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生物化学与生物物理进展 2025年

作者：程雅洁周雪彤王瑞方瑾中国医科大学生命科学学院医学细胞生物学教育部重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室细胞生物学教研室青岛大学附属妇女儿童医院病理科中国医科大学基础医学院干细胞与再生医学教研室

目的探讨大肠癌LoVo细胞来源的外泌体（LoVo-Exos）对肿瘤血管生成的影响，并探讨其促血管生成的可能分子机制。方法超速离心法提取LoVo-Exos，共聚焦显微镜观察其内化进入受体HUVEC细胞，体外管状形成实验分析LoVo-Exos对血管生成的... 详细信息

目的探讨大肠癌LoVo细胞来源的外泌体（LoVo-Exos）对肿瘤血管生成的影响，并探讨其促血管生成的可能分子机制。方法超速离心法提取LoVo-Exos，共聚焦显微镜观察其内化进入受体HUVEC细胞，体外管状形成实验分析LoVo-Exos对血管生成的影响；采用小鼠体内基质胶塞实验，体内分析LoVo-Exos对血管生成的影响。为探讨LoVo-Exos促血管生成的分子机制，Western blot分析LoVo-Exos携带活化型表皮生长因子受体（phosphorylated epidermal growth factor receptor，pEGFR）进入受体细胞。Western blot及ELISA方法分析EGFR-ERK通路关键信号蛋白及下游血管生成核心分子表达情况，并观察敲减EGFR及细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulatory protein kinase，ERK）抑制剂处理对血管生成的影响。结果共聚焦显微镜观察到LoVo-Exos内化进入HUVEC内皮细胞；体外血管生成实验显示，LoVo-Exos能够显著促进HUVEC细胞管状结构的形成。小鼠皮下基质胶塞实验显示LoVo-Exos能够促进血管样结构的形成。进一步研究发现LoVo-Exos递送pEGFR到HUVEC中，激活EGFR-ERK通路，促进血管生成。分析LoVo-Exos对下游血管生成核心分子表达的影响，发现LoVo-Exos能够促进HUVEC细胞白介素-8（interleukin-8，IL-8）的分泌，敲减EGFR的LoVo-Exos该促进作用降低，且该促进作用能够被MEK1/2抑制剂U0126抑制。结论 LoVo-Exos能够在体内外促进血管生成，其可能机制为LoVo-Exos递送pEGFR到HUVEC中，通过EGFR-ERK途径上调IL-8分泌水平，从而促进HUVEC血管生成能力，为癌症的转移提供新机制。

关键词：外泌体血管生成表皮生长因子受体大肠癌

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外泌体在子宫内膜癌诊断和治疗中的作用

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生命的化学 2025年第2期45卷 277-282页

作者：程雅洁李婉明刘西林青岛大学附属妇女儿童医院病理科青岛266000 中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室医学细胞生物学教育部重点实验室分子细胞生物学教研室沈阳110122

外泌体作为信息交流的载体,携带蛋白质、脂质、DNA、mRNA以及非编码RNA等生物活性物质进入人体体液,在细胞间信息交流中发挥巨大作用。外泌体在肿瘤细胞的增殖、上皮-间质转化和肿瘤微环境的形成中发挥了关键作用。近年来,外泌体在子宫... 详细信息

外泌体作为信息交流的载体,携带蛋白质、脂质、DNA、mRNA以及非编码RNA等生物活性物质进入人体体液,在细胞间信息交流中发挥巨大作用。外泌体在肿瘤细胞的增殖、上皮-间质转化和肿瘤微环境的形成中发挥了关键作用。近年来,外泌体在子宫内膜癌(endometrial cancer,EC)诊断、治疗中的作用逐渐成为研究的热点。研究发现,外泌体直接或间接介导了EC细胞的生长、转移,可作为EC诊断和预后的标志物,并可作为EC治疗的靶点。本文对外泌体在EC的诊断和治疗的研究进展进行综述,以期为EC的诊断和治疗提供新的思路。

关键词：子宫内膜癌外泌体肿瘤标志物肿瘤治疗

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核酸适配子探针对转移性大肠癌细胞的多靶点成像及其靶标的定量分析

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高等学校化学学报 2016年第7期37卷 1262-1268页

作者：李婉明方瑾中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室医学细胞生物学教育部重点实验室细胞生物学教研室沈阳110122

利用核酸适配子对肿瘤细胞的高亲和力靶向识别功能以及量子点的高荧光发射强度和光稳定性等特性,制备了识别不同靶点的核酸适配子探针,将其联合使用实现了对肿瘤细胞的多靶点成像及其靶标的定量分析.使用通过Cell-SELEX技术筛选得到的... 详细信息

利用核酸适配子对肿瘤细胞的高亲和力靶向识别功能以及量子点的高荧光发射强度和光稳定性等特性,制备了识别不同靶点的核酸适配子探针,将其联合使用实现了对肿瘤细胞的多靶点成像及其靶标的定量分析.使用通过Cell-SELEX技术筛选得到的可特异性识别转移性大肠癌细胞系Lo Vo的7个核酸适配子,分别与量子点QD605偶联制备分子探针.基于流式细胞术的竞争实验结果表明,7个探针可特异性识别靶细胞的不同靶点,相互之间无识别干扰.对靶细胞的荧光成像表明,与单一探针相比,多个探针联合使用可明显提高细胞表面的荧光信号强度,且阳性细胞检出率明显增多,显示出更高的检测灵敏度.使用流式细胞术及荧光成像定量方法分析了7个探针对不同转移特性大肠癌细胞系的识别能力,结果表明,多个探针联合使用可有效评价大肠癌细胞的转移潜能.本研究证实通过多个核酸适配子探针的联合使用可有效提高对靶细胞识别的灵敏度和准确性,为核酸适配子的广泛应用及大肠癌的靶向诊断提供了新的思路和手段.

关键词：核酸适配子转移性大肠癌多靶点量子点靶向成像

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利用慢病毒载体构建稳定干扰β-catenin的人胚胎干细胞系

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南方医科大学学报 2012年第8期32卷 1088-1092页

作者：孙懿曾思聪卢光琇林戈中南大学生殖与干细胞工程研究所//人类干细胞国家工程研究中心//卫生部人类干细胞与生殖工程重点实验室湖南长沙410078

目的建立β-catenin稳定干扰的人胚胎干细胞系。方法利用β-catenin慢病毒干扰质粒PLKO.1-puro-β-catenin转染包装细胞293FT制备重组慢病毒,并感染人胚胎干细胞,采用嘌呤霉素筛选稳定表达shβ-catenin人胚胎干细胞克隆;试验分为稳定转... 详细信息

目的建立β-catenin稳定干扰的人胚胎干细胞系。方法利用β-catenin慢病毒干扰质粒PLKO.1-puro-β-catenin转染包装细胞293FT制备重组慢病毒,并感染人胚胎干细胞,采用嘌呤霉素筛选稳定表达shβ-catenin人胚胎干细胞克隆;试验分为稳定转染β-catenin干扰质粒组(Shβ-catenin)、稳定转染空白载体组(VECTOR)和对照未感染组(WT)三组,RT-PCR检测干扰后β-catenin mRNA表达;进一步免疫荧光检测干扰后细胞β-catenin和OCT4的蛋白表达。结果β-catenin特异性shRNA的慢病毒感染人胚胎干细胞后,获得稳定表达shβ-catenin的人胚胎干细胞系,Shβ-catenin组β-catenin mRNA表达明显降低,只有WT组mRNA表达的1%,而VECTOR组和WT组之间无明显差异;免疫荧光染色进一步验证shβ-catenin组中基本无β-catenin蛋白的表达,但表达多能性标记OCT4。结论通过β-catenin特异性shRNA慢病毒载体构建了稳定干扰β-catenin的人胚胎干细胞系。

关键词：人胚胎干细胞 RNA干扰 β-catenin

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降钙素基因相关肽对卵母细胞体外成熟的影响

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中南大学学报（医学版） 2012年第10期37卷 973-978页

作者：张哲廖宏庆张硕屏徐小明龚斐卢光琇中南大学湘雅医学院生殖与干细胞工程研究所卫生部人类干细胞与生殖工程重点实验室中信湘雅生殖与遗传专科医院长沙410078

目的：探讨降钙素基因相关肽（***，CGRP）对小鼠卵母细胞体外成熟的影响。方法：6周龄雌性昆明小鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素（pregnantmareserumgonadotropin，PMSG）10U48h后处死，取出卵巢收集卵母细胞以30～40枚／孔的密度接种... 详细信息

目的：探讨降钙素基因相关肽（***，CGRP）对小鼠卵母细胞体外成熟的影响。方法：6周龄雌性昆明小鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素（pregnantmareserumgonadotropin，PMSG）10U48h后处死，取出卵巢收集卵母细胞以30～40枚／孔的密度接种于培养板内，以不同浓度CGRV（0，10^-10，10^-9，10^-9mol／L）处理24h后检测生发泡破裂（germinalvesiclebreakdown，GVBD）率和第一极体（polarbodyI，PBI）排出率；收集、培养人卵巢颗粒细胞，以不同浓度CGRV（0，10^-10，10^-9，10^-8mol／L）处理24h后测定颗粒细胞内cAMP浓度。结果：外源性CGRP处理小鼠卵母细胞可浓度依赖性地降低GVBD率及PBI排出率；外源性CGRP处理人颗粒细胞，可浓度依赖性地增高细胞内cAMP浓度。结论：CGRP抑制小鼠卵母细胞成熟可能与其增加颗粒细胞内cAMP浓度有关。

关键词：卵母细胞体外成熟降钙素基因相关肽环磷酸腺苷

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基于微流控芯片的温度梯度毛细管电泳检测大肠癌石蜡标本中K-ras基因突变

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生物化学与生物物理进展 2010年第7期37卷 794-800页

作者：张惠丹王晓楠周喆马倩方瑾中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室医学细胞生物学教育部重点实验室细胞生物学教研室沈阳110001

K-ras基因突变检测可用于大肠癌的早期筛查与诊断,并有利于筛选出抗表皮生长因子受体靶向药物治疗有效的大肠癌患者,以实现肿瘤的个体化治疗.采用以倾斜式热辐射原理建立的微流控温度梯度毛细管电泳(temperature gradient capillary ele... 详细信息

K-ras基因突变检测可用于大肠癌的早期筛查与诊断,并有利于筛选出抗表皮生长因子受体靶向药物治疗有效的大肠癌患者,以实现肿瘤的个体化治疗.采用以倾斜式热辐射原理建立的微流控温度梯度毛细管电泳(temperature gradient capillary electrophoresis,TGCE)基因突变检测系统,实现了对98例石蜡包埋大肠癌组织中K-ras基因突变的高灵敏度筛查,突变阳性检出率为47.96%,显著高于PCR产物直接测序的23.47%.克隆测序显示该方法至少能检测到2.08%的K-ras基因突变体.K-ras基因突变与临床病理学参数的关系分析显示,直肠癌中K-ras基因突变率明显高于结肠癌(P<0.05),而与年龄、性别、组织学类型和肿瘤分期等无显著相关性.该检测方法为肿瘤早期诊断和指导临床用药提供了一种灵敏度高、检测速度快、便于大规模筛查的有效手段.

关键词：微流控芯片温度梯度毛细管电泳(TGCE) K-ras基因突变大肠癌石蜡包埋组织

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基于双向浓度梯度的微流控芯片系统对肿瘤细胞侵袭能力的多重分析

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高等学校化学学报 2019年第12期40卷 2494-2501页

作者：王洁张宇于敏方瑾中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室医学细胞生物学教育部重点实验室细胞生物学教研室生命科学学院

利用微流控芯片易于模拟体内生理环境、流体控制精确及易于集成等优势,将基于扩散原理的浓度梯度形成结构与经典的圣诞树形浓度梯度发生器相集成,建立了在垂直和水平方向上形成连续、双向浓度梯度的微流控芯片系统,采用该系统对不同类... 详细信息

利用微流控芯片易于模拟体内生理环境、流体控制精确及易于集成等优势,将基于扩散原理的浓度梯度形成结构与经典的圣诞树形浓度梯度发生器相集成,建立了在垂直和水平方向上形成连续、双向浓度梯度的微流控芯片系统,采用该系统对不同类型细胞(HEK-293,MCF-7,SGC-7901)的侵袭力进行了定量分析;通过在垂直方向上施加血清浓度梯度,在水平方向上施加抗肿瘤药物十字孢碱浓度梯度,分析了在连续药物浓度作用下的人胃癌SGC-7901细胞侵袭能力被抑制的情况,同时观察并定量评价了伴随细胞侵袭力变化过程中细胞增殖能力受抑制的情况.研究结果表明,该系统可形成稳定的双向物质浓度梯度;在血清浓度梯度存在情况下,伴随十字孢碱浓度梯度的升高,肿瘤细胞侵袭(P<0.0001)和增殖能力(P<0.001)均呈现浓度依赖性的连续降低.建立的双向浓度梯度微流控芯片系统可用于评价复杂环境对细胞的多重影响,也为研究细胞间相互作用、多种药物联用及药物筛选等提供了良好的研究平台.

关键词：微流控芯片浓度梯度肿瘤侵袭药物筛选

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特异性下调GRP94对人大肠癌细胞生物学特性的影响

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细胞生物学杂志 2003年第2期25卷 94-98页

作者：陈瑶陈誉华宋今丹卫生部细胞生物学重点实验室

为观察GRP94对培养的人大肠癌细胞系CCL229生物学特性的影响,将特异性裂解GRP94 mRNA翻译起始区的核酶,用脂质体介导的转染方法导入培养的CCL229细胞中。在确定获得稳定转染株后,我们检测了细胞生物学特性的变化。结果为:(1)转染GRP94... 详细信息

为观察GRP94对培养的人大肠癌细胞系CCL229生物学特性的影响,将特异性裂解GRP94 mRNA翻译起始区的核酶,用脂质体介导的转染方法导入培养的CCL229细胞中。在确定获得稳定转染株后,我们检测了细胞生物学特性的变化。结果为:(1)转染GRP94核酶的细胞在A23187诱导16h后,细胞生长率显著降低。(2)核酶表达细胞诱导后的聚集能力明显下降。(3)核酶表达细胞在A23187诱导后,停滞在G0/G1期的比例明显升高。结论为CRP94与应激的大肠癌细胞的生长和侵袭能力密切相关;特异性下调GRP94能改变人大肠癌细胞系CCL229的一些生物学特性。实验结果为深入研究GRP94与肿瘤细胞发生、发展和转移的关系奠定了基础,在癌症的基因治疗上将具有一定意义。

关键词：人大肠癌细胞生物学特性发生发展转移葡萄糖调节蛋白GRP94 热休克蛋白特异性下调

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细胞重编程:调节关键基因获得需要细胞

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中国医学科学院学报 2011年第6期33卷 689-695页

作者：庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳110001

细胞重编程是在一定条件下成体细胞的记忆被擦除,重新程序化产生新的表型和功能,导致细胞命运发生改变,主要发生在不涉及基因组DNA序列改变的基因表达水平,即通过改变细胞基因表达程序(时空和差异),对其进行重新编程而改变细胞的分化方... 详细信息

细胞重编程是在一定条件下成体细胞的记忆被擦除,重新程序化产生新的表型和功能,导致细胞命运发生改变,主要发生在不涉及基因组DNA序列改变的基因表达水平,即通过改变细胞基因表达程序(时空和差异),对其进行重新编程而改变细胞的分化方向,获得所需要的细胞。对于细胞重编程的深入研究有助于掌握机体细胞的发生发育机制,为解决再生医学种子细胞来源问题提供理论基础。人类未来将从许多分化的细胞获得更多所需要的另外一些分化细胞,这对细胞分化机制和疾病的细胞替代治疗研究具有划时代的意义,本文总结了细胞重编程的分类、影响因素、方法及最新进展。

关键词：细胞重编程基因表达去分化转分化

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SMAD2介导的Activin A信号对人胚胎干细胞向限定性内胚层细胞诱导分化的促进作用

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2012年第8期40卷 28-33页

作者：孙懿周静卢光琇林戈中南大学生殖与干细胞工程研究所湖南长沙410078 人类干细胞国家工程研究中心湖南长沙410078 卫生部人类干细胞与生殖工程重点实验室湖南长沙410078

【目的】研究SMAD2在Activin A促进人胚胎干细胞向限定性内胚层诱导分化中的作用。【方法】在人胚胎干细胞中转染SMAD2基因siRNA或者过表达质粒后,收集经Activin A分别诱导0,6,12,24,48,72,96和120h的细胞各100ng/mL,采用实时定量PCR检... 详细信息

【目的】研究SMAD2在Activin A促进人胚胎干细胞向限定性内胚层诱导分化中的作用。【方法】在人胚胎干细胞中转染SMAD2基因siRNA或者过表达质粒后,收集经Activin A分别诱导0,6,12,24,48,72,96和120h的细胞各100ng/mL,采用实时定量PCR检测SMAD2与内中胚层共同前体标记Brachyury和内胚层标记Sox17的表达,进一步通过Western-blot分析Activin A诱导中SMAD2和磷酸化SMAD2(p-SMAD2)表达的变化。【结果】在Activin A诱导人胚胎干细胞向限定性内胚层细胞分化的过程中,干扰SMAD2后48h时才检测到Brachyury强表达,而单纯Activin A处理组24h就检测到强表达;Sox17的表达始终较单纯Activin A处理组明显降低,因此,干扰SMAD2直接抑制了Activin A的诱导作用。而过表达SMAD2,Brachyury和Sox17的表达水平较单纯Activin A处理组明显增加,促进了限定性内胚层的发生;并且在Activin A诱导过程中,p-SMAD2的表达水平明显提高,而SMAD2的表达没有明显改变。【结论】SMAD2作为关键因子,介导了Activin A诱导人胚胎干细胞向限定性内胚层的分化,并转录调控Brachyury和Sox17的表达;SMAD2的磷酸化,激活并介导了Activin A诱导的信号转导通路。

关键词：胚胎干细胞限定性内胚层 Activin A SMAD2 人

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