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南通大学学报（医学版） 2021年第3期41卷 207-211,F0003页

作者：王钰清葛锐姚珂张鲁中杨宇民南通大学教育部/江苏省神经再生重点实验室/神经再生协同创新中心南通226001

目的:研究复合型丝素神经导管对大鼠坐骨神经损伤的修复效果,为复合丝素支架在周围神经损伤中的临床应用提供理论依据。方法:制备两种分子质量的丝素蛋白,并通过静电纺丝、编织、涂层等方法制备复合型丝素蛋白导管,将导管在兔子的背部... 详细信息

目的:研究复合型丝素神经导管对大鼠坐骨神经损伤的修复效果,为复合丝素支架在周围神经损伤中的临床应用提供理论依据。方法:制备两种分子质量的丝素蛋白,并通过静电纺丝、编织、涂层等方法制备复合型丝素蛋白导管,将导管在兔子的背部皮下植入,设定相应时间点进行观察和统计分析。在大鼠坐骨神经缺损模型中,通过苏木精-伊红染色、组织免疫荧光染色和透射电镜等手段观察导管的生物安全性以及促坐骨神经再生能力。结果:在兔子背部皮下植入模型中,24周时导管表现出良好的降解趋势;在大鼠坐骨神经缺损模型中,导管无明显不良反应,表明该导管具有良好的生物安全性;12周时,导管能够促进轴突和髓鞘的形成从而促进坐骨神经再生,还能改善肌肉萎缩。结论:低分子丝素复合导管具有良好的生物安全性和降解性,并能促进大鼠坐骨神经的再生,为丝素在周围神经损伤修复领域的临床试验提供了理论依据。

关键词：丝素蛋白导管神经再生降解坐骨神经损伤

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激酶与外周神经损伤修复研究进展

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生物过程 2021年第4期11卷 99-108页

作者：张守萍关晋东孙诚刘晓宇南通大学教育部/江苏省神经再生重点实验室/神经再生协同创新中心江苏南通

外周神经损伤脱髓鞘疾病是最常见的外伤疾病。目前常见的治疗手段有外科手术缝合、自体神经或者异体神经移植及组织工程技术。影响损伤神经后期功能恢复因素众多如受损神经横断面积,缺损神经缺口长度及各种激酶、生长因子等表达的差异... 详细信息

外周神经损伤脱髓鞘疾病是最常见的外伤疾病。目前常见的治疗手段有外科手术缝合、自体神经或者异体神经移植及组织工程技术。影响损伤神经后期功能恢复因素众多如受损神经横断面积,缺损神经缺口长度及各种激酶、生长因子等表达的差异。激酶种类众多,作为重要的信号传导分子调控多条信号通路,包括神经损伤后坏死组织清除与神经再生等多种过程。因此,为进一步了解激酶在外周神经损伤修复中扮演的角色,本文回顾了多种常见的激酶类型、不同的神经损伤类型及其修复的进程,发现激酶可以通过调节自噬过程、炎症反应、细胞凋亡、细胞周期以及氧化应激等过程参与损伤神经组织再生修复微环境的形成,影响神经的再生修复。

关键词：激酶外周神经损伤修复炎症反应细胞凋亡

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关于导电材料在组织工程中应用的研究

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纳米技术 2021年第4期11卷 278-287页

作者：徐志新赵亚红杨宇民南通大学教育部/江苏省神经再生重点实验室/神经再生协同创新中心江苏南通

组织工程学一直致力于将生物细胞与材料相结合,体外或体内构建器官组织用于修复人类身体的损伤。随着研究的不断深入,支架材料也不断地仿生化、功能化,能够通过改善细胞的活性来修复或调节功能受损的组织。研究显示细胞活动与细胞内信... 详细信息

组织工程学一直致力于将生物细胞与材料相结合,体外或体内构建器官组织用于修复人类身体的损伤。随着研究的不断深入,支架材料也不断地仿生化、功能化,能够通过改善细胞的活性来修复或调节功能受损的组织。研究显示细胞活动与细胞内信号传导多以生物电信号的形式进行,因而导电材料可以赋予损伤组织更加良好的生物传感环境,有助于引导细胞在损伤部位的行为,包括迁移、粘附、增殖和分化。从聚合物到复合材料,再到陶瓷甚至金属,已经有各种类型的导电材料被引入组织工程中,根据其导电性能也可划分为导电与半导电。本综述旨在重点介绍并总结那些应用于组织工程中的导电生物材料的研究进展。

关键词：组织工程导电材料生物相容性聚合物

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精氨酸–谷氨酸–天冬氨酸–缬氨酸改性丝素导管的制备及性能研究

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生物过程 2021年第4期11卷 123-133页

作者：李文慧姚珂张鲁中杨宇民南通大学教育部/江苏省神经再生重点实验室/神经再生协同创新中心江苏南通

目的:制备由REDV多肽修饰且具沟槽结构的丝素蛋白支架。方法:在含有30微米沟槽结构的PDMS膜上制备丝素薄膜,卷成管。通过多巴胺改性在丝素移植物表面共价连接REDV多肽进行修饰。扫描电镜观察其内表面微观形貌,电子万能试验机(TFW-58)检... 详细信息

目的:制备由REDV多肽修饰且具沟槽结构的丝素蛋白支架。方法:在含有30微米沟槽结构的PDMS膜上制备丝素薄膜,卷成管。通过多巴胺改性在丝素移植物表面共价连接REDV多肽进行修饰。扫描电镜观察其内表面微观形貌,电子万能试验机(TFW-58)检测REDV多肽修饰的丝素蛋白支架力学性能的改变。将RSC96细胞种植在丝素蛋白支架内表面1-3 d,观察丝素蛋白质支架内表面的沟槽结构对细胞趋向生长的影响。使用CCK-8 (cell counting Kit-8)测定法检测RSC96细胞在丝素移植物表面的增殖情况。采用SD大鼠制备坐骨神经损伤模型,分别用丝素导管(SF)、具沟槽丝素导管(TOPOLOGY)、REDV多肽修饰丝素导管(REDV)、REDV修饰且具沟槽结构丝素导管(TOPOLOGY/REDV)进行桥接修复。术后12 w测量靶肌湿重比、移植段坐骨神经纵切免疫荧光染色。结果:扫描电镜观察,TOPOLOGY组及TOPOLOGY/REDV组均具有均一的沟槽结构;力学测试结果表明REDV多肽修饰的丝素蛋白支架力学性能有所改善;RSC96细胞与丝素移植物共培养发现移植物表面沟槽结构对于细胞的趋向生长具有引导作用;CCK-8细胞活力检测表明REDV多肽修饰的丝素蛋白支架较单纯的丝素蛋白支架而言生物相容性有所改善;术后12 w靶肌恢复湿重比及坐骨神经纵切免疫荧光染色结果表明REDV多肽修饰且具沟槽结构的丝素蛋白支架对于细胞的吸附生长、损伤神经的修复具有促进作用。结论:REDV多肽修饰且具沟槽结构的丝素蛋白支架具有良好的生物相容性,对于细胞的粘附及趋向生长具有促进作用,为丝素蛋白在神经损伤再生领域提供了新的应用。

关键词：丝素导管多巴胺改性多肽修饰神经再生

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中枢神经系统与周围神经系统发育和损伤过程中微管动态性的差异比较

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南通大学学报（医学版） 2022年第6期42卷 497-501页

作者：柏为娟马超巫荣华刘炎刘梅江苏省盐城市中心血站血液检测中心盐城224005 南通大学教育部/江苏省神经再生重点实验室神经再生协同创新中心

目的:通过比较微管蛋白的酪氨酸化、去酪氨酸化水平,分析中枢神经和周围神经系统神经元发育和损伤后微管动态变化。方法:分离培养Sprague-Dawley(SD)大鼠孕18 d(E18)胎鼠的背根神经节神经元和海马神经元,采用免疫细胞荧光化学方法检测... 详细信息

目的:通过比较微管蛋白的酪氨酸化、去酪氨酸化水平,分析中枢神经和周围神经系统神经元发育和损伤后微管动态变化。方法:分离培养Sprague-Dawley(SD)大鼠孕18 d(E18)胎鼠的背根神经节神经元和海马神经元,采用免疫细胞荧光化学方法检测不同修饰微管蛋白的表达和定位,对培养的神经元进行划伤,采用活细胞拍摄对神经元胞体及轴突生长进行分析比较。提取SD大鼠生后发育不同时间点的坐骨神经和脊髓组织,同时建立SD大鼠的脊髓挫伤和坐骨神经夹伤模型,于术后不同时间提取蛋白,通过Western Blot方法检测不同修饰(酪氨酸化、去酪氨酸化)的微管蛋白表达情况。结果:免疫细胞化学结果显示,与神经元种植1 d相比,在3 d时,背根神经节神经元,酪氨酸化、去酪氨酸化微管蛋白均维持较高水平,而海马神经元中酪氨酸化微管蛋白表达较低;活细胞摄像观察显示,背根神经节神经元和海马神经元在体外发育和损伤再生过程中轴突的平均生长速率差异无统计学意义,但背根神经节神经元胞体运动速率显著高于海马神经元胞体。中枢神经和周围神经发育过程中,坐骨神经组织维持较高的酪氨酸化微管蛋白水平,而在脊髓组织中酪氨酸化微管蛋白的表达逐步下降;在神经损伤后,酪氨酸化微管蛋白在坐骨神经组织中表达显著高于脊髓酪氨酸化微管蛋白。结论:与中枢神经相比,周围神经在发育和损伤后酪氨酸化修饰微管蛋白水平均高于中枢神经,提示周围神经具有更强的微管动态性。

关键词：酪氨酸化微管蛋白去酪氨酸化微管蛋白海马神经元背根神经节神经元脊髓坐骨神经神经损伤大鼠

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抗菌多糖水凝胶负载细胞治疗皮肤创伤的实验研究

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南通大学学报（医学版） 2021年第4期41卷 302-307,F0002页

作者：汤晓璇顾心逸陈晓莉凌珏杨宇民南通大学教育部/江苏省神经再生重点实验室/神经再生协同创新中心南通226001

目的:构建负载成纤维细胞的抗菌多糖类水凝胶,探讨其对皮肤创伤的促进作用。方法:将L929成纤维细胞载入水凝胶中进行共培养1、2、3 d,采用活死细胞染色,通过共聚焦荧光显微镜观察成纤维细胞在水凝胶内的生长情况,计算细胞存活率,评价其... 详细信息

目的:构建负载成纤维细胞的抗菌多糖类水凝胶,探讨其对皮肤创伤的促进作用。方法:将L929成纤维细胞载入水凝胶中进行共培养1、2、3 d,采用活死细胞染色,通过共聚焦荧光显微镜观察成纤维细胞在水凝胶内的生长情况,计算细胞存活率,评价其作为细胞3D培养支架的效果。利用大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌与水凝胶共培养检测其抗菌特性。构建大鼠背部直径2 cm全层皮肤缺损创面模型,分别注射生理盐水(A组)、海藻酸钠水凝胶(B组)、负载L929细胞的SCM水凝胶(C组)。第1、4、7天观察创面愈合情况,计算创面愈合率,采用HE染色观察组织修复效果。结果:L929细胞在水凝胶中培养3 d,细胞均可保持良好生长,存活率均超过80%。抑菌实验显示水凝胶具有良好的抑菌性能,可杀死超过75%的大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌。动物实验显示,C组小鼠背部创面愈合在1、4 d显著优于A组(P<0.01)和B组(P<0.05)。与B组相比,C组中细胞能更快地从伤口周围组织迁移到水凝胶中,在第7天时细胞完全浸润水凝胶。结论:负载细胞的抗菌多糖水凝胶够有效促进皮肤创伤修复。

关键词：水凝胶成纤维细胞伤口修复多糖水凝胶抗菌

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G蛋白耦联胆汁酸受体激动剂INT777通过激活AMPK信号通路抑制施万细胞成髓鞘过程

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南通大学学报（医学版） 2021年第1期41卷 6-10页

作者：关晋东丁杰刘晓宇孙诚南通大学教育部/江苏省神经再生重点实验室/神经再生协同创新中心南通226001

目的:研究G蛋白耦联胆汁酸受体(G-protein-coupled bile acid receptor 1,GPBAR1,同时也被称为TGR5)特异性激动剂6α-乙基-23(S)-甲基胆酸[6 alpha-ethyl-23(S)-methylcholic acid,INT777]对原代施万细胞髓鞘形成的影响并初步探讨其可能的作用机制。方法:用5μmol/L的INT777处理二丁酰环腺苷酸(dibutyryl cyclic adenoslne phosphate,dbcAMP)诱导分化原代施万细胞成髓鞘模型,用免疫印迹(Western Blot)方法检测髓磷脂蛋白表达量的变化。同时,提取施万细胞总核糖核酸后用定量聚合酶链式反应试验检测INT777对髓鞘形成过程相关分子基因表达的影响。另外,用Western Blot方法检测INT777对单磷酸腺苷活化蛋白激酶/核糖体蛋白S6激酶(adenosine 5′-monophosphate-activated protein kinase/ribosomal S6 kinase,AMPK/S6K)信号途径的影响。结果:在dbcAMP诱导分化原代施万细胞成髓鞘过程中,5μmol/L INT777的处理抑制了髓鞘早期生长因子20,八聚体结合转录因子6,髓磷脂蛋白的表达,且5μmol/L INT777处理激活了AMPK的活性,抑制了雷帕霉素作用靶点信号通路。结论:INT777抑制dbcAMP诱导的施万细胞成髓鞘过程,这种抑制作用可能是通过激活施万细胞AMPK活性、抑制S6K活性实现的。

关键词：施万细胞髓鞘 6α-乙基-23(S)-甲基胆酸单磷酸腺苷活化蛋白激酶

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二甲双胍促进大鼠皮层神经元轴突生长的体外效应研究

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南通大学学报（医学版） 2021年第3期41卷 199-202,F0002页

作者：管徒晨滕龙郭贝贝刘炎南通大学教育部/江苏省神经再生重点实验室/神经再生协同创新中心南通226001

目的:探究二甲双胍(metformin,MET)对原代皮层神经元轴突生长的效应,以寻找安全有效的促进神经元再生的药物,用于恢复中枢神经系统损伤。方法:原代培养大鼠胚胎18 d(E18)皮层神经元,加入不同浓度MET处理,采用免疫荧光观察神经元轴突生... 详细信息

目的:探究二甲双胍(metformin,MET)对原代皮层神经元轴突生长的效应,以寻找安全有效的促进神经元再生的药物,用于恢复中枢神经系统损伤。方法:原代培养大鼠胚胎18 d(E18)皮层神经元,加入不同浓度MET处理,采用免疫荧光观察神经元轴突生长状况,细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞活力变化,利用硫酸软骨素蛋白多糖(chondroitin sulfate proteoglycans,CSPGs)构建神经元轴突生长抑制模型,免疫荧光观察MET是否可以缓解CSPGs的抑制作用。结果:100μmol/L浓度的MET能够有效促进原代皮层神经元轴突的生长和再生;相比于对照组,MET作用48 h能显著提升细胞活力;MET能够缓解CSPGs对神经元轴突生长的抑制作用。结论:MET可有效促进原代皮层神经元轴突生长及损伤轴突的再生,且能有效缓解CSPGs对皮层神经元生长的抑制作用。

关键词：皮层神经元二甲双胍轴突生长硫酸软骨素蛋白多糖大鼠

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吡咯喹啉醌对鱼藤酮损伤细胞线粒体分裂融合的影响

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南通大学学报（医学版） 2021年第3期41卷 203-207页

作者：梁文鹏王洁张琦南通大学教育部/江苏省神经再生重点实验室/神经再生协同创新中心南通226001

目的:探讨吡咯喹啉醌(pyrroloquinoline quinine,PQQ)在鱼藤酮损伤细胞中对线粒体分裂融合的影响。方法:体外采用鱼藤酮损伤SH-SY5Y细胞构建帕金森病(Parkinson′s disease,PD)体外模型,通过定量聚合酶链式反应(polymerase chain reacti... 详细信息

目的:探讨吡咯喹啉醌(pyrroloquinoline quinine,PQQ)在鱼藤酮损伤细胞中对线粒体分裂融合的影响。方法:体外采用鱼藤酮损伤SH-SY5Y细胞构建帕金森病(Parkinson′s disease,PD)体外模型,通过定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测不同浓度PQQ预保护对线粒体分裂融合相关基因的表达变化;通过分离线粒体和胞质蛋白,分析PQQ对线粒体分裂融合相关蛋白表达的影响;通过透射电镜分析PQQ对线粒体超微结构的影响。结果:PQQ预保护能拮抗鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞中线粒体分裂融合相关基因动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)和线粒体融合蛋白2(mitofusin 2,Mfn2)表达的下调,促进损伤细胞线粒体中Drp1和Mfn2蛋白的表达,改善线粒体分裂融合紊乱。结论:PQQ能影响鱼藤酮损伤细胞模型中线粒体的分裂融合。

关键词：吡咯喹啉醌鱼藤酮帕金森病线粒体分裂融合

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β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅴ对脂多糖模型中iNOS、TNFR表达的影响

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南通大学学报（医学版） 2021年第5期41卷 399-402页

作者：王小瑜高书美周巧金会惠美琦严美娟沈洪妹南通大学教育部/江苏省神经再生重点实验室/神经再生协同创新中心南通226001

目的:探索β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅴ(β-1,4-galactosyltransferaseⅤ,β-1,4-GalTⅤ)对腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)引起脑皮层诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、肿瘤坏死因子受体(tumor necrosis factor receptor,TNFR)变化的调控作用。方法:腹腔注射LPS(0.5 mg/kg)建立炎症模型,采用组织免疫荧光染色观察iNOS与β-1,4-GalTⅤ在脑组织中的表达;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测脑组织中iNOS的mRNA表达;采用免疫印迹检测脑组织中TNFR1、TNFR2蛋白表达;采用脑皮层定点注射β-1,4-GalTⅤ的沉默或者过表达的慢病毒颗粒,观察β-1,4-GalTⅤ对脂多糖引起iNOS、TNFR变化的影响。结果:在LPS模型中,β-1,4-GalTⅤ和iNOS在脑组织中共定位;LPS刺激引起脑组织中iNOS、TNFR1表达增加,β-1,4-GalTⅤ沉默消减LPS诱导引起的iNOS、TNFR1水平增加;LPS刺激和β-1,4-GalTⅤ表达变化不影响脑组织中TNFR2表达。结论:β-1,4-GalTⅤ对脂多糖引起iNOS、TNFR1变化具有特异的调控作用,但不影响TNFR2的表达。

关键词： β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅴ 脂多糖诱导型一氧化酶肿瘤坏死因子受体大鼠

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