检索结果-内蒙古大学图书馆

中国新药杂志 2021年第4期30卷 320-332页

作者：纳涛孙懿吴婷婷欧阳琦卢光琇林戈袁宝珠中国食品药品检定研究院细胞资源保藏研究中心卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室人类干细胞国家工程研究中心湖南光琇高新生命科技有限公司

肝细胞、肝组织或器官移植是目前不可逆失代偿性肝病的主要治疗手段,而由人胚胎干细胞诱导分化来源的肝样细胞(human embryonic stem cells-derived hepatocyte-like cells,h ESC-HLCs)能为移植提供数量充足、质量可控、来源稳定的细胞... 详细信息

肝细胞、肝组织或器官移植是目前不可逆失代偿性肝病的主要治疗手段,而由人胚胎干细胞诱导分化来源的肝样细胞(human embryonic stem cells-derived hepatocyte-like cells,h ESC-HLCs)能为移植提供数量充足、质量可控、来源稳定的细胞。为满足临床应用研究的需要,hESC-HLCs需具备明确的基本生物学属性、微生物学安全性、生物学安全性及生物学有效性的总体质量要求,其中每一类质量要求是由多个关键质量属性所组成。hESC-HLCs的整个制备过程是从人胚胎干细胞(hESCs)向hESC-HLCs的全分化过程,可基本分为4个阶段,各阶段在细胞形态、标志基因/蛋白的表达、生物学功能等方面均有明显的特征。本文就h ESC-HLCs总体质量要求及各质量属性进行讨论,目的是在我国建立临床研究用hESC-HLCs质量评价方法和评价策略。

关键词：胚胎干细胞肝样细胞质量属性质量评价阶段性诱导分化

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NSO细胞DNA首批国家标准品的建立

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中国药学杂志 2020年第5期55卷 389-395页

作者：武刚付志浩崔永霏张荣建王兰中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室北京100050

目的建立小鼠骨髓瘤NSO细胞DNA含量测定国家标准品。方法使用QIAGEN基因组DNA纯化试剂以及Genomictip 500/G制备了NSO细胞DNA作为标准物质原料。通过紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳进行纯度和含量测定,每支100μL分装于螺口冻存管。组... 详细信息

目的建立小鼠骨髓瘤NSO细胞DNA含量测定国家标准品。方法使用QIAGEN基因组DNA纯化试剂以及Genomictip 500/G制备了NSO细胞DNA作为标准物质原料。通过紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳进行纯度和含量测定,每支100μL分装于螺口冻存管。组织5个独立实验室应用紫外分光光度法对我国第一批NSO DNA国家标准品进行协作标定,并评价DNA标准物质的稳定性与适用性。结果所制备的NSO细胞DNA标准品经检测,A260/A280均在1.7~1.9之间,电泳图谱条带单一,纯度符合要求。该DNA标准品经5家实验室协作标定共90次,几何平均含量为87.5μg·mL^-1,平均含量的95%可信区间为86.6~88.5μg·mL^-1。短期稳定性实验表明,该标准品在4℃条件下放置4个月,DNA标准品浓度测定值及/1260/无显著性差异;-20、-70℃贮存1年的长期稳定性结果显示,标准品DNA浓度测定值及A260/A280无显著性差异,电泳条带单一,因此该标准物质应在-20℃条件以下长期保存。在标准品适用性研究中,利用该标准品进行定量PCR法测定,在3 fg·μL^-1~300 pg·μL^-1之间线性良好,标准曲线r^2值>0.999。结论该批NSO DNA国家标准品各项指标均符合要求,可作为国家标准品用于定量PCR法检测NS0细胞DNA残留量,DNA标准品含量赋值为87.5μg·mL^-1,批号为330002-201701。

关键词： NS0细胞DNA 国家标准品 DNA残留量实时定量聚合酶链式反应法

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利用高分辨液相质谱综合表征抗CTLA4单克隆抗体的研究

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中国药学杂志 2020年第6期55卷 457-464页

作者：武刚王文波于传飞崔永菲张荣建王兰中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室北京102629

目的研究建立抗CTLA4单抗质谱表征方法。方法以抗CTLA4单抗为研究对象,利用液相色谱-串联质谱联用技术(LC-MS/MS),通过优化液相条件与质谱参数,应用液质联用技术从完整蛋白相对分子质量、亚基相对分子质量、氨基酸序列覆盖率、二硫键、... 详细信息

目的研究建立抗CTLA4单抗质谱表征方法。方法以抗CTLA4单抗为研究对象,利用液相色谱-串联质谱联用技术(LC-MS/MS),通过优化液相条件与质谱参数,应用液质联用技术从完整蛋白相对分子质量、亚基相对分子质量、氨基酸序列覆盖率、二硫键、糖基化位点、W糖基化修饰等方面对抗CTLA4单抗进行全面的表征。结果抗CTLA4单抗完整相对分子质量(主要糖型,A2G0F/A2G0F)约为147992;去糖完整相对分子质量为145103;轻链相对分子质量为23450,重链相对分子质量(主要糖塑,A2G0F)为50548;重链Fd段相对分子质量为25355,重链sFc段(A2G0F,lxK_Loss)25189。使用Trypsin&Chymotrypsin分别进行蛋白酶解,单抗氛基酸序列覆盖率为100%;16对二硫键全部得到鉴定,与理论二硫键连接方式一致;N糖基化修饰所在的肽段序列为EEQYNSTYR,N-糖基化修饰位点位于重链的第298位天冬酰胺残基上,有13种主要糖塑,包括A2G0F(59.8%)、A2GlFa(18.66%)、A2GlFb(7.28%)、A2G2F(3.2%)、M5(1.66%)、A2S1G0F(1.17%)、A1G0F(1.16%)、A3G1F(0.95%)、A2G0(0.94%)、A2S2F(0.78%)、A2S1G1F(0.67%)、A3G0F(0.53%)和A1G1F(0.51%)。结论建立了基于质谱技术对CTLA4单抗系统的表征分析方法。

关键词：抗CTLA4单抗高分辨液相质谱表征相对分子质量氨基酸序列覆盖率二硫键 N糖谱

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CESI-MS/MS和NanoLC-MS/MS技术对促红细胞生成素中糖肽的分析

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药物分析杂志 2021年第1期41卷 79-88页

作者：张伶俐王文涛赵颖华肖志良罗继刘冰董衍东李响陈泓序重庆市食品药品检验检测研究院重庆401121 SCIEX中国北京100015 中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的:使用无鞘液毛细管电泳-质谱联用(CESI-MS/MS)和纳升液相色谱-质谱联用(NanoLCMS/MS)2种方法,对高糖基化蛋白促红细胞生成素(EPO)的糖肽进行分析,并对2种方法的分析结果进行对比。方法:以EPO为研究对象,还原烷基化后用胰蛋白酶进行... 详细信息

目的:使用无鞘液毛细管电泳-质谱联用(CESI-MS/MS)和纳升液相色谱-质谱联用(NanoLCMS/MS)2种方法,对高糖基化蛋白促红细胞生成素(EPO)的糖肽进行分析,并对2种方法的分析结果进行对比。方法:以EPO为研究对象,还原烷基化后用胰蛋白酶进行酶切,酶切得到的肽段利用CESIMS/MS和NanoLC-MS/MS检测方法进行分离鉴定。CESI-MS/MS分析方法:采用熔融的石英毛细管,以10%醋酸水溶液为背景电解质,在34.5 kPa压力下进样60 s,分离电压为30 kV,同时施加正向压力6.9kPa;离子源温度为50℃,喷雾电压为1650 V,MS扫描范围为m/z 350~1250,MS/MS扫描范围为m/z 100~1500。NanoLC-MS/MS分析方法:采用YMC C_(18)色谱柱,以含0.1%甲酸的水溶液(A)-含0.1%甲酸的乙腈溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速5μL·min^(-1);离子源温度300℃,喷雾电压为+5500 V,MS扫描范围为m/z 350~1250,MS/MS扫描范围为m/z 100~1500。将采集到的质谱数据导入到软件BiopharmaView^(TM)3.0中进行搜库检索,对糖肽进行鉴定。结果:采用CESI-MS/MS方法可以单独鉴定到32条糖肽,采用NanoLC-MS/MS方法可以单独鉴定到40条糖肽;通过2种方法可以共鉴定到84条糖肽,共涉及56种糖型。对比2种方法的结果,发现对于EPO糖肽的分析,CESI-MS/MS方法可以鉴定到更多的含唾液酸的糖肽,并表现了更优异的分离效果。此外,CESI-MS/MS方法鉴定出的糖肽分子量范围更宽,可以有效分析NanoLC-MS/MS方法中未鉴定到的高分子量糖肽。结论:在糖蛋白的分析中,通过糖肽水平的分离和鉴定,可以获得糖基位点和糖基序列的信息。CESI-MS/MS方法和NanoLC-MS/MS方法提供了互补的分析结果,其联合使用可鉴定出更多种类的糖肽,为糖蛋白的研究中糖肽水平的分析提供了更全面的解决方案。

关键词：促红细胞生成素糖肽糖蛋白激素糖基化修饰无鞘液毛细管电泳-质谱联用纳升液相色谱-质谱联用

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机器学习在抗体制剂不溶性微粒分类识别中的应用

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中国药事 2024年第1期38卷 71-81页

作者：郭莎郭翔高洁许东泽梅玉婷王翠夏喜杰李灵坤贺鹏飞吴宏宇吴昊王兰中国食品药品检定研究院国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629 沈阳药科大学沈阳110179 中国药科大学南京210009

目的:对微流成像技术收集的抗体注射剂的不溶性微粒图片进行分类建模,以建立不溶性微粒的分类和溯源分析方法。方法:本研究首先制备并用微流成像系统获得气泡、硅油液滴、玻璃颗粒、反复冻融产生的蛋白颗粒4种不同类型颗粒的图片,并将... 详细信息

目的:对微流成像技术收集的抗体注射剂的不溶性微粒图片进行分类建模,以建立不溶性微粒的分类和溯源分析方法。方法:本研究首先制备并用微流成像系统获得气泡、硅油液滴、玻璃颗粒、反复冻融产生的蛋白颗粒4种不同类型颗粒的图片,并将这些图片分为训练集和测试集两部分。采用3种卷积神经网络(Convolutional Neural Network,CNN)模型,即ResNet50、DenseNet201和ShuffleNetV2,对训练集中的图片进行训练和识别,建立数据集,并用于对测试集图片的识别。此外,通过在实际样品中的应用,将CNN模型识别和人眼分类的准确性和速度进行对比。结果与结论:各模型对于测试集的识别准确率都达到96%以上,且DenseNet201模型具有更优的稳定性;与人眼识别相比,准确率没有显著差异,识别速度更快且具有显著差异。本研究表明CNN模型能够对蛋白质制剂中不溶性微粒图片进行分类和溯源分析,以便采取有针对性的措施,降低药品的潜在风险和安全隐患。

关键词：机器学习蛋白质制剂卷积神经网络不溶性微粒

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基于硼酸亲和色谱(BAC)测定单抗糖化比例方法的建立

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中国药事 2023年第3期37卷 287-297页

作者：刘旭梅王文波武刚于传飞韩治国王兰刘万卉烟台大学药学院烟台246005 中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室北京102629 安捷伦科技(北京)有限公司北京100102

目的:建立基于硼酸亲和色谱(BAC)测定单抗糖化比例分析方法并进行方法学验证。方法:对硼酸亲和色谱做方法优化和方法学验证,通过对流动相的盐组成、NaCl和Tris浓度的优化,建立能够有效定量单抗糖化比例的BAC分析方法,并对该方法进行方... 详细信息

目的:建立基于硼酸亲和色谱(BAC)测定单抗糖化比例分析方法并进行方法学验证。方法:对硼酸亲和色谱做方法优化和方法学验证,通过对流动相的盐组成、NaCl和Tris浓度的优化,建立能够有效定量单抗糖化比例的BAC分析方法,并对该方法进行方法学验证和应用评价。结果:NaCl和Tris浓度的变化会影响单抗糖化比例的检测,通过参数优化,最终确定在NaCl和Tris浓度分别为300 mmol·L^(-1)和25 mmol·L^(-1)时,可以对单抗糖化比例进行准确定量。根据ICH Q2和《中华人民共和国药典》2020年版对建立的方法进行了方法学验证,结果表明该方法具有良好的特异性、准确性、精密度和耐用性。单抗糖化比例在2%~90%有良好的线性,R^(2)大于0.99,回收率在87.04%~115.29%;非糖化比例在10%~98%具有良好线性,R^(2)大于0.99,回收率在99.69%~109.79%。精密度结果表明,该方法整体的RSD值小于18.26%。最后,利用建立的方法对利妥昔单抗原研药和生物类似药进行了糖化比例检测,发现同一厂家不同批次利妥昔单抗糖化比例差异较小,而不同厂家糖化比例存在差异。结论:建立的BAC糖化比例测定方法具有良好的准确性和精密度,可用于利妥昔单抗糖化比例的检测。

关键词：单克隆抗体利妥昔单抗糖化硼酸亲和色谱方法学验证

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单克隆抗体药物中重组人透明质酸酶活性测定方法的建立

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山西医科大学学报 2023年第8期54卷 1133-1137页

作者：崔春博刘春雨于传飞付志浩杜加亮王文波王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629

目的建立并验证一种检测单克隆抗体药物中重组人透明质酸酶(recombinant human hyaluronidase,rHuPH20)活性的方法。方法利用浊度法建立单克隆抗体药物中rHuPH20活性的检测方法,并对该方法的专属性、线性、中间精密度、准确度、重复性... 详细信息

目的建立并验证一种检测单克隆抗体药物中重组人透明质酸酶(recombinant human hyaluronidase,rHuPH20)活性的方法。方法利用浊度法建立单克隆抗体药物中rHuPH20活性的检测方法,并对该方法的专属性、线性、中间精密度、准确度、重复性进行验证。结果该方法专属性良好,空白和不添加rHuPH20的单克隆抗体药物的rHuPH20活性均<4 U/ml。在3.5~26.7 U/ml范围内,供试品rHuPH20理论活性和实测活性线性相关,决定系数R^(2)>0.97;中间精密度试验结果的变异系数(coefficient of variation,CV)均<15%;各rHuPH20活性的平均值回收率在95%~105%之间,符合线性、中间精密度和准确度的验证要求。6次独立测定3批供试品rHuPH20活性的变异系数分别为6.56%,2.96%和4.10%,符合重复性的可接受标准(≤10%)。结论该方法各项指标均符合要求,可对单克隆抗体药物中rHuPH20活性进行质量控制。

关键词：单克隆抗体药物皮下注射重组人透明质酸酶活性浊度法质量控制

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铜绿假单胞菌核酸检测用试剂盒国家参考品的研究

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中国医药生物技术 2022年第2期17卷 168-171,175页

作者：梁丽陈驰石继春王春娥龙新星刘茹凤黄洋李康徐潇李江姣徐颖华叶强中国食品药品检定研究院中国医学细菌保藏管理中心卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)为假单胞菌属的一种革兰氏阴性菌,也被称为绿脓杆菌。在自然界水、土壤与空气中均广泛存在[1]。铜绿假单胞菌污染常见于凉拌菜、熟肉制品、饮用水等食品领域。例如在水源水或成品水中检出铜绿假单... 详细信息

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)为假单胞菌属的一种革兰氏阴性菌,也被称为绿脓杆菌。在自然界水、土壤与空气中均广泛存在[1]。铜绿假单胞菌污染常见于凉拌菜、熟肉制品、饮用水等食品领域。例如在水源水或成品水中检出铜绿假单胞菌,甚至多批次样品的检出率大于10%,为一种重要的水源和食源性致病菌[2-4]。因此在我国饮用天然矿泉水(GB 8537-2016)[5]和包装饮用水(GB 19298-2014)[6]的国家标准中均明确规定不得检出铜绿假单胞菌。此外,在2015年我国颁布的《化妆品安全技术规范》也要求化妆品中不得有铜绿假单胞菌检出[7]。铜绿假单胞菌作为医院内感染的主要病原菌之一,在机体免疫力低下时,例如术后和恶性肿瘤的患者容易感染本菌,且铜绿假单胞菌的耐药性强,在治疗时往往需要使用多种抗生素进行联合用药[8-9]。因此,快速而准确地鉴定出铜绿假单胞菌对保障食品安全和人民健康具有重要的意义。

关键词：铜绿假单胞菌国家参考品核酸检测饮用天然矿泉水医院内感染凉拌菜食源性致病菌熟肉制品

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基因治疗产品中病毒颗粒的微粒特性研究

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药物分析杂志 2020年第1期40卷 62-69页

作者：于雷裴德宁王光裕胡金盼李永红饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的:研究基因治疗产品中病毒颗粒的微粒特性及粒径分布情况。方法:采用扫描电镜、动态光散射法、微流数字成像法、光阻法及目测法对腺病毒(adenovirus,AdV)、腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)和单纯疱疹病毒(herpes simplex vir... 详细信息

目的:研究基因治疗产品中病毒颗粒的微粒特性及粒径分布情况。方法:采用扫描电镜、动态光散射法、微流数字成像法、光阻法及目测法对腺病毒(adenovirus,AdV)、腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)和单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)基因治疗产品中病毒颗粒的微粒特性、粒径分布及制剂外观进行观察研究。结果:扫描电镜结果显示,AdV、AAV、HSV均存在不完整颗粒(空心病毒颗粒、衣壳碎片),HSV病毒存在包膜脱落或融合的情况;动态光散射法结果显示AdV对温度敏感,易形成聚集体,AAV的粒径分布不均一,变异度大,HSV实测粒径偏大且分布不均一;微流数字成像法、光阻法及目测法结果提示样品中存在的50μm以上的微粒,与典型的蛋白聚集体形态相似,且50μm以上的颗粒数与液体的浊度呈正相关,100μm以上颗粒与絮状沉淀物相关。结论:不同病毒的微粒特性也不相同,微粒分布情况及动态变化过程与聚集体的形成有关,可采用多种方法优势互补,对微粒进行全范围监测。

关键词：基因治疗产品病毒颗粒微粒特性聚集体不溶性微粒可见异物

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基因治疗产品的质量控制分析方法及研究进展

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药物分析杂志 2020年第1期40卷 4-12页

作者：李永红毕华秦玺饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

基因治疗产品近年来已成为国内外药物研发的热点。对研发阶段的基因治疗产品开展质量研究,建立相应的质量控制方法和质量标准,是产品安全、有效的重要保证和产业化进程中的重要环节之一。基因治疗产品的质量控制项目包括鉴别、含量、效... 详细信息

基因治疗产品近年来已成为国内外药物研发的热点。对研发阶段的基因治疗产品开展质量研究,建立相应的质量控制方法和质量标准,是产品安全、有效的重要保证和产业化进程中的重要环节之一。基因治疗产品的质量控制项目包括鉴别、含量、效价、纯度、杂质和其他常规检测项目等。本文较为详细地介绍了在各种基因治疗产品中这些质控项目可采用的分析方法。对于新型基因治疗产品,迫切需要研究适当的分析方法进行有效的质量控制,而已批准上市或进入临床研究产品的质控方法和标准则需要进一步的提高和完善。

关键词：基因治疗产品质量控制质量标准分析方法安全性有效性鉴别试验含量效价纯度杂质

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