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蛋白激酶C在脂多糖诱导内皮细胞β-1，4-半乳糖基转移酶-Ⅰ表达中的作用

中华微生物学和免疫学杂志 2009年第3期29卷 198-203页

作者：贲志云程纯孙晓雷钱佶肖锋张冬梅季玉红南通大学医学院免疫学与微生物学教研室 226001

目的研究蛋白激酶C（PKC）对脂多糖（LPS）诱导内皮细胞β-1，4-半乳糖基转移酶-Ⅰ（β-1，4-galactosyltransferase-Ⅰ，β-1，4-GaIT-Ⅰ）表达的调节作用，以及对内皮细胞骨架结构改变及其黏附能力的影响。方法分别用PKC激动剂或几种... 详细信息

目的研究蛋白激酶C（PKC）对脂多糖（LPS）诱导内皮细胞β-1，4-半乳糖基转移酶-Ⅰ（β-1，4-galactosyltransferase-Ⅰ，β-1，4-GaIT-Ⅰ）表达的调节作用，以及对内皮细胞骨架结构改变及其黏附能力的影响。方法分别用PKC激动剂或几种不同类型的PKC抑制剂预处理人脐静脉内皮细胞（HUVECs）30rain，LPS刺激HUVECs4h后，RT-PCR、Western blot方法检测β-1，4-GaIT-Ⅰ表达变化，细胞荧光染色观察β-1，4-GaIT-Ⅰ催化的糖链表达变化及细胞骨架结构的改变，通过内皮-单核细胞黏附试验观察HUVECs黏附能力的改变。结果儿种不同类型的PKC抑制剂均能不同程度地抑制LPS刺激HUVECs引起的β-1，4-GaIT-Ⅰ表达的上调，PKC激动剂能够使上调的β-1，4-GAIT-Ⅰ的表达进-步增加；在HUVECs中β-1，4-GaIT-Ⅰ与细胞骨架有共同定位，PKC抑制剂显著抑制LPS诱导的内皮细胞骨架蛋白的重构和β-1，4-GaIT-Ⅰ细胞内的再分布；PKC抑制剂显著抑制LPS诱导的内皮-单核细胞黏附能力的上调。结论PKC可能参与调节LPS诱导的HUVECs β-1，4-GaIT-Ⅰ的表达，可能多种类型的PKC参与了这一调节过程；PKC可能通过对β-1，4-GaIT-Ⅰ的调节进而影响炎症过程中内皮细胞骨架蛋白的重构及内皮细胞与单核细胞的黏附能力。

关键词： β-1 4-半乳糖基转移酶-Ⅰ 蛋白激酶C 内皮细胞脂多糖

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β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ在CD4~ +T_H细胞中的表达及对其黏附能力的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第10期27卷 871-877页

作者：韩毓汪晓莺季玉红沈爱国孙晓雷胡迎青周晓荣吴琼南通大学基础医学院微生物与免疫学教研室 226001

目的研究β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ(β-1,4-galactosyltransferaseⅠ,β-1,4-GalTⅠ)在CD4^+TH中的表达与定化以及β-1,4-GalTⅠ对CD4^+TH细胞黏附能力的影响。方法采用免疫磁珠阳性分选法分离纯化CD4^+TH细胞,通过RT-PCR、荧光免疫细胞... 详细信息

目的研究β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ(β-1,4-galactosyltransferaseⅠ,β-1,4-GalTⅠ)在CD4^+TH中的表达与定化以及β-1,4-GalTⅠ对CD4^+TH细胞黏附能力的影响。方法采用免疫磁珠阳性分选法分离纯化CD4^+TH细胞,通过RT-PCR、荧光免疫细胞化学法和激光共聚焦技术鉴定CD4^+ TH细胞中β-1,4-GalTⅠ的表达与定位;分别用rhIL-2、rhIL-12、rhIL-4等细胞因子组合诱导CD4^+TH细胞活化分化,通过半定量RT-PCR、FCM检测CD4^+TH细胞中β-1,4-GalTⅠ的表达变化,运用层黏连蛋白结合实验比较CD4^+TH细胞黏附能力的改变;用α-乳清蛋白干扰CD4^+TH细胞表面β-1,4-GalTⅠ的活性及底物特异性,用层黏连蛋白结合实验分析其对CD4^+TH细胞黏附能力的影响。结果CD4^+TH细胞表面和细胞浆内表达长型和短型β-1,4-GalTⅠ;rhIL-2活化的CD4^+TH细胞长型β-1,4-GalTⅠmRNA水平及细胞膜表面β-1,4-GalTⅠ表达水平、细胞黏附能力均高于未经活化的CD4^+TH细胞, rhIL-2^+rhIL-12诱导培养的CD4^+TH细胞增强更明显;CD4^+TH细胞长型β-1,4-GalTⅠmRNA水平及细胞膜丧面β-1,4-GalTⅠ表达水平均与CD4^+TH细胞黏附能力呈正相关;α-浮清蛋白干扰后CD4^+TH细胞黏附能力降低。结论β-1,4-GalTⅠ在CD4^+TH细胞中表达,且与细胞黏附能力密切相关,提示β-1,4-GalTⅠ可能在CD4^+TH细胞的黏附过程中发挥重要作用。

关键词： β-1,4-半乳糖基转移酶I CD4^+ 辅助性T细胞细胞黏附

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细胞表面β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ在免疫突触形成中的作用

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中国免疫学杂志 2011年第7期27卷 588-593页

作者：吴圆圆王滢薛琴张洁朱轶晴汪晓莺南通大学医学院微生物与免疫学教研室南通226001

目的:研究细胞表面β-1,4-半乳糖基转移酶-I(β-1,4-galactosyltransferase I,β-1,4-GalT-I)在免疫突触形成中的作用。方法:以抗CD3、CD28单克隆抗体活化Jurkat细胞,应用实时荧光定量PCR及流式细胞术检测分析β-1,4-GalT-I的表达变化,... 详细信息

目的:研究细胞表面β-1,4-半乳糖基转移酶-I(β-1,4-galactosyltransferase I,β-1,4-GalT-I)在免疫突触形成中的作用。方法:以抗CD3、CD28单克隆抗体活化Jurkat细胞,应用实时荧光定量PCR及流式细胞术检测分析β-1,4-GalT-I的表达变化,激光共聚焦显微镜观察β-1,4-GalT-I在Jurkat细胞活化前后的表达与定位;将Jurkat细胞与SEB负载的Raji细胞共培养以构建Jurkat-Raji细胞免疫突触,观察β-1,4-GalT-I在免疫突触中的定位。结果:β-1,4-GalT-I mRNA表达水平随着Jurkat细胞的活化逐渐增高,在细胞活化后36小时达到高峰;活化后细胞表面β-1,4-GalT-I分子的表达较静止状态高;共聚焦显微镜显示在活化的Jurkat细胞表面及Jurkat-Raji细胞免疫突触部位β-1,4-GalT-I表达信号增强且其分布发生重排和簇集,且与CD3分子共定位,与CD28分子部分共定位。结论:Jurkat细胞表面的β-1,4-GalT-I分子参与了免疫突触的形成。

关键词： β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ Jurkat细胞免疫突触

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β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ在树突状细胞中的表达及作用

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中国免疫学杂志 2008年第10期24卷 867-871页

作者：成翔汪晓莺季玉红韩毓吴琼南通大学医学院微生物与免疫学教研室南通226001

目的:观察β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ(β-1,4-galactosyltransferase-Ⅰ,β-1,4-GalT-Ⅰ)在人外周血来源的树突状细胞(Dendritic cells,DCs)中的表达与定位,研究其对DCs免疫功能的影响。方法:人外周血单核细胞经GM-CSF+IL-4+TNF-α诱导培养分化为DCs,采用RT-PCR、流式细胞术和激光共聚焦技术观察DCs中β-1,4-GalT-Ⅰ的表达与定位;通过细胞粘附试验分析β-1,4-GalT-Ⅰ表达与细胞粘附能力的关系。用α-乳清蛋白(α-lactalbumin,LA)作为细胞表面β-1,4-GalT-Ⅰ抑制剂,研究β-1,4-GalT-Ⅰ在DCs细胞粘附以及与CD4+Th细胞形成免疫突触过程中的作用。结果:在人外周血来源DCs细胞表面和细胞浆内可表达长型和短型β-1,4-GalT-Ⅰ;长型β-1,4-GalT-Ⅰ或细胞表面β-1,4-GalT-Ⅰ的表达水平与细胞粘附能力呈正相关;α-LA既可抑制DCs对层粘连蛋白的粘附,又可抑制DCs与CD4+Th形成免疫突触。结论:β-1,4-GalT-Ⅰ在DCs中表达,他们作为粘附分子参与细胞粘附和免疫突触形成。

关键词： β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ 树突状细胞粘附分子免疫突触

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丝裂原激活蛋白激酶在内毒素脂多糖诱导大鼠施万细胞一氧化氮合酶表达中的作用

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解剖学报 2007年第6期38卷 660-664页

作者：沈爱国王海波秦永伟程纯牛淑琼南通大学神经再生重点实验室南通大学医学院微生物和免疫学教研室南通226001

目的主要研究丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号途径在内毒素脂多糖(LPS)诱导大鼠施万细胞(Scs)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达和一氧化氮(NO)产生中的作用。方法先用3种MAPK的特异性抑制剂PD98059(ERK1/2)、SB202190(P38MAPK)和SP600125... 详细信息

目的主要研究丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号途径在内毒素脂多糖(LPS)诱导大鼠施万细胞(Scs)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达和一氧化氮(NO)产生中的作用。方法先用3种MAPK的特异性抑制剂PD98059(ERK1/2)、SB202190(P38MAPK)和SP600125(JNK)以不同浓度预处理细胞1h,再用LPS作用施万细胞4h后,用RT-PCR检测细胞中iNOS mRNA、IL-6mRNA和TNF-αmRNA的表达;Western blotting观察iNOS蛋白水平的表达变化;通过测定细胞培养液中亚硝酸盐含量来观察NO的水平。结果LPS可显著激活施万细胞中MAPK信号通路诱导iNOS表达。MAPK的抑制剂预处理细胞后,可显著抑制细胞iNOS mRNA和NO的合成及IL-6mRNA和TNF-αmRNA的表达。结论MAPK信号通路参与了LPS介导的大鼠施万细胞iNOS基因表达和NO产生,通过阻断细胞内信号转导通路来减少iNOS及其他细胞因子的产生,为抑制周围神经损伤后的炎症以及免疫反应发生提供了一条新思路。

关键词：丝裂原激活蛋白激酶内毒素脂多糖一氧化氮合酶施万细胞 RT-PCR Western blotting 大鼠

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一氧化氮合酶在坐骨神经夹伤后腓肠肌中的表达变化

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解剖学杂志 2007年第4期30卷 456-460,F0004页

作者：陈梦玲程纯严美娟高尚锋沈爱国南通大学江苏省神经再生重点实验室南通大学医学院微生物与免疫学教研室南通226001 南通大学医学院微生物与免疫学教研室

目的:探讨外周神经损伤后同侧腓肠肌中3种一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)的表达变化及定位。方法:采用H-E染色及Masson三色染色法分析大鼠坐骨神经夹伤后同侧腓肠肌的病理变化,NADPH-黄递酶组织化学研究其总NOS的改变,并利用W... 详细信息

目的:探讨外周神经损伤后同侧腓肠肌中3种一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)的表达变化及定位。方法:采用H-E染色及Masson三色染色法分析大鼠坐骨神经夹伤后同侧腓肠肌的病理变化,NADPH-黄递酶组织化学研究其总NOS的改变,并利用Western印迹法、免疫荧光双标法,对3种NOS表达变化及定位进行分析。结果:神经夹伤后相应腓肠肌发生了明显的病理变化且总NOS发生改变,3种NOS变化不尽相同,其表达高峰均约在4周左右。nNOS与神经丝标记物NF-200有共定位,iNOS、eNOS则分别在巨噬细胞、血管内皮细胞中有表达。结论:3种NOS在坐骨神经夹伤后相应腓肠肌中表达变化不同,可能对肌肉损伤及再生修复发挥不同作用。

关键词：坐骨神经创伤和损伤肌,骨骼一氧化氮合酶

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PKC在TNF-α诱导内皮细胞β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ表达中的作用

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第7期26卷 653-656页

作者：季玉红贲志云汪晓莺孙晓雷钱佶肖锋南通大学医学院免疫学与微生物学教研室

目的：研究蛋白激酶C（PKC）对肿瘤坏死因子-α（TNF—α）诱导内皮细胞β-1，4-半乳糖基转移酶-I（β-1，***—I）表达的调节作用，以及对内皮细胞骨架结构改变及其黏附能力的影响。方法：分别用PKC激动剂或几种不同类型的PKC抑制剂预... 详细信息

目的：研究蛋白激酶C（PKC）对肿瘤坏死因子-α（TNF—α）诱导内皮细胞β-1，4-半乳糖基转移酶-I（β-1，***—I）表达的调节作用，以及对内皮细胞骨架结构改变及其黏附能力的影响。方法：分别用PKC激动剂或几种不同类型的PKC抑制剂预处理人脐静脉内皮细胞（HUVECs），再用TNF一仅刺激HUVECs，应用RT—PCR、Western blot方法检测B．1，4-GaIT—I表达变化，应用细胞荧光染色观察B-1，4-GalT—I催化的糖链的表达变化及细胞骨架结构的改变，通过内皮-单核细胞黏附试验观察HUVECs黏附能力的改变。结果：几种不同类型的PKC抑制剂均能不同程度的抑制TNF-α刺激HUVECs引起的β-1，4-GaIT—I表达的上调，PKC激动剂能够使上调的β-1，4-GaIT—I的表达进一步增加；在HUVECs中β-1，4-GaIT—I与细胞骨架有共同定位，PKC抑制剂显著抑制TNF—α诱导的内皮细胞骨架蛋白的重构和β-1，4-GaIT—I细胞内的再分布；PKC抑制剂显著抑制TNF—α诱导的内皮一单核细胞黏附能力的上调。结论：PKC可能参与调节TNF—α诱导的HUVECsβ—1，4-GaIT—I的表达，并且可能多种类型的PKC参与了这一调节过程；PKC可能通过对β-1，4-GaIT—I的调节进而影响炎症过程中内皮细胞骨架蛋白的重构及内皮细胞与单核细胞的黏附能力。

关键词： β-1 4-半乳糖基转移酶-I 蛋白激酶C 内皮细胞 TNF-α

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ERK在TNF-α诱导内皮细胞β-1,4-半乳糖基转移酶-I表达中的作用

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免疫学杂志 2010年第11期26卷 930-933页

作者：贲志云汪晓莺钱佶肖锋季玉红南通大学医学院免疫学与微生物学教研室 226001

目的研究细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated protein kinase,ERK)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导内皮细胞β-1,4-半乳糖基转移酶-I(β-1,4-GalT-I)表达的调节作用。方法用不同浓度的TNF-α刺激人脐静脉内皮细胞(human ... 详细信息

目的研究细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated protein kinase,ERK)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导内皮细胞β-1,4-半乳糖基转移酶-I(β-1,4-GalT-I)表达的调节作用。方法用不同浓度的TNF-α刺激人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),并作用不同的时间,检测β-1,4-GalT-I表达变化;应用ERK通路抑制剂U0126预处理HUVECs,再用TNF-α刺激HUVECs,检测β-1,4-GalT-I的表达变化,并通过内皮-单核细胞黏附试验观察HU-VECs黏附能力的改变。结果 TNF-α诱导HUVECsβ-1,4-GalT-I表达增加,且具有剂量和时间依赖关系;U0126显著抑制TNF-α引起的HUVECsβ-1,4-GalT-I表达的上调及其黏附能力的上调。结论 ERK信号转导通路可能参与调节TNF-α诱导的内皮细胞β-1,4-GalT-I的表达,并影响内皮细胞的黏附能力。

关键词：细胞外信号调节激酶 TNF-α β-1,4-半乳糖基转移酶-I 内皮细胞

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PCPA对于外周血CD4^+T细胞Th1/Th2分化失衡影响的初步研究

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免疫学杂志 2011年第8期27卷 645-648,661页

作者：张洁周怡周晓荣孙晓蕾周鸣鸣印磊张迎娣汪晓莺南通大学医学院免疫学与微生物学教研室 226019

目的研究PCPA暴露对于外周血CD4+T细胞向Th1/Th2分化的影响及其分子机制。方法分离并培养人外周血CD4+T细胞。采用MTT、流式细胞术、QRT-PCR和酶联免疫吸附试验法(ELISA)对PCPA组和对照组细胞中Th1、Th2亚型的代表细胞因子IFN-γ、IL-4... 详细信息

目的研究PCPA暴露对于外周血CD4+T细胞向Th1/Th2分化的影响及其分子机制。方法分离并培养人外周血CD4+T细胞。采用MTT、流式细胞术、QRT-PCR和酶联免疫吸附试验法(ELISA)对PCPA组和对照组细胞中Th1、Th2亚型的代表细胞因子IFN-γ、IL-4进行检测。结果 PHA刺激48 h后,ELISA检测细胞培养上清显示,PCPA组上清中IFN-γ分泌水平明显高于对照组(P<0.05),而IL-4分泌量较对照组略有增加;RT-PCR检测显示,PCPA组IFN-γ基因表达高于对照组1.69倍,IL-4基因表达没有显著改变;流式细胞技术对胞内因子检测显示,PCPA组IFN-γ+T细胞比例(46.1%)明显高于对照组(32.6%),2组间有统计学意义(P<0.05),而IL-4+T细胞比例与对照组无显著变化(48.1%和46.5%)。PCPA组的IFN-γ+T细胞与IL-4+T细胞比值是对照组的1.53倍。结论 PCPA暴露(40μmol/L)导致CD4+T细胞LSD1的H3K4(2m)脱甲基化酶活性被抑制,引起Th1/Th2分化平衡向Th1方向的"漂移"。

关键词：反式环苯丙胺 LSD1 辅助T细胞 γ干扰素白介素4

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HCMV pp150抗原基因在蚕豆中的遗传转化及鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第12期27卷 1150-1154页

作者：严华李国才焦红梅陈红菊扬州大学医学院微生物学和免疫学教研室 225001

目的研制人巨细胞病毒(HCMV)口服疫苗。方法根据HCMV基质磷蛋白PP150基因序列设计引物,PCR法从HCMV AD169株基因组DNA中扩增出编码PP150抗原决定簇区域的基因片段。将Kozak序列插入pp150基因的起始密码子的上游,3′端引入了内质网滞留信... 详细信息

目的研制人巨细胞病毒(HCMV)口服疫苗。方法根据HCMV基质磷蛋白PP150基因序列设计引物,PCR法从HCMV AD169株基因组DNA中扩增出编码PP150抗原决定簇区域的基因片段。将Kozak序列插入pp150基因的起始密码子的上游,3′端引入了内质网滞留信号KDEL序列,将修饰后的基因片段克隆进载体pBI121,构建了带潮霉素(Hyg)选择抗性基因的植物表达载体pCAM- BIA1300/pp150和根癌农杆菌工程菌EHA105;采用叶盘法转化蚕豆,获得了5株抗性植株,通过PCR、Southern blot和RNA dot blot分析鉴定,确认了3株为转基因植株。通过ELISA和Western blot对这3株的蛋白萃取物进行分析,以鉴定其免疫学活性。结果这3株转基因植株表达的PP150蛋白具有免疫原活性。结论这些转基因植株为HCMV口服疫苗的研究提供了条件。

关键词：人巨细胞病毒 pp150 口服疫苗转基因蚕豆

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