检索结果-内蒙古大学图书馆

南方医科大学学报 2012年第8期32卷 1088-1092页

作者：孙懿曾思聪卢光琇林戈中南大学生殖与干细胞工程研究所//人类干细胞国家工程研究中心//卫生部人类干细胞与生殖工程重点实验室湖南长沙410078

目的建立β-catenin稳定干扰的人胚胎干细胞系。方法利用β-catenin慢病毒干扰质粒PLKO.1-puro-β-catenin转染包装细胞293FT制备重组慢病毒,并感染人胚胎干细胞,采用嘌呤霉素筛选稳定表达shβ-catenin人胚胎干细胞克隆;试验分为稳定转... 详细信息

目的建立β-catenin稳定干扰的人胚胎干细胞系。方法利用β-catenin慢病毒干扰质粒PLKO.1-puro-β-catenin转染包装细胞293FT制备重组慢病毒,并感染人胚胎干细胞,采用嘌呤霉素筛选稳定表达shβ-catenin人胚胎干细胞克隆;试验分为稳定转染β-catenin干扰质粒组(Shβ-catenin)、稳定转染空白载体组(VECTOR)和对照未感染组(WT)三组,RT-PCR检测干扰后β-catenin mRNA表达;进一步免疫荧光检测干扰后细胞β-catenin和OCT4的蛋白表达。结果β-catenin特异性shRNA的慢病毒感染人胚胎干细胞后,获得稳定表达shβ-catenin的人胚胎干细胞系,Shβ-catenin组β-catenin mRNA表达明显降低,只有WT组mRNA表达的1%,而VECTOR组和WT组之间无明显差异;免疫荧光染色进一步验证shβ-catenin组中基本无β-catenin蛋白的表达,但表达多能性标记OCT4。结论通过β-catenin特异性shRNA慢病毒载体构建了稳定干扰β-catenin的人胚胎干细胞系。

关键词：人胚胎干细胞 RNA干扰 β-catenin

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降钙素基因相关肽对卵母细胞体外成熟的影响

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中南大学学报（医学版） 2012年第10期37卷 973-978页

作者：张哲廖宏庆张硕屏徐小明龚斐卢光琇中南大学湘雅医学院生殖与干细胞工程研究所卫生部人类干细胞与生殖工程重点实验室中信湘雅生殖与遗传专科医院长沙410078

目的：探讨降钙素基因相关肽（***，CGRP）对小鼠卵母细胞体外成熟的影响。方法：6周龄雌性昆明小鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素（pregnantmareserumgonadotropin，PMSG）10U48h后处死，取出卵巢收集卵母细胞以30～40枚／孔的密度接种... 详细信息

目的：探讨降钙素基因相关肽（***，CGRP）对小鼠卵母细胞体外成熟的影响。方法：6周龄雌性昆明小鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素（pregnantmareserumgonadotropin，PMSG）10U48h后处死，取出卵巢收集卵母细胞以30～40枚／孔的密度接种于培养板内，以不同浓度CGRV（0，10^-10，10^-9，10^-9mol／L）处理24h后检测生发泡破裂（germinalvesiclebreakdown，GVBD）率和第一极体（polarbodyI，PBI）排出率；收集、培养人卵巢颗粒细胞，以不同浓度CGRV（0，10^-10，10^-9，10^-8mol／L）处理24h后测定颗粒细胞内cAMP浓度。结果：外源性CGRP处理小鼠卵母细胞可浓度依赖性地降低GVBD率及PBI排出率；外源性CGRP处理人颗粒细胞，可浓度依赖性地增高细胞内cAMP浓度。结论：CGRP抑制小鼠卵母细胞成熟可能与其增加颗粒细胞内cAMP浓度有关。

关键词：卵母细胞体外成熟降钙素基因相关肽环磷酸腺苷

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SMAD2介导的Activin A信号对人胚胎干细胞向限定性内胚层细胞诱导分化的促进作用

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2012年第8期40卷 28-33页

作者：孙懿周静卢光琇林戈中南大学生殖与干细胞工程研究所湖南长沙410078 人类干细胞国家工程研究中心湖南长沙410078 卫生部人类干细胞与生殖工程重点实验室湖南长沙410078

【目的】研究SMAD2在Activin A促进人胚胎干细胞向限定性内胚层诱导分化中的作用。【方法】在人胚胎干细胞中转染SMAD2基因siRNA或者过表达质粒后,收集经Activin A分别诱导0,6,12,24,48,72,96和120h的细胞各100ng/mL,采用实时定量PCR检... 详细信息

【目的】研究SMAD2在Activin A促进人胚胎干细胞向限定性内胚层诱导分化中的作用。【方法】在人胚胎干细胞中转染SMAD2基因siRNA或者过表达质粒后,收集经Activin A分别诱导0,6,12,24,48,72,96和120h的细胞各100ng/mL,采用实时定量PCR检测SMAD2与内中胚层共同前体标记Brachyury和内胚层标记Sox17的表达,进一步通过Western-blot分析Activin A诱导中SMAD2和磷酸化SMAD2(p-SMAD2)表达的变化。【结果】在Activin A诱导人胚胎干细胞向限定性内胚层细胞分化的过程中,干扰SMAD2后48h时才检测到Brachyury强表达,而单纯Activin A处理组24h就检测到强表达;Sox17的表达始终较单纯Activin A处理组明显降低,因此,干扰SMAD2直接抑制了Activin A的诱导作用。而过表达SMAD2,Brachyury和Sox17的表达水平较单纯Activin A处理组明显增加,促进了限定性内胚层的发生;并且在Activin A诱导过程中,p-SMAD2的表达水平明显提高,而SMAD2的表达没有明显改变。【结论】SMAD2作为关键因子,介导了Activin A诱导人胚胎干细胞向限定性内胚层的分化,并转录调控Brachyury和Sox17的表达;SMAD2的磷酸化,激活并介导了Activin A诱导的信号转导通路。

关键词：胚胎干细胞限定性内胚层 Activin A SMAD2 人

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荧光定量PCR精确检测人胚胎干细胞线粒体DNA拷贝数方法的建立

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中国细胞生物学学报 2012年第7期34卷 685-689页

作者：孙懿曾思聪胡亮卢光琇林戈中南大学生殖与干细胞工程研究所长沙410078 人类干细胞国家工程研究中心长沙410078 卫生部人类干细胞与生殖工程重点实验室长沙410078

建立一种精确定量人胚胎干细胞线粒体DNA拷贝数的方法。构建包含线粒体DNAND1和核单拷贝基因β-globin基因序列的重组质粒作为标准品;收集无饲养层培养体系下人胚胎干细胞DNA样本,结合2个单独的Taqman探针实时荧光定量PCR对待测样本中... 详细信息

建立一种精确定量人胚胎干细胞线粒体DNA拷贝数的方法。构建包含线粒体DNAND1和核单拷贝基因β-globin基因序列的重组质粒作为标准品;收集无饲养层培养体系下人胚胎干细胞DNA样本,结合2个单独的Taqman探针实时荧光定量PCR对待测样本中线粒体ND1和核β-globin基因分别进行定量,从而对人胚胎干细胞线粒体DNA的含量进行了精确定量。结果提示,人胚胎干细胞线粒体DNA的平均拷贝数/细胞为1 321±228。研究表明,该技术可对人胚胎干细胞线粒体DNA拷贝数进行准确的测定,为研究培养条件对人胚胎干细胞线粒体DNA拷贝数的影响及优化体外培养条件奠定了基础。

关键词：人胚胎干细胞线粒体DNA DNA拷贝数

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双水相纯化人肺腺癌和癌旁正常肺组织质膜蛋白质组差异分析

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中国生物化学与分子生物学报 2015年第2期31卷 182-190页

作者：梁旭俊郭爱云陈主初卢光琇张鹏飞中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室长沙410008 中南大学生殖与干细胞工程研究所长沙410078 人类干细胞国家工程研究中心长沙410205

肿瘤标志物对于肺腺癌病人的临床诊断和预后具有重要意义.本研究根据临床诊断选取人肺腺癌组织和癌旁正常肺组织为研究对象,采用差速离心联合双水相法纯化组织细胞质膜,运用同位素标记相对和绝对定量技术结合高效液相色谱-串联质谱技术... 详细信息

肿瘤标志物对于肺腺癌病人的临床诊断和预后具有重要意义.本研究根据临床诊断选取人肺腺癌组织和癌旁正常肺组织为研究对象,采用差速离心联合双水相法纯化组织细胞质膜,运用同位素标记相对和绝对定量技术结合高效液相色谱-串联质谱技术,鉴定出肺腺癌组织和癌旁正常肺组织的差异蛋白质41种.同癌旁正常肺组织相比,18个蛋白质在肺腺癌组织中表达上调,23个蛋白质在肺腺癌组织中表达下调.生物信息学分析发现,差异质膜蛋白质FLOT1、CAV1和ITGB1均处于蛋白质相互作用网络的重要位置,可能参与了肺腺癌相关信号转导.利用蛋白质印迹和免疫组织化学染色验证,差异蛋白质FLOT1、CAV1和ITGB1在肺腺癌织和癌旁正常肺组织的表达情况,其验证结果与蛋白质组学研究结果一致.研究结果对肺腺癌诊断标志物和肺腺癌癌变分子机理研究具有重要意义.

关键词：人肺腺癌 iTRAQ 质膜定量蛋白质组学

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延时摄像技术分析卵胞浆内单精子注射后出现全部多原核合子一例

延时摄像技术分析卵胞浆内单精子注射后出现全部多原核合子一例

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中华医学会第四次全国实验室学组学术会议

作者：戴菁张硕屏陆长富龚斐卢光琇林戈中南大学生殖与干细胞工程研究所卫生部人类干细胞与生殖工程重点实验室中南大学生殖与干细胞工程研究所中信湘雅生殖与遗传专科医院卫生部人类干细胞与生殖工程重点实验室

实验目的:研究在卵胞浆内单精子注射(Intracytoplasmic sperm injection,ICSI)后出现全部多原核(≥6PN)合子的病例中,导致原核形成异常的原因.方法:一名42岁不明原因原发不孕女性,在第一次体外受精-胚胎移植(In vitro fertilization,IVF...

实验目的:研究在卵胞浆内单精子注射(Intracytoplasmic sperm injection,ICSI)后出现全部多原核(≥6PN)合子的病例中,导致原核形成异常的原因.方法:一名42岁不明原因原发不孕女性,在第一次体外受精-胚胎移植(In vitro fertilization,IVF)+ICSI周期和第二次ICSI周期中均由于多原核合子导致助孕失败.在第三次治疗周期中使用延时摄像技术观察ICSI后的原核形成过程.结果:在第三次治疗周期前,该患者窦卵泡计数(antral follicle count,AFC)为5,基础内分泌检测抗苗勒氏管激素(anti-mullerian homone,AMH)水平为0.15ng/mL,卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)水平为6.13miu/mL.我们采用拮抗剂方案,获卵9枚,其中3枚为MⅡ.进行ICSI后观察到5至7个小囊泡出现在第二极体排出的位置附近,这些囊泡未融合成一个完整的雌原核.

关键词：

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IVF完全受精失败缺陷分析新方法

IVF完全受精失败缺陷分析新方法

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中华医学会第九次全国生殖医学学术会议

作者：戴菁张硕屏孔祥怡陆长富龚斐卢光琇林戈中南大学生殖与干细胞工程研究所卫生部人类干细胞与生殖工程重点实验室中南大学生殖与干细胞工程研究所中信湘雅生殖与遗传专科医院卫生部人类干细胞与生殖工程重点实验室

目的通过透明带(ZP)粘精子评估及免疫荧光染色技术,判断本周期面临IVF完全受精失败受精卵的阻滞阶段,为此类病人下一周期治疗方案的选择提供参考.方法收集44名常规IVF受精后16-18h全部未见原核,D3胚胎评级时仍未卵裂的MII期卵母细胞35...

目的通过透明带(ZP)粘精子评估及免疫荧光染色技术,判断本周期面临IVF完全受精失败受精卵的阻滞阶段,为此类病人下一周期治疗方案的选择提供参考.方法收集44名常规IVF受精后16-18h全部未见原核,D3胚胎评级时仍未卵裂的MII期卵母细胞354枚.通过评估zP粘精子情况、120μm管径吹吸后ZP粘精子情况、消化ZP后组蛋白和鱼精蛋白免疫荧光染色和DAPI复染,来判断精子结合/穿透透明带能力、精子结合/穿透卵膜能力、卵母细胞核和精子核的状态,并判断精子核是否解凝聚,确定卵母细胞受精失败的阻滞阶段.

关键词：

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单原核来源胚胎的实时动态成像观察研究

单原核来源胚胎的实时动态成像观察研究

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中华医学会第七次全国生殖医学学术会议

作者：石江霞张硕屏龚斐卢光琇林戈卫生部生殖与干细胞重点实验室中信湘雅生殖与遗传专科医院卫生部生殖与干细胞重点实验室中南大学生殖与干细胞工程研究所

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透明带形态异常患者卵的成熟、受精、胚胎发育与临床妊娠结局研究

透明带形态异常患者卵的成熟、受精、胚胎发育与临床妊娠结局研究

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中华医学会第四次全国实验室学组学术会议

作者：段超群滕璨顾亦凡陆长富张硕平龚斐卢光琇林戈中南大学中信湘雅生殖与遗传专科医院卫生部人类干细胞与生殖工程重点实验室

研究目的:以透明带(zona pellucida,ZP)形态异常患者为研究对象,探讨卵ZP异常对卵子成熟、受精、胚胎发育及妊娠结局的影响.材料与方法:回顾性地分析2012年1月至2014年5月在我院行助孕治疗的81名ZP异常患者,系统性地分析所有188个治疗周...

研究目的:以透明带(zona pellucida,ZP)形态异常患者为研究对象,探讨卵ZP异常对卵子成熟、受精、胚胎发育及妊娠结局的影响.材料与方法:回顾性地分析2012年1月至2014年5月在我院行助孕治疗的81名ZP异常患者,系统性地分析所有188个治疗周期,比较IVF(IVF-ET,in vitro fertilization-embryo transfer,体外受精-胚胎移植)周期与ICSI(intracytoplasmic sperm injection,单精子胞浆内注射)周期的受精、胚胎发育及临床妊娠结局,并比较ICSI周期中辅助孵化周期与未辅助孵化周期的妊娠结局.

关键词：

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利用逆转录病毒载体建立SMAD2稳定干扰的人胚胎干细胞系

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现代生物医学进展 2012年第15期12卷 2801-2803页

作者：孙懿卢光琇林戈中南大学生殖与干细胞研究所湖南长沙410078 人类干细胞国家工程研究中心湖南长沙410078 卫生部人类干细胞与生殖工程重点实验室湖南长沙410078

目的:建立SMAD2稳定干扰的人胚胎干细胞系。方法:利用包装细胞获得重组的逆转录病毒,感染人类胚胎干细胞,为干扰组ShSMAD2、载体组VECTOR和野生型组WT;经荧光筛选获得阳性克隆;Realtime-PCR检测SMAD2 mRNA的表达。结果:带GFP荧光标记的S... 详细信息

目的:建立SMAD2稳定干扰的人胚胎干细胞系。方法:利用包装细胞获得重组的逆转录病毒,感染人类胚胎干细胞,为干扰组ShSMAD2、载体组VECTOR和野生型组WT;经荧光筛选获得阳性克隆;Realtime-PCR检测SMAD2 mRNA的表达。结果:带GFP荧光标记的SMAD2特异性shRNA逆转录病毒感染人类胚胎干细胞后,获得稳定干扰SMAD2表达的人胚胎干细胞系。经检测shSMAD2组SMAD2 mRNA表达较VECTOR和WT组明显降低,VECTOR和WT组之间无明显差异。结论:通过SMAD2特异性shRNA逆转录病毒载体构建了稳定干扰SMAD2的人类胚胎干细胞。

关键词：人胚胎干细胞 RNA干扰 SMAD2

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