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解剖学报 2024年第3期55卷 363-370页

作者：宫川惠邱家怡印可馨张继茹何铖袁野吕广明南通大学医学院人体解剖学系江苏南通226001 南通大学医学院江苏南通226001 南通大学神经生物学研究所江苏省神经再生重点实验室江苏南通226001

目的为了缩短清晰无障碍脑成像鸡尾酒和计算分析(CUBIC)技术的透明时间,提高透明效率,探索亲水性组织透明技术应用的可能性,本研究对CUBIC技术进行灌注优化后,与4种亲水性透明化方法在组织透明效果、透明时间、面积变化、体积变化及腺... 详细信息

目的为了缩短清晰无障碍脑成像鸡尾酒和计算分析(CUBIC)技术的透明时间,提高透明效率,探索亲水性组织透明技术应用的可能性,本研究对CUBIC技术进行灌注优化后,与4种亲水性透明化方法在组织透明效果、透明时间、面积变化、体积变化及腺相关病毒(AAV)荧光保留情况等方面进行了比较。方法取6只成年美国癌症研究所(ICR)小鼠的脑、肝、脾和肾分别采用SeeDB、FRUIT、ScaleS、CUBIC的方法进行透明化处理,使用Image J 1.8.0测算样本的面积和灰度值,排水法测量透明前后体积,比较各组的透明效果、时间以及大小变形。通过改进灌注速率与最佳灌注剂量对CUBIC技术进行灌注优化,每组实验样本量为6。另在16只成年小鼠的大脑运动皮层定位注射AAV,4周后取其颈髓节段透明化处理,荧光照片经过ImageJ1.8.0测量平均荧光强度,评估不同技术的荧光保存情况。结果灌注CUBIC的最佳灌注速率和灌注剂量分别是15 ml/min和200 ml。对于透明能力和速度,灌注CUBIC技术的平均灰度值最低且用时最短,而CUBIC消耗的时间最长,SeeDB、FRUIT、ScaleS并没有显示出良好的透明能力。在面积和体积变化方面,几种技术对组织或器官透明后均有不同程度的膨胀。在荧光保留方面,灌注CUBIC对绿色荧光蛋白(GFP)荧光信号的保留效果最好,其次是CUBIC、ScaleS、FRUIT和SeeDB。结论灌注CUBIC技术与其他技术相比,组织透明效果最好,透明时间最短,AAV荧光保留最多。

关键词：组织透明化光学透明清晰无障碍脑成像鸡尾酒和计算分析亲水性组织透明化技术小鼠

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皮质脊髓束损伤后胶质细胞激活相关microRNA的筛选与验证

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解剖学报 2018年第1期49卷 14-19页

作者：刘晓东王艺儒吕金阳徐晓燕张致祎王鑫吕广明南通大学医学院解剖学教研室南通市第6人民医院医务科南通大学神经再生重点实验室江苏南通226001

目的检测皮质脊髓束损伤头侧和尾侧microRNA及其靶基因mRNA的表达变化,探讨microRNA在皮质脊髓束损伤修复过程中的生物学作用。方法在左侧延髓锥体切断大鼠锥体束(30只),建立单侧大鼠皮质脊髓束损伤模型,采用BBB评分进行行为学评价;实... 详细信息

目的检测皮质脊髓束损伤头侧和尾侧microRNA及其靶基因mRNA的表达变化,探讨microRNA在皮质脊髓束损伤修复过程中的生物学作用。方法在左侧延髓锥体切断大鼠锥体束(30只),建立单侧大鼠皮质脊髓束损伤模型,采用BBB评分进行行为学评价;实验以左侧大鼠皮质脊髓束损伤模型作为研究对象,利用生物信息学方法筛选差异表达的microRNA预测靶基因与mRNA的差异筛选取交集,进行microRNA和mRNA共表达分析;Real-time PCR检测12只大鼠miR-342-5p、Irf8的表达水平;Western blotting检测6只大鼠Irf8、Iba1蛋白的表达变化。结果皮质脊髓束损伤后观察到右后肢运动不协调,BBB评分表明运动功能受限,但是6只大鼠没有完全瘫痪,损伤后2 h,1、3、5和7 d BBB评分与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),提示模型制备成功。头侧和尾侧5 d与2h相比,聚集于与修复再生相关的生物学过程。Real-time PCR结果显示,尾侧5 d与2h相比,miR-342-5p表达差异有显著性(P<0.01),并且与Irf8呈现反向调节关系,而在头侧miR-342-5p表达差异无统计学意义(P>0.05)。Real-time PCR数据分析显示,Irf8与芯片结果一致,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。Western blotting结果显示,5 d和2h相比尾侧Irf8的表达显著增加,Iba1的表达明显增高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论皮质脊髓束损伤后损伤头侧和尾侧均有显著性上调或下调的差异表达基因,在损伤尾侧miR-342-5p和Irf8呈反向调节,提示miR-342-5p与胶质细胞激活从而促进脊髓损伤修复再生密切相关。

关键词：皮质脊髓束再生 microRNA 差异表达基因基因-基因网络免疫印迹法大鼠

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中药神经生长液对帕金森病小鼠的作用

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中华中医药杂志 2017年第8期32卷 3687-3691页

作者：姜文霞杨晓明吕广明顾晓松南通大学神经再生重点实验室南通大学医学院人体解剖学教研室南通226001

目的:探讨中药神经生长液对神经毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病(PD)模型鼠的治疗作用。方法:7周龄雄性C57BL/6小鼠80只,随机分为阴性组、模型组、美多芭组、中药组,每组20只。运用腹腔注射MPTP制备PD模型,通... 详细信息

目的:探讨中药神经生长液对神经毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病(PD)模型鼠的治疗作用。方法:7周龄雄性C57BL/6小鼠80只,随机分为阴性组、模型组、美多芭组、中药组,每组20只。运用腹腔注射MPTP制备PD模型,通过灌胃的方法对模型进行中药神经生长液和美多芭治疗,以0.9%氯化钠溶液为阴性对照。通过记录体质量,检测转棒实验和旷场实验行为学变化;用酪氨酸羟化酶(TH)的免疫染色中脑黑质多巴胺能神经元;通过HPLC检测纹状体多巴胺(DA)含量。结果:(1)制模后,模型动物体质量较阴性组降低,差异无统计学意义。灌胃后小鼠的体质量增加,各组之间仍无差异。(2)行为学检测显示,模型动物在行为学检测上较阴性组均明显降低(P<0.01)。灌胃后中药组和美多芭组在行为学检测上比模型组都明显好转(P<0.01,P<0.05)。(3)免疫组化结果显示,灌胃后中药组TH阳性细胞数比模型组和美多芭组明显增加(P<0.01,P<0.05)。(4)HPLC结果显示,灌胃后模型组DA含量减少(P<0.05),美多芭组和中药组DA含量有增加趋势,但差异无统计学意义。结论:中药神经生长液对MPTP诱导的PD模型鼠有一定的治疗作用。

关键词： 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶帕金森病美多芭中药神经生长液酪氨酸羟化酶

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层次解剖学对当今人体解剖学教学和科研发展的影响

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解剖学报 2017年第4期48卷 493-496页

作者：姜平童鑫康王鹤鸣韩群颖顾晓松丁炯江苏大学医学院解剖学教研室江苏镇江212001 加拿大麦吉尔大学蒙特利尔神经研究所南京医科大学解剖学系南京210029 南通大学江苏省神经再生重点实验室江苏南通226001

层次解剖学是姜同喻先生创立的,其理念是遵循人体结构相互配套的原则进行解剖、制作标本并绘制相应的图谱,因而不同于为显示而孤立地暴露结构的解剖方法。姜先生要求学生在解剖过程中对结构的测量,进而探索其关联性及其与临床的关系,引... 详细信息

层次解剖学是姜同喻先生创立的,其理念是遵循人体结构相互配套的原则进行解剖、制作标本并绘制相应的图谱,因而不同于为显示而孤立地暴露结构的解剖方法。姜先生要求学生在解剖过程中对结构的测量,进而探索其关联性及其与临床的关系,引导学生进行创新性学习。他传承中医学术体系,提出的自身比例的定位和模拟动态变化方法,在现代影像解剖的研究中得到广泛的应用。他提倡的解剖技能训练与当前在解剖中进行临床技能训练是不谋而合的。

关键词：层次解剖创新性教学自身比例定位

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海马放射状胶质细胞激活后Rest和Runx1t1基因的表达变化

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解剖学报 2012年第1期43卷 7-12页

作者：施金洪金国华李浩明张新化朱蕙霞田美玲秦建兵南通大学医学院人体解剖学系江苏南通226001 南通大学医学院生物化学教研室江苏南通226001 南通大学医学院江苏省神经再生重点实验室江苏南通226001

目的探讨经切割穹隆海马伞侧海马提取液诱导而激活的海马放射状胶质细胞的基因表达变化。方法将分离、纯化后的海马放射状胶质细胞分别加入正常侧和切割穹隆海马伞侧海马提取液,7d后利用免疫荧光法检测两组细胞的数量和生长情况;利用基... 详细信息

目的探讨经切割穹隆海马伞侧海马提取液诱导而激活的海马放射状胶质细胞的基因表达变化。方法将分离、纯化后的海马放射状胶质细胞分别加入正常侧和切割穹隆海马伞侧海马提取液,7d后利用免疫荧光法检测两组细胞的数量和生长情况;利用基因芯片分析细胞内基因表达情况;利用实时定量PCR分析神经干细胞向神经元分化的相关基因Rest和Runx1t1的转录情况。结果与正常组相比,切割组放射状胶质细胞的数量明显增多,胞体增大,突起增粗变长。基因芯片结果显示,在所检测的709个基因中,切割组中10个基因表达明显上调,10个基因明显下调;实时定量PCR结果表明,切割组Rest和Runx1t1的转录水平均显著高于正常组(P<0.05)。结论切割穹隆海马伞海马提取液可诱导海马放射状胶质细胞的激活,提高Rest和Runx1t1基因转录水平。

关键词：海马放射状胶质细胞 Rest Runx1t1 免疫荧光实时定量聚合酶链式反应大鼠

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枸杞多糖对氯化甲基汞诱导海马神经干细胞损伤的保护作用

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解剖学报 2012年第4期43卷 445-450页

作者：陈维维金国华张新化聂德康李小承嵇洪艳张夏南田建英宁夏医科大学人体解剖学教研室银川750004 南通大学医学院人体解剖学系江苏省神经再生重点实验室江苏南通226001 南通大学附属医院神经外科江苏南通226001

目的观察分析枸杞多糖对氯化甲基汞所诱导神经干细胞(NSCs)损伤的影响。方法取孕16 dSD大鼠胚胎的海马组织,分离纯化得到海马NSCs。将纯化后的海马NSCs增殖、生长10 d后,按随机分组方法将其分为空白对照组(DMEM/F12培养基);枸杞多糖组(D... 详细信息

目的观察分析枸杞多糖对氯化甲基汞所诱导神经干细胞(NSCs)损伤的影响。方法取孕16 dSD大鼠胚胎的海马组织,分离纯化得到海马NSCs。将纯化后的海马NSCs增殖、生长10 d后,按随机分组方法将其分为空白对照组(DMEM/F12培养基);枸杞多糖组(DMEM/F12培养基+枸杞多糖);氯化甲基汞组(DMEM/F12培养基+氯化甲基汞);氯化甲基汞+枸杞多糖组(DMEM/F12培养基+氯化甲基汞+枸杞多糖)。分别测定各组生长环境中的海马NSCs分化、生长的情况,观察分析氯化甲基汞对海马NSCs的损伤作用,以及枸杞多糖干预后对海马NSCs的影响。结果氯化甲基汞组和空白对照组比较,加入氯化甲基汞后的海马NSCs分化后的神经元比例(3.63%±0.62%)和神经元的周长(63.36μm±5.57μm)都较空白对照低;枸杞多糖组和其他各组比较,海马NSCs分化后的神经元比例(7.75%±0.59%)和神经元的周长(253.3μm±11.21μm)都较其他各组高;氯化甲基汞+枸杞多糖组和氯化甲基汞组比较,前者生长环境下的海马NSCs分化后的神经元比例(5.92%±0.98%)和神经元的周长(111.9μm±6.07μm)较氯化甲基汞组高。结论氯化甲基汞对海马NSCs的分化、生长具有损伤作用;枸杞多糖可以减轻氯化甲基汞对海马NSCs的损伤作用,并能促进海马NSCs向神经元的分化及神经元的生长。

关键词：枸杞多糖氯化甲基汞海马神经干细胞免疫荧光大鼠

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体外模拟海马神经再生微环境下的NSCs增殖和向神经元分化

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神经解剖学杂志 2012年第6期28卷 573-577页

作者：秦建兵金国华朱培培李浩明田美玲杨伟伟南通大学医学院人体解剖学系神经生物学研究所江苏省神经再生重点实验室南通226001

目的:探讨用切割穹窿海马伞海马提取液在体外模拟体内海马神经再生微环境下,对海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖和向神经元分化的影响。方法:分别制备正常侧和切割穹窿海马伞侧海马提取液。实验分为对照组、正常组和切割组,... 详细信息

目的:探讨用切割穹窿海马伞海马提取液在体外模拟体内海马神经再生微环境下,对海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖和向神经元分化的影响。方法:分别制备正常侧和切割穹窿海马伞侧海马提取液。实验分为对照组、正常组和切割组,分别在海马NSCs中加入DMEM/F12培养基、含正常侧海马提取液及切割侧海马提取液的DMEM/F12培养基。用WST-8和Ki67/Sox2免疫荧光检测NSCs的增殖,用DCX免疫荧光检测NSCs向神经元的分化情况。结果:切割组与正常组及对照组相比,WST-8检测OD450比值明显增高(P<0.05);Ki67阳性细胞和Sox2阳性细胞的比例均明显增高(P<0.001)。结论:用切割穹窿海马伞侧海马提取液在体外模拟海马神经再生微环境,可以促进海马NSCs的增殖和向神经元的分化。

关键词：神经干细胞切割海马伞海马提取液大鼠

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核受体相关因子1基因转染神经干细胞移植治疗帕金森病

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解剖学报 2011年第5期42卷 600-604页

作者：田美玲谭雪锋金国华秦建兵李浩明朱蕙霞张蕾南通大学医学院人体解剖学教研室神经生物学研究所江苏省神经再生重点实验室南通大学医学院生物化学教研室江苏南通226001

目的探讨转染核受体相关因子1(Nurr1)基因的神经干细胞(NSCs)移植至帕金森病(PD)大鼠纹状体后向多巴胺能神经元的分化及对PD大鼠行为的影响。方法应用脑立体定位技术构建单侧PD大鼠模型。将PD大鼠随机分为3组,每组8只。假手术组注射生... 详细信息

目的探讨转染核受体相关因子1(Nurr1)基因的神经干细胞(NSCs)移植至帕金森病(PD)大鼠纹状体后向多巴胺能神经元的分化及对PD大鼠行为的影响。方法应用脑立体定位技术构建单侧PD大鼠模型。将PD大鼠随机分为3组,每组8只。假手术组注射生理盐水,NSCs组移植未转染的NSCs,Nurr1组先将重组质粒载体pEGFP-N1-Nurr1转染NSCs,用RT-PCR方法及免疫荧光染色检测Nurr1基因的表达效果,然后用转染Nurr1基因的NSCs进行移植。细胞用DIL标记后移植至PD大鼠右侧纹状体中,术后2周起用阿朴吗啡诱发旋转试验观测移植后大鼠行为改善情况,12周后用免疫荧光技术检测移植细胞中酪氨酸羟化酶(TH)的表达。结果重组质粒转染后Nurr1基因能在NSCs中过表达。移植后假手术组和NSCs组PD大鼠的旋转圈数均无下降趋势,两者差异无统计学意义(P>0.05);NSCs组移植区可见DIL阳性细胞,但TH免疫阳性细胞较少,平均每视野为(3.21±0.40)个;Nurr1组移植后PD大鼠的旋转圈数从第6周开始下降,移植区DIL/TH双标神经元每视野达(9.28±1.09)个。结论 Nurr1基因过表达能诱导NSCs在PD大鼠纹状体内分化为TH阳性的多巴胺能神经元,并在一定程度上改善大鼠的行为功能。

关键词：核受体相关因子1 神经干细胞帕金森病基因转染移植免疫荧光大鼠

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骨髓基质细胞脑室内移植对脑外伤后神经功能障碍的治疗作用

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神经解剖学杂志 2011年第3期27卷 295-300页

作者：周谊芬车彦军吴圆圆刘灿均董玉林张志军倪衡建南通大学医学院人体解剖学教研室神经生物学研究所江苏省神经再生重点实验室南通226001 靖江市人民医院靖江214500

目的:探讨骨髓基质细胞(MSCs)移植到实验性脑外伤大鼠侧脑室后对神经功能障碍的治疗作用。方法:从GFP转基因SD大鼠分离MSCs,体外扩增至第五代。取SD大鼠96只,供制作模型。其中随机选取24只作为正常对照组,72只采用Feeney自由落体方法建... 详细信息

目的:探讨骨髓基质细胞(MSCs)移植到实验性脑外伤大鼠侧脑室后对神经功能障碍的治疗作用。方法:从GFP转基因SD大鼠分离MSCs,体外扩增至第五代。取SD大鼠96只,供制作模型。其中随机选取24只作为正常对照组,72只采用Feeney自由落体方法建立大鼠脑外伤模型,造模后7 d,随机分为三组:MSCs治疗组、IMDM对照组、TBI对照组,每组24只。MSCs治疗组经侧脑室移植MSCs,IMDM对照组经侧脑室注射同体积的IMDM基础培养液,TBI对照组经侧脑室空白进针,分别于移植后2、4、8、12周末,以神经功能评分和免疫荧光染色评价MSCs移植后对大鼠神经功能的改善情况和在大鼠脑内存活迁移情况。结果:经侧脑室移植的MSCs可向脑损伤区域迁移,少数能表达一些神经元和星形胶质细胞的特异性标志物,如NeuN和GFAP。侧脑室移植MSCs治疗组大鼠神经功能恢复的程度优于侧脑室注射IMDM对照组和TBI对照组,有统计学差异(P<0.05),IMDM对照组和TBI对照组神经功能恢复的程度相比无明显差异(P>0.05)。结论:MSCs通过侧脑室同种异体移植后能存活并向损伤区域迁移聚集,少数可分化为神经元和星形胶质细胞,可促进外伤性脑损伤所造成的神经功能障碍的恢复。

关键词： MSCs 脑外伤侧脑室移植免疫荧光大鼠

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桩蛋白在两型星形胶质细胞及神经元中的差异表达

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神经解剖学杂志 2011年第4期27卷 360-364页

作者：张志军何江虹倪衡建夏春林苏州大学医学部人体解剖学系暨细胞神经生物学研究室苏州215123 南通大学医学院人体解剖学系江苏省神经再生重点实验室南通226001

目的:观察桩蛋白在大鼠两型星形胶质细胞及神经元中的差异表达情况。方法:通过细胞培养并结合免疫荧光和RT-PCR方法,观察了桩蛋白的mRNA及蛋白在大鼠两型星形胶质细胞T1A和T2A以及神经元中的表达。结果:RT-PCR显示体外培养的T1A表达桩蛋... 详细信息

目的:观察桩蛋白在大鼠两型星形胶质细胞及神经元中的差异表达情况。方法:通过细胞培养并结合免疫荧光和RT-PCR方法,观察了桩蛋白的mRNA及蛋白在大鼠两型星形胶质细胞T1A和T2A以及神经元中的表达。结果:RT-PCR显示体外培养的T1A表达桩蛋白mRNA,而T2A和神经元未表达桩蛋白mRNA;免疫荧光染色显示桩蛋白主要分布于T1A的胞浆及突起中。结论:桩蛋白在T1A中表达,但未表达于T2A和神经元中;本实验结果为进一步研究桩蛋白在T1A中的生物学作用奠定了基础。

关键词：桩蛋白 1型星形胶质细胞 2型星形胶质细胞神经元大鼠

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