检索结果-内蒙古大学图书馆

生命科学研究 2012年第2期16卷 125-131,137页

作者：蔡琳琳阮井玲王娟曲立娟李华黄英上海市儿童医院上海医学遗传研究所中国上海200040 卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室暨上海市生殖与胚胎工程重点实验室中国上海200040

利用流式细胞仪和细胞染色体核型分析技术,比较奶牛的转基因体细胞和正常细胞经血清饥饿、抑制培养周期同步化处理后的G0/G1期细胞比例;并将同步化处理的核供体细胞进行核移植,然后统计囊胚发育率.结果表明,血清饥饿和抑制培养均能获得... 详细信息

利用流式细胞仪和细胞染色体核型分析技术,比较奶牛的转基因体细胞和正常细胞经血清饥饿、抑制培养周期同步化处理后的G0/G1期细胞比例;并将同步化处理的核供体细胞进行核移植,然后统计囊胚发育率.结果表明,血清饥饿和抑制培养均能获得较高比例的G0/G1期细胞,两组间差异不显著(P>0.05),但均显著高于未处理对照组(P<0.05);血清饥饿组的囊胚率显著高于抑制培养组和非处理对照组(P<0.05);但细胞同步化处理6 d后细胞染色体核型异常率增加.因此,要获得正常核型的G0/G1核移植供体细胞和较高的囊胚率,同步化处理时间以不超过4 d为宜.

关键词：供核细胞 G0/G1期同步化体细胞核移植

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不同启动子引导的人凝血因子Ⅷ基因载体在HC11细胞和小鼠乳腺中表达的研究

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医学分子生物学杂志 2012年第5期9卷 313-319页

作者：王晴任晓叶蔡勤龚秀丽黄英曾溢滔上海市儿童医院上海交通大学附属儿童医院上海医学遗传研究所上海市200040 卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海市200040

目的应用山羊β-酪蛋白基因启动子（P1A3），构建真核细胞表达人凝血因子Ⅷ（humancoagu—lationfactorⅧ，hFⅧ）全长cDNA载体（pcDNA3．1．P1A3-hFⅧ）和hFⅧB区缺失（humancoagulationfactorⅧB—***，hFVⅧBD）的cDNA载体（pcDNA3．1-P1A3-hFⅧBD），研究它们在乳腺细胞中的表达情况，同时与巨细胞病毒（cytomegalovirus，CMV）启动子引导的相应的hFⅧ载体进行比较。方法采用常规DNA分子克隆技术构建人凝血因子Ⅷ（hFⅧ）基因载体，转染小鼠乳腺上皮细胞（HC-11），应用RT—PCR以及real—timePCR技术检测hFⅧ基因转录本；对NSL期母鼠乳腺注射DNA载体后，采集试验母鼠乳汁，应用ELISA检测乳腺细胞分泌hFⅧ蛋白的瞬时表达水平。结果应用构建的CMV启动子和P1A3启动子指导的hFⅧ基因载体转染HC-11细胞后，在mRNA水平均有表达；瞬时转染哺乳期母鼠的乳汁检测表明，转染CMV和P1A3启动子的hFⅧ载体的母鼠，乳汁中的hFⅧ蛋白表达量分别为2．81μg／ml（CMV—hFⅧBD），2．01μg/ml（CMV—hFⅧ），1．82μg／ml（P1A3-hFⅧBD），1．20μg／ml（***Ⅷ）。结论构建的乳腺特异性表达hFⅧ基因的载体，转染HC-11细胞和乳腺组织后的mRNA及蛋白表达水平均证实了该载体的有效性：CMV启动子引导的hFⅧ载体表达虽稍高于P1A3启动子载体，但由于后者具有乳腺特异表达的特点，更适用于乳腺生物反应器。我们构建hFⅧ基因的载体的经验，为乳腺生物反应器的研制提供了有价值的科学依据。

关键词：人凝血因子Ⅷ 哺乳动物乳腺启动子特异表达

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一种快速检测CLN6模型小鼠基因型的方法——高分辨率熔解曲线分析法

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医学分子生物学杂志 2012年第3期9卷 161-165页

作者：许淼王娟龚秀丽蔡勤颜景斌 Nanbert Zhong 曾凡一黄淑帧上海市儿童医院上海医学遗传研究所上海交通大学医学遗传研究所上海市200040 卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室暨上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海市200040 上海交通大学医学院医学科研研究院发育生物学研究室上海市200025

目的建立利用高分辨率熔解曲线（HRM）分析快速鉴定CLN6（神经元蜡样脂褐质沉积症，ceroid—lipofuscinosis，neurona16）小鼠（c2硒基因移码突变）基因型的方法。方法根据NCBI公布的小鼠cln6序列（NC00075）设计HRM引物和测序引物，然... 详细信息

目的建立利用高分辨率熔解曲线（HRM）分析快速鉴定CLN6（神经元蜡样脂褐质沉积症，ceroid—lipofuscinosis，neurona16）小鼠（c2硒基因移码突变）基因型的方法。方法根据NCBI公布的小鼠cln6序列（NC00075）设计HRM引物和测序引物，然后采用HRM技术获得高分辨熔解曲线鉴定实验小鼠基因型，同时通过直接测序法进行验证，评价其灵敏性和准确性。结果181只实验小鼠经HRM检测，共有野生型11只、Cln6基因突变杂合子73只和纯合子97只，HRM结果和直接测序结果完全一致，准确性为100％。结论HRM方法检测DNA微小突变时具有操作简便、快速、灵敏，单管避免污染以及准确度高等优点，值得推广。

关键词：高分辨熔解曲线神经元蜡样脂褐质沉积症 Cln6模型小鼠

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一种快速检测CLN6模型小鼠基因型的方法-高分辨率熔解曲线分析法

一种快速检测CLN6模型小鼠基因型的方法-高分辨率熔解曲线分析法

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第八届全国遗传病诊断与产前诊断学术交流会

作者：许淼王娟龚秀丽蔡勤颜景斌 Nanbert Zhong 曾凡一黄淑帧上海市儿童医院上海医学遗传研究所，上海交通大学医学遗传研究所上海，200040 卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室暨上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海市儿童医院上海医学遗传研究所，上海交通大学医学遗传研究所上海，200040 上海市儿童医院上海医学遗传研究所，上海交通大学医学遗传研究所上海，200040 卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室暨上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海交通大学医学院医学科研研究院发育生物学研究室上

本文利用高分辨率熔解曲线分析法(HRM)对CLN6模型小鼠不同基因型进行检测。结果显示，通过比较HRM结果和直接测序结果完全一致，准确性和灵敏性均达到100%，且相比其他方法大大节省了时间和成本。

关键词：基因诊断高分辨率熔解曲线分析法动物模型

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用KOSR优化山羊克隆胚的培养体系

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上海交通大学学报（农业科学版） 2012年第6期30卷 47-50,57页

作者：陈威胡伟曹辉李凯王清泉蔡勤蔡琳琳刘宇习书斌李华陈美珏黄英黄淑帧曾凡一上海市儿童医院上海医学遗传研究所上海交通大学医学遗传研究所上海200040 卫生部医学胚胎与分子生物学重点实验室暨上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海200040 上海滔滔转基因工程股份有限公司上海201604 上海交通大学医学院医学科学研究院上海200025

体细胞核移植重构胚的体外培养一直是影响山羊克隆效率的一个重要因素,为了排除成分复杂的胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)对克隆重构胚发育的潜在抑制作用,本研究采用成分明确的血清替代品(knockout serum replacement,KOSR)进行山... 详细信息

体细胞核移植重构胚的体外培养一直是影响山羊克隆效率的一个重要因素,为了排除成分复杂的胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)对克隆重构胚发育的潜在抑制作用,本研究采用成分明确的血清替代品(knockout serum replacement,KOSR)进行山羊体细胞克隆重构胚胎的体外培养,并比较KOSR与FBS对重构胚的发育效率的影响。结果显示,KOSR组山羊重构胚培养体系的分裂率明显高于FBS组(80.67±0.63%.vs 49.02±4.85%,P<0.01),2组在重构胚重编程过程中的8细胞率具有显著差异(48.89±1.92%vs.28.59±3.13%,P<0.05);2组不同培养体系的受孕率也有明显不同(33.3%vs.10%,P<0.05)。研究结果表明,KOSR培养体系能有效提高山羊重构胚的发育效率,特别是有利于重构胚的早期重编程,为获得健康的转基因克隆山羊奠定了良好的基础。

关键词：血清替代品(KOSR) 山羊体细胞克隆重构胚重编程发育

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应用氯前列烯醇诱导山羊多胎率的研究

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中国畜牧兽医 2011年第9期38卷 209-212页

作者：胡伟李凯袁琦陈美珏黄淑帧上海交通大学医学遗传研究所上海200040 卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室暨上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海200040 上海滔滔转基因工程股份有限公司上海201604

为了增加养羊业的经济效益,以及医学、药学进行山羊动物试验的需要,必须提高山羊的繁殖效率,增加山羊怀孕的多胎率。为此作者特设计采用氯前列烯醇(Cloprostenol)对华东地区的山羊(江苏海门山羊)进行同步处理并配种以达到提高山羊的多胎... 详细信息

为了增加养羊业的经济效益,以及医学、药学进行山羊动物试验的需要,必须提高山羊的繁殖效率,增加山羊怀孕的多胎率。为此作者特设计采用氯前列烯醇(Cloprostenol)对华东地区的山羊(江苏海门山羊)进行同步处理并配种以达到提高山羊的多胎率,提高山羊利用效率的目的。试验分成两组,氯前列烯醇诱导组(T)136头和非诱导组(UT)136头。结果显示,采用氯前列烯醇诱导的山羊(T)多胎率达到78.7%(107/136),怀孕羔羊数平均达到了2.01只/胎(273/136),而未采用氯前列烯醇诱导的对照组山羊(UT)的多胎率只有39.0%(53/136),怀孕胎数平均为1.31只/胎(179/136),两组之间差异极显著(P<0.01),氯前列烯醇处理组羔羊出生后生长、发育正常。本试验结果表明,通过氯前列烯醇诱导可以明显提高山羊的怀孕多胎率,对山羊优良品种的繁育、种群的快速扩繁及试验用山羊的研制等具有重要的经济价值和应用价值。

关键词：山羊氯前列烯醇多胎率干细胞

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影响牛活体取卵(OPU)的因素

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上海交通大学学报（农业科学版） 2011年第5期29卷 1-7页

作者：李华焦飞阮井玲黄淑帧曾溢滔上海交通大学医学遗传研究所上海市胚胎与生殖工程重点实验室卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室上海200040

在B超扫描监视下进行牛的活体取卵(OPU),根据获得卵母细胞的数量、质量和试验牛的繁殖力对OPU的效果进行评估,并分析影响OPU效率的因素。结果表明,OPU的效率受季节、品种(鲁西黄牛和荷斯坦奶牛)、个体差异和吸卵压力的影响。但是重复每... 详细信息

在B超扫描监视下进行牛的活体取卵(OPU),根据获得卵母细胞的数量、质量和试验牛的繁殖力对OPU的效果进行评估,并分析影响OPU效率的因素。结果表明,OPU的效率受季节、品种(鲁西黄牛和荷斯坦奶牛)、个体差异和吸卵压力的影响。但是重复每周进行1次OPU操作,对获得卵母细胞的数量、质量和试验牛的繁殖力并无影响。因此,OPU技术可为体外生殖的研究和高质量胚胎的生产提供充足而理想的卵母细胞的一种有效途径。

关键词：牛繁殖力卵母细胞活体取卵(OPU) B超

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优化反向PCR法对hTF转基因小鼠整合位点旁侧序列分析

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中国医药生物技术 2011年第3期6卷 228-232页

作者：谢俊许淼龚秀丽曲立娟颜景斌黄英上海交通大学医学院 200025 上海市儿童医院上海医学遗传研究所/卫生部医学胚胎与分子生物学重点实验室暨上海市胚胎与生殖工程重点实验室 200040

自1982年世界上首次通过转基因动物技术获得＂巨鼠＂[1]以来,转基因动物的研究发展迅速。随着多种转基因动物的成功获得,研究者设想利用动物表达外源基因,以动物个体作为一个反应器来生产有价值的蛋白质。

关键词：转基因小鼠序列分析整合位点 PCR法转基因动物技术 hTF 优化外源基因

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应用实时荧光定量PCR测定牛体细胞端粒长度

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中国畜牧兽医 2010年第9期37卷 154-158页

作者：吕昆林丹许淼朱怡文黄英上海交通大学医学院上海市儿童医院上海医学遗传研究所卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室上海市生殖与胚胎工程重点实验室上海200040

本研究为了验证应用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative PCR,Q-PCR)测定牛基因组端粒长度的可行性,选取18个不同来源牛耳成纤维细胞抽提基因组DNA为样本,对Q-PCR和经典的Southern印迹法进行了相关性分析。结果显示,Q-PCR测定端粒长... 详细信息

本研究为了验证应用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative PCR,Q-PCR)测定牛基因组端粒长度的可行性,选取18个不同来源牛耳成纤维细胞抽提基因组DNA为样本,对Q-PCR和经典的Southern印迹法进行了相关性分析。结果显示,Q-PCR测定端粒长度相对T/S为1.16±0.24,Southern印迹法测量端粒平均TRF值为16.99 kb±0.85 kb,两种方法获得的结果相关性分析R2=0.5612(P<0.01),因此实时荧光定量PCR是一种测定牛基因组端粒长度的可靠的方法。

关键词：荧光定量聚合酶链式反应印迹法牛体细胞端粒长度

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奶牛体外受精胚胎的性别控制研究

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中国畜牧兽医 2010年第11期37卷 119-122页

作者：李晓晨李华蔡勤曹辉黄英上海交通大学附属儿童医院上海医学遗传研究所上海200040 上海交通大学医学院上海200025 卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室暨上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海200040

为加速母牛胚胎的生产,实现性控制胚胎产业化和体外扩繁优质品种的奶业工程发展,本研究在体外受精技术(invitro fertilization,IVF)不断成熟和完善的基础上,通过对牛非性控IVF胚胎与常规人工受精体内胚胎移植的妊娠成功率及其两者出生... 详细信息

为加速母牛胚胎的生产,实现性控制胚胎产业化和体外扩繁优质品种的奶业工程发展,本研究在体外受精技术(invitro fertilization,IVF)不断成熟和完善的基础上,通过对牛非性控IVF胚胎与常规人工受精体内胚胎移植的妊娠成功率及其两者出生后牛的性别比例进行比较分析,结果发现,两组妊娠成功率基本相同,且IVF胚胎出生的公牛比例高于体内胚;采用性控和非性控精液进行IVF试验,并对非性控IVF胚胎及性控IVF胚胎用牛Y染色体性别决定特异基因(SRY)核心序列进行分子生物学性别鉴定,结果显示,性控IVF胚胎的公牛比例显著低于普通IVF胚胎;此外,作者还比较了性控IVF与普通非性控IVF的囊胚发育率,结果显示两者并无显著差异。以上研究结果证明,体外扩繁优质良种母牛的奶业工程必须依靠性别控制体外授精技术来提高其效率和有效性。

关键词：牛体外扩繁技术体外受精胚胎移植性别控制

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