检索结果-内蒙古大学图书馆

解剖学报 2007年第4期38卷 489-493页

作者：顾芸刘梅刘炎顾晓松南通大学江苏省神经再生重点实验室南通226001

目的建立多疣壁虎胚胎大脑皮层神经元和胶质细胞的分离、培养及纯化方法。方法分离孵化15d的多疣壁虎胚胎的大脑皮层,经胰酶消化,细胞计数后接种于培养瓶。采用差速贴壁及反复传代相结合的纯化培养方法培养胶质细胞;采用添加B27的神经... 详细信息

目的建立多疣壁虎胚胎大脑皮层神经元和胶质细胞的分离、培养及纯化方法。方法分离孵化15d的多疣壁虎胚胎的大脑皮层,经胰酶消化,细胞计数后接种于培养瓶。采用差速贴壁及反复传代相结合的纯化培养方法培养胶质细胞;采用添加B27的神经元培养基培养神经元,并用免疫细胞化学方法鉴定。结果获得体外培养的壁虎GFAP阳性表达胶质细胞,4代后纯度达95%以上;采用神经元培养基,神经元生长良好,NF、MAPⅡ表达阳性,第10d纯度达95%以上。结论建立了壁虎细胞的培养方法,并获得高纯度的胶质细胞和神经元,为进一步对神经系统的深入研究提供细胞模型。

关键词：皮层神经元胶质细胞细胞培养多疣壁虎

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斑马鱼视网膜再生研究进展

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解剖学报 2015年第5期46卷 715-719页

作者：张书强刘东徐绘南通大学江苏省神经再生重点实验室江苏南通226001

哺乳动物视网膜损伤后仅有非常有限的自我修复能力。与哺乳动物不同,硬骨鱼类如斑马鱼的视网膜则具有旺盛的再生能力。斑马鱼视网膜损伤后,能够再生其丢失的所有类型的神经元和胶质细胞,并恢复大部分视力。研究表明,斑马鱼视网膜再生的... 详细信息

哺乳动物视网膜损伤后仅有非常有限的自我修复能力。与哺乳动物不同,硬骨鱼类如斑马鱼的视网膜则具有旺盛的再生能力。斑马鱼视网膜损伤后,能够再生其丢失的所有类型的神经元和胶质细胞,并恢复大部分视力。研究表明,斑马鱼视网膜再生的细胞来源是Müller细胞。近年来,关于斑马鱼视网膜Müller细胞去分化及其增殖的分子机制和信号通路的研究取得了许多新的进展。我们就斑马鱼视网膜再生的研究历史、损伤模型和再生细胞来源以及调控的分子机制等做一综述。

关键词：视网膜再生去分化 Müller细胞斑马鱼

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犬骨髓基质细胞和蚕丝丝素的体外生物相容性

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解剖学报 2010年第6期41卷 827-831页

作者：吴红胡楠杨宇民姚登兵顾晓松南通大学江苏省神经再生重点实验室江苏南通226001

目的探讨体外培养的犬骨髓基质细胞(BMSCs)与蚕丝丝素材料的生物相容性,寻找BMSCs组织工程化神经的支架材料。方法通过差速贴壁法体外分离、培养犬骨髓基质细胞,与丝素共培养后,通过光镜(经免疫荧光染色)、扫描电镜观察细胞在丝素上黏... 详细信息

目的探讨体外培养的犬骨髓基质细胞(BMSCs)与蚕丝丝素材料的生物相容性,寻找BMSCs组织工程化神经的支架材料。方法通过差速贴壁法体外分离、培养犬骨髓基质细胞,与丝素共培养后,通过光镜(经免疫荧光染色)、扫描电镜观察细胞在丝素上黏附和生长情况。利用丝素浸出液培养BMSCs后,通过透射电镜观察细胞内部超微结构,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测丝素、羟基磷灰石、有机锡浸出液和普通IMDM完全培养基培养细胞12、24、48、72h和7d的细胞活力,每组重复12次。流式细胞术检测丝素浸出液培养BMSCs的细胞周期及表型,实验重复3次。结果通过光镜、扫描电镜观察,发现BMSCs紧紧黏附于丝素材料,并沿着丝素纤维延伸,黏附于丝素纤维的细胞呈圆形、椭圆形及呈梭形。与普通IMDM完全培养基培养的细胞相比,透射电镜下可见丝素浸出液培养后的BMSCs内部结构未见异常;MTT检测丝素和羟基磷灰石浸出液对骨髓基质细胞的活力无显著性影响(P>0.05);流式细胞术检测丝素浸出液对骨髓基质细胞周期和表型无明显影响。结论蚕丝丝素材料与犬BMSCs生物相容性好,且未见丝素对BMSCs有毒性作用,可作为BMSCs组织工程化神经的支架材料。

关键词：骨髓基质细胞丝素相容性超微结构免疫荧光流式细胞术犬

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非肌性肌球蛋白Ⅱ-B调节斑马鱼咽弓的发育

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解剖学报 2016年第1期47卷 113-116页

作者：王鸿奎王学谦王新袁玮刘东南通大学江苏省神经再生重点实验室江苏南通226001

目的探讨非肌性肌球蛋白Ⅱ(NMⅡ)家族基因在斑马鱼胚胎期咽弓的表达及其对咽弓发育的影响。方法通过斑马鱼胚胎整体原位杂交及冷冻切片技术(n=10),观察NMⅡ家族基因在斑马鱼胚胎期咽弓的表达情况。利用软骨的阿辛蓝染色方法,将野生型对... 详细信息

目的探讨非肌性肌球蛋白Ⅱ(NMⅡ)家族基因在斑马鱼胚胎期咽弓的表达及其对咽弓发育的影响。方法通过斑马鱼胚胎整体原位杂交及冷冻切片技术(n=10),观察NMⅡ家族基因在斑马鱼胚胎期咽弓的表达情况。利用软骨的阿辛蓝染色方法,将野生型对照组(n=10)和blebbistatin处理组(每个浓度n=10)的斑马鱼胚胎进行比较,分析NMⅡ对斑马鱼胚胎期咽弓发育和形成的影响。结果受精后72 h(72hpf),NMⅡ-B在斑马鱼发育着的咽弓部位有特异性表达;120 hpf,NMⅡ-B在咽弓表达增加。Blebbistatin特异性抑制NMⅡ-B功能后,斑马鱼咽弓发生明显发育缺陷,部分软骨细胞出现显著形态改变;抑制咽弓形成的作用与blebbistatin浓度呈现剂量依赖效应。结论 NMⅡ-B通过影响咽弓软骨细胞从而调节斑马鱼胚胎期咽弓的发育。

关键词：非肌性肌球蛋白Ⅱ-B 咽弓发育原位杂交阿辛蓝染色斑马鱼

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小鼠骨髓基质细胞和蚕丝丝素材料的体外生物相容性

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解剖学报 2008年第6期39卷 831-835页

作者：吴红胡楠杨宇民顾晓松南通大学江苏省神经再生重点实验室江苏南通226001

目的研究体外培养的小鼠骨髓基质细胞(BMSCs)与蚕丝丝素材料的生物相容性,寻找BMSCs组织工程化神经的支架材料。方法通过贴壁法体外分离、培养小鼠(C57BL/6-GFP小鼠和C57BL/6小鼠)的BMSCs,与丝素共培养,通过光学显微镜和扫描电镜,观察... 详细信息

目的研究体外培养的小鼠骨髓基质细胞(BMSCs)与蚕丝丝素材料的生物相容性,寻找BMSCs组织工程化神经的支架材料。方法通过贴壁法体外分离、培养小鼠(C57BL/6-GFP小鼠和C57BL/6小鼠)的BMSCs,与丝素共培养,通过光学显微镜和扫描电镜,观察细胞的黏附和生长情况。利用丝素浸出液培养BMSCs后,通过透射电镜观察细胞超微内部结构,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测丝素、羟基磷灰石、有机锡浸出液和普通IMDM培养基培养细胞12h、24h、48h、72h、7d的细胞活力,每组重复12次。流式细胞术检测丝素浸出液培养BMSCs的细胞周期及细胞表型,实验重复3次。结果通过光镜、电镜观察,发现小鼠BMSCs黏附着丝素纤维、并沿着丝素纤维延伸,一些BMSCs缠绕并包裹丝素纤维,黏附着丝素纤维的细胞有的呈圆,形有的呈梭形。与普通IMDM培养基培养的细胞相比,透射电镜下丝素浸出液培养后的BMSCs内部结构未见异常;丝素和羟基磷灰石浸出液对BMSCs的活力无显著性影响(P>0.05);丝素浸出液对骨髓基质细胞周期和表型无明显影响。结论蚕丝丝素与小鼠BMSCs有好的生物相容性,且丝素对BMSCs没有毒性作用,可作为BMSCs构建组织工程化神经的支架材料。

关键词：骨髓基质细胞丝素相容性超微结构流式细胞术小鼠

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生长分化因子8在腓肠肌失神经萎缩过程中的表达变化

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中华创伤杂志 2005年第11期21卷 858-861页

作者：张冬雷刘梅丁斐顾晓松南通大学神经再生重点实验室

目的分析生长分化因子8[growthdifferentiationfactor8,GDF8,又称myostatin(MSTN)]在腓肠肌失神经萎缩过程中的表达变化,初步探讨GDF8在肌萎缩过程中的可能作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和WesternBlotting,分别检测失神... 详细信息

目的分析生长分化因子8[growthdifferentiationfactor8,GDF8,又称myostatin(MSTN)]在腓肠肌失神经萎缩过程中的表达变化,初步探讨GDF8在肌萎缩过程中的可能作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和WesternBlotting,分别检测失神经支配不同时间段腓肠肌中GDF8mRNA和蛋白含量,并对肌肉湿重比、肌纤维横截面积(CSA)及形态学特征进行分析比较。结果失神经支配早期(3～7d)腓肠肌中GDF8mRNA迅速上升,随后下降,而相应蛋白无此变化。7d后,GDF8mRNA和蛋白水平又逐渐增高,28d达到高峰,至56d时又显著下降。结论腓肠肌萎缩程度和GDF8mRNA及蛋白水平上升呈负相关,提示GDF8在腓肠肌失神经萎缩过程中起了重要作用,为进一步了解肌萎缩的分子机制、寻求相应的治疗方案提供理论基础。

关键词：肌萎缩去神经支配生长分化因子8 生长分化因子神经萎缩表达变化腓肠肌聚合酶链反应(PCR) Blotting Western

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大鼠坐骨神经髓鞘相关蛋白随年龄的变化

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解剖学杂志 2013年第4期36卷 762-767页

作者：张琦王彩萍蒋蔚蒋茂荣丁妹丁斐南通大学江苏省神经再生重点实验室南通226001

目的：研究大鼠坐骨神经髓鞘相关蛋白随年龄的变化及与髓鞘板层数之间的相互关系.方法：SD大鼠分别于饲养1周、1月、3月、9月、15月和21月后取坐骨神经,利用透射电镜观察计数髓鞘板层；采用免疫印迹检测髓鞘相关蛋白—髓鞘碱性蛋白（MB... 详细信息

目的：研究大鼠坐骨神经髓鞘相关蛋白随年龄的变化及与髓鞘板层数之间的相互关系.方法：SD大鼠分别于饲养1周、1月、3月、9月、15月和21月后取坐骨神经,利用透射电镜观察计数髓鞘板层；采用免疫印迹检测髓鞘相关蛋白—髓鞘碱性蛋白（MBP）、髓鞘相关糖蛋白（MAG）和P0蛋白（P0）的表达变化,并分析与板层数之间的相关性；采用荧光免疫组织化学显色观察MBP的表达变化.结果：透射电镜观察显示,大鼠坐骨神经髓鞘板层数从1周到15月逐渐增加,直到21月无显著变化.免疫印迹显示,MBP的表达随年龄增长而增加,21月时达到高峰,与髓鞘板层数呈正性直线相关；MAG在出生后1周表达最高,而P0在1月时达峰值,后皆随年龄增加而下降,MAG与髓鞘板层数呈负性直线相关,而P0与髓鞘板层数之间呈非直线相关.荧光免疫组织化学显色显示,随着年龄增长,MBP在大鼠坐骨神经的髓鞘表达的荧光强度逐渐增强.结论：大鼠坐骨神经髓鞘相关蛋白随年龄改变呈现不同的表达模式,并与髓鞘板层数之间存在一定相关性.

关键词：坐骨神经髓鞘髓鞘相关蛋白

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肿瘤源性热休克蛋白gp96诱导淋巴细胞反应及其抗肿瘤效应

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中国免疫学杂志 2007年第3期23卷 234-237页

作者：朱昌来林琳张天一南通大学神经再生重点实验室南通226001

目的研究肿瘤细胞来源的热休克蛋白gp96-多肽复合物在体外诱导脾淋巴细胞的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应。方法利用蛋白纯化技术、SDS-PAGE凝胶电泳及Western blot法分离纯化、鉴定gp96-多肽;通过流式细胞术、免疫荧光技术、CCK-8... 详细信息

目的研究肿瘤细胞来源的热休克蛋白gp96-多肽复合物在体外诱导脾淋巴细胞的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应。方法利用蛋白纯化技术、SDS-PAGE凝胶电泳及Western blot法分离纯化、鉴定gp96-多肽;通过流式细胞术、免疫荧光技术、CCK-8法等检测经gp96多肽诱导的CD8+T细胞及其抗肿瘤效应。结果经鉴定获得纯化的热休克蛋白;流式细胞仪检测表明,经gp96-肽复合物诱导后的CD8+T细胞比例达到近70%,远远高于对照组的35%、26%;该活化的CTL细胞在效靶比为50∶1时的肿瘤杀伤率达72%,与对照组相比具有统计学意义;激光共聚焦显微镜观察证实实验诱导组的培养上清能诱导H22肿瘤细胞凋亡的形态学改变。结论肿瘤来源的热休克蛋白gp96-肽复合物能诱导小鼠脾淋巴细胞的CTL反应,该活化的CTL具有特异性抗H22肿瘤细胞的免疫作用,并能分泌免疫活性物质诱导H22肿瘤细胞凋亡。

关键词： gp96-肽复合物 H22细胞细胞毒性T淋巴细胞细胞凋亡

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坐骨神经缺损后大鼠近端神经新miRNA的鉴定与功能分析

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中国科学：生命科学 2011年第7期41卷 525-531,597-629页

作者：李石营于斌姚登兵王勇军张占虎顾晓松南通大学江苏省神经再生重点实验室南通226001

周围神经系统在损伤后能够再生,再生过程中许多基因和蛋白的表达发生改变.miRNA是一类进化上高度保守、能够在转录后调控基因表达的非编码RNA.本研究聚焦在大鼠坐骨神经缺损后,近端神经新miRNA的鉴定和功能注解.通过深度测序、计算机分... 详细信息

周围神经系统在损伤后能够再生,再生过程中许多基因和蛋白的表达发生改变.miRNA是一类进化上高度保守、能够在转录后调控基因表达的非编码RNA.本研究聚焦在大鼠坐骨神经缺损后,近端神经新miRNA的鉴定和功能注解.通过深度测序、计算机分析和Q-PCR验证,98个新miRNA在坐骨神经缺损后的0,1,4,7和14天被发现和鉴定.进一步预测了这些miRNA的靶基因,分析了靶基因参与的生物学过程,结果显示靶基因参与的生物学过程与坐骨神经缺损后神经损伤和再生的过程基本一致.本实验为miRNA在坐骨神经缺损后的调控作用的研究提供了基础,有助于周围神经损伤和再生分子机制的进一步研究.

关键词： miRNA 背根节大鼠 Solexa

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斑马鱼遗传操作进展

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生物工程学报 2017年第10期33卷 1674-1692页

作者：高煜刘家辉王新刘东南通大学教育部江苏省神经再生重点实验室江苏南通226001

斑马鱼已经成为在发育生物学与疾病模型研究中应用最广泛的实验动物之一,其中多种遗传操作方法和高分辨率活体成像技术对斑马鱼的应用起了重要推动作用。斑马鱼在功能基因组学研究上有许多优势,如可以快速便捷地鉴定脊椎动物新基因的功... 详细信息

斑马鱼已经成为在发育生物学与疾病模型研究中应用最广泛的实验动物之一,其中多种遗传操作方法和高分辨率活体成像技术对斑马鱼的应用起了重要推动作用。斑马鱼在功能基因组学研究上有许多优势,如可以快速便捷地鉴定脊椎动物新基因的功能。本文尝试以示意图来简要总结应用于斑马鱼的遗传操作方法和基本原理,包括ENU化学诱变筛选的基本原理和隐性突变3代筛选的流程,逆转录病毒介导的插入突变的原理及其隐性突变3代筛选的流程,转座子Sleeping Beauty(SB)和Tol2介导的基因捕获载体系统(Gene-breaking transposon,GBT)为基础的基因捕获突变的基本原理,Morpholino介导的基因下调和micro RNA下调技术,TILLING(Targeting induced local lesions in genomes)技术和CEL1分析的基本原理和实验流程,锌指核酸酶ZFN(Zinc finger nuclease)与TALEN(Transcription activator-like effector nuclease)、CRISPR/Cas9定向基因失活的基本原理,斑马鱼上广泛采用的转基因技术的几种类型等。

关键词：斑马鱼遗传操作突变转基因转座子基因编辑

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