金边瑞香组增高明显(P<0．01)。生理盐水组和环磷酰胺组与正常对照组比较,ConA诱导的T淋巴细胞增殖的刺激指数均降低(P<0．01)。5、金边瑞香各剂量组与生理盐水对照组S180荷瘤小鼠相比,小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数均有增高,其中40g／Kg·d和8g／Kg·d金边瑞香组增高明显(P<0．05),尤其是8g／Kg·d金边瑞香剂量组,其吞噬率要高于40g／Kg·d金边瑞香剂量组(P<0．05)。生理盐水组和环磷酰胺组与正常对照组相比,小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数均降低(P<0．01)。结论:1、金边瑞香浓度为0．03125g／ml～lg／ml范围内对体外培养的肿瘤细胞生长有抑制作用,并在0．03125g／ml～0．5g／ml范围内与剂量成正相关。2、金边瑞香能使体外培养的SMCC7721 细胞周期阻滞在G0-G1期。3、金边瑞香8g／Kg／d～40g／kg／d对小鼠移植性肿瘤S180有明显的抑制作用,以8g／Kg／d作用明显。4、金边瑞香在8g／Kg／d～40g／kg／d剂量范围内能明显增强荷S180瘤小鼠的非特异性免疫、细胞免疫功能,以8g／Kg／d作用明显。

关键词：金边瑞香肿瘤细胞免疫功能抗肿瘤作用

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青风藤碱对海人酸所致神经毒性的抑制效应

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江西医学院学报 2006年第4期46卷 166-166,168页

作者：晏浩韩喻美南昌大学研究生院医学部南昌大学医学院生化-分子生物学教研室南昌330006

目的青风藤碱对海人酸所致神经毒性的抑制效应,用谷氨酸的受体激动剂海人酸(KA)引起的神经损伤为动物模型探讨青风滕碱的抑制效应。方法36只大白鼠随机分为6组:海人酸组,海人酸+青风滕碱20μg/μL组,海人酸+青风滕碱4μg/μL组,海人酸+... 详细信息

目的青风藤碱对海人酸所致神经毒性的抑制效应,用谷氨酸的受体激动剂海人酸(KA)引起的神经损伤为动物模型探讨青风滕碱的抑制效应。方法36只大白鼠随机分为6组:海人酸组,海人酸+青风滕碱20μg/μL组,海人酸+青风滕碱4μg/μL组,海人酸+青风滕碱0.8μg/μL组,海人酸+0.9%氯化钠注射液组和正常对照组。向前5组大白鼠深部前梨状皮层定位注射海人酸(KA)引起的神经损伤模型,施加药物,经两周的恢复后,采用从心脏上行灌注法,原位固定脑组织,冰冻切片、染色、进行病理切片,观察青风滕碱对注射区神经元的保护作用。结果Ⅰ组可使还原型辅酶Ⅱ-硫辛酰胺脱氢酶显阳性的神经元显著减少;而2、3、4组则可产生明显的神经保护作用。结论青风滕碱对海人酸所致神经毒性有抑制效应。

关键词：青风藤碱海人酸神经毒性

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RNA干扰单独及联合p53基因对肺癌细胞增殖的抑制作用

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江西医学院学报 2006年第6期46卷 1-3,8页

作者：杨晓红万福生潘泽政余波贺慧为艾春红张晓春卢小澍南昌大学医学院生化与分子生物学教研室南昌大学第二附属医院肿瘤科江西省人民医院南昌330006 美国华盛顿大学医学院圣路易斯63108 九江学院医学院病免教研室江西九江332000

目的观察RNA干扰技术单独及联合p53基因对肺癌细胞增殖的影响。方法用阳离子脂质体Lipo-fectamine2000分5组介导RNA干扰质粒和p53基因单独或共转染到非小细胞肺腺癌细胞系A549细胞,观察转染后第1、3、5、7天该细胞的增殖活力,采用四甲... 详细信息

目的观察RNA干扰技术单独及联合p53基因对肺癌细胞增殖的影响。方法用阳离子脂质体Lipo-fectamine2000分5组介导RNA干扰质粒和p53基因单独或共转染到非小细胞肺腺癌细胞系A549细胞,观察转染后第1、3、5、7天该细胞的增殖活力,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)测定吸光度(A),以检测细胞增殖活力。结果各组A均值分别为:空白对照组:1.406,脂质体组:1.238,RNA干扰质粒组:0.168,p53组:0.22,干扰质粒+p53组:0.109,实验组与对照组比较差异显著(P<0.05),以共转染干扰质粒+p53组最强。结论RNA干扰技术可成为有效抑制非小细胞肺腺癌的治疗新方法,联合抑癌基因p53可增强其对肺癌细胞的抑制作用。

关键词： RNA干扰 p53基因肺肿瘤基因治疗

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Fas系统参与介导烧伤后心肌细胞凋亡及牛磺酸的影响

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江西医学院学报 2005年第5期45卷 4-7页

作者：万福生龚文华赵小曼余乐涵李华李国辉南昌大学医学院生化与分子生物学教研室江西南昌330006 南昌大学第一附属医院烧伤中心江西南昌330006

目的观察Fas系统在烧伤后心肌细胞凋亡中的作用及牛磺酸的影响。方法选健康Wistar大鼠,随机分成对照组(Sham)、烧伤组(造成40%TBSAⅢ度烧伤)和牛磺酸保护组(烫伤后即刻腹腔注射牛磺酸400 mg/kg)。用原位末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞,R... 详细信息

目的观察Fas系统在烧伤后心肌细胞凋亡中的作用及牛磺酸的影响。方法选健康Wistar大鼠,随机分成对照组(Sham)、烧伤组(造成40%TBSAⅢ度烧伤)和牛磺酸保护组(烫伤后即刻腹腔注射牛磺酸400 mg/kg)。用原位末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞,RT-PCR检测Fas mRNA表达,免疫组化检测Fas/FasL和Caspase-8/3蛋白表达和荧光法分析Caspase-3活性。结果烧伤组大鼠伤后6 h和24 h心肌细胞凋亡指数分别为8.96±2.10和18.67±2.48,较对照组(0.92±0.34)有显著性升高,Fas蛋白阳性表达指数分别为13.51±1.56和14.55±1.89,也显著性高于对照组(2.46±0.75);Caspase-3活性分别为1.38±0.16和1.96±0.71,较对照组(0.35±0.06)有显著性差异。烧伤组凋亡指数与Fas表达之间有良好的相关性(r=0.86)。牛磺酸保护组细胞凋亡指数为2.14±0.68,Fas蛋白表达为3.71±0.82,Fas mRNA表达为0.17±0.03,Caspase-3活性为0.88±0.16,较烧伤组均有显著性降低。结论Fas系统参与了介导烧伤后心肌细胞凋亡,牛磺酸对烧伤后心肌细胞Fas表达及其信号转导有较好的拮抗作用。

关键词： Fas 细胞凋亡心肌牛磺酸烧伤

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